Universidad de San Carlos de Guatemala

Facultad de Agronomía
Área tecnológica
Sub Área de protección de plantas
Introducción a la fitopatología
Ing. Agr. Gustavo Álvarez

ACTIVIDAD POST – PRACTICA #3

TÉCNICAS DE OBSERVACION Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS
FITOPATÓGENAS

Ludwin Agusto Franco Anzueto

202105543
ludwinfranco9@[Link]
Guatemala 17 de agosto del 2025
TÉCNICAS DE OBSERVACION Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS
FITOPATÓGENAS

INTRODUCCION
Las bacterias fitopatógenas representan un factor de gran relevancia en el
ámbito agrícola debido a su impacto económico y productivo. Bajo condiciones
favorables, estas bacterias pueden diseminarse con rapidez e invadir diferentes
hospederos, ya sea de manera específica en una sola especie o afectando a una
amplia gama de cultivos. Los síntomas que ocasionan suelen ser similares entre
géneros, aunque algunas manifestaciones son características, como la pudrición
blanda o la presencia de exudados bacterianos.
A diferencia de otros agentes fitopatógenos como los hongos, la identificación de
bacterias requiere metodologías específicas tanto en campo como en laboratorio. Entre
ellas destacan las pruebas de patogenicidad en tejidos vegetales, así como técnicas de
aislamiento y caracterización, que permiten clasificar al patógeno y establecer
estrategias de manejo adecuadas según la especie involucrada y las condiciones del
cultivo.
OBJETIVOS
General
Caracterizar bacterias fitopatógenas de importancia agrícola.
Específicos
 Diferenciar entre los géneros mas comunes de bacterias presentes en
Guatemala
 Implementa y recrear métodos de reconocimiento y aislamiento de bacterias
fitopatógenas.

MARCO TEORICO
GÉNEROS DE IMPORTANCIA ECONÓMICA, CULTIVOS QUE AFECTAN Y
SINTOMATOLOGÍA
Agrobacterium
El género Agrobacterium, compuesto principalmente por A. tumefaciens, A.
rhizogenes y A. rubi, agrupa bacterias Gram negativas, bacilares (0.8 × 1.5 a 3 µm),
móviles por flagelos perítricos y productoras de polisacáridos mucilaginosos. Tienen
amplia distribución en suelos y rizosferas. Infectan frutales de hueso y pepita, vid,
sauces, zarzas, frambuesas, zarzamoras y manzano (Agrios, 2005).
 Agrobacterium tumefaciens causa la enfermedad de las agallas de la corona en
las plantas. La enfermedad se caracteriza por un crecimiento o agalla similar a un
tumor en la planta infectada, a menudo en la unión entre la raíz y el brote. Los tumores
son provocados por la transferencia conjugativa de un segmento de ADN (ADN-T) del
plásmido bacteriano inductor de tumores (Ti). La especie estrechamente relacionada,
Agrobacterium rhizogenes, induce tumores de raíz y porta el plásmido Ri (inductor de
raíz) distintivo. Aunque la taxonomía de Agrobacterium está actualmente bajo revisión,
se puede generalizar que existen 3 biovares dentro del género, Agrobacterium
tumefaciens, Agrobacterium rhizogenes y Agrobacterium vitis. Se sabe que las cepas
de Agrobacterium tumefaciens y Agrobacterium rhizogenes pueden albergar un
plásmido Ti o Ri, mientras que las cepas de Agrobacterium vitis, generalmente
restringido a las vides, puede albergar un plásmido Ti. Se han aislado cepas distintas
de Agrobacterium a partir de muestras ambientales que albergan un plásmido Ri,
mientras que los estudios de laboratorio han demostrado que las cepas distintas de
Agrobacterium también pueden albergar un plásmido Ti. Algunas cepas ambientales de
Agrobacterium no poseen plásmido Ti ni Ri. Estas cepas son avirulentas. (Agrobacteria.
s/f)

Imagen 1. Tumores generados por Agrobacterium sp.( Agrobacteria. s/f).

