EQUIPO 1 RESUMEN CAPITULO

Curva de crecimiento en bacterias

“Crecimiento” en los componentes celulares que conduce a un aumento en el número o
tamaño de las células. El fenómeno de fisión binaria o gemación aumenta el número de
células, mientras que los ciclos repetidos de división nuclear que no van seguidos de división
celular dan como resultado un aumento del tamaño celular. Procariota - modo binario.
Fase de latencia
El inóculo primario en un medio de cultivo fresco da como resultado un período en el que no
se produce ningún aumento aparente en el número de células. Sintetizan nuevos
componentes para adaptarse y prepararse para el nuevo crecimiento
Fase exponencial
La fase exponencial o logarítmica representa la etapa en la que las células microbianas se
dividen activamente con su tasa máxima de crecimiento. La tasa de proliferación microbiana
se rige por las condiciones de cultivo y su capacidad genética. División constante. Los
constituyentes celulares se sintetizan a velocidades relativamente constantes. Metabolitos
primarios incluyen aminoácidos, vitaminas, enzimas, etanol y ciertos ácidos orgánicos.
Fase estacionaria
Tasa de crecimiento coincide con la tasa de mortalidad. La muerte celular programada (PCD)
(respuesta a condiciones de estrés como la falta de nutrientes) ayudan a la supervivencia de
otras células siendo fuente de nutrientes.
Fase de muerte
Disminución exponencial del número de células. Comienza debido a la privación de nutrientes
y energía, la acumulación de desechos tóxicos y la activación de enzimas autolíticas.
Formación de esporas
Efecto de los factores ambientales sobre el crecimiento microbiano.
Los microorganismos pueden resistir y sobrevivir en condiciones ambientales extremas
(extremófilos). Factores ambientales, como la concentración de solutos, la temperatura, el
pH, el oxígeno y la radiación, tienen un profundo impacto en el crecimiento y la fisiología
microbiana.
Efecto de los solutos y la actividad del agua sobre el crecimiento microbiano.
La concentración de solutos fuera de una célula microbiana es fundamental en su
supervivencia en el entorno natural. Una célula microbiana típica retiene ciertas sustancias
químicas en su citoplasma que ayudan a generar una presión osmótica o de turgencia que
evita que la célula se encoja al adaptarse al e1ntorno externo. Osmorregulación
Efecto de la temperatura sobre el crecimiento microbiano.
Al aumentar la temperatura, las enzimas catalizan reacciones más rápidamente y, por tanto,
se observa un mayor crecimiento microbiano, las altas temperaturas resultan fatales.
Existen cuatro clases de microorganismos: psicrófilos, mesófilos, termófilos e hipertermófilos.
Los psicrófilos son organismos que pueden crecer a temperaturas tan bajas como 0 °C. Su
crecimiento óptimo se produce a una temperatura de 15 °C o menos y un máximo a 20 °C. Los
organismos que pueden crecer a 0 °C pero que tienen un óptimo de 20 a 40 °C se conocen
como psicrotolerantes. Los mesófilos son organismos que poseen un rango de temperatura
óptimo de 20 a 50 °C. La mayoría de los grupos de microorganismos se encuentran dentro de
este rango. Los termófilos son organismos que crecen a temperaturas superiores a 55 °C.
Muestran un crecimiento lento a 45 °C y tienen óptimos que oscilan entre 55 y 65 °C.
Hipertermófilos, sobreviven a temperaturas superiores a 80 °C. Su temperatura óptima oscila
entre 80 y 113 °C, y no pueden crecer bien ni siquiera por debajo de los 55 °C.
Efecto del pH sobre el crecimiento microbiano.
Un cambio en la concentración de iones de hidrógeno del entorno circundante afecta el
crecimiento microbiano
Neutrófilos: pH 5.5-7.9
Acidófilos: pH inferior 5.5
Los alcalófilos son el grupo de organismos que pueden sobrevivir en condiciones muy
alcalinas donde el pH suele ser 9 o superior.
Efecto de la presión sobre el crecimiento microbiano.
La presión hidrostática alta inhibe varios procesos celulares (motilidad, división celular, la
replicación, la transcripción y la traducción, la alteración de la estructura del ácido nucleico y
las proteínas y la función de la membrana).
Mesofilos- presión de aprox 50 MPa conduce a una inhibición del crecimiento celular.
La alta presión tiende a modificar la forma celular de las células bacterianas
Los microbios que sobreviven en fuentes hidrotermales muestran un alto grado de adaptación
osmótica ej. Fotobacteria profunda
Los piezófilos o barófilos necesitan un mínimo de 70 a 80 MPa
Efecto del oxígeno sobre el crecimiento microbiano.
Las especies bacterianas pueden adoptar diferentes estrategias para respirar en un ambiente
aeróbico y anaeróbico. Una cadena respiratoria bacteriana consta de deshidrogenasas
específicas para un sustrato particular que transfiere equivalentes reductores del donante a
los aceptores de quinona, donde los electrones son posteriormente aceptados por los
aceptores terminales de electrones
Los anaerobios facultativos- pueden crecer en condiciones anaeróbicas, pero muestran un
mejor crecimiento en condiciones aeróbicas.
Los organismos aerotolerantes- no se ven afectados por la presencia o ausencia de oxígeno.
Los anaerobios obligados - extremadamente sensibles al oxígeno, lo que provoca su muerte si
se exponen.
(ROS) especies reactivas de oxígeno
Crecimiento diáuxico
La población microbiana tiende a mostrar un crecimiento logarítmico bifásico cuando se le
suministran dos fuentes de carbono diferentes en su medio de crecimiento.
Las dos fases exponenciales están separadas por una fase de retraso, en la que el crecimiento
microbiano es limitado.
introducido Jacques Monod- El crecía E. coli con dos fuentes diferentes de carbono, glucosa y
lactosa, que mostraron un crecimiento bifásico donde la glucosa se consumía y después del
agotamiento observó una fase de retraso, seguida de la utilización de lactosa.
regulación del operón lac
a)laca operón reprimido: En ausencia de lactosa: Alta concentración de glucosa;
Niveles bajos de AMPc
b)laca operón activado: En presencia de lactosa: Baja concentración de glucosa;
Altos niveles de AMPc

Efecto de la producción de proteínas recombinantes sobre el crecimiento bacteriano

