UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
Escuela Profesional de Genética y Biotecnología
MICROBIOLOGÍA GENERAL
Informe de Laboratorio N° 6:
Nutrición microbiana y determinación de
requerimientos nutricionales
Docente a cargo del curso y de la Mesa:
Dra. Susana Gutiérrez Moreno
Grupo y Horario:
PG 1 - Martes 12:00m a 02:00pm y Jueves 12:00m a 02:00 pm
Estudiantes de Mesa N°1:
1. Alarcón Quispe, Roy ................... 23100116
2. Ayala Garay, Pamela …………... 23100119
3. Audante Campos, Antonella ....... 23100118
4. Cueva Roldan, Brayan ................. 23100041
5. De la Cruz Ibarra, Miryam .......... 23100126
6. Gonzalez Chiriboga, Angy .......... 23100130
7. Huamani Enciso, Erick ................ 23100133
2024-2
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I. INTRODUCCIÓN
Los microorganismos, como todos los organismos vivos, tienen requisitos
nutricionales específicos que son esenciales para su crecimiento y
supervivencia. Los requerimientos nutricionales de cada grupo microbiano
están dados por la composición química de las células que los constituyen y
por sus características genéticas las que determinan sus propiedades
fisiológicas y su capacidad para utilizar y transformar los compuestos que se
encuentran en el ambiente en que se desarrollan (Departamento de biología, s.
f.).
Comprender estos requisitos permite a los científicos clasificar a los
microorganismos en varios grupos según sus capacidades metabólicas. En
general, los microorganismos se clasifican en grupos autótrofos y heterótrofos,
con subdivisiones adicionales basadas en sus fuentes de energía y carbono. Los
microorganismos autótrofos, también conocidos como productores, ya que
producen su propio alimento a partir de moléculas inorgánicas y una fuente de
energía, además se dividen en fotótrofos, los cuales sintetizan moléculas
orgánicas usando como energía la luz solar y como precursores al dióxido de
carbono y al agua; y los quimiótrofos que obtienen su energía y moléculas
orgánicas a partir de reacciones químicas entre moléculas inorgánicas. Por su
parte, los heterótrofos dependen de los organismos autótrofos para su
alimentación y utilizan la energía para su metabolismo (Sánchez, 2018).
Se tiene como objetivo explorar y determinar los requerimientos nutricionales
específicos de diferentes microorganismos. Mediante el uso de medios
sintéticos, podemos observar y analizar los patrones de crecimiento de varios
microbios, demostrando la diversidad de sus necesidades nutricionales. Este
experimento también resalta las diferencias entre mutantes auxotróficos, que
tienen dependencias nutricionales específicas, y cepas prototróficas, que
pueden sintetizar todos los compuestos requeridos (Gutierrez et al., 2024).
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II. RESULTADOS
Experiencia 1: Determinación de los requerimientos mínimos para el
crecimiento
● Saccharomyces cerevisiae: No hubo crecimiento
- Motivo: Saccharomyces cerevisiae es un organismo heterótrofo
que necesita fuentes de carbono y nitrógeno orgánico para
crecer. En el medio con solo agar y agua destilada, no hay
fuentes de energía ni de carbono disponibles, por lo que no
puede crecer.
● Escherichia coli mutante auxotrófica: No hubo crecimiento
- Motivo: Esta cepa mutante auxotrófica tiene una deficiencia
genética que le impide sintetizar ciertos compuestos necesarios
para su crecimiento, como aminoácidos o bases nitrogenadas.
En el medio con solo agua y agar, no están presentes estos
nutrientes esenciales, por lo que no podrá crecer.
● Escherichia coli salvaje (protótrofa): No hubo crecimiento
- Motivo: Aunque Escherichia coli salvaje es un organismo
protótrofo capaz de sintetizar todos los compuestos necesarios
para su crecimiento a partir de fuentes inorgánicas mínimas, el
medio solo contiene agua destilada y agar, sin una fuente de
carbono (como glucosa) o nitrógeno. Por lo tanto, no tiene
suficientes nutrientes para crecer.