Clavibacter
Clavibacter incluye patógenos Gram positivos, bacilos rectos o ligeramente
curvos (0.5–0.9 × 1.5–4 µm), habitantes de tejidos vasculares. Infectan alfalfa, frijol,
tomate y papa (Agrios, 2005).
Clavibacter michiganensis, también conocida como podredumbre anular, es un
género inusual de bacterias fitopatógenas, ya que es grampositiva y no tiene un
sistema de secreción de tipo tres. Todas las especies y subespecies de Clavibacter
tienen una pared celular de tipo B2γ reticulada en un residuo de diaminobutirato.
Clavibacter es una bacteria aeróbica con una morfología corineforme. No tiene micelio
y no produce esporas.
Clavibacter michiganensis infecta al huésped primario de una de tres maneras:
heridas, hidatodos o por semillas contaminadas. Si las bacterias alcanzan un quórum
adecuado, el resultado es una infección vascular sistémica. En las primeras etapas de
la invasión, C. michiganensis reside como un patógeno biotrófico en los vasos del
xilema.
Clavibacter tiene una historia compleja de nombres taxonómicos. Durante
mucho tiempo, sólo había una especie reconocida dentro del género Clavibacter. Hay
nueve subespecies dentro de la especie michiganensis. Recientemente, algunas cepas
han sido reclasificadas en otros géneros. Esta historia compleja se debe a la dificultad
de caracterizar las bacterias. A diferencia de los hongos, la morfología de las bacterias
no es muy adecuada para fines taxonómicos. Para este fin, las cepas de una bacteria
fitopatógena, llamadas patovares, se distinguen por características culturales (medios
selectivos), fisiológicas, bioquímicas (p. ej. enzimas secretadas, respuestas químicas
de la planta) o patológicas (incluyendo la variedad de huéspedes susceptibles).

Imagen 2. Planta de tomate infectada con Clavibacter michiganensis ssp.

michiganensis

Erwinia (incluyendo géneros reubicados como Pectobacterium y Dickeya)

Bacterias Gram negativas, anaerobias facultativas, bastones móviles (0.5–1 × 1–
3 µm) con flagelos perítricos. Afectan cucurbitáceas, maíz, frutales de pomáceas y
hortalizas diversas (Agrios, 2005).
Es una bacteria Gram negativo en forma de bastón y con flagelos perítricos. El
género contiene algunas especies saprofitas y varias fitopatógenas. Es la única
fitobacteria facultativa, lo que significa que se pueden multiplicar tanto en la presencia
como en ausencia de oxígeno. Es oxidasa negativa, catalasa positiva y fermentadora.
La coloración de la mayoría de las colonias es crema y algunas especies producen
colonias amarillas. (Blogspot. S/F)
El género Erwinia pertenece a la familia Enterobacteriaceae y causa las
enfermedades denominadas pudrición blanda, canela negra, tallo hueco de papa, tallo
hueco del tomate, tizón de fuego de la pera y de la manzana. E. carotovora subsp.
atroseptica ocasiona la pudrición blanda, necrosis vascular y marchitez en la papa.
(Blogspot. S/F)

Imagen 3. Pudrición causada por Erwinia amilovora (Blogspot. S/F)

Xanthomonas
Gram negativas, bacilos (0.4–1 × 1.2–3 µm), móviles por un flagelo polar.
Colonias amarillas de crecimiento lento. Infectan frijol, algodón, arroz, cereales, tomate,
chile, begonia, gladiola, geranio, nogal, crucíferas y caña de azúcar (Agrios, 2005).
Sintomatología
 Manchas y tizones: tizón común del frijol, mancha foliar angular en algodón,
tizón bacteriano del arroz y cereales, manchas en frutales de hueso, tomate,
chile y ornamentales.
 Marchitamientos y pudriciones: nervadura negra en crucíferas (X. campestris pv.
campestris), gomosis de caña de azúcar (X. vasculorum).
 Cancros: cancros bacterianos en cítricos (X. campestris pv. citri).

