UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS BÁSICAS, TECNOLOGÍA E INGENIERÍA

INFORMES PRÁCTICAS 1, 2,3 y 4

CURSO: BIOQUIMICA
CÓDIGO: 201103A_2031

Palmira, Abril 2025

 INFORME No 1. BIOSEGURIDAD
Centro donde se realiza la CEAD PALMIRA
práctica
Nombre del tutor Nathalia Ramirez
Correo electrónico del
tutor
[email protected]

Nombre del o los Melissa Caicedo Zuñiga

estudiantes
Natalia Rivera Nieva
Yessenia Diaz Carabalí
Correo electrónico del o [email protected]
los estudiantes
[email protected]
[email protected]

Código o documento de 29509332

identidad del o los
estudiantes 1113683682
1062311175

1. OBJETIVOS

1.1. GENERAL
Conocer y aplicar las principales normas de seguridad e higiene que se deben seguir en
el laboratorio.
1.2. FUNDAMENTACION TEORICA
Las normas de seguridad en el laboratorio son protocolos establecidos
internacionalmente, que permiten hacer de la actividad de práctica de laboratorio, una
actividad segura con el conocimiento previo del manejo de los reactivos a través de la
consulta de la hoja de seguridad, la cual describe los peligros de una sustancia o
producto químico.
Normas Personales
El vestuario para asistir a la práctica de laboratorio debe ser apropiado, debe cubrir
porciones considerables de piel, con el fin de evitar posibles accidentes por salpicaduras
de productos químicos, para esto se recomiendan pantalones largos, tipo jeans, blusas
manga larga, la bata: blanca y de algodón, zapato cerrado, los guantes de nitrilo. Otros
elementos importantes son el tapabocas y la cofia. Durante la Permanencia en el
laboratorio, no llevar ningún elemento a la boca, como lapicero lápiz y los dedos.
Igualmente se recomienda evitar recostarse en los mesones y no oler sustancias químicas
por agradables que puedan resultar.

Normas para la utilización de productos químicos

Recomendaciones generales en la operación segura de los productos químicos en el
laboratorio. Es importante que cada grupo de estudiantes, tengan asignado las mínimas
cantidades posibles de los productos químicos, vidriería o equipos. Esta precaución puede
evitar accidentes de gravedad. Antes de usar cualquier sustancia es importante leer la
etiqueta que el recipiente tiene como información sobre el producto. Cada vez que se
utilice una determinada sustancia química es importante cerrar el envase para evitar que
se alteren las propiedades químicas o evitar accidentes. Al finalizar la tarea de laboratorio
es importante consultar al docente de práctica, sobre la disposición final de los residuos
químicos. Llevar de regreso todos los recipientes que contienen los reactivos químicos en
los gabinetes correspondientes evitando mezclar productos que puedan reaccionar
generando explosiones o fuego. Al finalizar la práctica, limpia el área de trabajo y entrega
los materiales utilizados limpios y en buenas condiciones. Por último, esperar las
indicaciones para retirarse de las instalaciones del laboratorio.
Normas de emergencia
En caso de emergencia mantenga la calma y escuche las instrucciones que el docente
encargado de la práctica. Recuerde que algunas medidas las puede realizar cualquier
integrante del grupo de estudiantes que asiste, tales como lavar con abundante agua, los
ojos o porción de la piel que termine afectada por alguna sustancia química. Puede
complementar la fundamentación teórica visualizando el siguiente video de bioseguridad
en el Laboratorio sobre normas generales de seguridad en el laboratorio Universidad
Politécnica de Cataluña, 2009. S01 Normas generales de seguridad en el laboratorio
[archivo de video] recuperado de https://www.youtube.com/watch?v=P61HBXO8DIs

2. DESCRIPCION DE LA PRACTICA
La práctica de bioseguridad consta de la observación del video sobre este tema de
normas de seguridad en el laboratorio, y una puesta en común de las aplicación e
importancia de las mismas.