Expresión de proteínas recombinantes por lo general conlleva al estrés metabólico.
• tasa de crecimiento especifica de las células recombinantes inducidas, expresan
proteínas heterólogas que es menora diferencia de células no inducidas o libres de
plásmidos.
• reducción en la tasa de crecimiento, atribuyen a la desviación de recursos celulares
hacia la expresión de proteínas recombinantes.
• La “carga metabólica” , puede resultar en la activación de genes implicados en las respuestas
al estrés , se asocia con una demanda elevada de energía de mantenimiento y tasas de
respiración más altas
• La acumulación de desechos tóxicos estimula la producción de metabolitos no deseados,
como el ácido acético (dificulta el crecimiento celular)
• La acumulación de subproductos crea condiciones limitantes de nutrientes y oxigeno que
inducen inanición y anaerobiosis, contribuyendo a una disminución significativa en el
crecimiento celular
Respuesta al choque térmico
Expresión de proteínas recombinantes por parte de células bacterianas puede dar lugar a la
activación
• surge debido a la acumulación de proteínas que no se han plegado correctamente.
Estas proteínas mal plegadas forman proteínas insolubles
• los agregados conocidos como cuerpos de inclusión que conducen a la expresión de
proteínas de choque térmico, estas son parte de una respuesta normal al estrés hacia
 temperaturas elevadas y su expresión está controlada por el factor sigma σ.
• proteína DnaK codificada por el ADNKEl gen es una chaperona que se une a las
proteínas agregadas y ayuda en el control de calidad
• Proteínas de choque térmico como la proteasa Lon, cataliza la degradación de
proteínas plegadas anormalmente sintetizadas durante condiciones de estrés
• La expresión de la proteína heteróloga también se asocia con altas tasas de transcripción y
expresión de proteínas de choque térmico como DnaK y GroEL
Respuesta estricta
En condiciones de privación de nutrientes y diferentes señales de estrés, el sistema de
respuesta estricto se activa en las células. La característica más importante de dicha
respuesta es la producción de ciertas pequeñas moléculas mensajeras secundarias como la
guanosina 5.′-difosfato 3′-difosfato (ppGpp) y guanosina 5′-trifosfato 3′-difosfato (pppGpp). se
puede activar una respuesta de tipo estricto durante la expresión de proteínas heterólogas
cuando la composición de aminoácidos de la proteína deseada es diferente de la de las
proteínas nativas de la célula huésped. La presencia de aminoácidos raros en la proteína
extraña da como resultado su agotamiento en la célula huésped y conduce a una respuesta
estricta. Además, la sobreproducción de proteínas recombinantes también reduce la reserva
de aminoácidos, provocando una detención en la síntesis de proteínas.
Medición del crecimiento microbiano
La medición de la tasa de crecimiento microbiano y la densidad celular es esencial para
estudiar la fisiología y el metabolismo celular. Muchos organismos tienden a formar grupos o
adoptar estructuras filamentosas cuando crecen en condiciones ligeramente desfavorables,
lo que dificulta la medición de la biomasa microbiana. Además, las condiciones de
crecimiento desfavorables también conducen al desarrollo de etapas resistentes (p. ej.,
esporas), lo que da lugar a mediciones erróneas. Las condiciones de crecimiento del inóculo
también juegan un papel importante en la determinación. El término "crecimiento" se puede
definir en términos de un aumento en el número de células o biomasa, y hay varios métodos
disponibles para calcular el tiempo de generación o la tasa de crecimiento microbiano.
Método de conteo directo
El uso de una cámara de recuento para el recuento de microorganismos es una de las técnicas
más comunes, que se considera fácil, rápida y razonable. Otra ventaja de este método es que
puede proporcionar información adicional sobre la morfología y el tamaño de las células
microbianas. Generalmente se utiliza para el recuento de células procariotas, y el
hemocitómetro que ayuda en el recuento de células tanto procariotas como eucariotas. Estas
cámaras de conteo son diapositivas construidas de forma que contienen cámaras con una
rejilla grabada. Un hemocitómetro es un portaobjetos microscópico especializado que consta
de cuadrados que tienen un área definida en la que se carga un volumen particular de células.
Un hemocitómetro consta de cuatro cuadrados grandes en las esquinas que se dividen a su
vez en dieciséis cuadrados más pequeños. El método de conteo directo tiende a ser tedioso y
propenso a errores debido a la adsorción de células microbianas en las superficies de pipetas
y otros materiales de vidrio.
Método de contador de rejas
Se trata de una técnica de recuento electrónico que se utiliza habitualmente en el campo de la
hematología clínica. Los contadores Coulter son especialmente beneficiosos para la
enumeración de microorganismos más grandes, incluidas levaduras no filamentosas y
protistas.
Citometría de flujo
Los microbios que pertenecen al grupo de los protistas y las levaduras se pueden enumerar
mediante citometría de flujo, que es una técnica rápida para el recuento de células. Con esta
tecnología se pueden estudiar varias facetas biológicas de las células eucariotas y procariotas.
En esta técnica, se permite que una suspensión de células microbianas fluya en una corriente
de líquido, que luego se analiza utilizando luz láser de diversos grados de frecuencias y
ángulos.
Método de conteo de colonias
• invención de las placas de agar para cultivar microorganismos no sólo ayudó a aislar
cepas puras de un cultivo microbiano particular, ayudó a contar las colonias que
surgieron de una única célula viable.
• Uso para la enumeración de células microbianas
• En este método, sólo aquellas células que son viables y se reproducen para formar
colonias se cuentan en términos de unidades formadoras de colonias (UFC).
Técnica de vertido en plato
• Se mezcla una muestra microbiana diluida con medio de agar fundido, que luego se
vierte en una placa de Petri estéril y se deja solidificar
• adecuada para la enumeración de microorganismos presentes en una muestra de
cultivo mixto
• cuidado al emplear este método, ya que el agar debe enfriarse a 45 °C antes de
verterlo en las placas de petri, ya que una temperatura más alta puede matar las
células microbianas
• también permite el aislamiento y la identificación de microorganismos que tienen
diferentes necesidades de oxígeno
• microaerófilos o aquellos microorganismos que tienen bajos requerimientos de
oxígeno crecen dentro de las placas de agar
Técnica de placa extendida
• se utiliza habitualmente para contar células microbianas presentes en un pequeño
volumen de muestra y encuentra aplicaciones en experimentos relacionados con el
aislamiento, la detección y el enriquecimiento de microorganismos
• Se extiende un cultivo microbiano adecuadamente diluido sobre la superficie de las
placas de agar con la ayuda de un esparcidor de vidrio, alambre o teflón o un plato
giratorio
• producen colonias microbianas uniformemente dispersas para el recuento
 • número de colonias obtenidas en las placas de cultivo se multiplica por el factor de
dilución para obtener el número total de células microbianas presentes en la muestra
de cultivo
• permite el crecimiento de colonias microbianas únicamente sobre la superficie de la
placa de agar
Técnica de placa de capa fina
• La técnica de superposición de agar blando se utiliza a menudo en ensayos de
placas para enumerar los bacteriófagos o virus infecciosos (de tamaño 100 a 200
nm) que infectan las células bacterianas.
• Para determinar la cantidad de partículas infecciosas presentes en una muestra, las
células bacterianas del huésped se mezclan con las partículas de fagos para
estimular el proceso de infección
• en presencia de partículas de fagos infecciosos que se replican dentro de las células
bacterianas, comienza a desarrollarse una zona de lisis en la placa que da lugar a
regiones limpias
Técnica de placa en capas
Consiste en verter una capa adicional de agar sobre el medio de agar blando fraguado para
asegurar el crecimiento de todos los microorganismos presentes en la muestra. Esto permite la
formación de colonias más pequeñas y compactas en la región subsuperficial de la placa, lo que
facilita la detección de un mayor número de colonias. Además, esta técnica ofrece flexibilidad al
suministrar nutrientes para el crecimiento microbiano y permite preparar reservas de agar con
diferentes concentraciones de nutrientes según sea necesario.
Técnica de filtro de membrana
Se emplea para enumerar células bacterianas en muestras de agua. Las células bacterianas se
filtran a través de un filtro de membrana y luego se cuentan utilizando uno de dos métodos: el
conteo directo, que implica la tinción de las células bacterianas atrapadas en la membrana y su
visualización bajo un microscopio, o el método basado en placas, donde el filtro se coloca sobre
un medio de cultivo para incubar y contar colonias individuales. Este último método se utiliza
junto con un medio selectivo para examinar la pureza de las muestras de agua. La precisión del
recuento de colonias depende de una distribución uniforme en la placa, y se prefieren entre 30
y 300 colonias por placa. Algunas cepas bacterianas, como las de Legionella y Brucella,
requieren técnicas de cultivo especializadas debido a su crecimiento lento y exigente.
Número más probable (MPN)
Se utiliza para estimar el número de organismos viables en una muestra, especialmente en el
agua, donde se busca detectar contaminantes. Se basa en la inoculación repetida de tubos con
caldo líquido con la muestra bacteriana y la evaluación del crecimiento. Las muestras se diluyen
y se inoculan en tres tubos réplica con caldo nutritivo. Los resultados se interpretan utilizando
una tabla MPN, que compara réplicas de tres diluciones separadas por log10 unidades. El
método es adecuado para muestras con una variabilidad significativa en la tasa de crecimiento
y cinética de la población microbiana.
Estimación de biomasa celular
El crecimiento de células microbianas también va acompañado de un aumento de la
biomasa celular
 a) Estimación del peso de células húmedas (WCW) y del peso de células secas (DCW)
El peso húmedo de las células microbianas se calcula separando los medios
líquidos del contenido sólido y luego midiendo el peso de la masa celular. Dado que
la biomasa no se seca en el horno, el valor medido también incluye el peso de los
componentes del medio líquido encerrados en los espacios intersticiales de las
células, lo que conduce a un cálculo erróneo
Esta técnica es especialmente útil para la estimación de la biomasa de hongos
filamentosos, existen varios problemas asociados con esta estrategia, ya que tiene
baja sensibilidad y requiere mucho tiempo.
Además, el secado en horno puede provocar la degradación o pérdida de algunos
de los componentes volátiles a alta temperatura