Imagen 4. Planta de geranio con Xanthomonas sp.

Xylella
 Gram negativas, bastones pequeños (0.3 × 1–4 µm), no móviles, aerobias
estrictas, habitantes del xilema. Incluye X. fastidiosa, que afecta vid, cítricos, café y
olivo.
Sintomatología
Provoca obstrucción del xilema, generando marchitez, clorosis marginal, muerte
regresiva de ramas y síntomas como “ojo de buey” en café y clorosis variegada en
cítricos.

Imagen 5. Planta con signos de Xylella fastidiosa

Pseudomonas
El género Pseudomonas agrupa bacterias Gramnegativas, en forma de bacilos
con dimensiones de aproximadamente 0.5 – 1 × 1.5 – 4 µm, y se caracterizan por su
movilidad gracias a uno o varios flagelos polares. Algunas especies se distinguen como
fluorescentes, como P. syringae, que en medios con bajo hierro producen pigmentos
verde-amarillos que brillan bajo luz UV; en contraste, las especies no fluorescentes,
como P. solanacearum (Ralstonia solanacearum), carecen de esta pigmentación . Este
género tiene relevancia económica debido a su capacidad de infectar una amplia
variedad de cultivos, causar pérdidas significativas y presentar una alta versatilidad
ecológica, siendo huésped tanto de plantas ornamentales como de cultivos agrícolas
de gran valor.

Imagen 6. Tizón tardío de la papa causado por una bacteria del genero Pseudomona.
 FITOPATOGENOS DE INTERES
Xanthomonas hortorum pv. hederae (antes X. hederae)
Xanthomonas hortorum pv. hederae es un patovar Gram-negativo bacilar móvil,
causante del “bacterial leaf spot and stem canker” en hiedra (Hedera helix), con
impacto en la producción ornamental y en jardinería (Roberts, 2023).
Afecta principalmente a Hedera helix y otras especies de hiedra cultivadas como
plantas de follaje o en viveros (Roberts, 2023).
Sintomatología.
Se caracteriza inicialmente por manchas “water-soaked” (manchas acuosas) de color
verde claro que evolucionan a lesiones marrones o necróticas circulares o irregulares.
En casos severos, la infección avanza al tallo, provocando oscurecimiento, marchitez y
muerte regresiva de ramas (Extension Oklahoma State, s.f.)

Imagen 7. Hoja de Hedera hélix con presencia de Xanthomona Hederae (Extension

Oklahoma State, s.f.)

Xanthomonas hortorum pv. pelargonii (antes X. pelargonii)

Este patovar de Xanthomonas, conocido como X. hortorum pv. pelargonii
(también referida antiguamente como Xanthomonas campestris pv. pelargonii), es el
agente responsable del tizón bacteriano más destructivo en geranios de exposición y
ornamentales (UMass Extension, s.f.).
Ataca Pelargonium spp. y Geranium spp., incluyendo geranios zonales e ivy geraniums,
cultivados en invernaderos y exteriores (UMass Extension, s.f.; AHDB, s.f.) .
Aparecen pequeñas manchas acuosas, a veces hundidas, que se vuelven necrosadas;
también se observan áreas en forma de V amarillentas hacia la nervadura, marchitez,
pudrición del tallo y muerte; la bacteria puede diseminarse fácilmente por riego y
propagación (Penn State Extension, 2023; Ball Seed, 2022)
 Imagen 8. Geranio infectado con Xanthomona Pelargonii. (UMass Extension, s.f.;
AHDB, s.f.) .