Procedimiento.
1. Para el desarrollo de esta práctica el estudiante debe observar los videos normas de
seguridad en el laboratorio
2. Se hará la discusión sobre las normas de seguridad antes descritas y las que se
encuentran en la Reglamentación y Normas de Bioseguridad en los Laboratorios de la
UNAD y Otras Disposiciones.
3. Realice las siguientes actividades:

A: Identifique la señalización que encuentra en el laboratorio, fotografíe o dibuje los

pictogramas y elementos de seguridad que encuentre (Duchas, extintores, cámaras
extractoras, etc.) describa en el informe de laboratorio su significado o uso según
corresponda.

es una cabina de seguridad biológica (marca BIOBASE), usada comúnmente en

laboratorios de química, biología o microbiología. Su función principal es:

Proteger a las personas, el producto y el ambiente durante la manipulación de sustancias

peligrosas o contaminantes.
Según los símbolos que se observan, en este laboratorio se manejan sustancias:

Inflamables

Tóxicas

Corrosivas

Nocivas para la salud

Peligrosas para el medio ambiente

Comburentes (oxidantes)

Explosivas

Gases a presión

Estas cabinas cuentan con sistemas de filtración HEPA y flujo de aire controlado que
evitan que partículas o vapores peligrosos escapen al entorno.

Los extintores, como el que aparece en la imagen, sirven para apagar o controlar
incendios en situaciones de emergencia, especialmente cuando el fuego es pequeño y
aún no se ha propagado.

En un laboratorio, su función es crucial para:

Apagar incendios causados por sustancias inflamables (alcoholes, disolventes, gases).

Prevenir la expansión del fuego hasta que lleguen los bomberos.

Proteger al personal y al equipo de laboratorio.

Tipos comunes de extintores en laboratorios:

Extintor de CO₂ (dióxido de carbono): Ideal para fuegos eléctricos y químicos.

Extintor de polvo químico seco: Apto para fuegos clase A (sólidos), B (líquidos) y C
(gases).

El extintor en tu imagen parece ser de polvo químico seco, por su color rojo y etiqueta,
aunque se podría confirmar con una vista más cercana del rótulo.
1. Ducha de seguridad:
Función: Se utiliza para enjuagar rápidamente el cuerpo en caso de contacto con
sustancias químicas peligrosas o fuego.

Uso: Se activa tirando de la palanca o cadena, y libera un chorro de agua abundante.

Situaciones:

Derrames de ácidos o bases sobre la piel.

Incendios sobre la ropa.

Exposición a sustancias tóxicas.

2. Lavaojos:
Función: Lava y enjuaga los ojos en caso de salpicaduras de productos químicos o
partículas irritantes.

Uso: Se activa con una palanca o botón; se deben mantener los ojos abiertos durante al
menos 15 minutos.

Son fundamentales para actuar de inmediato en emergencias químicas y reducir daños

en la salud.
se observan señales de seguridad que se usan en laboratorios para prevenir accidentes y
garantizar un ambiente seguro. Aquí te explico para qué sirven:

Señales de prohibición (círculo rojo):

Prohibido comer o beber – Evita la contaminación con sustancias químicas.

Prohibido fumar – Previene incendios o explosiones.

Prohibido el uso de celulares – Evita distracciones o interferencias con equipos.

Prohibido el ingreso sin autorización – Controla el acceso a personas capacitadas.

Señales de obligación (círculo azul):

Uso obligatorio de bata – Protege la piel y ropa del contacto con sustancias peligrosas.

Uso obligatorio de guantes – Protege las manos de químicos o materiales infecciosos.

Uso obligatorio de gafas – Protege los ojos de salpicaduras o vapores.

Señal de advertencia (triángulo amarillo):

Peligro por sustancias químicas – Informa de la presencia de productos peligrosos.

Estas señales son parte de las normas de seguridad en laboratorios y deben respetarse
en todo momento para evitar accidentes.
Este tipo de gabinete está diseñado para almacenar de manera segura productos
químicos peligrosos, como:

Sustancias inflamables

Corrosivos

Tóxicos

Reactivos

Funciones principales:
Prevención de accidentes: Evita derrames, reacciones peligrosas o incendios.

Control de vapores: Algunos gabinetes tienen ventilación para evitar acumulación de

gases tóxicos.

Organización: Mantiene los químicos separados y bien identificados.

Cumplimiento de normas: Es obligatorio en muchos laboratorios por reglamentos de

seguridad.

Los pictogramas en las puertas indican el tipo de sustancias almacenadas (inflamables,

tóxicas, corrosivas, etc.), y las señales de advertencia recuerdan los riesgos y
restricciones, como “prohibido fumar” o “riesgo eléctrico”.

B: Defina Riesgo biológico y Riesgo químico

Riesgo biológico:
Es el peligro que representan los microorganismos como bacterias, virus, hongos o
parásitos, que pueden causar enfermedades en los seres humanos. Este tipo de riesgo es
común en laboratorios clínicos, hospitales o al manipular muestras biológicas.