b) Medición de turbidez
Los métodos basados en la turbidez se utilizan comúnmente para medir el
crecimiento bacteriano, ya que son sencillos de realizar y no causan daño a las
células bacterianas. Se hace pasar un haz de luz a través de la suspensión de
células bacterianas y se estima la cantidad de luz que atraviesa y llega al detector.
La cantidad de luz que se dispersa es directamente proporcional a la biomasa
celular, estableciendo así una relación lineal dentro de un límite determinado
La densidad óptica de una muestra se mide con la ayuda de un espectrofotómetro
o colorímetro
La ley de Beer-Lambert es una combinación de dos leyes, donde la ley de Lambert
establece que la cantidad de luz absorbida por un medio particular no depende de
la intensidad de la luz incidente. Por lo tanto, la cantidad de luz que se transmite se
expresa como una relación entre la intensidad de la luz que se transmite versus la
intensidad de la luz incidente.

Otros métodos para medir el crecimiento microbiano

El crecimiento microbiano puede correlacionarse con la cantidad de ciertos constituyentes

celulares. Para utilizar un componente celular como indicador de crecimiento, debe estar
presente en todos los organismos y ser cuantificable con un método de extracción fiable.
Componentes como el trifosfato de adenosina (ATP), el ácido D-murámico, los ácidos grasos
bacterianos y la clorofila pueden medirse para estimar el crecimiento. El ATP, por ejemplo, se
puede cuantificar utilizando el sistema luciferina-luciferasa, aunque la extracción completa y la
degradación pueden ser desafíos, especialmente en muestras complejas como el suelo. Otros
métodos incluyen la extracción de clorofila para medir la biomasa de algas y la estimación de
fosfolípidos para calcular la biomasa microbiana. Estos enfoques ofrecen formas precisas y
rápidas de evaluar el crecimiento microbiano en diferentes entornos.
Cinética de crecimiento de la fermentación por lotes
El crecimiento microbiano puede verse como una respuesta a los cambios en el entorno
natural donde un medio de cultivo adecuado ayuda en la síntesis de compuestos necesarios
para varios procesos biológicos. Las células microbianas requieren nutrientes para la
generación de energía y para la producción de macromoléculas biológicas que aumentan
la biomasa celular.
fisión binaria es la ruta más común de reproducción bacteriana, en la que una célula se
divide en dos células individuales
El crecimiento microbiano puede verse como una respuesta a los cambios en el entorno
natural, donde un medio de cultivo adecuado ayuda en la síntesis de compuestos necesarios
para varios procesos biológicos. Las células microbianas necesitan nutrientes para generar
energía, así como para la producción de macromoléculas biológicas que aumentan la
actividad celular. biomasa.
Modelo monod de cinética de lotes
Jacques Monod desarrolló un modelo matemático basado en el efecto de las concentraciones
de nutrientes sobre el crecimiento bacteriano en la fermentación discontinua. La cinética
monod para el cultivo por lotes es similar a la cinética de la enzima Michaelis­Menten, que
establece que la tasa de crecimiento de la población bacteriana depende de un solo sustrato
limitante del crecimiento.
La ecuación de la cinética de Monod se puede escribir de la siguiente manera:
μmax ∗ S
μ=
Ks + S
Donde:
•  es la tasa de crecimiento específica;
• max es la tasa de crecimiento específica máxima;
• S es la concentración de sustrato limitante del crecimiento;
• Ks es la constante de saturación.
El valor de Ks se define como la concentración de sustrato a la que la tasa de crecimiento
específica alcanza el valor de la mitad de la tasa de crecimiento máxima (max).
• Si Ks > S, entonces la afinidad hacia ese sustrato es baja.
• Si Ks < S, entonces denota una alta afinidad por el sustrato.
Coeficientes de rendimiento de crecimiento
El coeficiente de rendimiento del crecimiento microbiano (Y ) es la medida de la eficiencia de
conversión del sustrato en producto y biomasa. Matemáticamente, el sustrato utilizado para la
producción de biomasa se representa en forma de rendimiento real o teórico coeficiente de la
siguiente manera:
∆𝑋
𝑌 𝑡 𝑋⁄ =
𝑆 ∆𝑆
Cociente respiratorio
La proporción entre el dióxido de carbono producido y el oxígeno consumido en las células
vivas se conoce como cociente respiratorio (RQ).
𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐶𝑜2
𝑅𝑄 =
𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑂2 𝑢𝑡𝑖𝑙𝑖𝑧𝑎𝑑𝑜𝑠
La tasa de consumo de oxígeno del cultivo aeróbico depende de la tasa de crecimiento
específica del cultivo microbiano
Energía de mantenimiento
Las células microbianas realizan varias funciones celulares, como
• Reparación celular
• Transporte de materiales a través de la membrana celular
• Absorción de nutrientes del entorno externo
• Osmorregulación
• Motilidad.
La energía necesaria para llevar a cabo estas funciones de limpieza se denomina energía de
mantenimiento.
La velocidad a la que se utilizará el sustrato para el mantenimiento de la célula.
Productos de crecimiento y no asociados al crecimiento
Los microorganismos pueden sintetizar varios productos y metabolitos durante su curso de
crecimiento y reproducción. Sin embargo, no todos los productos se fabrican al mismo tiempo
y simultáneamente. Ciertas sustancias como: aminoácidos, enzimas y hormonas, son los
metabolitos primarios sintetizados durante la fase exponencial y, por lo tanto, se denominan
productos asociados al crecimiento.
Reactor de tanque agitado continuo (CSTR)
Los cultivos discontinuos muestran cuatro etapas diferentes de crecimiento que ocurren
debido a la concentración cambiante de nutrientes y la acumulación de subproductos en el
medio de cultivo. Por el contrario, los cultivos continuos no pasan por estos cambios debido a
la adición de nutrientes frescos junto con la eliminación continua de medios gastados.
La estrategia de cultivo proporciona a los microorganismos condiciones ambientales óptimas
y estables y permite el mantenimiento del crecimiento microbiano y la síntesis de productos
de calidad uniforme durante más tiempo en comparación con el cultivo por lotes.
CSTR es una estrategia ideal para estudiar la forma en que los microorganismos responden a
las condiciones ambientales cambiantes durante el crecimiento. En CSTR, el impulsor y el
rociador satisfacen los requisitos de oxígeno del cultivo.
Tasa de crecimiento específica en una cultura continua
En un CSTR, el aumento neto de la biomasa celular se obtendrá restando la producción de
células del crecimiento en el recipiente fermentador.
Cultura Fed-Batch
El desarrollo en ingeniería de bioprocesos a finales del siglo XX permitió una producción
avanzada de enzimas y proteínas. La creciente demanda de proteínas como anticuerpos y
enzimas industriales impulsó la necesidad de estrategias innovadoras para mejorar el
rendimiento. Una técnica clave es el cultivo alimentado por lotes, que implica la adición continua
de nutrientes durante la fermentación, evitando la acumulación de sustrato y mejorando la
producción. Esta técnica se emplea en la producción de vacunas virales y proteínas
recombinantes, optimizando la fase de producción celular y la concentración del producto
deseado. La implementación exitosa requiere un diseño cuidadoso del medio y la estrategia de
alimentación para mantener una concentración óptima de nutrientes y evitar la inhibición del
proceso.
Estrategias de alimentación utilizadas en el cultivo feed-batch.
La estrategia de alimentación en fermentaciones puede ser constante, gradual o exponencial.
La alimentación constante suministra nutrientes a una velocidad fija, aumentando el volumen y
la concentración celular. La gradual aumenta la alimentación de forma progresiva, mientras que
la exponencial suministra nutrientes en proporción al crecimiento celular. Se pueden regular las
tasas de alimentación mediante mediciones de nutrientes, pH, turbidez o consumo de oxígeno,
adaptándolas a las necesidades de crecimiento celular y evitando la acumulación de nutrientes
o la sobrealimentación.
Nueve aplicaciones de estrategias de cultivo de alta densidad celular
La estrategia de cultivo de alta densidad celular (HCDC) se emplea para incrementar la biomasa
microbiana y la concentración volumétrica del producto en la industria de fermentación. Es
crucial para maximizar la productividad volumétrica, es decir, la cantidad de producto generado
en un volumen fijo en un tiempo determinado. Aunque esta estrategia ha sido exitosa en la
sobreproducción de proteínas relevantes industrialmente, presenta desafíos como la
acumulación de subproductos, problemas asociados con la solubilidad de gases y sustratos, y
condiciones limitantes del sustrato. Sin embargo, mediante ingeniería metabólica y ajustes en
el proceso de fermentación, se puede mitigar la acumulación de subproductos no deseados. Se
han producido una amplia gama de biomoléculas y proteínas mediante fermentación a gran
escala, lo que incluye aminoácidos, vitaminas, ácidos orgánicos y antibióticos, gracias a
diversas cepas microbianas y técnicas de ingeniería genética.

