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（SOLO PARA USO EN INVESTIGACIÓN. NO USAR EN DIAGNÓSTICO CLÍNICO.）

Número de catálogo：E-BC-K854-M

Especificación：48T (44 muestras)/96T (92 muestras)

instrumento de medición：Lector de microplacas（330-350 nm）

Rango de detección：1,95-100 μmol/L

Elabciencia®Homocisteína (Hcy) Colorimétrica

Kit de ensayo

Lea atentamente este manual en su totalidad antes de usar este producto. Si tiene algún

problema, póngase en contacto con nuestro Centro de Servicio Técnico para obtener ayuda.：

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Teléfono: 1-832-243-6086

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Por favor, proporciónenos el número de lote (en el exterior de la caja) del kit para un

servicio más eficiente.

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 Tabla de contenido

Resumen del ensayo........................................................................................................................3

Uso previsto...............................................................................................................................4

Principio de detección................................................................................................................. 4

Componentes y almacenamiento del kit.................................................................................................... 4

Materiales preparados por los usuarios.............................................................................................. 5

Preparación de reactivos.............................................................................................................. 5

Preparación de muestras................................................................................................................6

Los puntos clave del ensayo.................................................................................................6

Pasos operativos................................................................................................................................7

Cálculo................................................................................................................................. 7

Apéndice I Características de rendimiento.................................................................... 8

Apéndice P Ejemplo de análisis................................................................................................. 9

Declaración.................................................................................................................................10

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Resumen del ensayo

3
 Uso previsto

Este kit puede medir el contenido de homocisteína (Hcy) en muestras de suero (plasma) y

orina.

Principio de detección

La Hcy oxidativa se convierte en Hcy libre, que puede convertir NADH en NAD+

Mediante catálisis cíclica de enzimas, se produce una disminución del valor de DO a 340 nm. El

contenido de Hcy en la muestra se calcula según la tasa de disminución.

Componentes y almacenamiento del kit

Artículo Componente Talla 1 (48 T) Talla 2 (96 T) Almacenamiento

- 20℃, 12 meses, luz

Reactivo 1 Solución tampón A 10 ml × 1 vial 20 mL × 1 vial
de sombreado

Reactivo 2 Solución tampón B 6 mL × 1 vial 12 ml × 1 vial - 20℃, 12 meses

- 20℃, 12 meses, luz
Reactivo 3 Sustrato Energía × 1 vial Potencia × 2 viales
de sombreado
- 20℃, 12 meses, luz
Reactivo 4 Reactivo enzimático Potencia × 2 viales Potencia × 4 viales
de sombreado
- 20℃, 12 meses, luz
Reactivo 5 Estándar de 28 μmol/L 0,5 ml × 1 vial 1 ml × 1 vial
de sombreado

Microplaca UV 96 pozos No hay ningún requisito

Sellador de placas 2 piezas

Nota: Los reactivos deben almacenarse estrictamente según las condiciones de

conservación de la tabla anterior. Los reactivos de diferentes kits no pueden

mezclarse. Para volúmenes pequeños de reactivos, centrifugue antes de usar para

evitar una cantidad excesiva.

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Materiales preparados por los usuarios

Instrumentos:

Lector de microplacas (330-350 nm, longitud de onda óptima: 340 nm)

Reactivos:

Agua bidestilada, solución salina normal (0,9 % NaCl)

Preparación de reactivos

① Equilibrar todos los reactivos a temperatura ambiente antes de usarlos.

2 Preparación de la solución de trabajo del sustrato：

Disuelva un vial de sustrato con 1 mL de solución tampón A y mezcle bien hasta su disolución. Se

recomienda conservar las alícuotas a -20 °C durante 5 días, protegido de la luz, y evitar ciclos

repetidos de congelación y descongelación.

③ Preparación de la solución de trabajo enzimático：

Disuelva un vial de reactivo enzimático con 200 µL de agua bidestilada y mezcle bien hasta

su disolución. Consérvese a 2-8 °C durante 1 día, protegido de la luz.

4 Preparación de la solución de trabajo de reacción A：

Antes de la prueba, prepare suficiente solución de reacción A según los pocillos

de prueba. Por ejemplo, prepare 160 µL de solución de reacción A (mezcle en

un pocillo 150 µL de solución tampón A y 10 µL de solución de sustrato).

Conserve la solución de reacción A a 2-8 °C, protegida de la luz. La solución

preparada debe consumirse en un día.

5 Preparación de la solución de trabajo de reacción B：

Antes de la prueba, prepare suficiente solución de reacción B según los pocillos

de prueba. Por ejemplo, prepare 120 µL de solución de reacción B (mezcle bien

110 µL de solución tampón B y 10 µL de solución de enzima). Conserve la

solución de reacción B a 2-8 °C, protegida de la luz. La solución preparada debe

consumirse en un día.

5
Preparación de muestras

① Preparación de muestras

Suero (plasma) y orina:Detectar directamente. Si no se detecta el mismo día, la muestra

puede conservarse a -80 °C durante un mes.

