DIAGNÓSTICO

PARASITOLÓGICO
MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO DIRECTO:
Técnicas directas. Técnicas de concentración
de parásitos en muestras fecales.

MSC. MAYDAY STASEY SOTO ALVAREZ

Importancia de la Parasitología médica

⚫ Reconocimiento de nuevos parásitos:

◦ “Organismos inusuales”
🞄 Microsporidios y Coccidios
⚫ Nuevos métodos de diagnóstico
◦ Importancia del reconocimiento de las
limitaciones de cada técnica
🞄 Información incompleta
🞄Tratamiento inadecuado del paciente
Importancia de la Parasitología

⚫ Prevalencia de parasitosis producidas por

protozoos y helmintos
◦ Zonas endémicas
◦ Zonas no endémicas
◦ Problemática en inmunodeprimidos
 Importancia de la Parasitología
1. Enfermedades por parásitos endémicos 2. Debido a inmigración y turismo
Giardiasis → Niños Malaria
Tricomoniasis → Adultos Tripanosomiasis
Toxoplasmosis → Embarazadas Leishmaniasis
Leishmaniasis → Niños
Amebiasis
Enterobiasis → Niños
Esquistosomiasis y otras Trematodiasis
Triquinelosis → Matanzas ilegales
Filariasis
Equinococosis → Zonas ganaderas
Oncocercosis
Pediculosis → Niños
Geohelmintiasis

3. Inmunosupresión Sarna

Leishmaniasis 4. Importancia ganadera

Toxoplasmosis 5. Importancia alimentaria
Isosporosis
Criptosporidiosis
Microsporidiosis
Estrongiloidosis
 DIAGNÓSTICO DE PARASITOSIS:
Consideraciones generales

Importancia del diagnóstico parasitológico

• Gran impacto de las enfermedades parasitarias en la salud global

• Necesidad de personal cualificado
• Errores diagnósticos (no se diagnostica o el diagnóstico es
erróneo)
• Repercusión grave en el tratamiento de los pacientes
• Importancia de individuos inmunodeficientes y enfermedades
parasitarias
• Síntomas inespecíficos
DIAGNÓSTICO DE PARASITOSIS:
Consideraciones generales

Ciclo de Zona
vida geográfica

Morfología
 EL COSTE DE UN DIAGNÓSTICO POBRE

Salud Individual Salud Pública IMPACTO GLOBAL

Incidencia y
Ausencia de diagnóstico o

Prevalencia
No Tto. Enfermedad Transmisión
Carga Enfermedad
diagnóstico erróneo

Asignación errónea
Recursos recursos
Tto. del Tto. Erróneo o
síndrome Sobre-tto. Aparición Dificultad Control
Resistencia Tto. Enfermedad
 DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO

Directos Indirectos

Observación Cultivo “in Inoculación Inmuno- Molecular Inmuno-

morfológica vitro” en animales diagnóstico (PCR) diagnóstico
Tipos de muestras

Según la muestra a analizar se tendrá en cuenta:

• Forma de la toma
• Momento de la toma
• Precauciones al tomar la muestra
• Tratamiento pre-analítico de la
muestra
Tipos de muestras

Localización de las muestras

• Cualquier lugar del cuerpo humano es

susceptible de ser colonizado por un parásito

• Tropismo especial de cada parásito por ciertos

órganos y tejidos. Ciclo biológico bien definido
 Tipos de muestras Localización de las muestras

• Consultar Tablas de las obras referenciadas o de otras similares.

Garcia, Lynne Shore (Author). Practical Guide to Diagnostic Parasitology

(2nd Edition). Washington, DC, USA: ASM Press,
 Tipos de muestras

Casos particulares en la toma de muestras

• Parasitación por Enterobius vermicularis
• Parásito intestinal, cuya hembra emite huevos (Método Graham)

• Filariasis: diagnóstico basado en identificación de las microfilarias

(L1) de sangre periférica ¡Periodicidad!
P. Nocturna P. Diurna Aperiódicas
Wuchereria bancrofti
Brugia malayi Loa loa Onchocerca volvulus
Brugia timori

• Malaria: Plasmodium spp. protozoo sanguíneo intreritrocitario. En

general, debe tomarse la muestra durante o inmediatamente
después del período febril (*excepciones)
 Tipos de muestras

Casos particulares en la toma de muestras

• Algunos parásitos pueden identificarse en varios tipos de
muestras:

Parásito Muestra
Larvas en esputo
Ascaris lumbricoides
Huevos en heces
Trofozoítos y quistes en heces
Entamoeba histolytica
Trofozoítos en hígado
Tipos de muestras
Aparato respiratorio
• Esputo
• Aspirado bronco-pulmonar
• Líquido de lavado bronquial
• Heces (si hay deglución)

Sistema circulatorio/linfático
• Sangre
• Linfa
• Aspirado o biopsia de ganglios linfáticos
Tipos de muestras
Sistema nervioso
• Líquido cefalorraquídeo (LCR)
• Punción lumbar

Aparato genito-urinario
• Orina
• Secreciones vaginales, uretrales
• Aspirados y raspados vaginales, prostáticos…
• Biopsias