CUESTIONARIO
1. Defina el crecimiento microbiano y analice también las cuatro fases del
crecimiento bacteriano en un cultivo discontinuo. aumento en los componentes
celulares que conduce a un aumento en el número o tamaño de las células. Consta de 4
fases latencia (no se produce ningún aumento aparente en el número de células) fase
exponencial (las células microbianas se dividen activamente con su tasa máxima de
crecimiento) fase estacionaria (el número de recambio celular permanece constante) fase
de muerte (disminución exponencial del número de células)
2. ¿Qué son los solutos compatibles? Explique con algunos ejemplos. suelen ser
producto del metabolismo de nutrientes como carbohidratos y proteínas y pertenecen a la
clase de azúcares, aminoácidos y polioles
3. ¿Cómo Deinococcus radiodurans tolera las radiaciones ionizantes de alta
intensidad?
Por sus características:
• Reparación del ADN: D. radiodurans tiene un sistema de reparación del ADN
altamente eficiente que puede reparar rápidamente los daños causados por la
radiación
 • Proteínas protectoras: Produce proteínas específicas, como las proteínas
protectoras del ADN (Dps), que protegen el ADN de los daños causados por la
radiación y ayudan en su reparación.
• Capacidad de formar agregados de cromosomas: Después de sufrir daños graves
en el ADN, D. radiodurans es capaz de formar estructuras especiales llamadas
agregados de cromosomas que ayudan en la reparación y reensamblaje del
genoma.
• Alta eficiencia en la reparación de rupturas dobles en el ADN: La radiación ionizante
de alta intensidad puede causar rupturas dobles en las cadenas de ADN. D.
radiodurans tiene una capacidad excepcional para reparar estas rupturas dobles de
manera rápida y precisa.
• Protección antioxidante: Posee una cantidad muy alta de enzimas antioxidantes que
ayudan a proteger sus células del estrés oxidativo inducido por la radiación.