Riesgo químico:
Es el peligro asociado al manejo de sustancias químicas que pueden ser inflamables,
tóxicas, corrosivas o reactivas. Estas sustancias pueden causar daños a la salud
(quemaduras, intoxicaciones, alergias) o al ambiente si no se manipulan adecuadamente.

b. Escoja uno de los reactivos utilizados en el componente práctico y conteste las

siguientes preguntas:
REACTIVO: ETANOL

i. Escriba las propiedades físicas y químicas de la sustancia.

Propiedades físicas del etanol:
Estado físico: Líquido a temperatura ambiente

Color: Incoloro

Olor: Característico, agradable y fuerte

Punto de ebullición: 78.37 °C

Punto de fusión: -114.1 °C

Densidad: 0.789 g/cm³ (a 20 °C)

Solubilidad: Miscible con agua y con la mayoría de los solventes orgánicos

Volatilidad: Alta (se evapora fácilmente)

Propiedades químicas del etanol:

Inflamabilidad: Altamente inflamable, forma vapores que pueden formar mezclas
explosivas con el aire

Reactividad: Reacciona con agentes oxidantes fuertes

pH: Neutro en solución acuosa

Puede formar enlaces de hidrógeno, lo que influye en su solubilidad y punto de ebullición

Oxidación: Puede oxidarse a acetaldehído y luego a ácido acético

ii. Mencione posibles riesgos que representa la sustancia para la salud.

1. Riesgos por inhalación:
La exposición a vapores de etanol puede causar mareos, dolor de cabeza, somnolencia o
irritación respiratoria.

En altas concentraciones, puede deprimir el sistema nervioso central.

2. Riesgos por contacto con la piel:

Puede causar resequedad o irritación si el contacto es prolongado o repetido.

3. Riesgos por contacto con los ojos:

Irritación ocular severa, con enrojecimiento, dolor y lagrimeo.

4. Riesgos por ingestión:

Aunque el etanol es el mismo alcohol presente en bebidas, en laboratorio puede estar
contaminado y es tóxico si se ingiere.

Puede provocar náuseas, vómitos, pérdida de coordinación e incluso pérdida de

conciencia.
5. Riesgo de incendio:
Es altamente inflamable. Sus vapores pueden encenderse fácilmente con chispas o
llamas.

iii. Indique cual es el equipo o la vestimenta de seguridad necesaria para manipular la

sustancia.

El equipo de protección personal (EPP) necesario para manipular etanol incluye:

1. Bata de laboratorio:
Preferiblemente de algodón, de manga larga y resistente al fuego.

2. Guantes de protección química:

De nitrilo o neopreno (los de látex no siempre son adecuados).

3. Gafas de seguridad o careta facial:

Para evitar salpicaduras en los ojos.

4. Mascarilla o respirador (si hay poca ventilación):

Para protegerse de la inhalación de vapores, especialmente en espacios cerrados.

5. Zapatos cerrados y antideslizantes:

Evita lesiones por derrames.

Además, es recomendable trabajar en una campana extractora o zona bien ventilada y

tener un extintor clase B cerca, ya que el etanol es inflamable.

CONCLUSIONES

La bioseguridad es importante en el laboratorio para proteger la salud de las personas

que trabajan allí y para evitar la contaminación.
Riesgos biológicos
 Los laboratorios son espacios con mayor riesgo de agentes patógenos.
 La bioseguridad ayuda a prevenir riesgos a la salud y al medio ambiente.
Riesgos químicos
 Los productos químicos pueden ser peligrosos para la salud humana.
 Las operaciones más habituales que generan riesgos químicos son el trasvase, la
extracción con disolventes, la limpieza del material de vidrio, y el transporte y
almacenamiento de sustancias.
Riesgos de accidentes
 Las medidas de bioseguridad ayudan a reducir el riesgo de accidentes.
 La higiene del laboratorio mejora la seguridad, eficiencia y precisión.
Medidas de bioseguridad
 Establecer protocolos de limpieza
 Almacenar materiales y desechos de forma segura
 Usar trajes de protección
 Cumplir con las normas de bioseguridad
 Contar con fichas de datos de seguridad para todos los productos químicos
 Evaluar los riesgos químicos
Es importante aplicar las medidas de bioseguridad de manera efectiva para prevenir
impactos nocivos.

es fundamental para prevenir accidentes y proteger a las personas y al medio ambiente.