2 Dilución de la muestra

El factor de dilución recomendado para diferentes muestras es el siguiente (solo como referencia):

Tipo de muestra Factor de dilución

Suero humano 1
orina humana 1

Nota: El diluyente es solución salina normal (0,9 % NaCl). Para la dilución de otros tipos de muestra,

realice una prueba previa para confirmar el factor de dilución.

Los puntos clave del ensayo

El tiempo de incubación y el tiempo de determinación deben controlarse estrictamente de acuerdo con los

pasos de la operación.

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Pasos operativos

① Pocillo estándar: Añada 20 μL de estándar de 28 μmol/L a los pocillos correspondientes.

Pocillo blanco: Añada 20 μL de agua bidestilada a los pocillos correspondientes. Pocillo de

muestra: Añada 20 μL de muestra a los pocillos correspondientes.

2 Agregue 120 μL de solución de trabajo de reacción A a cada pocillo, luego mezcle completamente

con un lector de microplacas durante 3 s e incube a 37 ℃ durante 5 min.

③ Agregue 80 μL de solución de trabajo de reacción B a cada pocillo, luego mezcle completamente con un

lector de microplacas durante 3 s e incube a 37 ℃ durante 2 min.

4 Mida el valor de OD de cada pocillo a 340 nm, registrado como A1Incubar a 37 °C

durante 10 minutos y medir el valor de DO de cada pocillo a 340 nm registrado como A

2, ΔA=A1- A2.

Cálculo

La muestra:

Contenido de Hcy (μmol/L) = (ΔAMuestra- ΔABlanco) ÷ (ΔAEstándar- ΔABlanco) × 28* × f

[Nota]

ΔAMuestra:El cambio del valor de OD del pocillo de muestra, A1-A2. ΔA

Estándar:El cambio del valor de OD del pozo estándar, A1-A2. ΔABlanco

:El cambio del valor de OD del pocillo en blanco, A1-A2. 28*:La

concentración del estándar, 28 μmol/L.

f: Factor de dilución de la muestra antes de la prueba.

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 Apéndice I Características de rendimiento

1. Parámetro:

Precisión intraensayo

Se analizaron tres muestras de suero humano en réplicas de 20 para determinar la

precisión dentro de un ensayo (CV = coeficiente de variación).

Parámetros Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3

Media (μmol/L） 5.60 35.60 84.30

%CV 2.0 1.7 1.4

Precisión entre ensayos

Tres operadores analizaron 20 veces por duplicado tres muestras de suero humano para

determinar la precisión entre ensayos.

Parámetros Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3

Media (μmol/L） 5.60 35.60 84.30

%CV 8.8 9.2 9.0

Recuperación

Tome tres muestras de alta concentración, concentración media y concentración baja para

probar las muestras de cada concentración 6 veces en paralelo para obtener una tasa de

recuperación promedio del 104%.

Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3

Concentración esperada(μprostituta） 12.6 42.8 92

Concentración observada.(μprostituta） 13.2 44.1 95.7
tasa de recuperación (%) 105 103 104

Sensibilidad

La sensibilidad analítica del ensayo es de 1,95 μmol/L. Esta se determinó

sumando dos desviaciones estándar a la DO media obtenida tras analizar el
estándar cero 20 veces y calculando la concentración correspondiente.

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 Apéndice P Ejemplo de análisis

Análisis de ejemplo：

Para suero humano, tome una muestra de 20 μL y realice el análisis según la tabla de

operaciones. Los resultados son los siguientes:

la A1del pocillo de muestra es 1,317, la A2del pocillo de muestra es 1,219, la A1del

pozo en blanco es 1.107, la A2del pozo en blanco es 1.050, la A1del pozo estándar

es 1.044, la A2del pozo estándar es 0,795 y el resultado del cálculo es:

Contenido de Hcy (μmol/L) = (0,098 - 0,057) ÷ (0,249 - 0,057) × 28 = 5,98 μmol/L

Detecte suero humano, orina humana según el protocolo, el resultado es el

siguiente:

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 Declaración

1. Este kit de ensayo es solo para uso en investigación. No nos responsabilizamos de

ningún problema ni responsabilidad legal que surja por su uso para diagnóstico

clínico u otros fines.

2. Lea atentamente las instrucciones y ajuste los instrumentos antes de los

experimentos. Sígalas estrictamente durante los experimentos.
3. Se deben tomar medidas de protección utilizando bata de laboratorio y guantes de látex.

4. Si la concentración de la sustancia no está exactamente dentro del rango de detección, se

debe tomar una dilución o concentración adicional para la muestra.

5. Se recomienda realizar una prueba previa si su muestra no figura en el manual de

instrucciones.

6. Los resultados experimentales están estrechamente relacionados con la situación de los

reactivos, las operaciones, el entorno, etc. Elabscience solo garantiza la calidad de los kits y

no se responsabiliza del consumo de muestra derivado del uso de los kits de ensayo. Es

recomendable calcular el posible consumo de muestra y reservar suficientes muestras

antes de su uso.

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