Piel
• Raspados
• Biopsias
Tipos de muestras

Órganos profundos
• Hígado, Bazo:
• Aspirados
• Punciones o biopsias

Tejido muscular
• Aspirados
• Biopsias
Tipos de muestras

Resumen

• De todas las muestras susceptibles de realizar análisis

parasitológico, sólo dos pueden ser tomadas por el paciente:
• HECES
• ORINA

• Todas las demás se tomarán por personal especializado, en

cada caso
Fases para realizar un análisis coprológico
parasitario

Fase Pre-analitica
Información al paciente sobre la toma de Transporte. Datos del paciente
muestras Fecha y hora de la recogida

Fase Analítica
Tratamiento de las muestras Análisis coprológico e identificación de las
Calibración del microscopio formas parasitarias

Fase Post-analítica
Información de los resultados:
Informe adicional al clínico, si procede
interpretación y recomendaciones
ANÁLISIS PARASITOLÓGICO

Fase Pre-analítica
• Es esencial para que el resultado sea el correcto
• Anamnesis
• Modo de vida: rural, urbano
• Presencia de animales domésticos
• Patología idéntica en la familia
• Viajes recientes
• Anamnesis → sospecha clínica de una parasitosis y solicitará un
determinado análisis
• Es necesario el conocimiento de los parásitos (ciclo de vida,
distribución geográfica, sintomatología, etc.), para poder
solicitar la muestra adecuada
• Preparación del paciente
ANÁLISIS PARASITOLÓGICO

Fase Analítica Fase Post-analítica

• Preparación del material • Información de los
resultados:
• Procesamiento de las
muestras • Interpretación

• Análisis • Recomendaciones
• Informe adicional al
clínico, si procede
 Fase pre-analítica
Toma de muestras fecales

Recomendaciones generales

1. Si el paciente puede desplazarse. La defecación deberá efectuarla

en el laboratorio y el análisis, sobre todo si aparecen heces
sanguinolentas, deberá realizarse inmediatamente

2. Si el paciente no puede desplazarse pero las heces pueden

remitirse al laboratorio dentro de la hora siguiente a la emisión.
Las heces serán recogidas en un recipiente con cierre hermético y
se transportan rápidamente al laboratorio de análisis, dentro de
otro recipiente aislante (termo) destinado a impedir su
enfriamiento

3. Si el paciente no puede desplazarse y las heces no se pueden enviar

rápidamente al laboratorio. En este caso las heces se mezclarán,
inmediatamente después de la defecación, con un
fijador/conservante
 Fase pre-analítica
Toma de muestras fecales
Recomendaciones generales

Régimen alimenticio estricto desde 72 h antes

recogida muestra
• No ingerir medicamentos opacos (sales de Ba, Mg, Bi) Remitir al
• No utilizar laxantes oleosos por vía oral o en supositorios laboratorio la
• Evitar alimentos con muchos residuos totalidad de la
• Legumbres emisión fecal
(150g al menos)
• Frutas de cutícula resistente
• Frutos con semillas duras y pequeñas (higos, fresas) Recoger las heces
• Evitar carnes sangrantes, hígado (falso parasitismo), separadamente de
morcillas la orina en frasco
limpio y seco

Examinar:
A la espera de
Mezclar con ▪ 30 min (heces líquidas) observación, la muestra
fijador/conservante si ▪ 1 h (heces blandas) se mantendrá a T
no se envía la muestra
▪ dentro de las 24h post- ambiente; 37º si son
inmediatamente
emisión (heces formes) muy líquidas
 Fase pre-analítica

Toma de muestras fecales

Recomendaciones generales

Si no es posible enviar la muestra inmediatamente, ésta se debe mezclar

con un fijador o conservante (3 partes fijador/1 parte heces).
Procedimiento: el paciente recogerá la muestra de heces en 2 viales

Formol al 5%-10% Otro Fijador

CONCENTRACIÓN TINCIONES PERMANENTES

 Fase pre-analítica

Toma de muestras fecales

Recomendaciones específicas

• Si son líquidas enviar rápidamente al laboratorio (menos de

30 minutos) y sin meter en la nevera, especialmente en
sospecha de disentería amebiana

• Si el examen se va a demorar es necesario utilizar

productos fijadores (por ejemplo SAF)

• Para cultivo-migración de Strongyloides es esencial

mantener la muestra a temperatura ambiente
 Fase pre-analítica

Principales fijadores/conservantes

CONSERVADOR VENTAJAS LIMITACIONES

Conserva muy bien, huevos helmintos, No conserva bien la morfología de
quistes protozoos y larvas. Fácil de los trofozoítos. No válido para
Formol 5-10% preparar, larga duración. Buen fijador algunas tinciones permanentes*, ni
para técnicas de concentración. Se para algunos inmunoensayos. No
puede utilizar para inmunoensayo apropiado para PCR

Conserva y tiñe todo tipo de parásitos.