Figura 1. Placa Petri (Agar + H20dd)
● Saccharomyces cerevisiae: No hubo crecimiento
- Motivo: No creció porque es un microorganismo heterótrofo,
que requiere una fuente de carbono orgánico como la glucosa,
además de fuentes de nitrógeno y otros factores de crecimiento
● .Escherichia coli mutante auxotrófica: No hubo crecimiento
- Motivo: No creció, ya que, al ser una cepa auxotrófica,
necesita un suplemento específico (como un aminoácido o
vitamina) que no está presente en este medio.
● Escherichia coli salvaje (protótrofa): Acá si hubo crecimiento
pero de manera limitada por la ausencia de fuentes de carbono y
nitrógeno
Figura 2. Placa Petri(Agar+H20dd+SM)
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● Saccharomyces cerevisiae:No hubo crecimiento
- Motivo:Esto se debe a que, como levadura heterótrofa, S.
cerevisiae requiere tanto carbono como nitrógeno para
sintetizar aminoácidos, proteínas, y otros componentes
esenciales para su crecimiento. Sin una fuente de nitrógeno
en el medio, no podrá desarrollarse, a pesar de que la glucosa
le provea el carbono necesario.
● .Escherichia coli mutante auxotrófica: No hubo crecimiento
- Motivo:Aunque el medio proporciona glucosa como fuente
de carbono, esta cepa auxotrófica requiere un suplemento
específico (como un aminoácido, vitamina, etc.) debido a su
incapacidad de sintetizar ciertos nutrientes. Dado que el
medio no incluye estos suplementos, no puede crecer
adecuadamente.
● Escherichia coli salvaje (protótrofa): Si crece
- Motivo:Esta cepa puede sintetizar todos los nutrientes que
necesita a partir de fuentes básicas como sales minerales y
glucosa. Por lo tanto creció con normalidad.
Figura 3. Placa Petri(Agar+H20dd+SM+FC)
● Saccharomyces cerevisiae: No hubo crecimiento
- Motivo: S. cerevisiae es un organismo heterótrofo que
necesita tanto una fuente de carbono (glucosa) como de
nitrógeno (por ejemplo, sales de amonio o peptonas) para
sintetizar proteínas y otros compuestos esenciales, pero el
medio al estar en un medio Ph 7 el microorganismo no se
desarrolló como debería a pesar de tener todo los
componentes, el Saccharomyces vive en medio Ph4-5
● Escherichia coli mutante auxotrófica:Si hubo crecimiento
- Motivo: Ya que el medio posee todas las sustancias
necesarias (Sm+ FC+FN) el mutante creció con total
normalidad.
● Escherichia coli salvaje (protótrofa):Si hubo crecimiento
- Motivo:Ya que este no requiere de muchas sustancias
específicas para su crecimiento y este al poseer todas las
sustancias mínimas para cualquier cepa este crece con
normalidad.
Figura 4. Placa Petri(Agar+H20dd+SM+FC+FN)
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Experiencia 2. Test Auxonográfico
En la figura 5, se observa el
crecimiento de la bacteria E.
coli mutante auxótrofa y
salvaje protótrofa en el
medio de cultivo Agar
mínimo de Davis. Esta placa
contiene los aminoácidos:
guanina, leucina, serina y
tirosina. El hecho de que la
bacteria mutante creciera en
este medio de cultivo
significa que contiene los
compuestos que no puede
sintetizar.
Figura 5. Crecimiento de la bacteria E. coli
mutante y salvaje en la placa N°2.
En la figura 6, se observa el
crecimiento de la bacteria E.
coli mutante auxótrofa y salvaje
protótrofa en el medio de
cultivo Agar mínimo de Davis.
Esta placa contiene los
aminoácidos: cisteína,
isoleucina, triptófano y alanina.
El hecho de que la bacteria
mutante creciera en este medio
de cultivo significa que contiene
los compuestos que no puede
sintetizar.
Figura 6. Crecimiento de la bacteria E. coli
mutante y salvaje en la placa N°3.
6
En la figura 7, se observa el
crecimiento de la bacteria E.
coli salvaje protótrofa en el
medio de cultivo Agar mínimo
de Davis, el cual contiene
metionina, valina, treonina y
ácido aspártico. Al ser una
bacteria salvaje, esta crece en
cualquier medio, lo que se
demuestra en esta experiencia.
