ISSN edición digital 2618 - 4656
Volumen XXVIII
Corrientes, Argentina
PROYECTO ARROZ
Resultados Campaña 2019/2020
1° encuentro
técnico virtual del
cultivo de arroz
en el
nordeste
argentino
13 y 14 de agosto de 2020
@rroceros en línea
INTA Ediciones
116
VALORACIÓN DE COLOR DEL CANOPEO DE ARROZ
CON DRON Y SU RELACIÓN CON CARACTERÍSTICAS DEL
FOLLAJE
S.E. Olmos; E. Aguiar; O. Royo; A.I. Zorat; M.C. Peichoto1 y M.I. Pachecoy
Email: [email protected]
Palabras clave: canopeo; color; hojas; medidor de clorofila; morfo-anatomía; Oryza sativa;
SPAD.
INTRODUCCIÓN (Stay-green funcional) puede correlacio-
narse con mayor contenido de clorofila en
El color del canopeo, y así el estado del las hojas, mayor tasa de fotosíntesis y ma-
cultivo, puede ser analizado indirecta- yor rendimiento final del cultivo. El grado
mente por medios ópticos instantáneos no de venación y la posición de la medición de
destructivos como ser la reflectancia hiper- clorofila a lo largo de la lámina afectan la
espectral (NDVI) y más sencillamente por trasmisión de luz del instrumento variando
imágenes de fotografías aéreas. así el valor medido. La presencia de pilosi-
Los picos de absorción espectral de la ra- dad (tricomas) es un carácter frecuente en
diación solar por parte de la clorofila del fo- arroz que contribuye a la fotosíntesis y pre-
llaje se encuentran en la zona roja y azul, senta ventajas ante estreses bióticos y
con una absorción menor en la zona verde, abióticos y podría estar correlacionado con
y casi sin absorción en la zona infrarroja otros caracteres y/o afectar las mediciones
cercana (no visible, térmica). Por este mo- de clorofila.
tivo, el color visible del follaje se construye El objetivo fue estudiar en un panel de 175
con el espectro de bandas que es refle- genotipos de arroz (indica, japónica y culti-
jado, es decir el color verde y la zona infra- vares cruzas, líneas estabilizadas y élite de
rroja no visible. Así, un cultivo denso en los programas de mejoramiento de arroz
buen estado fisiológico absorberá mayor de Argentina) las variaciones de color a ni-
luz en la banda rojo visible. Por ello refle- vel de canopeo con fotografías aéreas de
jará menor luz en la banda rojo visible y re- dron y relacionarlas con el indicador rela-
flejará mayor luz en el verde visible y en la tivo de clorofila y características de las ho-
banda del infrarrojo cercano. jas como ser pilosidad y la forma del mar-
A nivel genético, se observa en arroz que gen foliar de la lámina.
hay variabilidad entre variedades para el
color del follaje, la forma del margen foliar
MATERIALES Y MÉTODOS
de la lámina en transcorte, pilosidad y el
grado de venación de la hoja. A nivel de La siembra se realizó el 20/11/2019 con
cultivo, el patrón del color observado varía sembradora experimental a 0,17 cm entre
según el momento fenológico y el estado surco y 5 m de largo. Se sembraron tres
de senescencia. A nivel de planta, la carac- surcos por genotipo, sin repetición. Los ge-
terística de retardo de la senescencia notipos fueron ordenados por ciclo y altura,
1 Instituto de Botánica del nordeste (IBONE), Facultad de Ciencias Agrarias. Universidad Nacional del Nordeste.
117
la mayoría de los genotipos presentaban Con las imágenes de vuelo a 20 m (Figura
un ciclo intermedio con porte semienano, 2) en el momento de madurez (10/03/2020)
aunque también había ciclos cortos y lar- y puntos fijos georeferenciados se realizó
gos de altura variable. Se intercalaron un ortomosaico con el programa Agisoft
siembras con una variedad de color de fo- Metashape para la construcción de mode-
llaje morado para el estudio de colorime- los digitales de elevación (Figura 3) (Digital
tría. Elevation Model en inglés, o DEM) con la
El riego se inició al principio del macollaje finalidad de construir una representación
y se mantuvo continuo hasta la madurez. 3D de la superficie del terreno y una esti-
La fertilización, control de malezas e insec- mación de la altura de plantas en el mo-
tos se realizó según prácticas estándar. mento de madurez.