MIF Adecuado para las técnicas de
concentración. Bueno para frotis
No útil para los trofozoítos de
protozoos. No válido para tinciones
(mertiolato-yodo-formol) fecales teñidos permanentemente. Los con tricrómico
parásitos se conservan indefinidamente
Excelente para fijar trofozoítos y quistes
No muy útil para huevos y larvas de
de protozoos. Se puede utilizar para
helmintos, coccidios y
PVA (alcohol polivinílico) técnicas de concentración. Bueno para
microsporidios. Difícil de preparar.
tinciones permanentes. Muy duradero
No usar para inmunoensayo
en frascos sellados
* Tricrómico, Hematoxilina férrica (típicas de amebas y flagelados), para éstas se emplea sobre todo el PVA. Sin embargo, sí se puede
utilizar perfectamente para tinciones específicas de coccidios y microsporidios, como Ziehl-Neelsen modificado, Kinyoun, para
ooquistes y tricrómico-cromotropo 2R para esporas de microsporidios
 Fase pre-analítica

Principales fijadores/conservantes

CONSERVADOR VENTAJAS LIMITACIONES

No útil para huevos y larvas de
Schaudinn Buena conservación de morfología de
trofozoítos y quistes de protozoos.
helmintos, coccidios y
microsporidios. Pobre adherencia a
(Cloruro de mercurio, etanol Tinciones permanentes fáciles de
portaobjetos. No recomendable
y ácido acético glacial) preparar
para las técnicas de concentración

Buen fijador para todos los parásitos. No bueno para formas juveniles
SAF Bueno para técnicas de concentración.
Bueno para frotis fecales teñidos
Requiere aditivos (albúmina-
glicerina) para la adherencia al
(acetato sódico-ácido permanentemente. Fácil preparar. portaobjetos. Las tinciones
acético-formol) Compatible con algunas técnicas permanentes no son tan buenas
inmunológicas como con PVA-Schaudinn
Análisis coprológico parasitario
Fase-analítica

▪ Heces duras: examen fecal como máximo dentro de las 24 h siguientes a la defecación (los
quistes podrían desintegrarse, los huevos eclosionar y las larvas mudar)
▪ Heces líquidas: si se sospecha la presencia de trofozoítos, observación en 30 min máximo
(informar al paciente de que evite el enfriamiento de la muestra)

▪ Para cualquier muestra que llegue al laboratorio se debe realizar:

Si da negativo, repetir
(hasta 3 veces)

Examen microscópico tras

concentración. Observación con
y sin lugol

Examen microscópico
directo, con y sin lugol

Examen
macroscópico

“Enla muestra analizadanosehanencontradoformas parasitarias”

 Fase-analítica

Métodos de diagnóstico directo de enteroparásitos

Análisis Coprológico Parasitario

• Mayoría de parásitos intestinales y de vías biliares

• Resultado ☑ parasitismo
• Resultado ☒ no descarta parasitismo
• Causas imputables a la técnica

• Causas imputables a la biología del parásito

 Fase-analítica

Métodos de diagnóstico directo de enteroparásitos

Análisis Coprológico Parasitario

• Causas de resultado negativo

• Técnica
• Muestra inadecuadamente recogida y conservada
• Escasez de parásitos en la muestra (sensibilidad)
• Biología del parásito
• Período de invasión parasitaria
• Eliminación irregular de formas parasitarias
períodos negativos
• Parásitos intestinales que no expulsan huevos en
heces
Examen macroscópico de las heces
Fase-analítica

Características de la muestra

• Consistencia
• Color
• Elementos no fecales
• Parásitos
 Análisis coprológico parasitario Fase-analítica

Distribución de los protozoos en relación con la

consistencia de las heces

Consistencia Trofozoítos Quistes

Los ooquistes de coccidios y esporas de microsporidios se encuentran en heces de

cualquier consistencia
 Examen macroscópico de las heces
Fase-analítica

Características de la muestra
• Consistencia
• Color
• Elementos no parasitarios
• Pus
• Moco
• Tejido conjuntivo [Link]
• Sangre html
© L. E. Hueli Amador.
• Residuos alimenticios Dept. Parasitología. F.
Farmacia. Univ. Granada

• Parásitos (se debe diluir la

totalidad de la emisión fecal en
agua)
• Cestodos
• Trematodos
• Nematodos
• Artrópodos (Larvas de mosca) [Link] [Link]
s/[Link] a_domestica
 Fase-analítica
Examen macroscópico de las heces*

Procesamiento de la muestra para detectar parásitos

Examinar
con lupa
Emisión fecal
completa (al Pasar el
menos 150 g) Añadir agua Transferir a Dejar
Triturar sedimento
hasta recipiente reposar 30
(varilla, en
consistencia grande y min y
agitador, fracciones a
mortero) de pasta llenar de decantar.
un
fluida agua Repetir
cristalizador

*Si se sospecha una parasitosis por protozoos se debe pasar directamente al examen microscópico; cuanto menos manipulaciones
se hagan, mejor. Menos se alterarán los elementos parasitarios. La orientación del clínico es muy importante
Examen microscópico de las heces Fase-analítica

Examen directo: 0,9% ClNa

Trofozoítos, quistes, ooquistes, huevos y larvas
Movilidad de los trofozoítos

Examen directo (formol 5-10 %)

Procedimiento
Frotis directo (helmintos y protozoos)
Morfología general

Concentración (Formol-éter; FAE)