4. Nombra las enzimas involucradas en la protección de las células contra las

especies reactivas de oxígeno (ROS).
Superóxido dismutasa y la catalasa
5. Definir crecimiento diáuxico. ¿Cuáles son los tres genes estructurales implicados
enlaca ¿operón? Cuando un microorganismo es capaz de utilizar dos fuentes de
carbono distintas, pero prefiere utilizar una sobre la otra, primero consumirá la
fuente de carbono preferida antes de utilizar la segunda opción, lo que resulta en un
crecimiento secuencial en dos fases distintas. Genes LacA, LacZ
6. ¿Cuál es la tasa de crecimiento específica de un microorganismo? ¿Cómo se
representa matemáticamente?
μmax ∗ S
μ=
Ks + S
Donde:
•  es la tasa de crecimiento específica;
• max es la tasa de crecimiento específica máxima;
• S es la concentración de sustrato limitante del crecimiento;
• Ks es la constante de saturación.
7. Diferenciar entre formación de productos asociada al crecimiento, no asociada al
crecimiento y asociada al crecimiento mixto.
La formación de productos asociados al crecimiento, no asociados al crecimiento y
asociados al crecimiento mixto en microbiología se refiere a las diferentes formas en que
los microorganismos producen y liberan sustancias durante su crecimiento y desarrollo.
• Los productos asociados con el crecimiento son aquellos que son producidos por
microorganismos durante su fase de crecimiento activo. Esto incluye sustancias
como enzimas, toxinas y otros productos metabólicos que libera el microorganismo
a medida que crece y se multiplica.
 • Los productos no asociados al crecimiento son aquellos que son producidos por
microorganismos durante su fase estacionaria, cuando ya no están creciendo
activamente. Estos productos suelen producirse en respuesta al estrés o cambios
ambientales y pueden incluir sustancias como esporas, biopelículas y otras
estructuras protectoras que ayudan al microorganismo a sobrevivir en condiciones
adversas.
• Los productos asociados con el crecimiento mixto son aquellos que se producen
tanto durante la fase de crecimiento activo como durante la fase estacionaria del
microorganismo.
(Cultivo De Microorganismos Asociados A Oncoides De Manantiales Hidrotermales De
& Gallut Rubio, n.d.)
8. ¿Cuál es la tasa de formación de producto específica de un microorganismo?
¿Tiene alguna relación con la tasa de crecimiento específica en caso de formación
de productos asociada al crecimiento? En caso afirmativo, demuéstrelo
matemáticamente.
La tasa de formación de producto específica de un microorganismo se refiere a la cantidad
de producto formado por unidad de tiempo y por unidad de biomasa. Este parámetro permite
optimizar la formación de productos y diseñar estrategias de fermentación más eficientes.
La tasa de formación de producto específico está estrechamente relacionada con la tasa
de crecimiento específico en los casos de formación de producto asociado con el
crecimiento. Esto se debe a que el crecimiento del microorganismo proporciona la energía
y los recursos necesarios para la formación del producto. En términos matemáticos, esta
relación se puede expresar como:
r_p = μ * Y_p/x
donde:
• r_p es la tasa de formación de producto específico
• μ es la tasa de crecimiento específico
• Y_p/x es el coeficiente de rendimiento del producto con respecto a la biomasa
• x es la concentración de biomasa.
Esta ecuación muestra que la tasa de formación de producto específico es directamente
proporcional a la tasa de crecimiento específico, siempre que el coeficiente de rendimiento
permanezca constante.
Sin embargo, en los casos de formación de productos no asociados con el crecimiento o
asociados con un crecimiento mixto, la relación entre la tasa de formación de productos
específicos y la tasa de crecimiento específica puede ser más compleja.
9. ¿Qué es la energía de mantenimiento? Discuta su significado.
La energía necesaria para llevar a cabo funciones de limpieza como la reparación celular, el
transporte de materiales a través de la membrana celular, la absorción de nutrientes del entorno
externo, la osmorregulación y la motilidad.
10. ¿Qué es la muerte celular programada y cuál es su mecanismo de inducción?
La muerte celular programada, también conocida como apoptosis, es un proceso biológico
altamente regulado que conduce a la muerte ordenada y controlada de una célula. Es
fundamental para el desarrollo normal de un organismo, la homeostasis tisular y la
eliminación de células dañadas o innecesarias.
después de la señal de apoptosis
Activación de caspasas: Las caspasas son enzimas proteolíticas clave que catalizan la
degradación de proteínas celulares y son responsables de muchos de los cambios
morfológicos asociados con la apoptosis.
Fragmentación del ADN: Las caspasas y otras proteínas activadas durante la apoptosis
causan la fragmentación del ADN nuclear, que es una característica distintiva de este
proceso.
Cambios morfológicos: La apoptosis se caracteriza por cambios morfológicos específicos
en la célula, como la condensación del núcleo, la formación de cuerpos apoptóticos y la
ruptura de la membrana plasmática.
Fagocitosis: Una vez que la célula ha completado el proceso de apoptosis, sus restos
celulares son eliminados por células fagocíticas, como macrófagos o células vecinas, sin
desencadenar una respuesta inflamatoria.
11. Nombra tres colorantes fluorescentes utilizados en la técnica de citometría de
flujo.
Isotiocianato de fluoresceína (FITC), ficoeritrina (PE), aloficocianina (APC), peridinina-clorofila-
proteína (PerCP), Alexa Fluor 405 y Alexa Fluor 488
12. Defina ¿Cómo juega un papel en la selección de un sustrato ideal para el
crecimiento microbiano? En la selección de un sustrato ideal para el crecimiento
microbiano, se consideran varios factores que influyen en la eficiencia y la productividad de
los microorganismos. Estos factores incluyen la disponibilidad de nutrientes esenciales para
el crecimiento, la capacidad del sustrato para proporcionar la energía necesaria, y la
interacción entre el microorganismo y el sustrato en términos de metabolismo y adaptación.
Un sustrato ideal para el crecimiento microbiano debe proporcionar los nutrientes
necesarios, como carbono, nitrógeno, fósforo, y otros elementos esenciales, en
proporciones adecuadas para el metabolismo del microorganismo. Además, la composición
del sustrato debe ser compatible con las enzimas y vías metabólicas del microorganismo.
La selección del sustrato también debe considerar la capacidad del microorganismo para
degradar y utilizar el sustrato de manera efectiva. Esto implica evaluar la afinidad del
microorganismo por el sustrato, su capacidad para transportar y metabolizar los nutrientes
presentes, y su adaptación a las condiciones del entorno en el que se encuentra el sustrato.
13. ¿Cuál es la productividad volumétrica de un biorreactor?
es una medida de la cantidad de biomasa generada en la unidad de volumen de cultivo en
la unidad de tiempo. Se expresa en unidades de masa por unidad de volumen y unidad de
tiempo, como por ejemplo g/L/dí[Link] productividad volumétrica está relacionada con la
velocidad específica de crecimiento (µ) y la concentración de biomasa (Cb) en el biorreactor,
según la ecuación Pb=µ·Cb. Por lo tanto, a mayor velocidad de crecimiento y mayor
concentración de biomasa, mayor será la productividad volumétrica. La productividad
volumétrica es un parámetro importante en el diseño y operación de biorreactores, ya que
permite evaluar la eficiencia del proceso y determinar el tamaño y capacidad del biorreactor
necesarios para alcanzar los rendimientos deseados.
14. ¿Cómo se proporciona la aireación en un fermentador?
esto se logra haciendo burbujear aire a través del caldo, lo que también sirve para mezclar
el contenido del fermentador. La tasa de aireación, o la cantidad de aire suministrada por
unidad de volumen de caldo por unidad de tiempo, es un parámetro importante en los
procesos de fermentación. El diseño de un fermentador debe garantizar que los
microorganismos tengan acceso a suficiente oxígeno para llevar a cabo sus procesos
metabólicos y que la temperatura, el pH y otras condiciones se controlen dentro del rango
deseado.
Se puede lograr una aireación adecuada mediante el uso de difusores de aire, rociadores
u otros dispositivos de aireación, y la tasa de aireación debe controlarse cuidadosamente
para garantizar un rendimiento óptimo de la fermentación.
15. ¿Cuáles son las diferentes estrategias de alimentación con nutrientes adoptadas
para lograr una alta densidad celular en una operación de alimentación por lotes?
Las diferentes estrategias para proporcionar nutrientes en un proceso de fermentación por
lotes para lograr una alta densidad celular son:
• Cultivo discontinuo: En esta estrategia, todos los nutrientes se agregan al inicio del
proceso de fermentación. Los microorganismos crecen y consumen los nutrientes
hasta agotarlos, y entonces finaliza el proceso de fermentación. Esta estrategia es
simple y fácil de implementar, pero no permite controlar la tasa de crecimiento ni la
concentración de nutrientes durante el proceso de fermentación.
• Cultivo discontinuo: en esta estrategia, los nutrientes se agregan de forma continua
o intermitente al caldo de fermentación durante el proceso de fermentación. La tasa
de adición de nutrientes se puede controlar para mantener una concentración de
nutrientes constante o para controlar la tasa de crecimiento de los microorganismos.
Esta estrategia permite controlar la tasa de crecimiento y la concentración de
nutrientes durante el proceso de fermentación, y puede conducir a mayores
densidades celulares y mayor productividad que el cultivo por lotes.
• Cultivo continuo: en esta estrategia, se agrega continuamente medio fresco al caldo
de fermentación y el caldo de fermentación se elimina continuamente al mismo
ritmo. La tasa de dilución, que es la relación entre el caudal del medio y el volumen
del caldo de fermentación, se puede controlar para mantener una concentración de
nutrientes constante o para controlar la tasa de crecimiento de los microorganismos.
Esta estrategia permite controlar la tasa de crecimiento y la concentración de
nutrientes durante el proceso de fermentación, y puede conducir a mayores
densidades celulares y mayor productividad que el cultivo por lotes.
La elección de la estrategia depende de los requisitos específicos del proceso de
fermentación, como la tasa de crecimiento, los requisitos de nutrientes y el producto
deseado.
16. Deducir la relación entre la tasa de crecimiento específica(μ)y tasa de dilución(D)
en un CSTR mantenido en estado estacionario.
 𝒌𝒔 ∙ 𝑫
̅
𝑺=
𝝁 𝒎á𝒙𝒊𝒎𝒐 − 𝑫
̅ = 𝒄𝒐𝒏𝒄𝒆𝒏𝒕𝒓𝒂𝒄𝒊ó𝒏 𝒅𝒆𝒍 𝒔𝒖𝒔𝒕𝒓𝒂𝒕𝒐 𝒆𝒏 𝒆𝒔𝒕𝒂𝒅𝒐 𝒆𝒔𝒕𝒂𝒄𝒊𝒐𝒏𝒂𝒓𝒊𝒐
𝑺
𝝁 = 𝒕𝒂𝒔𝒂 𝒅𝒆 𝒄𝒓𝒆𝒄𝒊𝒎𝒊𝒆𝒏𝒕𝒐
𝑫 = 𝒕𝒂𝒔𝒂 𝒅𝒆 𝒅𝒊𝒍𝒖𝒄𝒊ó𝒏
𝒌𝒔 = 𝒄𝒐𝒏𝒔𝒕𝒂𝒏𝒕𝒆 𝒅𝒆 𝒗𝒆𝒍𝒐𝒄𝒊𝒅𝒂𝒅 𝒆𝒔𝒑𝒆𝒄í𝒇𝒊𝒄𝒂 𝒅𝒆 𝒄𝒓𝒆𝒄𝒊𝒎𝒊𝒆𝒏𝒕𝒐 𝒎𝒊𝒄𝒓𝒐𝒃𝒊𝒂𝒏𝒐
17. Calcular la tasa de crecimiento específica de un microorganismo, si su tiempo de
duplicación es de 30 min.
𝐼𝑛(2)
𝜇= ≈ 0.023 𝑚𝑖𝑛−1
30 𝑚𝑖𝑛
18. Explique el efecto de las siguientes condiciones sobre la biomasa celular y la
concentración de sustrato en un CSTR (a)µ >D, (b)µ=Dy C)µ <D
(a) µ >D se producirá la acumulación de biomasa.
(b) µ=D el sustrato y la concentración celular permanecen constantes; es decir, no hay
acumulación neta de biomasa o sustrato
C) µ <D se producirá el lavado de las células con la acumulación de sustrato.

