El Microscopio
El microscopio (del prefijo micro- y el sufijo -
scopio, y estos del prefijo griego μικρο- micro-,
‘muy pequeño’, y la raíz griega σκοπ- scop-,
‘ver’) es un instrumento que permite observar
objetos que son demasiado pequeños para ser
vistos a simple vista. El tipo más común y el
primero que se inventó es el microscopio
óptico. Se trata de un instrumento óptico que
contiene dos o más lentes que permiten
obtener una imagen aumentada del objeto y
que funciona por refracción. La ciencia que
investiga los objetos pequeños utilizando este
instrumento se llama microscopía.
Microscopio compuesto fabricado hacia 1751 por Magny. Proviene del
laboratorio del duque de Chaulnes y pertenece al Museo de Artes y Oficios,
París.
El microscopio fue inventado por Zacharias Janssen en 1590. En 1665
aparece en la obra de William Harvey sobre la circulación sanguínea al mirar
al microscopio los capilares sanguíneos y Robert Hooke publica su
obra Micrographia.
En 1665 Robert Hooke observó con un microscopio un delgado corte
de corcho y notó que el material era poroso, en su conjunto, formaban
cavidades poco profundas a modo de celditas a las que llamó células. Se
trataba de la primera observación de células muertas. Unos años más
tarde, Marcello Malpighi, anatomista y biólogo italiano, observó células
vivas. Fue el primero en estudiar tejidos vivos al microscopio .
Partes del microscopio
Los microscopios ópticos son instrumentos que nos van a permitir ver una
imagen ampliada por medio de un conjuntos de lentes. Los que nos
interesan, para la microscopia de hongos estarán en el rango de ampliación
comprendido entre 40 y 1000 aumentos (con oculares de 10X).
Los oculares
Deben su nombre a la proximidad a los ojos, los mas comunes suelen ser 10X esto
quiere decir que aumentan la imagen que vemos diez veces.
Cuando el microscopio tiene dos oculares (microscopio binoculares) tienen un
mecanismo intermedio que sirve para ajustar la distancia interpupilar, su correcto
ajuste ocurre cuando al mirar a través de los dos vemos únicamente un circulo, un mal
ajuste nos haría ver dos círculos o uno superpuesto en el otro.
Los Objetivos
Son lentes con diferente tipo de aumento, se encuentran insertados en una
pieza metálica llamada revolver y que gira en ambas direcciones Lo más
frecuente es encontrar revolver con cuatro objetivos que suelen ser de 4X 10X
40X 100X aumentos. Cuando giremos el revolver para cambiar de objetivo
debemos mantener la vista en ellos para evitar que rocen la preparación y
dañar las lentes con ello.
Tipos de Objetivos
Acromático: son los que se usan más comúnmente en la micología. Se han corregido
cromáticamente para dos longitudes de onda, azul y rojo y la aberración de esfericidad
se fija para una longitud de onda, generalmente de color amarillo-verde. Ventaja: son
los mas baratos y fáciles de encontrar. Inconveniente: solo se observa con calidad
aceptable en el centro del campo de visión.
Semiapocromáticos: están ajustados para corregir las aberraciones cromáticas de
dos o incluso tres colores básicos y las aberraciones de esfericidad. Con ellos se suele
tener una mayor apertura numérica. Es raro encontrarlos a la venta.
Apocromáticos: están calibrados para 3 o cuatro longitudes de onda (cada una de
ellas representa un color básico) y la aberración de esfericidad se corrige con azul y
rojo. Bastante caros. Planacromáticos: acromáticos donde la curvatura de campo
está eliminada. Esto es que el campo de visión es igual en el centro que en cualquier
lado. Lo mejor que podemos adquirir sin arruinarnos. Ideales para fotografía
(evidentemente sin contar con los últimos). Planapocromáticos: apocromáticos
donde la curvatura de campo está eliminada. Son los ideales a fecha actual pero el
precio nos hace descartarlos. Existen además los Semiplanacromáticos pero no
merecen la pena pues la diferencia de precio con los Planacromáticos no es
significativa (por lo general).
Mesa de trabajo “Platina”
Es la plataforma donde colocaremos las
preparaciones para su observación, tiene un orificio
central por donde pasa la luz procedente de la
fuente de iluminación.
Tiene dos pinzas para sujetar el portaobjetos y dos
tornillos que nos van a permitir mover la
preparación de adelante a atrás, de izquierda a
derecha y viceversa.
Condensador:
Justo debajo de la mesa de trabajo se encuentra el condensador, es un sistema de
lentes que concentra la luz de la fuente de iluminación hacia la preparación. En su
interior tiene un diafragma-iris con el que podremos condensar (limitar) el haz de rayos
de luz que atraviesa el sistema de lentes, eliminando los rayos demasiados desviados
consiguiendo aumentar o disminuir el contraste, obteniendo una mayor nitidez en la
visión. Tiene un filtro de color azul para corregir el exceso de amarillo de la luz y
proteger la visión. Este filtro es intercambiable por otros de distinto color con los que
se puede obtener distintos efectos.