¿Por qué es importante la bioseguridad?
 Los laboratorios son entornos de alto riesgo por la manipulación de sustancias
químicas, gases, equipos y herramientas.
 Se deben tomar medidas preventivas para controlar los factores de riesgo
biológicos, físicos o químicos.
 Se deben proteger a las personas de riesgos derivados de sustancias tóxicas,
energizantes, cancerígenas, hormonas, antibióticos, entre otras.
¿Cómo se puede garantizar la bioseguridad?
 Establecer protocolos de limpieza, desde el orden en espacios de trabajo hasta el
almacenamiento seguro de materiales y desechos.
 Conocer la ubicación de los elementos de seguridad en el laboratorio y el
significado de cada una.
  Contar con un plan de emergencia.
 Utilizar anteojos de seguridad, viseras o pantallas faciales u otros dispositivos de
protección.
 Utilizar respiradores descartables (N95 ó N100) cuando exista riesgo de producción
de aerosoles o polvos.
 Verificar la ausencia de vapores inflamables antes de encender una fuente de
ignición.
 Contar con un botiquín de primeros auxilios.
es importante revisar y limpiar todos los elementos de laboratorio antes y después de
cada uso.
 INFORME No 2. Identificación de lípidos
Centro donde se realiza la CEAD PALMIRA
práctica
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1. OBJETIVOS

1.1. GENERAL
Verificar los índices de yodo que se encuentran en diferentes tipos de aceites y grasas
animales y vegetales.

1.2. FUNDAMENTACION TEORICA.

2.

DESCRIPCION DE LA PRACTICA

Esta práctica realizará la emulsificación, saponificación e índice de yodo de lípidos

3. PROCEDIMIENTO.

3.1. Parte I – Emulsificación.

a. Tome dos tubos de ensayo y agregue a cada uno 5 ml de agua.

Posteriormente, en uno de los tubos agregue 10 gotas de aceite vegetal de
cocina y en el otro tubo 10 gotas de aceite de oliva.

b. Agitar fuertemente, observar y registrar cuánto tiempo dura la emulsión.

c. De acuerdo con el tiempo estimado, definir cuál permite obtener una
emulsión más estable.

Análisis y resultados obtenidos

De acuerdo con los resultados obtenidos, podemos observar que en el agua el aceite que
genero una emulsión más estable fue la mezcla del aceite de oliva. El aceite de oliva es
una grasa rica en ácidos grasos monoinsaturados, especialmente el ácido oleico. En la
emulsificación, estos ácidos grasos son más estables a temperaturas moderadas y en
presencia de emulsificantes adecuados, debido a su naturaleza química. Las emulsiones
de aceite de oliva suelen ser más estables frente a la oxidación gracias a los
antioxidantes presentes, como los polifenoles.

Diagrama de Flujo

3.2. Parte II. Saponificación.

a. En un tubo de ensayo adicionar 10 gotas de aceite de oliva, en otro tubo adicionar 10
gotas de aceite vegetal, y en otro adicionar manteca.

b. A cada tubo adicionar 3 ml de NaOH al 20%

c. Llevar a calentamiento en un baño maría durante 3-5 minutos. Sumergiendo el tubo de

ensayo con ayuda de las pinzas para tubo de ensayo.

d. Separar el precipitado formado, decantando la solución sobrante en otro tubo de

ensayo, lo cual representa el exceso de hidróxido de sodio que no reaccionó.

e. Agregar a cada uno de los tubos con el precipitado 3 ml de agua destilada. Agitar y
observar.

f. Agregar a cada uno de los tubos cloruro de sodio (NaCl) a saturación,

aproximadamente lo que se mida con la punta de la espátula.

g. Dejar en reposo 3 min. Observar la formación de un precipitado que se aglomera en la

parte inferior del tubo.

h. Decantar el líquido y observar el precipitado en el mismo tubo.

i. Agregar 3 ml de agua destilada, agitar y observar si se disuelve y forma espuma

jabonosa.
Análisis de resultados

Observamos que en la parte 2 de la práctica se presenta un precipitado más compacto

con la grasa o manteca de cerdo, dado que este tipo de grasa es más densa y compacta
debido a su naturaleza, de acuerdo con los ácidos grasos saturados, este tipo de ácidos
tienen a formar estructuras más estables y menos solubles en agua.

Se observó también que el aceite vegetal produjo más espuma jabonosa. Esto se
debe a la mayor insaturación de los ácidos grasos, lo que les permite formar emulsiones
más fácilmente y crear burbujas o espuma. Además, los jabones derivados de ácidos
grasos insaturados tienden a ser más solubles en agua, lo que favorece la formación de
espuma.

El aceite de Vegetal presentó un comportamiento intermedio, con un precipitado y

formación de espuma menores en comparación con la grasa de cerdo y el aceite vegetal,
debido a sus ácidos grasos monoinsaturados.

