UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS DR. JACOBO BUCARAM ORTIZ
CARRERA AGROINDUSTRIA
MICROBIOLOGIA EN LOS ALIMENTOS
PRÁCTICA # 1
TEMA:
TINCIONES BACTERIANAS. SIMPLES Y DIFERENCIALES. COLORANTES BÁSICOS Y
ÁCIDOS
GRUPO #4
INTEGRANTES:
BUESTAN CEVALLOS MARIA STEFFANIA
LEMA DAVILA RAQUEL ELIZABETH
MACIAS MORENO JIMMY ALEXANDER
REYES PIHUAVE MARIA GABRIELA
POZO CHILAN JONATHAN KELVIN
DOCENTE: Ing. Daniel Borbor, Ph.D
CURSO: TERCERO ”B”
AÑO LECTIVO:
2023 - 2024
Tabla de Contenido
Tabla de Contenido 2
Tinciones bacterianas. Simples y diferenciales. Colorantes básicos y ácidos 4
INTRODUCCIÓN: 4
1.1 Tinciones simples 5
1.1.1 Mecanismo de acción 5
1.1.2 Procedimiento de tinción simple 6
1.1.2 Importancia y Aplicaciones 6
1.2 Tinciones diferenciales 7
1.2.1 Tinción de Ziehl-Neelsen 7
1.2.2 Otras tinciones diferenciales 8
1.3 Colorantes básicos y ácidos 8
1.3.1 Colorantes ácidos 9
1.3.2 Importancia en microbiología 10
2. Bibliografía 10
Tinciones bacterianas. Simples y diferenciales. Colorantes básicos y ácidos
INTRODUCCIÓN:
La observación y el estudio de bacterias mediante el microscopio requieren de
técnicas especiales que permiten visualizar estos organismos tan pequeños y, a
menudo, transparentes. Las tinciones bacterianas son métodos esenciales en
microbiología para resaltar y diferenciar las estructuras bacterianas, facilitando así su
identificación y estudio. Existen diversos tipos de tinciones, que se clasifican
principalmente en simples y diferenciales, y utilizan colorantes que se dividen en
básicos y ácidos.
1.1 Tinciones simples
Las tinciones simples utilizan un solo colorante para teñir todas las células de
un mismo color. Este método es útil para observar la morfología, el tamaño y la
disposición de las bacterias. Un colorante básico comúnmente usado es el azul de
metileno. Las tinciones simples son rápidas y fáciles de realizar, proporcionando una
buena visión general de las características morfológicas de las bacterias.
1.1.1 Mecanismo de acción
Los colorantes utilizados en las tinciones simples suelen ser básicos, lo que
significa que poseen una carga positiva. Estos colorantes se adhieren a las
estructuras celulares bacterianas que tienen una carga negativa, como la pared
celular. La afinidad entre el colorante y las estructuras bacterianas facilita la
visualización de las bacterias bajo el microscopio (Lizarazo, 2019).
- Ejemplos de colorantes básicos
Entre los colorantes básicos más comunes utilizados en tinciones simples se
encuentran:
● Azul de metileno: este colorante se utiliza ampliamente debido a su capacidad
para proporcionar un fuerte contraste con las estructuras bacterianas,
facilitando la visualización de la morfología celular.
● Cristal violeta: aunque se usa principalmente en la Tinción de Gram, también
puede emplearse en tinciones simples para observar la morfología general de
las bacterias.
● Safranina: comúnmente utilizada como colorante de contraste en la Tinción
de Gram, la safranina también puede emplearse sola en tinciones simples para
teñir las células bacterianas y permitir su observación (Soria, 2022).
1.1.2 Procedimiento de tinción simple
El procedimiento de tinción simple implica los siguientes pasos básicos:
Preparación de la muestra: se realiza un frotis bacteriano sobre un
portaobjetos limpio y se deja secar al aire.
Fijación: la muestra se fija generalmente pasando el portaobjetos por la llama
de un mechero Bunsen, lo que adhiere las bacterias al portaobjetos y las mata,
preservando su morfología.
Aplicación del colorante: se aplica el colorante básico seleccionado sobre el
frotis y se deja actuar durante un tiempo determinado (generalmente 1-2 minutos).
Lavado: se lava suavemente el portaobjetos con agua destilada para eliminar
el exceso de colorante.
Secado y observación: el portaobjetos se seca y se observa bajo el
microscopio para analizar la morfología bacteriana (Dalmasso, Gallace, Cenizo,
Caramutti y Ruíz, 2020).
1.1.2 Importancia y Aplicaciones
Las tinciones simples son cruciales en el laboratorio de microbiología para la
identificación inicial de bacterias. Estas técnicas permiten a los microbiólogos obtener
información básica sobre la morfología bacteriana, lo cual es esencial para la posterior
identificación y caracterización de los microorganismos (Sangioni, Pereira, Vogel y
Botton, 2013). Además, son métodos rápidos y sencillos que no requieren
equipamiento complejo, lo que las hace accesibles en diversos contextos de
investigación y diagnóstico.
1.2 Tinciones diferenciales
Las tinciones diferenciales utilizan más de un colorante para distinguir entre diferentes
tipos de bacterias o estructuras celulares. El ejemplo más conocido es la tinción de
Gram, que clasifica las bacterias en Gram positivas y Gram negativas basándose en
las diferencias en la composición de sus paredes celulares.