Xanthomonas campestris pv. campestris

Este patovar es el agente causal del black rot en crucíferas, considerada una de
las enfermedades más destructivas globalmente en cultivos como repollo, coliflor,
brócoli, mostaza y rábano (Wikipedia, s.f.; UMass Amherst, s.f.).
Afecta prácticamente todas las especies cultivadas de Brassicaceae, incluyendo
semillas de producción comercial (Wikipedia, s.f.; UConn IPM, s.f.).
Sintomatología.
Produce lesiones en forma de V amarilla que se tornan necróticas desde el margen
hacia el centro, con necrosis vascular visible como oscurecimiento o ennegrecimiento
de las venas. El síntoma puede extenderse al tallo, causando marchitez y colapso
general de la planta; puede transmitirse mediante semillas o residuos infectados
(Wikipedia, s.f.; UConn IPM, s.f.; Wisconsin Extension)
 Imagen 9. Brócoli con síntomas de Xanthomonas campestris

Pectobacterium carotovorum (antes Erwinia carotovora)

Pectobacterium carotovorum (anteriormente Erwinia carotovora) es un patógeno
Gram-negativo que causa la pudrición blanda bacteriana (bacterial soft rot), reconocido
entre los diez patógenos vegetales más peligrosos por su amplia gama de hospedantes
y alto impacto poscosecha (ScienceDirect, s.f.; MDPI 2025).
Abarca un amplio rango de hospederos: papa, zanahoria, cebolla, tomate, apio, coles,
ornamentales (iris), entre otros (Bugwood, s.f.; UC ANR, s.f.).
Sintomatología.
Pudrición acuosa y blanda en tejidos lesionados o frutos, con textura mucilaginosa,
desprendimiento de células por acción de pectinasas, mal olor y colapso estructural. En
tubérculos como papa se manifiesta “pierna negra”. Favorable en ambientes cálidos,
húmedos y con heridas en la superficie (BiologyInsights; Bugwood; UC ANR; MDPI
2025)

Imagen 10. Planta de repollo con Pectibacterium carotovorum

METODOLOGÍA
Existen distintas formas de caracterizar bacterias, ya se solo identificando su
presencia, aislándolas en cultivos puros o con pruebas de campo. Durante esta
practica se realizaron tres metodologías distintas que se describen a continuación.
a. DETECCIÓN DE SÍNTOMAS BACTERIANOS Y OBSERVACION DE FLUJO
BACTERIANO
Esta practica principalmente es de ayuda para identificar si la planta observada
presenta daños por bacteria, pero no nos indica de que tipo ni nos brinda mayor
información de la misma.
 1. Observar los síntomas presentados por la planta, importante verificar la
pudrición blanda, el cambio en la coloración del tejido y perdida en la
pigmentación de los tejidos foliares.
2. Realizar cortes casi tan finos como los necesarios para los montajes
permanentes practicados anteriormente en el laboratorio.
3. Montar en una gota de agua el corte realizado anteriormente.
4. Observar determinadamente si hay presencia de flujo o exudado bacteriano, de
ser así se puede confirmar la presencia de bacterias en la planta examinada.

b. TINCIÓN DEL GRAM

Esta prueba identifica a que gran grupo pertenecen las bacterias observadas en la
planta, pueden pertenecer al grupo gram positiva o gran negativa. Esta clasificación no
solo es vital para los microbiólogos, sino que también tiene implicaciones importantes
en la agricultura, ya que influye en el manejo de enfermedades de las plantas y en la
implementación de estrategias de control.
1. Cortar trozos de aproximadamente 1 cm2 del área afectada por el patógeno,
pero sin tomar muchas de las porciones necróticas.
2. En un porta objetos con agua estéril macerar lo más posible los cuadros de
tejido. Luego retirar los sobrantes de tejido, esparcir la solución agua / bacterias
que queda en el portaobjetos.
3. Fijar las bacterias con ayuda del mechero.
4. Añadir cristal violeta sobre el porta por 30 segundos, luego lavar con agua.
5. Repetir ese proceso con alcohol al 95% seguido de safranina.
6. Secar el porta objetos, usar aceite de inmersión y observar en el microscopio.