Diagrama de flujo

3.3. Parte III. Índice de Yodo.

a. Tomar 3 tubos de ensayo y colocar a cada uno de ellos 2 ml de etanol y 0,5 g de una
muestra de lípido si es sólida, o 0.5mL si es líquida (muestra de lípido: manteca, aceite de
cocina y aceite de oliva).
b. Someter a calentamiento en baño maría por un minuto cada tubo y dejar enfriar.

c. Agregar 5 gotas de Lugol a cada tubo de ensayo y mezclar.

d. Agitar y observar el resultado anotando cuáles son los cambios para cada una de las
muestras. Se debe observar el cambio de color del Lugol de un azul oscuro a un color
café oscuro.

e. Clasifique los tubos de ensayo de menor a mayor coloración o tonalidad. Esto le

permitirá identificar la presencia de ácidos grasos con mayor insaturación en cada una de
las muestras.

De acuerdo con las imágenes anteriores y lo revisado en el laboratorio, el orden de mayor

a menor es, aceite de vegetal, aceite oliva y manteca de cerdo, es decir de acuerdo con
esto podemos ver que la mayor saturación de acuerdo con índice de yodo se presenta en
el aceite vegetal y menor en la manteca de cerdo, lo que significa que tienen una mayor
cantidad de enlaces dobles. Cuando se añade yodo a un aceite con muchos enlaces
dobles, este se adhiere a dichos enlaces, lo que lleva a la formación de una reacción con
yodo más fuerte. Esto puede resultar en un color más oscuro en la muestra debido a la
mayor cantidad de yodo absorbido, ya que los aceites poliinsaturados tienen más
insaturaciones disponibles para reaccionar.

Lo que se presenta con la manteca de cerdo es que como tiene pocos enlaces o no
contiene enlaces dobles, los ácidos saturados no reaccionan con el yodo por lo tanto este
índice será más bajo.
Diagrama de Flujo

Conclusión

Las 3 practicas nos ayudaron a verificar la cantidad de lípidos que se presentaban en

cada una de las muestras estudiadas, en algunas de las partes de estas, se presentó cual
de todas era más estable al momento de realizar la emulsión de estos, en la práctica de
saponificación pudimos comprobar que la manteca de cerdo o la grasa de cerdo lograba
un precipitado mayor, y por el contrario los demás aceites utilizados nos presentaban una
mayor cantidad de espuma jabonosa.
 INFORME No 3. Extracción y cuantificación espectrofotométrica del
ADN
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1. OBJETIVOS

1.1. GENERAL
Analizar el ácido nucleico ADN obtenido a partir de células vegetales

1.2. FUNDAMENTACION TEORICA

El ácido desoxirribonucleico (ADN) está conformado por un azúcar, llamado desoxirribosa,

bases nitrogenadas adenina A, timina T, citosina C o guanina G y un grupo fosfato. En el
ADN se presenta una doble cadena, una hebra de ADN está formada por unidades
alternas de grupos fosfato y azúcar Los bases nitrogenados, se unen a la desoxirribosa y
se forman dos hebras, unidas entre sí por puentes de hidrógeno. El genoma de las células
eucarióticas se encuentra organizado en cromosomas, que son estructuras de DNA
relacionadas con proteínas básicas, a las que se les denomina histonas, y proteínas no
histonas; las histonas tienen carga positiva a pH fisiológico y neutralizan las cargas
negativas del fosfato de los nucleótidos, lo que confiere estabilidad y permite que el DNA
que mide casi 2 metros de longitud se empaquete en un núcleo de 10 µm de diámetro. El
genoma humano está constituido por 46 cromosomas y contiene 5 × 106 kpb en su
totalidad. El ácido ribonucleico (ARN) es una molécula similar al ADN. El ARN difiere en
que es monocatenario, es decir, presenta una hebra de ARN; tiene un esqueleto formado
por grupos alternantes de azúcar ribosa y fosfato. Se adjunta a cada azúcar una de las
cuatro bases: adenina A, uracilo U, citosina C o guanina G. Visualice el siguiente video
como parte de la fundamentación teórica sobre la técnica espectrofotométrica utilizada
en la práctica. Universidad de Málaga, 2017. Técnicas básicas en Bioquímica:
espectrofotometría [archivo de video] recuperado en https://www.youtube.com/watch?
v=fXjP10sdmQU

2. DESCRIPCION DE LA PRACTICA
Esta práctica realizará la extracción del ácido desoxirribonucleico de células vegetales de
la fresa Utilizando un método de extracción químico.
Parte I – Extracción de ADN