EQUIPO 1 LO QUE VAMOS A INVESTIGAR

3.1 Fisiológica.
Estudia de las funciones vitales de los microorganismos, como bacterias, virus, hongos y
protozoos. Esto incluye procesos como la obtención de nutrientes, la respiración, la
reproducción y la respuesta a estímulos ambientales Busca entender cómo los
microorganismos crecen, se reproducen, obtienen energía, metabolizan nutrientes,
responden a su entorno y realizan otras actividades fundamentales para su supervivencia
y proliferación.
Una de las funciones vitales de los m.o. es el metabolismo bacteriano, el cual se refiere a
las diversas reacciones bioquímicas que tienen lugar dentro de las bacterias para obtener
energía, sintetizar componentes celulares y llevar a cabo funciones vitales (obtención de
energía, catabolismo, anabolismo, regulación metabólica, adaptación al entorno). Estas
reacciones metabólicas pueden variar según el tipo de bacterias y su entorno. En el
crecimiento y reproducción de m.o. se busca comprender las condiciones óptimas para que
estas de desarrollen, como el pH, la temperatura, la disponibilidad de nutrientes y la
presencia de oxígeno. En el caso de m.o. patógenos, se busca comprender como estos
m.o. causan enfermedades, incluidos los mecanismos de invasión, evasión del sistema
inmunológico y producción de toxinas. En la interacción microbiana, los m.o. interactúan
entre si y con otros organismos en su entorno, estudiar estas interacciones puede ayudar
a comprender la ecología microbiana, la formación de comunidades microbianas y su
impacto en la salud humana, el medio ambiente y la industria. La adaptación y evolución de
m.o. comprende los mecanismos de adaptación y evolución microbiano, lo cual es
fundamental para predecir y controlar la resistencia a los antimicrobianos y para desarrollar
estrategias afectivas en biotecnología y medicina.

3.1.1 Regulación enzimática.

Moléculas reguladoras: las enzimas pueden ser reguladas por otras moléculas que
aumentan o bien disminuyen su actividad. Las moléculas que aumentan la actividad de una
enzima se conocen como activadores, mientras que aquellas que disminuyen la actividad
de una enzima se llaman inhibidores.
Competitiva vs. No competitiva
Un inhibidor puede unirse a una enzima y bloquear la unión del sustrato, por ejemplo, al
pegarse al sitio activo. Esto se conoce como inhibición competitiva. En la inhibición no
competitiva, el inhibidor no bloquea la unión del sustrato con el sitio activo, sino que se
pega a otro sitio y evita que la enzima haga su función.
Regulación alostérica: la regulación alostérica, es solo cualquier forma de regulación donde
la molécula reguladora (un activador o un inhibidor) se une a una enzima en algún lugar
diferente al sitio activo. El lugar de unión del regulador se conoce como sitio alostérico.
Cofactores y coenzimas: los cofactores permiten que la enzima realice su función (iones
orgánicos). Las coenzimas son un subconjunto de cofactores que son moléculas orgánicas
(basadas en el carbono).
Compartimentación de las enzimas: significa que las enzimas que son necesarias para
procesos específicos se pueden conservar en los lugares donde actúan.
Inhibición de vías metabólicas por retroalimentación: el producto final de una vía metabólica
actúa sobre la enzima clave que regula el ingreso a esa vía para evitar sobreproducción del
producto final.
[Link] Represión catabólica.
La represión catabólica es un mecanismo de control global, que controla el uso de las
fuentes de carbono si hay presente más de un azúcar. Cuando las células se cultivan en un
medio que contiene glucosa, la síntesis de enzimas necesarias para utilizar otras fuentes
de carbono es reprimida, incluso si estas otras fuentes de carbono están presentes. Por
tanto, la presencia de una fuente de carbono preferida reprime la inducción de rutas que
catabolizan otras fuentes de carbono. La represión catabólica también se conoce como
“efecto glucosa”, porque la glucosa fue la primera sustancia que se descubrió que causaba
esta respuesta. No obstante, la represión catabólica no está siempre ligada a la glucosa. El
aspecto fundamental es que el sustrato preferido es una mejor fuente de carbono y de
energía que otras fuentes de carbono disponibles. Por tanto, asegura que el organismo
utiliza en primer lugar la mejor fuente de carbono y energía.
[Link] Efecto Pasteur.
El efecto Pasteur es un efecto de inhibición de la fermentación alcohólica debido a la
participación de oxígeno (O2). La fermentación es un proceso completamente anaeróbico
(sin la participación del aire) y la inclusión del oxígeno la detiene o minimiza .
El efecto Pasteur se produce en microorganismos capaces de realizar metabolismo fermentador
y respiración aerobia, conocidos como anaerobios facultativos. En presencia de oxígeno utilizan
la respiración aeróbica, pero también pueden emplear la fermentación si no hay oxígeno libre
en su medio ambiente. Pasteur fue el primero en observar que el azúcar es convertido en alcohol
y CO2 por levaduras en ausencia de aire, y que en presencia de aire se forma muy poco o nada
de alcohol, siendo el CO2 el principal producto final de esta reacción aeróbica. Este efecto indica
el mayor rendimiento energético de la respiración sobre la fermentación.
[Link] Efecto Crabtree.
Fenómeno observado en algunos organismos, como las levaduras, donde la fermentación de
glucosa prevalece incluso en presencia de oxígeno. Se caracteriza por una inhibición de la
respiración aeróbica en presencia de altas concentraciones de glucosa. Es decir, cuando la
glucosa está en abundancia, las células optan por fermentarla para obtener energía en lugar de
realizar la respiración celular aeróbica.
[Link] Regulación por retroalimentación.
La regulación por retroalimentación, también conocida como retroalimentación negativa, es un
principio fundamental en fisiología que describe un mecanismo de control homeostático en el
que un sistema ajusta su actividad en respuesta a un cambio en su entorno interno o externo,
de modo que se contrarresta ese cambio y se restablece un estado de equilibrio o homeostasis.
En términos más simples, cuando un parámetro fisiológico se desvía de su valor normal, se
activan mecanismos de retroalimentación negativa para corregir esa desviación y llevar el
sistema de vuelta a su estado óptimo. Por ejemplo, si la temperatura corporal aumenta por
encima de lo normal, se desencadenan respuestas fisiológicas, como la sudoración y la
vasodilatación, para disipar el calor y devolver la temperatura al rango normal.