c. PRE AISLAMIENTO EN TEJIDO VIVO

Prueba de mucha ayuda en campo, variando el tejido vivo puede dar una idea si
hay presencia de bacterias, si el tejido que se contamina apropósito es de agrado para
las bacterias etc.
1. Dividir el tejido (en este caso un chile pimiento) en dos secciones, el lado A será
nuestro testigo absoluto y el lado B será el tratamiento o el lado inoculado.
2. Con ayuda de palillos de madera estériles y desinfectados realizar pinchazos en
la zona del testigo.
3. Realizar el mismo procedimiento con la parte a inocular, solo que antes de hacer
un agujero en esta área primero realizar un pinchazo en tejidos infectados por la
bacteria para realizar una inoculación a propósito al pinchar el lado B.
4. Aislar el material en un tipo de cámara y observar los resultados dos días.
 d. VELOCIDAD DE CRECIMIENTO FORMA Y COLORACIÓN DE LAS
COLONIAS EN MEDIOS DE CULTIVO.
A diferencia de las metodologías anteriores, esta si es de especifico desarrollo dentro
del laboratorio y con mucha consideración de las formas o métodos de sanidad. Con
este proceso obtenemos el desarrollo de las Fito bacterias en medios de cultivo donde
forman colonias.
1. Al igual que en el desarrollo de tinción del gram, obtener trozos de material
vegetal del área afectada por las bacterias.
2. Esterilizar el área de trabajo en laboratorio con alcohol al 95%, preparar en la
mesa de trabajo los vidrios de reloj, mechero, alcohol y el asa.
3. Trasladar el tejido durante todo el tren de desinfección durante 30 segundos por
estación, el tren se describe a continuación:

H20 Estéril Hipoclorito Na H20 Estéril Alcohol 97% H20 Estéril 10 gotas de H20 Estéril

4. Cuando se llega a la ultima estación con tan solo 10 gotas de agua estéril, se
macera el material vegetal todo lo que se pueda con ayuda de las agujas o de
alfileres desinfectados.
5. Con ayuda del asa previamente desinfectada, inocular los medios de cultivo
proporcionados en laboratorio, sellar las cámaras e introducirlas en la
incubadora durante dos días

RESULTADOS
Todos los procesos se realizaron con tejido infectado por Xanthomonas hortorum pv.
pelargonii en geranio (Geranium)
a. DETECCIÓN DE SÍNTOMAS BACTERIANOS Y OBSERVACION DE FLUJO
BACTERIANO
En el microscopio se observó el flujo de microorganismos, dando comprobación del
flujo bacteriano.

Imagen 11. Flujo bacteriano observado a 40X

b. TINCIÓN DEL GRAM

En lente de inmersión se pudieron observar los siguientes microorganismos:

Imagen 12. Bacterias fijadas y teñidas en el porta objetos.

 c. PRE AISLAMIENTO EN TEJIDO VIVO
Tiempo de observación 24h después 72h después

Imagen del tejido

d. PRE AISLAMIENTO EN TEJIDO VIVO

Medio de cultivo 24h 72h

BK

YDC

AM

DISCUSIÓN DE RESULTADOS
 La práctica permitió corroborar la presencia de Xanthomonas hortorum pv.
pelargonii en tejido de geranio, integrando diferentes metodologías de diagnóstico. En
la primera fase, la observación de síntomas y el flujo bacteriano fueron determinantes
para diferenciar el origen bacteriano de la enfermedad respecto a otros fitopatógenos
como hongos o virus. La presencia de exudados bacterianos en cortes foliares
constituyó una evidencia rápida y confiable de infección, ya que este signo es
característico de bacterias vasculares como Xanthomonas (Agrios, 2005).
En la tinción de Gram se observaron células bacilares que se tiñeron de color rosado,
lo cual confirma que X. pelargonii es Gram negativa. Este resultado concuerda con lo
descrito en la literatura, pues el género Xanthomonas pertenece al grupo de bacterias
Gram negativas, con pared celular rica en lipopolisacáridos y sensible a la decoloración
por alcohol (UMass Extension, s.f.). Este hallazgo no solo valida la identificación de
género, sino que también tiene importancia aplicada, ya que la respuesta a ciertos
antibacterianos y métodos de control biológico puede variar entre bacterias Gram
positivas y negativas.
En el pre-aislamiento en tejido vivo, se evidenció que el chile pimiento utilizado como
planta de prueba no presentó síntomas tras la inoculación. Este resultado se explica
por la especificidad de hospedero que presentan muchas bacterias fitopatógenas. En
este caso, X. pelargonii es un patógeno altamente especializado de geranios y otras
especies de Pelargonium, careciendo de patogenicidad en tejidos de solanáceas como
el pimiento (Penn State Extension, 2023). Esto resalta la importancia del concepto de
rango de hospedero en fitopatología.
Finalmente, en los medios de cultivo se observaron colonias con características
morfológicas asociadas a Xanthomonas: crecimiento relativamente lento, colonias
circulares y de coloración amarillenta debido a la producción de xantomonadina, un
pigmento carotenoide típico del género (Agrios, 2005). Estas características culturales
complementan la tinción y la observación sintomatológica, confirmando la identidad del
patógeno.