La tinción de Gram, desarrollada por Christian Gram en 1884, es la técnica
diferencial más comúnmente utilizada. Esta tinción clasifica las bacterias en dos
grandes grupos: Gram positivas y Gram negativas, según la estructura de su pared
celular. El procedimiento de la tinción de Gram incluye los siguientes pasos:
Aplicación del colorante primario (cristal violeta): todas las bacterias se
tiñen de púrpura.
Adición de un mordiente (lugol): fija el cristal violeta en las células
bacterianas.
Decoloración con alcohol o acetona: las bacterias Gram negativas pierden
el color púrpura, mientras que las Gram positivas lo retienen.
Aplicación del colorante de contraste (safranina): las Gram negativas se
tiñen de rosa, mientras que las Gram positivas permanecen púrpuras.
La tinción de Gram es fundamental no solo para la identificación bacteriana,
sino también para determinar su susceptibilidad a diferentes antibióticos, dado que
las diferencias estructurales en las paredes celulares influencian la permeabilidad y
resistencia a estos medicamentos (Vázquez, Martín, de Silóniz y Serrano, 2011).
1.2.1 Tinción de Ziehl-Neelsen
La tinción de Ziehl-Neelsen es otra técnica diferencial importante, utilizada
principalmente para detectar bacterias ácido-alcohol resistentes, como el
Mycobacterium tuberculosis. El procedimiento incluye:
- Aplicación de fucsina fenicada: todas las bacterias se tiñen de rojo.
- Calentamiento de la muestra: facilita la penetración del colorante en las
bacterias resistentes.
- Decoloración con ácido-alcohol: solo las bacterias ácido-alcohol
resistentes retienen el colorante.
- Aplicación de un colorante de contraste (azul de metileno): las bacterias
no resistentes se tiñen de azul.
Este método es esencial en el diagnóstico de la tuberculosis y otras infecciones
por micobacterias, ya que estas bacterias no se tiñen adecuadamente con la tinción
de Gram debido a la presencia de ácidos micólicos en su pared celular (Samper y
González, 2018).
1.2.2 Otras tinciones diferenciales
● Tinción de Wright y Giemsa: utilizadas principalmente en hematología para
la diferenciación de células sanguíneas, también son útiles en la identificación
de ciertos parásitos y bacterias intracelulares (González y Carzoli, 2019).
● Tinción de Schaeffer-Fulton: específica para la visualización de esporas
bacterianas, utilizando verde de malaquita y calor para fijar el colorante en las
esporas (Bulfon y Bravo, 2018).
● Tinción de Cápsulas: permite observar las cápsulas bacterianas como halos
transparentes alrededor de las células, utilizando una tinción negativa que
resalta la estructura de la cápsula (Tobon y Hoyos, 2020).
1.3 Colorantes básicos y ácidos
Según Cerrón y Unterlass (2018) indicaron que los colorantes básicos son
cationes (cargas positivas) que se unen a componentes celulares cargados
negativamente, como ácidos nucleicos y proteínas. Ejemplos de colorantes básicos
incluyen el cristal violeta, azul de metileno y safranina. Estos colorantes son ideales
para teñir las estructuras bacterianas debido a la naturaleza generalmente negativa
de las superficies celulares bacterianas.
Por otro lado, los colorantes ácidos son aniones (cargas negativas) que se
unen a componentes celulares cargados positivamente. Un ejemplo es la eosina, que
se usa en la tinción de tejidos en histología más que en microbiología.
Ejemplos y Aplicaciones:
● Cristal violeta: usado principalmente en la tinción de Gram, tiñe todas las
bacterias de púrpura antes del proceso de decoloración.
● Azul de metileno: utilizado en tinciones simples para observar la morfología
celular básica.
● Safranina: funciona como colorante de contraste en la tinción de Gram,
tiñendo las bacterias Gram negativas de rosa o rojo (Corrales y Caycedo,
2020).
Estos colorantes permiten distinguir las características morfológicas y estructurales
de las bacterias, facilitando la identificación y el análisis de muestras bacterianas.
1.3.1 Colorantes ácidos
Los colorantes ácidos son compuestos aniónicos (cargados negativamente)
que se unen a las estructuras celulares catiónicas (cargadas positivamente). Aunque
su uso es menos común en microbiología que el de los colorantes básicos, son
importantes en ciertas técnicas de tinción que requieren resaltar componentes
específicos de las células o tejidos.
Ejemplos y aplicaciones:
● Eosina: Utilizada en la tinción de hematoxilina y eosina (H&E) para teñir el
citoplasma de las células en muestras de tejido.
● Fucsina Ácida: Empleada en la tinción de Ziehl-Neelsen para la identificación
de bacterias ácido-alcohol resistentes, como Mycobacterium tuberculosis.
● Ácido Pícrico: Utilizado en tinciones especiales para visualizar componentes
específicos de las células, como el tejido conectivo.
Los colorantes ácidos son cruciales para técnicas que requieren la
diferenciación de componentes celulares cargados positivamente, como ciertas
proteínas y estructuras extracelulares (Corrales y Caycedo, 2020).
1.3.2 Importancia en microbiología
La selección adecuada de colorantes básicos y ácidos es fundamental para
obtener resultados precisos y detallados en las tinciones microbiológicas. Los
colorantes básicos son preferidos para resaltar la morfología bacteriana y sus
componentes internos, mientras que los colorantes ácidos son esenciales para
técnicas que buscan destacar estructuras específicas en el contexto de estudios más
complejos o en la histología.
2. Bibliografía
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