Este proceso se llama retroalimentación negativa porque el sistema responde en una dirección
opuesta al cambio inicial, es decir, la respuesta del sistema se opone a la desviación del
parámetro fisiológico de su valor normal, actuando así para estabilizar el sistema.
Por ejemplo, la concentración de diversos iones en la sangre debe mantenerse
constante, junto con el pH y la concentración de la glucosa. Si estos valores
aumentan o disminuyen demasiado, puedes terminar muy enfermo.
Ejemplo 2
Para apreciar cómo ocurre la diabetes, En una persona sana, dos hormonas controlan la
glucemia: la insulina y el glucagón.
La insulina disminuye la concentración de glucosa en la sangre. Después de comer, la
concentración de glucosa en sangre aumenta, lo que provoca que las células β del páncreas
secreten insulina. La insulina actúa como una señal que activa a las células del cuerpo,
como las células adiposas y musculares, para que tomen la glucosa y la usen como
combustible. La insulina también provoca que el hígado convierta la glucosa en glucógeno,
una molécula de almacenamiento. Ambos procesos retiran azúcar de la sangre, con lo que
disminuye la concentración de azúcar sanguínea, se reduce la secreción de insulina y todo
el sistema vuelve a la homeostasis.

[Link] Inducción.
Proceso mediante el cual la síntesis de enzimas se aumenta en respuesta a la presencia
de un sustrato específico. Esto significa que la presencia de ciertos compuestos químicos
puede activar genes específicos en las células para producir más enzimas que permitan
metabolizar esos compuestos.
Importante en la regulación de la actividad enzimática porque permite una respuesta rápida
a cambios en el entorno.
Suele estar mediada por moléculas llamadas inductores, que se unen a proteínas
reguladoras conocidas como operones. Estas proteínas reguladoras controlan la
transcripción de los genes que codifican las enzimas necesarias para metabolizar el
sustrato específico. Cuando el inductor se une a la proteína reguladora, se activa la
transcripción de los genes y se produce más enzima.
3.1.2 Métodos empíricos empleados para interrumpir los mecanismos reguladores en
la producción de metabolitos secundarios
Los métodos que se utilizan para inducir la sobreproducción de metabolitos secundarios son
principalmente empíricos. Tales métodos incluyen mutaciones y estimulación mediante la
manipulación de componentes y condiciones de los medios
Selección y mejoramiento de la línea celular. La primera estrategia para lograr una línea
celular altamente productora de un metabolito es la selección adecuada de la fuente de
explante.
Ingenierías genética y metabólica. Las ingenierías genética y metabólica son estrategias
efectivas para optimizar la producción de metabolitos secundarios.

EQUIPO 2 NOSOTROS LO QUE INVESTIGAMOS

3.2 Genética.
La genética puede ayudar en la sobreexpresión de metabolitos microbianos
mediante la ingeniería genética de los microorganismos para aumentar la
producción de un metabolito específico, mejora la capacidad de los
microorganismos de producir compuestos de interés industrial, agrícola,
farmacéutico o ambiental.
3.2.1 Ingeniería genética aplicada a la sobreproducción de metabolitos de interés.

Un metabolito primario se forma durante la fase de crecimiento exponencial del

microorganismo, en cambio un metabolito secundario se forma muy cerca o durante la fase
estacionaria de crecimiento.
La microbiología industrial utiliza microorganismos, generalmente cultivados a gran escala,
para obtener productos comerciales o realizar importantes transformaciones químicas. La
Ingeniería Genética, modifica genéticamente los microorganismos para que produzcan
sustancias que de otro modo no podrían producir. Un metabolito primario se forma durante
la fase de crecimiento exponencial del microorganismo. Por el contrario, un metabolito
secundario se forma cuando se avecina el final de la fase exponencial de crecimiento; con
frecuencia, muy cerca de o durante la fase estacionaria de crecimiento. Los metabolitos
secundarios son algunos de los metabolitos de interés industrial más complejos e
importantes.
Propiedades de un microorganismo de interés industrial
• Ser capaz de crecer y sintetizar el producto en un cultivo a gran escala
• Preferible que produzca esporas o alguna forma de célula reproductora, que pueda
ser fácilmente inoculada en los grandes recipientes utilizados
• Debe crecer rápidamente y sintetizar el producto deseado en un período
relativamente corto de tiempo
• Poder crecer en un medio de cultivo líquido relativamente barato que se
comercialice a granel
• No debe ser patógeno, especialmente para los seres humanos, pero tampoco para
animales o plantas
• Susceptibles de manipulación genética, porque en Microbiología Industrial a
menudo se incrementa genéticamente el rendimiento mediante mutación y
selección.
3.2.2 Manipulaciones del genoma que no involucran ADN o bases extrañas: mutación
convencional.
La genética convencional se refiere a la manipulación del genoma que no involucra ADN o
bases extrañas, sino a mutaciones que ocurren de forma natural. Estas mutaciones pueden
ser causadas por diversos factores, como la exposición a radiación, fármacos o virus, o
pueden no tener una razón evidente. Las mutaciones convencionales se producen de forma
natural durante la replicación celular o como respuesta a factores ambientales, y pueden
afectar a células somáticas o a células productoras de gametos. Las mutaciones somáticas
no se transmiten a la siguiente generación, mientras que las mutaciones en la línea germinal
se transmiten a la siguiente generación.