Análisis y resultados obtenidos

Extracción de ADN de la fresa

La extracción de ADN es un procedimiento clave en biotecnología que permite aislar el

material genético presente en las células, en este caso se utilizó la fresa como fuente de
ADN, siguiendo una serie de pasos diseñados para romper las estructuras celulares y faci-
litar su aislamiento, el primer paso consistió en la preparación de una solución de lisis,
que contenía agua destilada, detergente y sal, el detergente ( jabón liquido) jugó un pa-
pel fundamental al destruir las membranas celulares y nucleares, permitiendo la libera-
ción del ADN, la sal por otro lado ayudó a neutralizar las cargas negativas del ADN, evi -
tando su dispersión en la solución y favoreciendo su posterior precipitación, para mejorar
la eficiencia del proceso, la fresa fue triturada cuidadosamente lo que permitió aumentar
la superficie de contacto entre la solución de lisis y las células de la fruta. Es importante
destacar que este paso debe realizarse con suavidad para no dañar la estructura del
ADN, un elemento clave en este procedimiento fue la incorporación de jugo de piña, que
contiene bromelina, una enzima capaz de degradar las proteínas unidas al ADN, Sin este
paso, el ADN podría quedar atrapado en complejos proteicos, dificultando su aislamiento,
finalmente, se añadió alcohol isopropílico frío de manera delicada, evitando mezclarlo con
la solución, dado que el ADN no es soluble en alcohol, comenzó a precipitar y se hicieron
visibles hebras blancas flotando en la interface entre el alcohol y la solución acuosa.

Esta práctica nos permite comprender de manera práctica los principios básicos del aisla -
miento de ADN y la importancia de cada reactivo en el proceso además evidenció cómo
el uso de enzimas como la bromelina puede mejorar la pureza del ADN obtenido .

Diagrama de Flujo

Preparación de la Solución de Lisis Preparación de la Muestra

Objetivo: Romper las membranas Objetivo: Liberar el ADN de las células

celulares y liberar el ADN contenido vegetales.
dentro de las células.
1. Mezcla 50 mL de agua destilada, 1
1. Pela y corta en trozos pequeños el kiwi,
mL de jabón líquido y 2 g de NaCl fresa o espinaca con un bisturí.
(cloruro de sodio) en un vaso de
precipitado. 2. Coloca los trozos en un mortero y co-
2. Agita suavemente hasta que el mienza a macerarlos.
cloruro de sodio se disuelva por
completo. 3. Agrega la solución de lisis poco a poco
3. Evita la formación de burbujas, mientras continúas macerando durante
ya que pueden dificultar el proceso de 10 minutos.
extracción
4. Evita hacer espuma, ya que las bur-
bujas pueden atrapar el ADN e in-
terferir con su extracción.
 Evita la formación de burbujas,
 Filtración Precipitación del ADN
Separar los restos de material Hacer visible el ADN agregando reactivos
celular del ADN disuelto. específicos.

1. Filtra la mezcla con un em- 1. Transfiere 3 mL del filtrado a otro tubo

budo y papel de filtro. de ensayo.

2. Recoge aproximadamente 2. Agrega 1 mL de zumo de piña recién

5 mL del filtrado en un tu- obtenido y filtrado.
bo de ensayo.
3. Agita suavemente para mezclar sin que
3. Esto elimina restos de células la solución toque las paredes del tubo.
y deja solo el ADN disuelto en
el líquido. 4. Inclina el tubo a 45° y, con una pipeta

Medición de absorbancia:
Cuantificación Espectrofotométrica
1. Se enciende el espectrofotómetro UV-VIS y se
configura a 260 nm.
1. Rehidratar el ADN:
2. Se coloca agua destilada en una cubeta para
 Se transfiere el ADN precipitado a un tu-
calibrar el espectrofotómetro (blanco).
bo con 2 mL de agua destilada.
3. Luego, se mide la absorbancia de la muestra de
 Se agita suavemente hasta que el ADN
ADN.
se disuelva.
Parte II. Cuantificación espectrofotométrica
4. Se repite el procedimiento a 280 nm.
Para evaluar la calidad y pureza del ADN extraído de la fresa, se utilizó la
técnica de espectrofotometría, este método permite
Cálculo dedeterminar la
la relación A260/A280:
concentración de ácidos nucleicos y detectar la presencia de contaminantes,
1. Se obtiene el cociente entre la absorbancia a
como proteínas mediante la medición de absorbancia a diferentes
260 nm y 280 nm. longitudes
de onda, Primero el ADN precipitado fue rehidratado en agua destilada, lo
que facilitó su dispersión en la solución para obtener mediciones más
precisas. Luego, el espectrofotómetro se calibró utilizando agua destilada
como blanco, se realizaron mediciones en dos longitudes de onda clave:

 260 nm: Esta longitud de onda es absorbida principalmente por

los ácidos nucleicos, lo que permite cuantificar el ADN presente en la
muestra.