Fuente de iluminación
Esta se encuentra en la parte inferior del
microscopio y encargada de proporcionarnos la
iluminación para ver la preparación tiene dos
pulsadores uno de encendido y apagado y otro
para regular la intensidad de luz.
Fuente de iluminación
Esta se encuentra en la parte inferior del
microscopio y encargada de proporcionarnos
la iluminación para ver la preparación tiene
dos pulsadores uno de encendido y apagado
y otro para regular la intensidad de luz.
Tercer ocular
En los microscopios trioculares tienen un tercer ocular diseñado para
instalar una cámara digital específicas para microscópicos o en su
defecto por medio de unos adaptadores también podremos acoplar
nuestra cámara digital para resultarnos mas cómoda la fotografía.
Macrométrico y micrométrico
Son los mando que están situados en la parte baja del pie que se usan
para enfocar, subiendo y bajando la mesa de trabajo.
Con el de mayor tamaño (macrometico) subiremos y bajaremos de
manera rápida mientras que con el mando pequeño enfocaremos con
más precisión ya que son micras el desplazamiento que se obtiene
con este mando.
Utilización del microscopio
En primer lugar encenderemos la luz del microscopio y ajustaremos
los oculares a nuestro espacio interpupilar.
Deberemos tener colocado el objetivo de menor aumento 4X y la
mesa de trabajo (Platina debe estar en su posición mas baja y
totalmente recogida sin que ninguna pieza sobresalga de ella.
Cuando terminemos de trabajar con el, después de realizar la limpieza
que le corresponda, esta debe ser siempre la posición en que lo
guardemos.
Seguidamente colocaremos la preparación sobre la mesa de trabajo y
procederemos a enfocar con el tornillo macrometrico, una ver
enfocado cambiaremos al siguiente objetivo, siempre sin saltarnos el
objetivo inmediatamente superior, y así lo haremos hasta llegar al de
40x que será el objetivo que mayormente usemos.
En el objetivo de 40X Sujetaremos el tornillo micrométrico y jugaremos
(subir y bajar ligeramente y continuamente) para tener profundidad de
campo ya que el microscopio nos da una visión bidimensional .
Para el calibrado del ocular micrométrico necesitamos de un
portaobjeto micrométrico ya que la regla que aparece en el ocular, en
muchos casos no corresponde a ninguna unidad de medida.
Calibrado del ocular micrométrico
Con el calibrado del ocular micrométrico conseguiremos determinar el
valor que tiene cada división que vemos en el, generalmente suele
tener cien divisiones.
Si es posible este proceso lo dejaremos en manos de un experto, o
alguien que lo haya realizado con anterioridad o lo realizaremos bajo
su supervisión, ya que el portaobjeto micrométrico suele resultar
costoso y romperlo no seria del todo complicado para los que no
tienen experiencia con el microscopio.
Si no tuviésemos a nadie que nos ayudase estos serian los pasos a
seguir:
1º- Sustituiremos el ocular del microscopio por el ocularel ocular
micrométrico
2º- Bajaremos la mesa de trabajo al punto mas bajo y colocaremos el
objetivo de menor aumento 4x
3º- Colocaremos el portaobjeto micrométrico en la mesa del
microscopio y enfocaremos hasta ver las dos escalas micrométricas
4º- Situaremos una escala sobrepuesta sobre la otra y haremos que
coincidan en el punto 0
5º- Buscar una división del ocular que coincida con otra del portaobjeto
micrométrico tomando el máximo de divisiones posibles tanto en el
ocular micrométrico como en el portaobjeto micrométrico
6º- Por una regla de tres se calcula la medida en micras a lo que
corresponde cada división del ocular
7º Este proceso lo realizaremos con el resto de objetivos
Utilización de la cámara para fotografía microscópica
No resulta fácil realizar una buena fotografía microscópica, será tan
importante el buen conocimiento de nuestra cámara como la buena
realización de la preparación a fotografiar Con práctica conseguiremos
poco a poco ir mejorando los resultados
Existen cámaras en el mercado exclusivas para la fotografía
microscopia que se introducen dentro del tercer ocular o en su defecto
en el tubo donde va uno de nuestros ocular de visión Estas cámaras
además de costosas suelen carecen de una buena lente óptica por los
que las fotografías realizadas carecen de buena calidad, existen
algunos modelos expresamente diseñados por los propios fabricantes
de microscopios que serian de un elevadísimo coste A favor tienen
que son muy cómodas de usar ya que se conectan al ordenador
mediante un cable USB viendo la imagen en la pantalla de este,
facilitándonos la realización de la fotografía y la selección de la zona a
fotografiar
Tenemos también unos adaptadores para nuestra cámara digital por
medio de adaptadores, anillos y oculares de rosca que conseguirán
unir a los tubos de nuestro microscopio consiguiendo unos resultados
muy buenos. Existen ciertos modelos de cámaras digitales en el
mercado que podemos conectar a nuestro pc mediante el cable Usb
con las que obtendremos las mismas comodidades que las anteriores
Este es el mejor método por que nos permite en un futuro cambiar de
cámara si necesidad de cambiar el resto del materia, además de la
gran calidad en las fotografías que podemos obtener. Con un coste
bajo
Para los que no dispongan de estos adaptadores para la cámara
también podemos realizar fotografía. Para la realización de esta,
colocaremos la cámara sobre un trípode y haremos coincidir el
objetivo de la cámara con el del microscopio, aproximándolos lo mejor
posible Existen en el mercado cámaras con unos objetivos muy
pequeños que se acoplan al ocular del microscopio y con las que
obtendremos buenos resultados
Mantenimiento del microscopio
Solamente se requiere de uno pocos consejos para el mantenimiento
de un microscopio.
