TEMA
• Transcripción
• RNA polimerasas
• Maduración del RNA
Transferencia de la información: Transcripción
GEN:
“una unidad de DNA que contiene la información que
especifica la síntesis de un producto único”
Genes Procariotas Genes Eucariotas
sitio de iniciación para
la s íntesis de mRNA
transcripci ón
sitios iniciación síntesis proteínas
transcripci ón y
traducción
tranducci ón procesamiento
traducción
tranducci ón
prote ínas
prote ínas
Transferencia de la información: Transcripción
La transcripción se puede definir como el proceso por el que un sistema
enzimático convierte la información almacenada en un segmento de DNA,
en una cadena de RNA con una secuencia de bases complementaria a una de
las dos hebras de este DNA. La hebra de RNA recién transcrita queda
disponible para la biosíntesis de proteínas
Presenta similitudes y diferencias con la replicación
Similitudes
-Tiene lugar en el núcleo.
-Se usa un molde de DNA de hebra simple.
-Utiliza sustratos con enlaces trifosfato de alta energía (NTPs) para la polimerización.
-La dirección de síntesis es 5’→3’.
Diferencias
-No hace falta cebador.
-Sólo se transcribe una de las dos hebras del molde.
-La velocidad de polimerización no es constante.
-Sólo se transcriben una serie de pequeños segmentos del DNA total.
-La expresión de unos u otros segmentos está fuertemente regulada.
RNA Polimerasas Catalizan la síntesis de RNA dirigida por el DNA
Productos Estr. Cuaternaria
Procariotas
5 subunidades
RNA Polimerasa mRNA, rRNA, tRNA
α2ββ’σ
Eucariotas
RNA Polimerasa I rRNA de 28S, 18S y 5.8S 2 subunidades grandes
RNA Polimerasa II Precursores del mRNA y snRNA y aprox. 10 subunidades
pequeñas
RNA Polimerasa III tRNA y rRNA de 5S
La Transcripción comienza en los Centros Promotores,
a los que se une la RNA Polimerasa
PROMOTOR de E. coli PARA:
OPERÓN Trp
tRNAtyr
lP2
OPERÓN Lac
recA
lexA
T7A3
secuencia consenso
Hebra NO TRANSCRITA ó CODIFICANTE
Hebra TRANSCRITA ó NO CODIFICANTE
• La RNA Polimerasa de procariotas RNA Polimerasa de E. coli
“escanea” con su subunidad σ el DNA, (holoproteína)
buscando las secuencias consenso.
• La subunidad σ debilita la interacción de
la RNA Polimerasa con el DNA, facilitando
el escaneo.
• Cuando encuentra la secuencia consenso,
se une al DNA, asentándose en un
segmento de unos 60 nucléotidos.
• La intensidad del reconocimiento
por σ permite clasificar a los
promotores en fuertes y débiles
(transcripción más o
menos intensa/veloz,
respectivamente).
• Hay diferentes sub. σ,
cuyo uso alternativo
permite coordinar la
expresión de unos
genes u otros.
• La subunidad σ, más
frecuente tiene 70 kDa
de masa molecular, σ70
Un tercer elemento de reconocimiento, rico en AT, llamado UP (upstream promoter)
aparece también entre -40 y -60 en los promotores de genes que se expresan en gran
cantidad. Es reconocido por la subunidad α de la RNA polimerasa
• Cuando la RNA Pol. se acopla al Intervención de topoisomerasas
Inicio-Elongación para rebajar tensiones
promotor (unión a la hebra
codificante), lo hace en la
Transcription
dirección correcta: 3’→5’ de la bubble
hebra molde.
• El acoplamiento ocasiona el Nontemplate
strand
desenrollamiento de un corto
segmento (15-17 pb) del DNA dh,
Template
generándose el Complejo Abierto strand
con la burbuja de transcripción. NTP
• Se inicia, entonces, la channel
transcripción, uniéndose RNA-DNA Active
hybrid,
ribonucleótidos de acuerdo con las ∼8 bp
site
instrucciones de la hebra molde.
• Cuando el RNA naciente alcanza 12 nucleótidos, se disocia la
subunidad σ, quedando la RNA polimerasa esencial (α2ββ’) o forma
elongante
MECANISMO DE POLIMERIZACIÓN
NO requiere
CEBADOR
Corrección
de errores (?)
Terminación
• Señal de parada: secuencias ricas en G-C
• Formación de horquillas
• Se añaden varios residuos U al 3’
Terminación mediada
por el factor Rho
RNA Pol. II de eucariotas
• Estruct 3D semejante a RNA Pol procariotas
• 12 subun.: RBP1 ∼β’/ RBP2 ∼β/ RBP3 y 11 ∼α
• Requiere múltiples Factores Transcripción
(TFIIx)
•Sec. Consenso Inicio: Caja TATA (-30)
Dominio CTD
sec. YSPTSPS
repetida múltiples
veces (52 en humanos)
RNA Pol. II de eucariotas
Velocidad de transcripción
≈ 20 nucleótidos/s
INICIOS MÚLTIPLES
El mRNA sintetizado por la RNA Polimerasa de procariotas sale
listo para su traducción inmediata
Traducción sincronizada
con la Transcripción
El mRNA de eucariotas requiere maduración
Maduración del mRNA: encapuchado en 5’
Las actividades enzimáticas
que forman la caperuza 5’
están asociadas al dominio
CTD de la Pol II’
Complejo de
Unión al
Casquete
Sólo mRNA y snRNA tienen casquete 5’.
No lo tienen ni tRNA ni rRNA
SPLICING: Corte de Intrones y Empalme de Exones
Hay SECUENCIAS CONSENSO que marcan los puntos de corte y emplame
El splicing tiene lugar en el “Espliceosoma”
Transcripción y Splicing
coordinados
Ensamblaje del
Espliceosoma
Maduración del mRNA: encapuchado en 3’ Múltiples productos a partir de un gen
Corte y Poliadenilación a) Splicing alternativo
b) Corte y Poliadenilación alternativos
Los rRNA también requieren procesamiento post-transcripcional
Procariotas
• rRNA 16S, 23S y 5S, y algunos tRNA, proceden de
precursores (pre-rRNA) de 30S
• 7 variedades de pre-rRNA, que difieren en tRNA
• Se modifican bases específicas
• Corte por RNasas, seguido de acción de nucleasas
Eucariotas
• rRNA de 18S, 28S y 5.8S proceden de pre-rRNA de 45S
• Complejo prerribosómico de 90S → Ensamblado ribosoma
• Intervienes snoRNP formados por snoRNA
• Se modifican bases específicas
• Corte por RNasas, seguido de acción de nucleasas
También los tRNA sufren procesamiento post-transcripcional
• Entre 40 y 50 tRNA diferentes/célula
• Múltiples copias de genes tRNA en eucariotas
• Transcritos primarios como precursores largos que se acortan por
a) eliminación extremo 5’, catalizado por endonucleasa RNasa P (ribozima)
b) eliminación extremo 3’ catalizado por exonucleasa (RNasa D)
• Adición de trinucleótido CCA en extremo 3’, catalizado por enzima tRNA nucleotidil
transferasa (sitio de unión para los 3 nucleótidos)
• Modificación de bases (ej.: uridina a pseudouridina por rotura de enlace N-glicosídico y
reformación de C-glicosídico)
• Splicing de un intrón de 14 nucleótidos (no se da en procariotas)
TRANSCRIPCIÓN INVERSA: Síntesis de DNA a partir de un molde de RNA
La llevan a cabo DNA Polimerasas dependientes de RNA,
prácticamente exclusivas de RETROVIRUS