 280 nm: Se utilizó para evaluar la posible contaminación con

proteínas, ya que los aminoácidos aromáticos absorben luz en esta
región del espectro.

A partir de los valores obtenidos, se calculó la relación A260/A280 para cada

muestra, lo que permitió evaluar su pureza. Un ADN de buena calidad suele
presentar un valor cercano a 1.8-2.0 en esta relación, si la relación es menor
a 1.8, indica que hay una posible contaminación con proteínas u otros
compuestos si es mayor a 2.0, puede deberse a la presencia de ARN en la
 muestra, el análisis de los resultados obtenidos en el laboratorio permitió
identificar el grado de pureza del ADN extraído y evaluar la efectividad del
procedimiento utilizado.

Los Resultados obtenidos fueron para el Grupo 1 y 2

Tabla absorbancia de muestras

MUESTRA DATOS 1 2
Grupos ABS 260 ABS 280 ABS 260 ABS 280
BLANCO
1 3,999 2,9133 3,9999 3,6123
DATOS 1 2
MUESTRA ADN Grupos ABS 260 ABS 280 ABS 260 ABS 280
1 3,9999 3,2144 -0,001 3,6123
Relación A260/A280 1,24 0

Análisis y resultados obtenidos Grupo 1 y 2

Durante el desarrollo del experimento de extracción de ADN vegetal, se
obtuvieron diferentes valores de absorbancia a 260 nm y 280 nm para los grupos
1 y 2, lo que permitió evaluar la presencia y pureza del ADN extraído.

Grupo 1
En el grupo 1, se midió una absorbancia de 3,9999 a 260 nm y 3,2144 a 280 nm
Al calcular la relación A260/A280, se obtiene un valor aproximado de:
3,9999
3,2144
¿
1 , 24

Este valor está por debajo del rango ideal (1,8 - 2,0), lo que indica que aunque
hubo presencia de ADN, también existe una contaminación significativa con
proteínas u otros compuestos absorbentes a 280 nm, esto podría deberse a una
etapa de lisis incompleta o a un lavado deficiente durante la precipitación.

A pesar de esto, la intensidad del valor de absorbancia a 260 nm sugiere que sí se

logró extraer una buena cantidad de material genético, lo cual es positivo.

Grupo 2
El grupo 2 presentó valores contrastantes se registró una absorbancia muy baja a
260 nm (-0,0010), lo que indica una ausencia casi total de ADN detectable en esa
medición. En contraste, a 280 nm se obtuvo un valor de 3,6123, lo cual sugiere
una alta presencia de proteínas u otros contaminantes.

Cuando se calcula la relación A260/A280 en este caso:

− 0,0010
3,6123
¿

−¿ 0,0003
Este valor es totalmente fuera del rango esperado, lo que indica que no se logró
una extracción efectiva de ADN o que hubo un error en el proceso de lectura del
espectrofotómetro, es probable que el ADN no haya sido precipitado
correctamente o que no se haya rehidratado de manera uniforme en el agua.

Preguntas

¿Cuál es la función de los componentes de la solución de lisis?

R/: La solución de lisis se utiliza para romper las membranas celulares y liberar el
contenido, incluyendo el ADN, Sus componentes cumplen funciones específicas:

1. Detergente (jabón líquido): rompe las membranas celulares y nucleares al

disolver los lípidos, permitiendo liberar el ADN.

2. Sal (como cloruro de sodio): estabiliza el ADN y ayuda a precipitar las pro-
teínas que interfieren con su aislamiento.

3. Agua destilada: actúa como disolvente para mezclar todos los componen-
tes.
¿Para qué se usa el zumo de piña, cuál es el compuesto clave y su
función durante el proceso de extracción de ADN?
R/: El zumo de piña contiene una enzima llamada bromelina, cuya función es
degradar las proteínas, especialmente las que se encuentran asociadas al ADN
(como las histonas) esto facilita la liberación y purificación del ADN al evitar que
quede atrapado en complejos proteicos.

Explique las diferencias de solubilidad del ADN en medio salino y

alcohólico?

R/: En un medio salino, el ADN permanece soluble, ya que las sales ayudan a
neutralizar la carga negativa de su esqueleto fosfato, favoreciendo su disolución
en agua

En un medio alcohólico (como etanol o isopropanol), el ADN precipita es decir, se

vuelve insoluble y forma filamentos visibles. Esto ocurre porque el alcohol reduce
la solubilidad del ADN y permite su separación del resto de los componentes
celulares.