3.2.3 Métodos de mejora de la cepa que implican bases o ADN extraños

Transformación
Esta técnica se emplea para introducir en la bacteria moléculas mixtas de ADN
recombinante de las que interesa obtener copias (clonación)
• la bacteria receptora acepta moléculas desnudas de ADN que penetran por su pared
desde el medio externo (Ocurre de manera natural o artificial)
• El ADN desnudo es destruido rapidamente por DNAsas que son enzimas muy
frecuentes en muchos medios
• la pared de la célula receptora debe estar relativamente permeable para dejar pasar
fragmentos de ADN, Suelen ser competentes, es decir, capaces de sufrir
transformación las especies de Streptococuus, Staphylococcus, Haemophilus,
Neisseria y Bacillus.
• En el laboratorio puede forzarse la competencia mediante cambios en la
concentración de calcio del medio
• La electroporación es otro método de promoción de la competencia. Mediante este
método, las células se chocan brevemente con un campo eléctrico de 10-20 kV/cm
 que se cree que crea agujeros en la membrana celular a través de los cuales puede
entrar el ADN plasmídico
• El Choque térmico es también un método de promoción, inicia con una solución con
cationes divalentes fría, la célula crea agujeros por los cuales puede entrar el ADN,
posterior mente se expone al choque térmico.
Ejemplo:
superficie de bacterias como E. coli está cargada negativamente debido a
fosfolípidos y lipopolisacáridos en su superficie celular, y el ADN también está
cargado negativamente, proteger las cargas coordinando los grupos fosfato y otras
cargas negativas, permitiendo así que una molécula de ADN se adhiera a la
superficie celular. Se sugiere que exponer las células a cationes divalentes en
condiciones frías también puede cambiar o debilitar la estructura de la superficie
celular de las células haciéndolas más permeables al ADN. Se cree que el pulso de
calor crea un desequilibrio térmico a ambos lados de la membrana celular, lo que
obliga al ADN a ingresar a las células a través de los poros o la pared celulares
dañada
Transducción
La transducción generalizada es el proceso por el cual cualquier gen bacteriano puede
transferirse a otra bacteria a través de un bacteriófago, y normalmente lleva solo ADN
bacteriano y no ADN viral.
• los virus bacteriófagos los que llevan un fragmento de ADN de la bacteria donadora
hasta el citoplasma de la receptora.
• Para infectarlas inyectan su ADN en el citoplasma dejando fuera la cápside del fago
• Para liberar los nuevos bacteriófagos lisan la bacteria infectada. A veces, durante
estos ciclos líticos se introduce por error en una cápside de bacteriófago ADN de la
bacteria infectada ( estas pueden iniciar con la infección de otra bacteria)
• En el caso que no es inyectado el genoma completo del virus, la bacteria no muere
y puede recombinar el fragmento adquirido
Ciclo lítico y Ciclo lisogénico
Si se adopta el ciclo lisogénico, el cromosoma del fago se integra (por enlaces
covalentes) en el cromosoma bacteriano, donde puede permanecer latente durante
miles de generaciones.
Si se induce el lisógeno (por ejemplo mediante luz UV), el genoma del fago se escinde
del cromosoma bacteriano e inicia el ciclo lítico, que culmina en la lisis de la célula y la
liberación de partículas de fago. El ciclo lítico conduce a la producción de nuevas
partículas de fago que son liberadas por lisis del huésped.
Conjunción (Vampiro)
• conjugación entre bacterias Gram negativas suele ocurrir a través de pili sexuales
codificados por el plásmido conjugativo
• Las bacterias que lo poseen (F+) sintetizan 2 o 3 pili con los que contactan con
bacterias receptoras y se acercan a ellas. Entonces el plásmido F se rompe por un
lugar fijo (el origen de transferencia), y una de sus cadenas pasa a través del puente
citoplásmico creado por el pili, hasta el citoplasma de la célula receptora
 • En ambos citoplasmas se van sintetizando las cadena complementarias de forma
que al final del proceso ambas bacterias poseen un plásmido F completo. Por tanto
la conjugación convierte a la bacteria receptora (F-) a su vez en donadora (F+), lo
que acelera el proceso de extensión del plásmido, y puede ocurrir entre bacterias
de esta o de diferentes especies relacionadas.
• Las células donadoras actúan típicamente como tales porque tienen un pedazo de
ADNll llamado factor de fertilidad (o factor F). Este pedazo de ADN codifica para
las proteínas que forman el pilus sexual; también contiene un sitio especial donde
comienza la transferencia del ADN durante la conjugación .
• Si el factor F se transfiere durante la conjugación, la célula receptora se convierte
en un donador F que puede hacer su propio pilus y transferir ADN a otra célula. Aquí
tenemos una analogía: este proceso es parecido a cuando un vampiro puede
convertir a otras personas en vampiros al morderlas
Transfección
se utilizan en la actualidad se pueden clasificar en dos tipos: métodos químicos o métodos
físicos . Los métodos químicos están basados en la formación de complejos que las células
son capaces de adquirir e incorporar, bien sea directamente mediante la ruta endofítica o a
través de las membranas
Métodos Químicos:
• Fosfato cálcico: Basado en la obtención de un precipitado entre el cloruro de calcio
y el DNA en una solución salina de fosfatos, coprecipitan formando unos agregados
que son endocitados por las células
• DEAE dextrano: Basado en la obtención de complejos entre la resina DEAE y el
DNA. Los polímeros de DEAE dextrano o polybreno tienen una carga que les
permite unirse a las muy negativamente cargadas moléculas de DNA
• LIpofeccion: Se basa en la formación de complejos entre lípidos catiónicos y DNA.
El complejo tiene afinidad por la membrana y permite la entrada del DNA en el
citosol.
Métodos Físicos:
• Microinyección directa: El DNA se microinyecta directamente al citosol, célula por
célula
• Electroporación: Introducción del DNA adherido a micropartículas que se disparan
sobre las células.
• Láser La transfección mediada por láser (también conocida como optoporación o
fototransfección) utiliza un pulso de láser para irradiar la membrana celular con la
finalidad de formar un poro momentáneo
Usos de la transfección
• Estudios genéticos
• Terapia génica
• Proteínas recombinantes
• Alimentos transgénicos
• biorremediación
• mascotas transgénicas
Uso de Plásmidos como vectores de clonación
los plásmidos, ampliamente reconocidos por sus capacidades de clonación, permiten la
duplicación de genes específicos
La clonación de ADN se utiliza para muchos propósitos. Como ejemplo, veamos cómo la
clonación de ADN se puede utilizar para sintetizar una proteína (como la insulina humana)
en bacterias. Los pasos básicos son:
1. Abrir el plásmido y "pegar" el gen dentro. Este proceso depende de enzimas de
restricción (que cortan el ADN) y de ADN ligasa (que une el ADN).
2. Insertar el plásmido en las bacterias. Se usa selección con antibióticos para
identificar las bacterias que incorporaron el plásmido.
3. Cultivar bacterias portadoras de plásmido en gran cantidad y usarlas como
"fábricas" para producir la proteína. Recolectar la proteína de las bacterias y
purificarla.
Las bacterias sin plásmido mueren a causa del antibiótico. Cada bacteria que tenga
plásmido forma una colonia, un grupo de bacterias clonales que contienen el mismo
plásmido. Una colonia típica se ve como un punto pequeño y blanquecino del tamaño
de una cabeza de alfiler.
No necesariamente todas las colonias contendrán el plásmido adecuado. Eso es
porque, durante una ligación, los fragmentos de ADN no siempre se "pegan"
exactamente como queremos. Por el contrario, debemos recolectar ADN de varias
colonias y ver si cada una contiene el plásmido correcto. Se usan métodos como la
digestión con enzimas de restricción y la PCR para revisar los plásmidos.

3.2.4 Bioética en la Ingeniería Genética: cuidado del medio ambiente; normas y

reglamentos
La ingeniería genética aplicada al MA utiliza técnicas de manipulación genética (problemas
ambientales y promover la conservación y restauración de los ecosistemas)
(Biorremediación, Fitorremediación Control de plagas y enfermedades Restauración de
hábitats Conservación de especies en peligro de extinción.) Plantea preocupaciones éticas
y de seguridad.
La bioética aborda las cuestiones éticas relacionadas con la modificación genética de
organismos para la restauración ambiental, la eliminación de contaminantes o la mejora de
la productividad agrícola, considerando los riesgos y beneficios.
Con los Organismos Genéticamente Modificados (OGMs), (en culitvos, m.o. y animales)se
busca la alteración del material genético de una manera que no ocurre naturalmente, esto
con técnicas de ingeniería genética en organismos vivos con el fin de separar, modificar y
transferir partes del ADN de un ser vivo a otro. Puede ser en plantas, animales o m.o. para
mejorar ciertas características deseables (resistencia a plagas y enfermedades, tolerancia
a herbicidas, mejoras nutricionales, capacidad de crecimiento en condiciones ambientales
adversas, entre otros).
El uso de OGMs ha generado debates a nivel mundial, esto por preocupaciones sobre
seguridad ambiental, impacto en la biodiversidad, efectos en la salud humana y cuestiones
éticas y socioeconómicas relacionadas con el impacto en los sistemas agrícolas y
alimentarios. Su desarrollo y uso están regulados por diversas normativas y leyes en
diferentes países. Debe contar con los permisos necesarios como la COFEPRIS, SADER;
etiquetados autorizados por la SSA. Se analiza la inocuidad de acuerdo con la Ley de
Bioseguridad de los Organismos Genéticamente Modificados y su Reglamento.
3.3 Análisis de factibilidad para la sobreproducción de microorganismos industriales.
La microbiología está a la cabeza de muchos avances importantes en medicina, en
veterinaria, en agricultura y en la industria. Los microorganismos desempeñan funciones
importantes en ella, como el deterioro, la seguridad y la producción.
Industria alimenticia
Dentro de la industria alimenticia la sobreproducción es una técnica factible, esto debido a
que en la industria producir fermentaciones a grande escala para aumentar la escala de
microorganismos deseados.
Industria agrícola
Dentro del sector agrícola, se han dado a la tarea de producir microorganismos patógenos
que actúen como sustitutos de insecticidas químicos, con la finalidad de eliminar los riesgos
en los cultivos (salud).
Industria farmacéutica
Los microbiólogos buscan crean microorganismos o enzimas que ayuden a controlar la
propagación de enfermedades.
El microorganismo debe estar presente en todos los casos de la enfermedad, pero ausente
en los organismos sanos.