Frotis directo (helmintos y protozoos)
Frotis directo (epifluorescencia coccidios)
Tinciones especiales (coccidios)
Morfología general/precisa

Muestras con fijador (PVA, SAF)

Tinción permanente: trofozoítos y quistes
Morfología precisa

Cultivos en medios artificiales

(parásitos escasos)
Examen microscópico directo Fase-analítica

Preparación de la muestra

• Observar si las heces son homogéneas o heterogéneas (restos

mucosos, sanguinolentos...) tratar cada porción como muestra
independiente
• Tamizar para eliminar restos groseros
• Tomar muestras de varios puntos con asa de platino y poner en un
porta con unas gotas de solución salina fisiológica (también se puede
hacer una papilla con solución salina, en una copa cónica)
• Colocar 2 gotas separadas sobre un porta (una de ellas con lugol)
• Si se sospecha la presencia de trofozoítos amebianos mezclar una
gota de la muestra con otra de AMA (azul de metileno amortiguada)
 Fase-analítica
Examen microscópico directo

Observación microscópica de los elementos parasitarios

• HECES ACUOSAS O SUELTAS:
• Protozoos (trofozoítos, quistes y ooquistes)
• Helmintos (huevos y larvas)
• HECES FORMADAS O BLANDAS:
• Protozoos (quistes, ooquistes)
• Helmintos (huevos y larvas)
• La mayoría de los ooquistes de coccidios se encuentran en heces líquidas

Observación microscópica de los elementos no parasitarios

• Glóbulos rojos
• Glóbulos blancos (polimorfonucleares, eosinófilos…)
• Macrófagos
• Cristales de Charcot-Leyden
• Levaduras, esporas de hongos
• Restos alimenticios: células vegetales, granos de polen, grasas neutras, fibras musculares,
almidón, ácidos grasos, celulosa…

Observación microscópica minuciosa de toda la preparación

• Objetivo seco débil (10 x)
• Objetivo seco fuerte (25-40 x)
• Habitualmente no se emplea objetivo de inmersión

• Importante: No diluir demasiado las muestras

Glóbulos rojos Glóbulos blancos
 Fase-analítica
Examen microscópico directo

Examen directo Organismos que se pueden

identificar definitivamente en
en fresco un examen directo

Diagnóstico rápido “Resultados preliminares”

Quistes de Giardia y de Entamoeba coli
muestras con gran cantidad
Huevos y larvas de helmintos
de formas parasitarias
Ooquistes de Isospora

Objetivo: “Resultados definitivos”

Chequear la motilidad de Después de concentración y

los trofozoítos tinción
Los quistes se excretan en heces . La infección
por Entamoeba histolytica ocurre por la ingestión
de quistes maduros en alimentos, agua o
manos contaminadas con heces. La
eclosión ocurre en el intestino delgado
liberando a los trofozoítos, que migran al
intestino grueso. Los trofozoítos se multiplican
por fisión binaria y produce quistes , los cuales
son excretados en las heces . Por la protección
que confiere la pared del quiste, este puede
sobrevivir días en ambiente externo y ser
responsable de la transmisión (los trofozoítos se
excretan en las heces diarreicas, pero se
destruyen rápidamente fuera del cuerpo y si
fueran ingeridos no sobreviven al ser expuestos al
ambiente gástrico). En muchos casos, los
trofozoítos se mantienen confinados al lumen
intestinal ( : infección no invasiva) de los
individuos que se convierten en portadores
asintomáticos, que excretan los quistes en
heces. En algunos pacientes los trofozoítos
invaden la mucosa intestinal ( : infección
intestinal), o a través del torrente sanguíneo, en
sitios extraintestinales como son hígado, cerebro
y pulmones ( : infección extraintestinal). Se ha
establecido que las formas invasivas y no
invasivas representan dos diferentes especies,
respectivamente E. histolytica y E. dispar, sin
embargo, no todas las personas que están
infectadas con E. histolytica presentan la infección
invasiva. Estas dos especies son
morfológicamente indistinguibles. La transmisión
se presenta también por contacto sexual (en cuyo
caso tanto los quistes como trofozoítos son
infectantes).
IMÁGENES
 Fase-analítica

Examen microscópico directo

Movilidad Tinción
(trofozoítos) (vacuolas y núcleos)

Si las muestras que llegan al laboratorio tienen conservante, puede omitirse el examen
en fresco pues no se observará la movilidad de los trofozoítos (propósito principal)
 Fase-analítica
Examen microscópico de las heces

Técnicas de concentración
◼ Objetivo: aumentar la sensibilidad del Análisis
Coprológico Parasitario (ACP), al facilitar la
identificación de los elementos parasitarios dispersos
en la masa fecal, mediante la separación de los restos
fecales

◼ Numerosos métodos. Se pueden realizar con materia

fecal fresca o fijada

◼ Ninguno evidencia todos los tipos de parásitos

Examen microscópico de las heces Fase-analítica

Técnicas de concentración
EXAMEN TRAS CONCENTRACIÓN

Métodos físicos: Métodos difásicos:

-Sedimentación Empleo de dos fases no miscibles:
-Flotación (agua/éter o acetato de etilo)