Al terminar de trabajar con el, dejaremos el objetivo de menor
aumento, dejaremos la mesa de trabajo (Platina) completamente
recogía, sin quedar ningún elemento que sobresalga de ella.
Siempre que usemos el objetivo de inmersión debemos eliminar de el
los restos de aceite Lo ideal es que utilicemos toallitas especiales para
la limpieza de lentes con un compuesto también diseñado para la
limpieza de las lentes llamado xilol, el mismo método emplearemos
para la limpieza de las demás lentes siempre que lo necesiten y si
abusar de ello.
No utilizaremos nunca alcohol para limpiar las lentes ya que su uso
reiterado, dañará las lentes y su sujeción.
Cubriremos con una funda o bolsa para que no coja polvo y si lo
vamos a dejar un tiempo continuado sin usar lo guardaremos en su
caja.
Elección de microscopio
A la hora de adquirir un microscopio debemos tener presente que este
debe reunir las características necesarias para el uso que le vamos a
dar.
Como ocurre con todas nuestras aficiones, en un principio adquirimos
herramientas más económicas para luego ir mejorándolas con el
tiempo.
Lo mismo nos ocurrirá con el microscopio, no debemos hacer un gran
desembolso para luego dejarlo guardado en un rincón cogiendo polvo.
Es recomendable que el equipo que elijamos no este muy desfasado,
para si es necesario, ir añadiéndole mejores elementos que el equipo
que elijamos no este muy desfasado, para si es necesario, ir
añadiéndole mejores elementos.
Lo mínimo que le podemos pedir a un micro es lo siguiente:
Que la longitud del tubo sea estándar (160 mm.) Que sea binocular
(por comodidad, aunque se puede uno apañar con un monocular) y si
se quiere comodidad para hacer fotografía, triocular (aunque con un
binocular e incluso un monocular se pueden hacer).
Que tenga al menos 3 objetivos (mejor 4 e ideal 5) de 10X, 40X y
100X (con 4 añadir el de 4X y con 5 añadir uno de 60X o de 20X).
La calidad y la cualidad de dichos objetivos marca la diferencia en los
precios: normales (acromáticos), mejores (semiplanacromatico),
ideales (planacromaticos) y de soñadores (planapocromáticos).
Que tengan una luz de al menos 20 w. No le daremos menos
importancia a la mecánica, como son los tornillos de enfoque y a la
mesa de trabajo (stage) con ejes de coordenadas X e Y para poder
mover el portaobjeto de forma milimétrica y cómoda. Aparte debemos
adquirir un objetivo micrométrico para poder realizar mediciones.
Errores a evitar
-. Debemos aprender a reconocer las burbujas de aire y no
confundirlas con esporas de paredes gruesas.
-. No confundir los basidiolos (basidios inmaduros) con cistidios.
-. A la hora de la recolección de hongos para su observación en el
microscopio es importantísimo guardarlos independientemente a
poder ser envolver en papel de aluminio para evitar la contaminación
de las esporas de unos con otros, ya que nos llevaría a cometer
grandes errores.
-. Nos aseguraremos ante una reacción negativa, del buen estado de
los reactivos y que no sean demasiado viejos (se puede comprobar la
validez de un reactivo probándolo sobre un hongo ya conocido y
viendo su resultado).
-. Si el microscopio no viniese montado (cosa que es frecuente) a la
hora de montar los objetivos en el revolver, se deben de montar de
menor a mayor y habituarse a la hora de usarlo en empezar por el de
menor aumento e ir pasando progresivamente a mas aumento y
acostumbrarse a hacerlo así para evitar golpear los objetivos de mayor
aumento (a no ser que el micro tenga tope).
-. No utilizaremos el portaobjetos micrométrico para realizar la
elaboración de una preparación que luego vallamos a observar en el
microscopio.
-. A la hora de sustituir la bombilla de la fuente de alimentación
debemos tener presente las indicaciones del fabricante de nuestro
microscopio y respetar el voltaje de dicha bombilla.
Colocar una bombilla, con distintas especificación en el microscopio va
a reduciría notablemente su calidad del visionado
Componentes de un microscopio:
