Universidad Autónoma de Baja California Laboratorio de Inmunología
Facultad de Medicina y Psicología María De Jesús Gutiérrez Villagrán
Laboratorio de inmunología
ACS VIH
Práctica No. 11
Acosta Ortega Ana Rosa, 2208681
Camarena Cruz Karlo Santiago, 2209039
Garnica Miranda Lucia, 2209012
Hernandez Lucero Paulina, 2208780
VIH ¿Qué es?
Ciclo de vida
Virus de inmunodeficiencia Humana Fusión
Unión
Retrovirus que ataca al sistema Proteina gp41
Celulas CD4+
inunologico, especialmente
Linfocitos TCD4+
Predispone a infecciones
oportunistas Integración Retrotranscripción
VIH mal tratado puede evolucionar a Integrasa Transcriptasa inversa
SIDA (Sindrome De
Transcripcion y
Inmunodeficiencia Adquirida). Gemacion y
traducción
ARN polimerasa II Maduración
VIAS DE TRANSMISIÓN
Tejidos ricos es celulas inmunes
Mucosa Ganglios
linfaticos
genital
regionales
Tejido linfoide
asociado a
mucosa
MANEJO DE SUEROS
Se recogen de la forma habitual
Evitar mantenerlos más de 24 horas a temperatura
ambiente.
Recomendado usar tubos estériles y no conservarlos a
+4ºC más de 72h (para minimizar contaminación
microbiana)
Si se prevé la necesidad de conservar +24h : utilizar
temperaturas de -20ºC y -70ºC.
No inactivar sueros con calor.
Curso clínico de la infección
Fase aguda Fase cronica SIDA
2 -4 semanas despues Latencia clinica CD4+ < 200 celulas /UL
del contagio Puede durar años sin Presencia de
Sintomas : Fiebre, sintomas enfermedades
faringitis, El virus se replica en oportunistas :
linfadenopatia, ganglios linfaticos Pneumecystis
jirovecii
exantema y mialgias Lentamente
Candidiasis
Alta carga viral disminuyen L. CD4+
esofagica
Caida linfocitos CD4+
Tuberculosis
diseminada
MECANISMOS DE EVASIÓN
INMUNOLÓGICA DEL VIH
Infección directa y destrucción de
linfocitos CD4+.
Integración del genoma viral al ADN
del huésped.
Alta tasa de mutación → escape del
reconocimiento inmunológico.
Ocultamiento en reservorios
celulares.
Resultado: progresiva
inmunodeficiencia sin eliminación
viral.
TÍTULO DE ANTICUERPOS
Fases según el título
Aguda o primaria : 1-2 semana, No hay anticuerpos detectables aun
"Periodo de ventana"
Seroconversion : 2 - 4 semana, aparecen anticuerpos detectables
IgM IgG Prueba ELISA 3ª o 4ª Gen.
Infección cronica : Puede durar años, se elevan las concentraciones de IgG, linfocitos
T CD4+ disminuyen lentamente
Progresión a sida: Inmunosupresion progresiva provoca : Disminucion
titulos de anticuerpos y falsos negativos
Limitaciones diagnósticas
tempranas en la infección por VIH
Ausencia de marcadores detectables en
etapas iniciales de la infección
Fase conocida como “periodo de ventana”
Las pruebas basadas en anticuerpos pueden
tardar 2 a 3 semanas en volverse positivas
Las pruebas combinadas (Ac + Ag p24)
acortan el periodo de ventana, pero no lo
eliminan
Posibilidad de resultados falsos negativos en
etapas tempranas
Recomendación: repetir la prueba si existe
sospecha clínica o exposición reciente
TÉCNICAS Y ANTÍGENOS
La forma mayormente utilizada es la enzimoinmunoanálisis
tambien denominada ELISA o EIA
Indirecto Competitivo
Antigeno se adhiere a la fase Se coloca el antigeno en fase
solida solida
Se añade la muestra de peciente Se añade muestra de paciente
Si hay anticuerpos se uniran al con anticuerpos marcados
antigeno. Competencia de anticuerpos
De capruta / Sandwich
Se fijan anticuerpos en la fase solida
Se añade muestra paciente
Se añade un segundo anticuerpo marcado con enzima
Se añade el sustrato
Pruebas rápidas de detección
Inmunocromatografía Duración : 15 - 30 minutos
Técnica de aglutinación pasiva : Pruebas rápidas (pruebas de cribado del VIH)
Usa partículas con antígenos de VIH Emplea anticuerpos
Sencilla y permite hacer titulaciones Se obtiene entre 5 -20 min
Difíciles de automatizar Utilizado en situaciones de urgencias
Detecta IgM e IgG
Inmunocromatográfica
Tipo test rápido
Se utiliza una tira reactiva
Es facil de usar y útil en emergencias
Pruebas de confirmacion
La confirmación de los resultados positivos en las pruebas de detección
primarias es inexcusable.
Western blot (WB)
Estándar de confirmación de la
presencia de ac anti-VIH.
Separación de las proteínas víricas por
PM mediante electroforesis →
membrana nitrocelulosa + suero
Positivo: cumple con el criterio de +
Negativo: no observa banda de
reactividad
Indeterminado: reactividad distinta a
las del criterio de +
Criterios de Positividad (WB)
Positivo: cumple con el criterio de +
Negativo: no observa banda de reactividad
Indeterminado: reactividad distinta a las del criterio de +
Organización Reactividad frente a:
Dos glucoproteínas cualquiera: gp160,
OMS
gp120, gp41
Una proteína de cada gen estructural:
Cruz Roja Americana
env, pol, gag
FDA p24 + p32 + (gp41 o gp120 o gp160)
ESTRATEGIAS DE
CONFIRMACIÓN DE AC ANTI-VIH
Diagnóstico + prevalencia <10%: se recomienda el uso de tres técnicas con
antígeno distinto
Tres pruebas positivas = Dx positivo
Se le recomienda a los laboratorios contar con mínimo 2 pruebas de
detección primarias de distinto fabricante
Técnica utilizada en primer lugar: máxima sensibilidad
Técnica utilizada en segundo y tercer lugar: mayor especificidad
PROBLEMAS EN LA CONFIRMACIÓN
Falsos Positivos
Congelaciones y descongelaciones repetidas
Almacenamiento a temp. subóptima
Aspecto lipídico o turbio
Contaminación microbiana
Enfermedades reumatoides
Poliomielitis
Lupus eritematoso
Multitransfundidos
Multiparas
Hemodializados
Sídrome de Stevens-Johnson
PROBLEMAS EN LA CONFIRMACIÓN
Falsos Negativos
Infección por tipo de VIH no detectable
Tratamiento inmunosupresor prolongado
Transplante de médula osea
Disfunción de los linf. B
Neoplasias
Errores de extracción o identificación
Fallos en el principio técnico
Fallas en la fabricación del equipo dx
Respuestas anómalas ante la infección
Impacto clínico de la detección
oportuna del VIH
Importancia del diagnóstico temprano
Evita la progresión a inmunodeficiencia avanzada.
Reduce la carga viral y el daño inmunológico.
Disminuye el riesgo de transmisión.
Permite iniciar tratamiento antirretroviral (TAR)
oportunamente.
Mejora la calidad y expectativa de vida.
Facilita el seguimiento clínico y apoyo psicosocial.
Fortalece la prevención en salud pública.
FUNDAMENTO DE LA PRÁCTICA
WL Check HIV 1+2
Cassette plástico
Prueba rápida → ensayo
Membrana nitrocelulosa con
inmunocromatográfico “in vitro”
antígenos recombinantes HIV-1
(gp41) y HIV-2 (gp36)
Zona T
Detecta: anticuerpo anti-HIV-1, anti-
Parche impregnado con antígenos
HIV-1 grupo O, anti-HIV-2
conjugados a oro coloidal
FUNDAMENTO DE LA PRÁCTICA
WL Check HIV 1+2
Muestra reactiva:
Muestra y buffer → al pocillo anticuerpos (anti HIV-1 y HIV-2)
Mezcla migra (capilaridad) a
“S” se mezcla con los forman un complejo con los
la membrana nitrocelulosa.
antígenos recombinantes. antígenos conjugados del oro
coloidal.
Complejo se une con los
Prueba control antígenos inmovilizados de
En la zona de prueba “C” se debe la zona de prueba “T” de la
formar una línea del mismo color membrana nitrocelulosa →
forma un línea color rosa-rojo
púrpura.
Metodología de la práctica
Referencias extras:
Mayo Clinic. (2023). VIH/sida y : Diagnóstico y tratamiento. https://www.mayoclinic.org/es/diseases-
conditions/hiv-aids/diagnosis-treatment/drc-20373531
NIH. (2023). El ciclo de vida del VIH. HIVinfo.nih.gov. https://hivinfo.nih.gov/es/understanding-hiv/fact-
sheets/el-ciclo-de-vida-del-vih
Organización Mundial de la Salud (OMS). (2023). VIH/sida: Datos y cifras.
https://www.who.int/es/news-room/fact-sheets/detail/hiv-aids
SIDA STUDI. (2018). Diagnóstico precoz del VIH. https://www.sidastudi.org/resources/inmagic-
img/DD49156.pdf
Caso clínico
Comenta haber tenido relaciones
sexuales ocasionales sin
protección en los últimos tres
meses.
Durante la entrevista, refiere un
episodio de faringitis leve hace
tres semanas, que resolvió
espontáneamente. Niega otras
comorbilidades. En la exploración
física, se encuentra en estado
general conservado, con palidez
leve de tegumentos, candidiasis
oral leve y ganglios palpables en
región cervical y axilar.
Caso clínico
Con esta presentación clínica y el
antecedente de exposición de
riesgo reciente, sin datos aún de
inmunodepresión severa… ¿cuál es
la prueba diagnóstica inicial más
adecuada?
a) Prueba rápida
inmunocromatográfica para VIH
b) ELISA de tercera generación
c) Prueba combinada de cuarta
generación (Ag p24 + Ac)
d) PCR cuantitativa para carga viral
Hazte la prueba
llama al
911-234-5678
Elementos