Preparación de las heces para la concentración

Examen microscópico de las heces Fase-analítica

Técnicas de concentración: Métodos Físicos

▪ Dilución minuciosa de heces en líquido o solución de

densidad:
▪ Inferior a la de los parásitos: técnicas de sedimentación
▪ Superior a la de los parásitos: técnicas de flotación

▪ En las dos técnicas hay 2 etapas: dilución y concentración

▪ En ciertos casos se puede acelerar el proceso con
centrifugación suave

▪ Ventajas:
▪ Realización muy simple y barata
▪ Precisan poco material de laboratorio
Examen microscópico de las heces Fase-analítica

Técnicas de concentración: Métodos Físicos

▪ Técnicas de sedimentación

▪ Método de sedimentación simple

▪ Método de Faust e Ingalls (sin centrifugación)
▪ Método de Baroody y Most (con centrifugación)

▪ Técnicas de flotación

▪ Método de Fülleborn
▪ Método de Willis (flotación en solución saturada de ClNa)
▪ Método de Faust (flotación en SO4Zn, con centrifugación)
▪ Método de Sheather (flotación con centrifugación en una
solución de azúcar)
 Fase-analítica
Examen microscópico de las heces
Menisco convexo
Métodos Físicos: flotación
Método de Willis
▪ Homogeneizar 1-2 g de heces en s.s.
▪ Filtrar a través de doble capa de gasa
▪ Poner 1-2 ml del filtrado en un tubo de ensayo, añadir
solución sobresaturada de ClNa y volver a homogeneizar
▪ Completar el tubo con la sol. saturada de ClNa hasta
que se forme un menisco convexo en la superficie
▪ Colocar un porta/cubre objetos desengrasado en
contacto con el menisco
▪ A los 20 min retirar el porta rápidamente, colocarle el
cubre y observar al microscopio

▪ VENTAJAS: pocas manipulaciones y material parasitario con

pocos contaminantes
▪ CONTRAINDICADO: heces ricas en grasa, huevos operculados,
huevos Ascaris infértiles y de Schistosoma spp., larvas de
helmintos y quistes de protozoos
 Fase-analítica
Examen microscópico de las heces

Métodos Físicos: flotación

Método de Willis

Huevo de Taenia spp.

30-35 m

Huevos de Toxocara canis

80-85 m

Imágenes: © Laboratorio Virtual de Prácticas de Parasitología. Dept. Parasitología. F. Farmacia. Univ. Granada. PID-08-50
Examen microscópico de las heces Fase-analítica

Métodos físicos: flotación-centrifugación

Método de Faust simplificado

• Diluir 1 ml de heces en aprox. igual cantidad de una
solución saturada de sulfato de Zn (SO4Zn 333 g, H2O
destilada c.s.p. 1000 ml; densidad entre 1,18-1,20)
Película
superficial • Homogeneizar suavemente
• Rellenar de nuevo con sulfato Zn hasta ≈ 1 cm del borde
• Equilibrar y centrifugar a 2300 rpm, 1 min
• Recoger inmediatamente un fragmento de la película
formada en la superficie y del sedimento, con un asa de
Sulfato platino y observar al microscopio
de Zn

Sedimento Asa de platino

 Fase-analítica
Examen microscópico de las heces

Métodos físicos: flotación-centrifugación

Método de Faust simplificado

Ooquistes de coccidios sin esporular

Huevos de Ascaris lumbricoides
60-75 m

Ooquistes de coccicios esporulados

20-25 m

Imágenes: © Laboratorio Virtual de Prácticas de Parasitología. Dept. Parasitología. F. Farmacia. Univ. Granada. PID-08-50
Examen microscópico de las heces Fase-analítica

T. concentración: Métodos difásicos (físico-químicos)

◼ Derivan todos del método descrito por Telemann

en 1908

◼ Las heces se mezclan con dos diluyentes no

miscibles: uno acuoso (solución de formol) y otro
disolvente de lípidos (éter o acetato de etilo)
Examen microscópico de las heces Fase-analítica

T. concentración: Métodos difásicos (físico-químicos)

◼ Ventajas:
◼ Simples, rápidos, detectan gran cantidad de especies
parásitas (trofozoítos*, quistes y ooquistes de protozoos,
huevos y larvas de helmintos)
◼ Menor deformación de estructuras parasitarias 🠪 menos
limitado por el tiempo que los métodos de flotación
◼ Válido para heces frescas o heces fijadas previamente
(formol, MIF, SAF)

◼ Inconvenientes:
◼ Muestra pequeña que puede ocasionar resultados falsos
negativos
◼ Huevos infértiles de Ascaris y a veces quistes de Giardia
pueden flotar y eliminarse con el tapón de interfase
◼ Tubos de ensayo de vidrio si se usa éter
 Examen microscópico de las heces
Fase-analítica

Métodos difásicos (físico-químicos)

◼ Método formol-acetato de etilo (éter)
◼ Añadir 10 ml de formol 10% a 1g de heces.
Remover bien
◼ Tamizar
◼ Depositar 1ml en un tubo de centrífuga Fase orgánica (AE)
◼ Añadir 1 ml de acetato de etilo. Tapar con un Residuos (grasas,
tapón y mezclar durante 1 min mucus, bacterias)
(para que no se acumulen los vapores de éter, es conveniente
destapar el tubo una o dos veces)
◼ Equilibrar tubo de muestra con tubo con agua Fase acuosa (Formol)
◼ Centrifugar durante 5 min a 3000 rpm
◼ Aparecen 4 capas, sólo la del fondo nos interesa
◼ Decantar
◼ Colocar el tubo en una gradilla y dejar que el Sedimento
líquido de los lados del tubo escurra hasta el (concentrado
sedimento. Mezclar bien de parásitos)

◼ Observar al microscopio en fresco y con lugol

 Fase-analítica
Examen microscópico de las heces

Métodos difásicos (físico-químicos)

◼ Método formol-acetato de etilo

Quistes de Giardia lamblia (8-19 m)

Larvas-1 de Strongyloides stercoralis

(180-300 m)
[Link]
[Link] [Link]/[Link]?SOT_CAP=F_GIARD#25
nematode/[Link]
Tamaños relativos de los huevos de helmintos

Fuente: OMS 1994. Medios auxiliares para el diagnóstico de las parasitosis

intestinales. Organización Mundial de la Salud, Ginebra. En:
[Link]
¿En qué características nos tenemos que fijar para
identificar los huevos de las distintas especies?

Presencia de
estructuras
Tamaño (longitud y especiales:
anchura) opérculos, espinas
tapones…

Forma Color

Fase de desarrollo Grosor de la

en heces cubierta
[Link]
 LEISHMANIOSIS- Género Leishmania
Enfermedad(es) producida por las distintas especies del género Leishmania (Protozoa,
Euglenozoa, Kinetoplastida, Trypansomatidae). Hay aproximadamente 20 especies que afectan
al hombre, y están extendidas por todo el mundo. El ciclo se desarrolla entre un hospedador
vertebrado (principalmente cánidos y roedores, y, por supuesto, las personas), y un hospedador
invertebrado que son los flebotomos. Está repartida por todo el mundo, siendo los principales
focos la India-Nepal, Este de África, y Brasil. El mediterráneo, tanto europeo como africano,
también es endémico. En Europa Occidental (y por tanto en España) se dan numerosos casos
todos los años, la única especie presente es Leishmania infantum, y el perro es el principal
reservorio (la leishmaniosis canina constituye uno de los principales problemas de la práctica
veterinaria)
Básicamente, en las personas aparecen 3 formas clínicas: visceral, cutánea y cutáneo-mucosa.
No obstante, recientemente se están dando casos de Lsh mucosa estricta en el mediterráneo

RESERVORIOS.
+ Humanos: solo para L.
donovani y L. tropica.
+ Cánidos: principalmente de L.
infantum. Zorro, lobo, chacal,
pero sobre todo el perro
(leishmaniosis canina).
+ roedores. Un sinfín de especies,
muy diferentes de unos sitios a
otros. Prácticamente todas las
especies de Leishmania, excepto
las anteriormente citadas.
VECTORES: flebotomos
+ Género Phlebotomus
+ Gén. Lutzomyia (Nuevo Mundo)
Leishmaniosis Visceral o Kala-Azar: se caracteriza por fiebre alta e irregular, hepato-
esplenomegalia, pancitopenia, adenopatía, alteración del la proporción albúminas/γ-
globulinas, astenia, cansancio, delgadez progresiva a caquexia, y muerte.
+ LV está causada por L. donovani (en India-Nepal y Este de África). En India es una
antroponosis (el hombre es el reservorio), mientras en el este de África es una zoonosis,
con diversas especies de roedores como reservorios. Las personas afectadas son tanto
adultos como niños.
+ L. infantum causa la LVH en el resto del mundo (Mediterráneo, Oriente Medio, y
América). En América a veces se le da, incorrectamente, el nombre de L. chagasi. El
reservorio de L. infantum son los cánidos en general, y los perros en particular; no
obstante, recientemente se ha comprobado que los gatos, conejos y liebres pueden jugar
un papel importante como reservorios del parásito. Los niños han sido los principalmente
afectados, aunque en los últimos decenios este patrón ha cambiado, principalmente si se
consideran las personas infectadas con el VIH.
+ 580 casos anuales de LVH en España, y en la Comunidad de Madrid se ha dado un brote
epidémico a partir de 2012 en el que el nº de casos se ha multiplicado por 10 (ha pasado
de 10-12 casos año a casi 120).
Diagnóstico Leishmaniosis VISCERAL
+ La sangre se usa para PCR o serología, pero no sería una muestra válida
para la observación del parásito
+ Las mejores muestras para la observación del parásito (formas
amastigotes) serían:
+ Médula Ósea: esternón, o cresta ilíaca (niños pequeños)
+ Esplénica: muy peligrosa (hemorragias)
+ Ganglio (se usa poco o nada en personas; sí se usa en perros)
Diagnóstico de la LEISHMANIOSIS
CUTÁNEA

+ causada por prácticamente todas las

especies que afectan al hombre, como L.
tropica, L. major, y L. aethiopica (Viejo
Mundo). L. donovani causa la LDPKA,
probablemente como consecuencia de
un fallo en el tto. de la LVH.
En el Nuevo Mundo, por las especies de
los complejos braziliensis y mexicana.
+ En España y otros países
mediterráneos europeos, L. infantum.
LCH americana
+ Localización estrictamente cutánea
+ Gran variedad clínica, aunque la forma
más típica es el clásico botón de oriente.
+ formas atípicas de la enfermedad
+ Las causadas por [Link] tienen un
aspecto más húmedo, mientras que las
causadas por L.t. tienen aspecto más
costroso.
+ las americanas son ser de mayor
tamaño.
Leishmaniosis cutánea. Toma de muestras

+ solo de la lesión cutánea (nunca de

sangre)

+ Borde de la lesión,

+ Presionar el borde de la lesión

hasta que se observe poca sangre.

+ Hacer raspado, con bisturí. Evitar sangre.

+ o hacer aspirado, con jeringa insulina,

+ o biopsia, con biopsy punch

+ el mejor, la biopsia (la hace el

dermatólogo) con biopsy punch de 4 mm;
no necesita punto.

+No se debe hacer biopsia en cala con

bisturí, porque deja mucha cicatriz
[Link]
 Diagnóstico leishmaniosis:
Amastigotes
libres tras ruptura con las muestras obtenidas, hacer frotis
macrófago ↓
(Amastigotes), o cultivo (promastigotes)

Amastigotes: formas ovoides,

de 3-5 μ de largo por 2-3 μ de
ancho, con núcleo y
kinetolasto, normalmente en el Amastigotes libres entre GR
interior de los
Macrófagos. Sólo en el
hospedador vertebrado

Amastigotes en macrófago. Amastigotes en Macrófago

Medio NNN ó EMTM
(Trypanosomátidos)
+ Sangre de conejo con CitNa,
EDTA o Heparina. Añadir
penicilina: 1 M/20 ml
+ Fase solida (NNN):
+ Agar, 1´5-2 g; ClNa, 0’6g;
H2O, csp 100 ml.
+ Autoclavar a 120 ºC, 30’. Solución EMTM:
+ Dejar enfriar hasta 57 ºC. + Extracto carne, 0’3 g
+ Añadir sangre de conejo al + Peptona bacteriológica, 0’5 g
10 %.
+ ClNa, 0’8 g
+ Enfriar en pico de flauta
+ Agar, 2 g
Para EMTM, igual pero usar
solución EMTM (al dejar enfriar se solidifica)
Fase líquida: Suero bovino fetal al 10-20 %. Unas gotas.
Otros medios de cultivo de Leishmania

RPMI-1640 (Roswell Park Memorial Institute): Se adquiere de Sigma (España). Se trata

de un medio de cultivo estándar líquido monofásico. Puede contener rojo fenol como
indicador de pH. Utilizado para el cultivo de Leishmania spp. y de las líneas celulares de
mamífero. Se suplementa con bicarbonato sódico (NaHCO3), suero bovino fetal (SBF)
entre un 10-20% y bencilpenicilina sódica (200 U/mL).

Composición Medio RPMI:

Polvo RPMI: 10,4 g; NaHCO3: 2 g; SBF: 100 mL; Penicilina: 200000 U;

csp H2O bidestilada: Hasta 1 L

Se esteriliza por filtración. Se alicuota y se guarda a -20 ºC, ó 4 ºC. Etiquetado como
“RPMI completo”.

__________________________

Otros medios son el MEM, CCS/BHI, Schneider, LIT, etc.

MALARIA ó PALUDISMO
+ Plasmodium
+ P. vivax, P. ovale, P. malariae,
P. falciparum, y P. knowlesi.
+ fiebres tercianas ó cuartanas
+ 216 M casos/año
+ Erradicada en occidente, pero 655m
muertes/año en 3er Mundo (Lancet, 2014)
+ casi 400.000 casos en 1942 en España. El
último caso autóctono se produjo en 1961, pero
cada año se dan aproximadamente 400 casos

En el ciclo de Plasmodium sólo intervienen dos

hospedadores: los humanos, y los mosquitos de
género Anopheles
DIAGNÓSTICO DE LA MALARIA O
PALUDISMO:
+ causada por Plasmodium ssp
+ Especies humanas: P. vivax, P. ovale, P.
malariae, P. falciparum. (P. knowlesi).

+ ciclo en sangre (eritrocitos):

+ merozoito puntiforme.
+ trofozoito anular
+ trofozoito ameboide
+ Esquizonte inmaduro
+ Esquizonte maduro
+ Granulaciones específicas
+ Pigmento palúdico
+ Gam masc (microgametocito)
+ Gam fem (macrogametocito)
+ formas libres del parásito

+ en frotis sanguíneo
parásitos intraeritrocíticos

+ en gota gruesa:
parásitos extraeritrocíticos
P. vivax ha
sido el
principal
causante de la
malaria en el
Mediterráneo,
y, en general,
en todo el
mundo
Occidental
(incluídos el
Centro-Norte
de Europa y
USA).
En España
causaba el 70-
90 % de los
casos de
paludismo.
Se considera
la 2ª especie
más grave de
Plasmodium
(tercianas)
P. vivax
P. ovale es casi
exclusivamente
africano. Nunca
ha sido
endémico en el
Mediterráneo, y
es poco
patógeno
(terciana
benigna).