CUESTIONARIO
¿Cuál es el objeto del uso de chile pimiento?
Inocular tejidos vegetales puede referenciar si el microorganismo causante del daño en
la planta de referencia también puede desarrollarse en otro tejido, en este caso el uso
de chile pimiento y su sanidad aun después de ser inoculado es un indicador de que la
bacteria presente en el geranio es selectiva para esa especie.
Géneros de bacterias fitopatógenas
Síntomas Cultivos
Tipo de
Género Características principales en afectados
Gram
plantas (ejemplos)
Hortalizas
Bacilos, móviles por
Manchas foliares (tomate,
flagelos polares, Gram
Xanthomonas amarillas, cancros, pimiento),
estrictamente negativo
marchitez, tizones. frutales cítricos,
aerobios.
ornamentales.
Bacilos rectos,
Pudriciones
móviles, pigmentos Tomate, frijol,
Gram blandas, necrosis,
Pseudomonas fluorescentes, papa, cereales,
negativo manchas acuosas,
metabolismo hortalizas.
quemado foliar.
versátil.
Bacilos rectos, Marchitez
móviles, habita en Gram bacteriana, Papa, tomate,
Ralstonia
suelo y agua, negativo oscurecimiento tabaco, plátano.
coloniza xilema. vascular.
Erwinia (ahora Bacilos móviles, Pudriciones Papa, zanahoria,
Gram
Pectobacterium y producen enzimas blandas, mal olor, lechuga,
negativo
Dickeya) pectinolíticas. marchitez. ornamentales.
Bacilos, móviles,
ubicuos en suelo, Gram Tumores, agallas Vid, frutales,
Agrobacterium
transfieren plásmido negativo en cuello y tallos. ornamentales.
Ti.
Bacilos inmóviles, Cancros, necrosis
Gram Tomate, papa,
Clavibacter aerobios estrictos, vascular,
positivo cereales.
crecen lentamente. marchitez.
Bacilos móviles,
aeróbicos, Gram Manchas foliares, Sandía, pepino,
Acidovorax
relacionados a negativo tizones, necrosis. frijol, arroz.
lesiones en semillas.
Forman micelio
Costras, lesiones
filamentoso, Gram Papa, zanahoria,
Streptomyces en raíces y
esporas, producen positivo betabel.
tubérculos.
antibióticos.

CONCLUSIONES
 La observación de flujo bacteriano en tejido infectado constituye una herramienta
rápida y eficaz para confirmar la presencia de bacterias fitopatógenas en
plantas.
 La tinción de Gram confirmó que Xanthomonas hortorum pv. pelargonii es una
bacteria Gram negativa, coherente con lo descrito en la literatura.
  El pre-aislamiento en tejido vivo demostró que esta bacteria presenta
especificidad de hospedero, siendo patógena en geranio pero no en chile
pimiento.
 Las colonias obtenidas en medios de cultivo presentaron las características
típicas de Xanthomonas, como crecimiento lento y pigmentación amarilla,
reforzando su identificación.
 La práctica permitió comprender la importancia de integrar distintos métodos de
diagnóstico para la correcta identificación de bacterias fitopatógenas en
laboratorio.

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