Práctica: Contaje de reticulocitos.
Fecha: 27/11/2014.
Introducción:
Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros, es la fase
anterior a ser un eritrocito. El reticulocito contiene en
su interior restos de ARN (ribosomas), mitocondrias
y otros órganos celulares.
Tienen un tamaño de 8-9 micrómetros de
diá[Link] en la médula ósea (MO) unos
2 o 4 días y después salen a la sangre periférica,
donde maduran un día.
La tinción de los reticulocitos es una tinción
supravital porque se hace mientras las células están
aún vivas.
Reticulocitos ( Imagen de Hematología artículos)
Materiales utilizados:
-Gradilla.
-Lanceta.
-Gasas.
-Matraz aforado de 100 ml. -Probeta.
-Tubos de hemólisis.
-Pipetas Pasteur.
-Baño de agua.
-Vidrio de reloj.
-Portas.
-Filtro hecho con papel de filtro.
-Microscopio óptico.
-Frasco lavador.
-Capilar con EDTA.
-Balanza.
-Embudo.
-Parafilm.
Reactivos empleados:
-Alcohol o lejía para limpiar los portas.
-Azul de cresil brillante en polvo.
-Solución salina al 0,9%.
-Citrato sódico al 3%.
-Agua destilada.
-Aceite de inmersión.
Muestra:
Para esta práctica lo más aconsejable es utilizar
sangre fresca anticoagulada con EDTA , para ello
pinchamos con una lanceta la cara lateral del tercer
o cuarto dedo de una mano (previamente
desinfectado con alcohol y dejado secar para que se
evapore), desechamos la primera gota de sangre y
recogemos con el capilar con EDTA la sangre de la
zona.
Objetivos:
-Conocer qué son los reticulocitos.
-Saber el tipo de tinción que estamos utilizando en la
práctica.
-Saber por qué se realiza la corrección del
porcentaje de reticulocitos.
-Conocer lo que expresa el IPR.
Desarrollo de la práctica:
[Link] se debe preparar el colorante:
Mezclamos 80 ml de solución salina y 20 ml de
citrato sódico al 3% ( lo hemos hecho al 3%: en un
matraz aforado de 100 ml hemos puesto 3g de
citrato sódico que se presenta en polvo y hemos
enrasado con agua destilada proveniente del frasco
lavador hasta la línea de enrase ).
Después pesamos 1g de azul de cresil brillante y lo
disolvemos en la mezcla anterior.
Luego, filtramos con un embudo y un filtro.
2.A continuación en un tubo de hemólisis echamos 3
gotas de la solución colorante y otras 3 gotas de
sangre total previamente
[Link] suavemente y tapamos
con parafilm.
[Link] introducimos en el baño de agua a 37 ºC
durante 5 minutos.
[Link]és se vuelve a homogeneizar y se realiza
una extensión con la disolución.
Las extensiones salieron muy cortas y no se
extendían bien por el porta, por lo que decidimos
disolver un poco más la solución
colorante.
Tras realizar varias extensiones, la que dimos por
válida para observar al microscopio fue la número 3
porque en la número 1 la gota fue muy gruesa y la
número 2 se nos quedó muy corta.
[Link] al microscopio con el objetivo de 100 x
con ayuda del aceite de inmersión.
Reticulocitos al microcopio óptico ([Link]).
Cálculo del porcentaje de reticulocitos:
Al observar al microscopio se deben contar 2.000
hematíes en total, para calcular el porcentaje de
reticulocitos tenemos que emplear la siguiente
fórmula:
% reticulocitos = ( Nº de reticulocitos contados / Nº de hematíes contados ) x 100
Para descartar errores se deben realizar dos
extensiones y hacer el recuento a ambas, por lo que
la diferencia entre ellas tiene que ser igual o menor a
5 reticulocitos.
% reticulocitos = ( 16 / 2.000 ) x 100 = 0,8 % de reticulocitos.
Interpretación clínica de los resultados
obtenidos:
En adultos y niños los valores normales están entre
0,5 y 1,5% , nosotros hemos obtenido 0,8%, por lo
que se encuentra entre los valores normales de
reticulocitos.
La cantidad de reticulocitos expresada en tanto por
ciento es un valor relativo que se refiere a una cifra
normal de eritrocitos (en nuestro caso 2.000 ).Por
ello, cuando existe una anemia con disminución en
al cantidad de eritrocitos se compensa con un
aumento de reticulocitos y debemos corregir su valor
en tanto por ciento para poder considerarlo real.
La corrección se hace en base al hematocrito (HTO)
del paciente, se calcula con la siguiente fórmula:
% de reticulocitos corregido = % reticulocitos x ( HTO del paciente / HTO normal )
Si la anemia es muy intensa, aparece en sangre
periférica un número mayor de reticulocitos del que
correspondería por regeneración eritoblástica. Esto
se debe a que el estímulo eritropoyético que
compensa va acompañado de un periodo de
maduración intramedular más corto y una etapa de
maduración en sangre periférica más larga.
Esto se conoce como "desviación reticulocitaria".Se
debe hacer una segunda corrección del % de
reticulocitos en función de los días que tarda en
madurar el reticulocito en sangre periférica, y a esto
se le llama índice de producción reticulocitaria (IPR).
Se utiliza la siguiente fórmula:
IRP = % reticulocitos corregido / días de maduración en sangre periférica
Esta tabla muestra los días que tarda en madurar el
reticulocito:
(Libro de Hematología)
Un IPR mayor de 3 nos indica un aumento de al
actividad eritropoyética medular, mientras que un
IPR menor de 2 indica una escasa actividad
eritropoyética.
Resolución de los objetivos propuestos:
-Los reticulocitos son la fase anterior al [Link]
origina por maduración del eritroblasto
ortocromático.
Los reticulocitos no presentan núcleo, son algo
mayores que los eritrocitos (8-9 micras )., su
citoplasma todavía posee alguna cantidad de ARN y
conserva cierta tonalidad [Link] algo de
sustancia ribosómica y reticular que es visible
mediante la tinción vital de azul cresil brillante.
Permanecen de 2 a 4 días en la médula ósea y 1 día
en la sangre periférica hasta terminar de madurar y
transformarse en eritrocito.
En condiciones normales, los eritrocitos constituyen
del 0,5 al 1,5% del total de los eritrocitos circulantes.
-Estamos utilizando una tinción supravital de azul de
cresil brillante.
-Hacemos la corrección del porcentaje de
reticulocitos porque existe una anemia con
disminución en la cantidad de eritrocitos que se
compensa con un aumento en el número de
reticulocitos y debemos corregir su valor en tanto por
ciento para poder considerarlo real.
-El índice de producción reticulocitario (IPR) nos
proporciona un valor numérico de la estimulación
hematopoyética por encima de la actividad de la
línea base normal.