El perfil de clorofila se realizó con un medi- Por cada genotipo se realizaron nueve me-
dor SPAD-502 meter en la primera hoja ex- diciones de color, tres en cada surco, de 30
pandida de cada genotipo, al mismo pixeles de alto y ancho cada una. Se in-
tiempo para todos, cuando se encontraban tentó capturar los valores promedios RGB
próximos a la finalización del estado vege- (0~255) para cada canal de color de cada
tativo (15/01/2020) a los 48 días de la genotipo buscando el valor representativo
emergencia (inicio de la diferenciación del en forma manual, teniendo en cuenta que
primordio floral). hay valores sobrexpuestos y subexpuestos
a la luz solar. Estos valores se expresan en
El medidor SPAD mide la diferencia de luz
una serie de parámetros RGB (rojo, verde
transmitida por la hoja en el rojo visible a
y azul) como un vector donde 000.000.000
650 nm (pico de absorción de la clorofila) y
corresponde al negro y 255.255.255 al
el infrarrojo a 940 nm (no absorción de clo-
blanco en una escala de 16.777.216 de co-
rofila). Para lograr un valor representativo
lores, que es lo que manejan los equipa-
de la variación del grado de nitrógeno/se-
mientos electrónicos, y definido como 24
nescencia de la hoja, se realizaron tres me-
bits de resolución de color. Para determi-
diciones SPAD en la sección apical, media
nar el color representativo se tomó un valor
y basal de la lámina, en tres plantas dife-
promedio entre los extremos para determi-
rentes del surco central. Los valores por
nar el valor aproximado del canal G
genotipo se promediaron.
(Green), que es el determinante para esta-
Las fotografías se realizaron con Drone DJI blecer el “verdor”, mientras que los canales
Spark, equipado con cámara de 12Mp de R (Red) y B (Blue) acentúan los tonos y
resolución y se analizaron con software de eventualmente viran el color a mo-
fotogrametría y retoque fotográfico Jcpi- rado/azulado, respectivamente.
cker (pick de pixels para convertir valores
RGB a color indexado).
El vuelo para el análisis de colorimetría se
realizó el 15/01/2020 a las 8,30 h y a 10 m
de altitud (Figura 1) coincidente con la me-
dición SPAD. La colorimetría de las imáge-
nes individuales se analizó con Photoshop
(versión 2015) realizando un procesa-
miento basado en los valores por defecto
del panel de conversión Alto Rango Diná-
mico (High Dynamic Range en inglés, o
HDR) para resaltar los colores “realistas”
por igual en todo el campo visual.
118
Figura 1. Fotografía aérea del ensayo de genotipos de arroz obtenida con dron (Fecha: 15/01/2020) y
procesada con filtro HDR. Los genotipos se cultivaron en tres surcos de 5 m sin repetición. Para un
mejor manejo del riego, el ensayo se dividió en dos bloques separados por una taipa. Un genotipo de
color de follaje morado (Flecha lila) se intercaló en la siembra.
Posteriormente a la determinación del las frecuencias de verdes. Se dividió el
verde representativo, se descartaron ma- rango de valores verdes [0~255] en tres
nualmente en la medición las sobrexposi- partes iguales para proporcionar una guía
ciones y las subexposiciones, utilizando inicial y básica para determinar el grado de
como guía el segundo orden de pixeles de verde en una escala cualitativa de: verde
las zonas adyacentes más iluminadas o el claro (255), intermedio (170) y verde os-
segundo en el caso de las menos ilumina- curo (85).