¿Qué significa la relación A260/A280 en la cuantificación de muestras de

ADN?

R/: La relación A260/A280 se utiliza para evaluar la pureza del ADN:

 A260 indica la cantidad de ácidos nucleicos (ADN y ARN).

 A280 indica la presencia de proteínas (que absorben más en esta longitud

de onda).

Una relación ideal A260/A280 para ADN puro está entre 1,8 y 2,0, valores meno-
res sugieren contaminación con proteínas u otros compuestos, y valores mayores
pueden indicar la presencia de ARN o contaminantes.
¿Qué procedimientos se pueden utilizar para purificar el ADN?
R/: Las muestras de ADN y ARN suelen obtenerse a partir de preparaciones
crudas. El ADN genómico, el ADN plasmídico y el ARN total pueden extraer-
se y purificarse de diversas fuentes, como células bacterianas y de mamífe-
ros, tejido vegetal, tejido fúngico, tejido de mamíferos, sangre, plasma,
suero, virus, hisopos bucales y nasales, matrices de gel, PCR y otras reac-
ciones enzimáticas. El aislamiento de ácidos nucleicos de estas muestras
suele implicar la lisis de las membranas celulares o la homogeneización de
la muestra, seguida de la eliminación de proteínas, enzimas, detergentes,
sales y lípidos.

Los enfoques comunes incluyen:

 Extracción alcalina

 Extracción con fenol-cloroformo

 Centrifugación en gradiente de densidad de cloruro de

cesio (CsCl)

 Cromatografía de oligo(dT)-celulosa

 Matriz de sílice

Consulte dos métodos de extracción de ADN?

R/: Lisado y purificación con un detergente iónico. Método del
CTAB
Este es un procedimiento básico para extraer ADN de vegetales, donde un
detergente aniónico puede romper la pared celular y así se produce la lisis de las
células, el uso de detergentes aniónicos no solo se restringe a la extracción de
ADN vegetal, puede ser usado para ADN genómico de bacterias y otros tipos de
organismos. Un ejemplo de este método, quizás el más conocido, es el uso de
CTAB (bromuro de cetil trimetil amonio) como detergente para lograr la lisis. El
CTAB además, en presencia de EDTA como agente quelatante y TRIS-HCl como
tampón, forma complejos insolubles con el ADN. Luego se extraen los residuos
orgánicos con cloroformo, para separar posteriormente el ADN por precipitación
con etanol. Si se quiere evitar el uso de disolventes orgánicos se puede llevar a
cabo el método del CTAB separando directamente los complejos insolubles
formados con el ADN del sobrenadante donde han quedado disueltos el resto de
componentes celulares. Estos complejos se resuspenden en disolución salina y se
adiciona posteriormente alcohol y RNAsa, logrando que precipite el ADN con un
grado de pureza aceptable para muchas aplicaciones.

Extracción con kits comerciales (por columnas de sílica o resinas): más

precisa y rápida, Permite obtener ADN de alta pureza para aplicaciones
moleculares como PCR o secuenciación.

Anexos
Anexo 1. Proceso de extracción de ADN en fresa
Conclusión

La práctica de laboratorio permitió comprobar la eficacia del método casero de ex-

tracción de ADN vegetal a partir de fresa, empleando una solución de lisis comple-
mentada con jugo de piña como fuente de bromelina, una enzima que facilitó la
ruptura de proteínas asociadas al ADN, la adición de alcohol frío permitió observar
la precipitación del ADN, generando un botón visible lo cual evidenció una correc-
ta extracción, en la cuantificación espectrofotométrica los resultados obtenidos
por el Grupo 1 a 260 nm y 280 nm fueron de 3,9999 y 3,2144, respectivamente,
lo que dio una relación A260/A280 de aproximadamente 1,24, valor inferior al
ideal de 1,8 para ADN puro, lo que sugiere presencia de proteínas u otros conta-
minantes, el Grupo 2 presentó datos anómalos, como una absorbancia negativa a
260 nm (–0,0010), lo cual puede deberse a errores de lectura, calibración del es-
pectrofotómetro o contaminación de la muestra, estos resultados destacan la im-
portancia de la precisión durante las fases de recolección manipulación y lectura
espectrofotométrica, también se comprobó cómo el uso de enzimas naturales (co-
mo las del jugo de piña) puede ser efectivo en procedimientos de laboratorio sen-
cillos pero funcionales.