Figura 7. Crecimiento de la bacteria E.
coli en la placa N°4.
En la figura 8, se observa el
crecimiento de la bacteria E.
coli mutante auxótrofa y salvaje
protótrofa en el medio de
cultivo Agar mínimo de Davis.
Esta placa contiene los
aminoácidos: fenilalanina,
serina, triptófano, treonina y
prolina. El hecho de que la
bacteria mutante creciera en este
medio de cultivo significa que
contiene los compuestos que no
puede sintetizar.
Figura 8. Crecimiento de la bacteria E.
coli mutante y salvaje en la placa N°8.
Después de observar el crecimiento de la bacteria E. coli mutante y salvaje, se
puede concluir que la bacteria salvaje crece en cualquier medio, mientras que
la bacteria mutante no puede sintetizar los compuestos serina y triptófano, por
lo cual solo crece en los medios que ya los contienen.
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III. DISCUSIÓN
De acuerdo a lo mencionado por Cappuccino & Sherman (2010) la nutrición
en los microorganismos está regulado por varias vías metabólicas a través de
las cuales toman los compuestos químicos que necesitan para llevar a cabo sus
procesos energéticos y biosintéticos con la finalidad de crecer y reproducirse,
ello se subraya, de igual manera, en la experiencia y detalles brindados durante
la práctica de microbiología; por este motivo es esencial tomar ello como
punto de partida. Asimismo, Madigan et al. (2009) menciona que los
requerimientos nutricionales de cada grupo microbiano están dados por la
composición química de las células que lo constituyen y por sus características
genéticas las que determinan sus propiedades fisiológicas, así reflejan el
ambiente natural en el que viven, Algunos tienen requerimientos nutricionales
muy simples, pues realizan sus procesos metabólicos en presencia de agua y
obtienen su energía de compuestos inorgánicos como el CO2 o carbonatos
como fuente de carbono; otros requieren de sales minerales en bajas
concentraciones para prosperar y fuentes de nitrógeno para obtener
aminoácidos que les permitan generar proteínas para un normal
funcionamiento del organismo.
A través de varios experimentos llevados a cabo, la forma química específica
bajo la cual los microorganismos adquieren el carbono, nitrógeno, azufre,
fósforo y oxígeno, así como su energía es muy variable, lo que determina que
los microorganismos presenten múltiples tipos nutricionales. Por tal motivo, se
observa que la Escherichia coli salvaje, un organismo prototrófico (capaz de
sintetizar las moléculas necesarias para su desarrollo, no es exigente), no creció
en la primera la placa Petri que contenía solo agua necesaria; por consiguiente
se observó que si creció, aunque demasiado poco, en la placa Petri que
contenía agua (le confirió un medio para realizar las funciones metabólicas) y
sales minerales, ya que estas últimas suministran fuentes de aniones y cationes
como el magnesio (importante para la estabilidad de la membrana), el potasio y
el calcio (activadores enzimáticos), el hierro (participa en los citocromos y
hemoproteínas no hémicas), etc. En la placa Petri que contenía agua, sales
minerales y fuente carbonada, creció exponencialmente pues recibió el motor
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para realizar varias reacciones de anabolismo y catabolismo enzimático.
Asimismo, se observó un crecimiento exponencial al suministrar una fuente de
nitrógeno ya que le proporciona el medio con el cual obtener aminoácidos
necesarios para la síntesis proteica.
Por otro lado, Saccharomyces cerevisiae crece en presencia de agua, sales
minerales, fuente de carbono y fuente de nitrógeno; Suárez-Machín et al.
(2016) y Aguilar & Franςois (2005) señalan que esta levadura presenta un
contenido proteico que oscila entre el 40-50 % de su peso seco, además de
fuentes de carbono junto a proteínas, glicoproteínas, polisacáridos,
polifosfatos, lípidos y ácidos nucleico, así como las sales minerales y agua para
el metabolismo celular; por tal motivo debió crecer en la última placa Petri,
pero debido al pH de 7, no creció puesto que solo prolifera Saccharomyces
cerevisiae en medio con pH de 4-5.