das directamente por el sol; y luego se con- La caracterización de morfología de hojas
feccionó un histograma para determinar se realizó in situ en al menos tres plantas
119
de cada genotipo, clasificando la pilosidad tras se analizaron preliminarmente con mi-
al tacto y en forma visual el margen de la croscopio óptco y el Microscopio Electró-
lámina. Se recolectaron muestras de hojas nico de Barrido (MEB) utilizando el equipa-
en líquido fijador FAA (formaldehído, al- miento MEB JEOL 5800 LV de la UNNE.
cohol, ácido acético) para futuras determi-
naciones de espesor de hoja. Las mues-
Figura 2. Fotografía aérea del ensayo de genotipos de arroz obtenida con dron en el momento de
madurez (Fecha: 10/03/2020), utilizada para la construcción de un modelo digital de elevación (digital
elevation model en inglés, o DEM). Los genotipos de mayor altura se ubicaron en el bloque posterior
separados de una taipa.
Se obtuvieron datos comunes para todas correlación de Pearson con el programa In-
las variables para 144 de los 175 genotipos fostat.
de arroz. Los datos se analizaron mediante
120
Figura 3. Modelo digital de elevación (digital elevation model en inglés, o DEM) obtenido con la foto-
grafía aérea del ensayo de genotipos de arroz obtenida con dron (Fecha: 10/03/2020) en el momento
de madurez. Colores cálidos corresponden a mayor altura de planta y colores fríos a menor altura
relativa del suelo. El color azul corresponde a la cota del suelo más baja, así la variación de azul
evidencia microrelieves dentro del ensayo.
RESULT ADOS más oscuros (Figura 4). El histograma re-
veló la mayor concentración de frecuen-
I. Medidor de clorofila cias en el rango de coloración verde inter-
medio de 30-40 unidades (130 casos), se-
La distribución de frecuencias de clases guido de follaje verde oscuros intermedio
estuvo en el rango de 20 a 60 unidades 40-50 (28 casos) y verdes oscuros (3 ca-
SPAD, correspondiendo los valores más sos). El genotipo morado presentó un valor
bajos al verde claro y los mayores a verdes promedio de SPAD de 37. Cabe aclarar
121
que este genotipo presenta follaje de color 120
morado matizado con líneas verdes y pre- 105
senta hoja de espesor fino lo que podría 100
explicar un valor de SPAD intermedio.
80
Frecuencia
150
130
60
37
40
100
Frecuencia
20
3
50 0
28 85 170 255
Clase
1 3 1
0 Figura 5. Histograma de frecuencias de colori-
30 40 50 60 70 metría en canal verde RGB del canopeo me-
diante procesamiento con filtro HDR. La escala
Clase corresponde a 170-255: verde claro; 85-170:
verde intermedio; 0-85: verde oscuro.
Figura 4. Histograma de frecuencias de medi-
das de indicador de clorofila con equipo SPAD.
Valores más bajos corresponden a verde claro La correlación entre los canales RGB y los
y mayores a verdes más oscuro. valores de SPAD resultó baja y negativa
pero altamente significativa (p < 0,001)
II. Colorimetría de fotografías aéreas para el rojo (Red) (-0,28) y para el verde
El histograma de valores del canal verde (Green) (-0,31) (Figura 6), mientras que
(Figura 5) mostró una mayor concentración para el azul (Blue) resultó no significativa.
de genotipos en el rango de verde claro
(108 casos) seguido de verde intermedio
(58 casos) y en menor medida de verde os-
curo (8 casos, incluyendo el genotipo mo-
rado).
Figura 6. Gráfico de dispersión ente los parámetros del canal de color verde (Green) y rojo (Red) y valores de
SPAD.
122
III. Morfología de hojas otras pilosas.
La mayoría de los genotipos presentaron La pilosidad de la hoja no estuvo correla-
margen de lámina plano (109) y en menor cionada con ningún canal RGB ni con la
medida tuvieron hojas involutas (7) y revo- forma del margen de la lámina ni con los
luta (8), mientras que 21 casos fueron in- valores SPAD.
termedios entre estas formas (Figura 7).