En 2002 se dio
un caso de
“paludismo de
aeropuerto” en
España,
causado por
dicha especie.
P. malariae,
de origen
africano, ha
sido
endémico en
el
Mediterráneo,
y en España
representaba
el 5-10 % de
los casos.
Produce las
“cuartanas”,
y el riñón
suele estar
especialmen-
te
involucrado.
P. malariae
P. falciparum causa
las tercianas
malginas, y este
parásito ha sido el
agente infeccioso
que ha producido
más muertes al
hombre a lo largo de
la historia.
Originario de África,
ha sido endémico en
el mundo Occidental,
y en España
representaba el 5-10
% de los casos.
Sigue siendo un
problema mundial,
con 1 M de muertos
al año. Otro
problema añadido
son las resistencias
a los antipalúdicos,
así como de los
vectores a los
insecticidas
P. falciparum
P. knowlesi,
¿el 5º Plasmodium humano?.
+ Parásito de monos del genero Macaca, tales como M. fascicularis
+ Algún caso humano en el decenio 1950.

+ Brote epidémico a comienzo del 2000, en el sudeste asiático.

+ ya se ha dado un caso en europeos (incluidos españoles) que han
estado en dicha zona.

+ algunas formas parecidas a P. falciparum, y otras parecidas a P.

malariae.
+ “Descubrimiento” por biología molecular.
SANGRE ó MÉDULA ÓSEA

+ Directamente con solución

salina: Trypanosoma sp.,
Microfilarias. (poca utilidad
práctica).
+ Frotis: Plasmodium, Trypanosma,
Leishmania, Microfilarias. (se ve
mejor la morfología del parásito)

+ Gota Gruesa: Plasmodium,

Trypanosoma, Microfilarias. (más
fácil encontrar los parásitos)
+ Microhematocrito:
Trypanosoma, Microfilarias
GIEMSA-FROTIS GIEMSA-GOTA GRUESA

+ Secar la preparación + Secar preparación (cubierta)

+ Fijar con metanol, 3´. Secar. (¡ No fijar con Metanol !)

+ Teñir con Giemsa 20 %. 30´ + Teñir con Giemsa 20 %, 30’ .

+ Tirar Giemsa, lavar con agua del + Retirar Giemsa . Lavar en Placa
grifo, secar. de Petri. Secar

+ Observar a 40x y 100x + Secar y observar a 40x y 100x

 FROTIS y GOTA GRUESA CONJUNTO

+ Hacer frotis, y secar.

+ Hacer gota gruesa en el mismo porta. Secar.

+ Introducir parte del porta donde está la gota gruesa en Agua.

Hemolisis. Secar

+ Fijar todo con metanol. 3’

+ Teñir todo con giemsa 20 % (en agua del grifo, PBS o SSF), durante
30’.

+ Tirar colorante, lavar y secar

[Link]
[Link]
Referencias bibliográficas
◼ Ash,L.R., Orihel, C.T. 2010.- Atlas de Parasitología Humana. Edit. Médica
Panamericana. 5ª Edic., Madrid. 540 pp

◼ Beaver, P.C., Jung, R.C., Cupp, E.W. 2003. Parasitología Clínica de Craig y Faust.
3ª ed. rev. Masson (México)

◼ aGarcía, L.S., 2006. Diagnostic Medical Parasitology, 5th ed. American Society
for Microbiology, Washington, 1224 pp. (Enlace directo)

◼ aGarcía, L.S., 2009. Practical guide to diagnostic parasitology, 2nd ed. American
Society for Microbiology, Washington, 488 pp. (Enlace directo)

◼ bGarcia LS, Arrowood M, Kokoskin E, Paltridge GP, Pillai DR, Procop GW, Ryan N,
Shimizu RY, Visvesvara G. 2018. Laboratory diagnosis of parasites from the
gastrointestinal tract. Clin Microbiol Rev 31:e00025-17.
[Link]

◼ Heelan J.S. 2004.- Cases in Human Parasitology. American Society for

Microbiology, Washington DC, 243 pp.

◼ O.M.S. 1992. Métodos básicos de laboratorio en Parasitología Médica. O.M.S.

Ginebra.

 Obras de consulta imprescindible

aDisponible para usuarios de UGR a través de la plataforma E-libro de la Biblioteca de la UGR
bDisponible a través de biblioteca electrónica de UGR
Referencias en Internet

◼ DPDx – Laboratory Identification of Parasitic Diseases of Public Health

Concern. Web site developed and maintained by CDC's Division of Parasitic
Diseases and Malaria (DPDM)
◼ [Link]
◼ Organización Mundial de la Salud
◼ [Link]/es/[Link]
◼ Metodología para el diagnóstico directo de enfermedades parasitarias.
Análisis coprológico (vídeos realizados por el Depto. Parasitología, Facultad
de Farmacia, Universidad de Sevilla)
◼ [Link]
enfermedades-parasitarias-analisis-cropologico/
◼ [Link]
enfermedades-parasitarias-examen-macroscopico/
◼ [Link]
enfermedades-parasitarias-examen-microscopico/