Se observa que la Escherichia coli mutante no creció en ninguna de las placas
Petri, debido a que presenta una nutrición exigente frente a algún
requerimiento nutricional exógeno, esto es por la mutación genética que sufrió
convirtiéndola en una auxótrofa; Atlas & Bartha (2002) indican que hay una
carencia de una ruta metabólica funcional que genere la sustancia de la que
depende.
Para culminar, respecto al test auxonográfico, se observó que en la placa Petri
4, creció exponencialmente la Escherichia coli salvaje en medio con agar
mínimo de Daves al que se le adicionó metionina, valina, treonina y ácido
aspártico, esto se debe a su naturaleza nutricional como prototrófica; mientras
que la cepa salvaje no creció debido a que no se presentaba en el agar mínimo
de Daves el componente que requiere para generar la sustancia de la que
depende. Esto mismo sucedió en la placa Petri 9 con agar mínimo de Daves al
cual se adicionó ácido glutámico, alanina, tirosina, ácido aspártico y alanina.
Por otro lado, en la placa 8, Escherichia coli salvaje y la cepa mutante 48,
crecieron exponencialmente en agar mínimo de Daves con adición de
fenilalanina, serina, triptófano, treonina y prolina; esto indica que se
9
encontraba el componente esencial de la mutante auxótrofa para su desarrollo.
También, en la placa Petri 3, Escherichia coli salvaje y la cepa mutante 48,
crecieron exponencialmente en agar mínimo de Daves con adición de
isoleucina, triptófano, cisteína y alanina, esto indica que se encuentra el
componente esencial para continuar su ruta metabólica con la cual proliferar la
mutante auxotrófica. Luego de comparar las diferentes muestras del test
auxonográfico con las demás mesas de laboratorio, se llegó a la conclusión que
la mutante necesitaba los aminoácidos serina y triptófano para su crecimiento.
IV. CONCLUSIONES
El estudio demostró con éxito los diversos requisitos nutricionales de
diferentes microorganismos, destacando la importancia de condiciones de
cultivo apropiadas para el crecimiento microbiano. Saccharomyces cerevisiae
no pudo crecer en ningún medio debido a condiciones de pH subóptimas,
mientras que E. coli de tipo salvaje prosperó en todos medios, mostrando su
naturaleza prototrófica. La cepa mutante auxotrófica de E. coli exhibió
crecimiento solo en medios que contenían aminoácidos específicos que no
podía sintetizar, particularmente serina y triptófano. La prueba auxonográfica
resultó efectiva para identificar estos requisitos nutricionales específicos. Estos
hallazgos subrayan la importancia de comprender las capacidades metabólicas
microbianas y las necesidades nutricionales, lo que permite una clasificación y
cultivo más precisos de los microorganismos.
V. CUESTIONARIO
1. Establezca la diferencia entre una cepa auxotrófica y una cepa
autotrófica.
Los auxótrofos son microorganismos incapaces de sintetizar un nutriente
esencial debido a una mutación génica. Muchas cepas de laboratorio portan
múltiples mutaciones que interfieren con la síntesis de estos nutrientes, lo que
las convierte en herramientas útiles para la investigación genética, como en la
transformación plasmídica. En contraste, las cepas autótrofas no presentan
estas mutaciones y son capaces de sintetizar todos los compuestos esenciales a
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partir de fuentes simples de nutrientes, lo que les permite crecer en medios
mínimos sin suplementos adicionales. La principal diferencia entre ambas
radica en que los auxótrofos dependen de nutrientes externos, mientras que los
autótrofos son autosuficientes en sus necesidades biosintéticas (O´Connor,
2022).
2. Esquematice los resultados esperados en la experiencia 1, fundamentando
cada caso.