La forma del margen de la lámina presentó
correlación baja y negativa pero significa- 120
tiva (p≤ 0,01) con cada uno de los canales 110
RGB (r2 de -0,28, -0,28 y -0,22, respectiva-
mente), con una tendencia de genotipos de 100
margen de lámina plano a presentar pará-
metros RGB más elevados mientras que
80
genotipos de hoja revoluta presentaron va-
lores RGB menores. La correlación de la
Frecuencia
forma del margen de lámina resultó no sig- 60
nificativa con la pilosidad y valores SPAD.
40 34
120
109
20
100
1
0
80 lisa pilosa otra
Frecuencia
Clase
60
Figura 8. Distribución en 144 genotipos de
arroz de casos con morfología de hoja lisa y pi-
40 losa.
21 A nivel microscópico se observó presencia
20
de tricomas que no son detectados al tacto
7 8
(Figura 9). Por ejemplo, la clasificación de
0 pilosidad al tacto del material CR 2006 fue
plana involuta revoluta mixta de hoja pilosa mientras que Ñu Potí fue de
Clase hoja lisa, los pequeños tricomas observa-
dos al MEB en Ñu Potí no se percibieron al
Figura 7. Distribución en 144 genotipos de tacto.
arroz de casos con morfología del margen de
la hoja plana, involuta, revoluta, y mixta (inter-
medias plana-involuta, planta-revoluta).
En cuanto a la pilosidad (Figura 8) la ma-
yoría de los genotipos resultó de hoja pi-
losa (110), en menor medida tuvieron hoja
lisa (34), mientras que un solo genotipo
presentó mezcla de plantas con hoja lisa y
123
Figura 9. Imágenes de secciones de lámina obtenidas con el MEB con el registro de los siguientes ca-
racteres: espesor de la lámina en las venas mayores (línea azul), espesor menor de la lámina (línea roja)
y distancia entre los haces vasculares (línea amarilla). Flecha verde: diferentes clases de tricomas (pe-
los), ma: macropelo, ag: microtricos en aguijón ("prickles"), ga: microtricos pequeños (ganchos, "hooks").
CONCLUSIONES fueron adecuadas para lograr la cobertura
del surco al final de estado vegetativo, co-
La disposición del cultivo en tres surcos se- rregir las sobreexposiciones y subexposi-
parados a 0,17 m, el ordenamiento por al- ciones y facilitar así la estimación del color
tura y la hora de captación de la imagen, del canopeo.
124
Se logró una correlación baja pero signifi-
cativa entre SPAD y valores de los canales
rojo (Red) y verde (Green).
La pilosidad de la hoja no se asoció con los
parámetros de canal RGB, con el SPAD ni
con la forma del margen de la hoja.
La forma del margen de la hoja se asoció
en forma baja pero significativa con meno-
res valores de parámetros RGB, los geno-
tipos de hoja revoluta presentaron una ten-
dencia de parámetros RGB más bajos (os-
curos).
Las imágenes preliminares de MEB permi-
tieron estimar el grado de venación y espe-
sor de la lámina de la hoja para futuros es-
tudios de correlación con mediciones de
SPAD.
BIBLIOGRAFÍA
Drouet, J.-L., Bonhomme, R. (1999). Do Varia-
tions in Local Leaf Irradiance Explain
Changes to Leaf Nitrogen within Row
Maize Canopies? Annals of Botany,
84(1), 61-69.
Esfahani, M., Abbasi, H. R. A., Rabiei, B., & Ka-
vousi, M. (2008). Improvement of nitro-
gen management in rice paddy fields us-
ing chlorophyll meter (SPAD). Paddy and
Water Environment, 6(2), 181-188.
Greg Ward, Anyhere Software. «High Dynamic
Range Image Encodings» en
http://www.any-
here.com/gward/hdrenc/hdr_encod-
ings.html consultada en septiembre de
2019.
Hu, B., Wan, Y., Li, X., Zhang, F., Yan, W. and
Xie, J. (2013), Phenotypic Characteriza-
tion and Genetic Analysis of Rice with
Pubescent Leaves and Glabrous Hulls
(PLgh ). Crop Science, 53: 1878-1886.
Konica Minolta (2019). Instrucciones para el
servicio y la utilización del medidor de
clorofila SPAD-502. 13 pag.