Saccharomyces E. Coli salvaje E. Coli mutante
Cerevisiae
Agua destilada y
agar No hubo
crecimiento
Agar y sales
minerales
Agar, sales No hubo Sí hubo Crecimiento
minerales y fuente crecimiento crecimiento residual
de carbono
Agar, sales Sí hubo
minerales, fuente crecimiento
de carbono y
fuente nitrogenada
Saccharomyces cerevisiae
Se observó que Saccharomyces cerevisiae no creció en ninguna de las placas
de cultivo, a pesar de estar en un medio rico en nutrientes. Este fenómeno
puede atribuirse al pH neutro (7.0) del medio, ya que esta levadura requiere un
pH óptimo entre 4.0 y 6.0 para un crecimiento eficiente y una adecuada
actividad metabólica (Aguilar et al., 2005). Un pH ácido favorece la actividad
enzimática, lo que permite un metabolismo más eficiente y la producción de
ácidos poliinsaturados, así como otros metabolitos deseables como etanol y
dióxido de carbono, que son beneficiosos para su crecimiento (Uribe et al.,
2014). En este caso, el pH neutro inhibió la actividad de las enzimas
involucradas en el metabolismo de azúcares, resultando en un crecimiento
deficiente.
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E.Coli salvaje
Su crecimiento se observó en todos los cultivos, principalmente porque se trata
de un microorganismo prototrófico capaz de sintetizar las moléculas necesarias
para su desarrollo. Al encontrarse en un pH óptimo de 7, su crecimiento fue
adecuado (Canet, 2017). Aunque puede sintetizar sus propios nutrientes, los
cultivos enriquecidos con estos elementos favorecieron un crecimiento aún
más rápido. El agar contribuyó a este crecimiento al proporcionar nutrientes
esenciales, mientras que las sales minerales fueron cruciales para mantener el
equilibrio osmótico. Las fuentes de carbono brindaron energía, y las fuentes
nitrogenadas proporcionaron los componentes necesarios para la síntesis de
proteínas y ácidos nucleicos.
E. Coli mutante
Al tratarse de una cepa de bacteria que sufrió alteraciones genéticas debido a
su exposición a rayos ultravioleta, su capacidad de síntesis se vio afectada,
impidiendo un crecimiento adecuado en cultivos donde normalmente
prosperaría (Oviedo, 2013). Su crecimiento no se pudo lograr solo con agar y
sales minerales, ya que no tenía la capacidad de sintetizar las moléculas
orgánicas necesarias, como lo haría en su estado natural. Sin embargo, en un
cultivo que incluía agar, sales minerales y fuentes de carbono, se observó
crecimiento, aunque esto no debería haber ocurrido. La explicación puede ser
que el material utilizado para manipular el cultivo estaba contaminado con otro
cultivo que contenía los medios necesarios para el crecimiento, lo que resultó
en un crecimiento residual.
En particular, el cultivo que incluía agar, sales minerales, una fuente de
carbono y una fuente nitrogenada proporcionó los elementos que la bacteria no
podía sintetizar. Las fuentes de carbono son esenciales para proporcionar
energía y sirven como bloques de construcción para la biosíntesis de
compuestos orgánicos, mientras que las fuentes nitrogenadas son cruciales para
la síntesis de aminoácidos, proteínas y ácidos nucleicos (Canet, 2017). Sin
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estos nutrientes, el crecimiento de la cepa mutante sería significativamente
limitado. Al incluir estos componentes en el medio de cultivo, se le ofreció a la
bacteria un entorno más nutritivo, lo que le permitió compensar su incapacidad
para sintetizar ciertos compuestos y, por lo tanto, aumentar su biomasa y
viabilidad en condiciones donde de otro modo no podría haber crecido.
3. Hagamos la experiencia inversa,¿cómo serían los resultados en el Test
Auxonográfico de una cepa de E.coli bio- arg- met- y por qué tiene esas
deficiencias?
La cepa necesitaría para su crecimiento un medio mínimo enriquecido con
biotina, arginina y metionina ya que no puede sintetizar estos aminoácidos ni
tampoco la vitamina, necesita conseguirlo de manera catabólica.
4. Observe la composición de los medios sintéticos para las especies del
siguiente ejemplo y diga ¿ cuál es exigente nutricional?
La especie Leuconostoc mesenteroides sería la exigente nutricional esto debido
a que Escherichia coli necesita bases nitrogenadas: purinas (adenina y guanina)
y pirimídicas (uracilo y xantina), además necesita de los 20 aminoácidos
esenciales.
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VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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composición de polisacáridos contenidos en la pared celular de la
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