LABORATORIO # 3
DISTRIBUCIÒN DE LOS MICROORGANISMOS EN
EL AMBIENTE. FLORA MICROBIANA NORMAL
A) Introducción:
La microbiota normal es el conjunto de gérmenes que conviven con el huésped en
estado normal, sin causarle enfermedad. Su composición es característica para la
especie humana, tanto en los gérmenes que la componen como en su número y
distribución en el organismo. Existen sitios colonizados (que poseen microbiota) y
sitios estériles, La microbiota normal coloniza las superficies cutáneo, mucosas,
pero no así cavidades o sitios que son estériles en condiciones normales: por
ejemplo, pleura, meninges, cavidad peritoneal, pericardio y otros. Esto debe ser
tenido en cuenta al realizar un estudio microbiológico. Las técnicas empleadas para
obtener una muestra de un sitio con microbiota son diferentes a las de los sectores
que no la tienen. También son diferentes los medios de cultivo que se emplearán
para sembrar esas muestras (que requerirán a menudo de medios que inhiban la
microbiota normal) y la interpretación de los cultivos. Por ejemplo, el aislar un
germen del líquido cefalorraquídeo es siempre patológico si se tomaron las
precauciones para no contaminar la muestra; en cambio, en un exudado faríngeo
se aislarán diversos gérmenes y se deberá valorar en forma cuidadosa cuales son
habitantes normales de ese sector y cuáles no.
El término flora, que en su día se utilizaba con frecuencia y que implicaba la “flora
intestinal”, ha ido dando paso paulatinamente al de microbiota en sentido plural,
ya que la microbiota existe no solo en el intestino, sino también en nariz, boca,
vagina, piel entre otros.
El microbiólogo llamado Carl Woese describió el sistema de los tres dominios:
Eukarya, Bacteria y Archaea, siendo el término actual y correcto “MICROBIOTA”
INTESTINAL. Este mismo término debe ser utilizado en microbiota normal de la piel,
microbiota oral, microbiota vaginal entre otros.
La Microbiota normal desde diversos puntos de vista representa un importante
mecanismo de defensa del huésped ya que contribuye al desarrollo de la respuesta
inmunológica, como ha sido demostrado en modelos animales que nacen y son
criados en condiciones de esterilidad (individuos axénicos). Estos animales
presentan un pobre desarrollo de los diversos componentes de su sistema
inmunitario. La microbiota normal además ayuda a evitar la colonización de la piel
o las mucosas por bacterias que pueden ser patógenas. Los gérmenes para iniciar
la infección deben, en general, comenzar por colonizar los epitelios. Allí
seguramente compiten con los integrantes de la microbiota por factores tales como
receptores celulares y nutrientes.
Por otro lado, en el aire hay microorganismos, aunque no se puede asegurar que
existe un verdadero «aeroplankton», que viven, se alimentan y se reproducen
permanentemente en él. Muchos microorganismos que viven en la hidrosfera y
litosfera pueden encontrarse en el aire.
Son microbios alóctonos, procedentes del suelo, agua y seres vivos que pueblan
estos ambientes. Los movimientos del aire y de los seres vivos son los que sitúan a
los microorganismos en la atmósfera. Junto al suelo hay una capa laminar de aire
que impide el fácil paso de microorganismos del suelo al aire. Para que pasen se
necesita una fuerte corriente de aire que levante polvo del suelo o agua de sus
depósitos (mares, ríos...) También las plantas los lanzan en sus movimientos de
dehiscencia y diseminación (polen, esporas...) y los animales en los actos
respiratorios normales y anormales (estornudos, tos). A menudo, tanto las esporas
como los microorganismos vegetativos entran en la atmósfera como bioaerosoles,
que pueden formarse por muchas causas como lluvia, movimiento del agua en los
ríos y mar, tratamiento de aguas residuales, aspersores de riego, aire acondicionado
o secreciones respiratorias del hombre y de los animales. Ésta última es muy
importante en la dispersión de bacterias patógenas y virus animales. Los
microorganismos también pueden encontrarse en el aire sobre partículas de polvo
o en el suelo.
Esta práctica ha sido diseñada para demostrar todo lo anteriormente planteado
evidenciando objetivamente a través de cultivos y frotis la amplia distribución de
microorganismos en el ambiente en algunas áreas del cuerpo humano.
En las profesiones de la salud es importante conocer que existen microorganismos
distribuidos en el entorno, que pueden infectar a las personas que estén
consultando al profesional de salud, requiriendo sus servicios. La contaminación
puede darse tanto en el paciente, como en el profesional de la salud mismo. Las
condiciones desfavorables del paciente dada su condición de enfermo lo hacen
proclive a contagiarse con algún microbio.
Se harán frotis de piel, y de exudado faríngeo, así como de las colonias que hayan
crecido en los medios inoculados con muestra de la piel y del medio ambiente en la
práctica anterior. Para constatar la presencia de microorganismos, los frotis serán
coloreados y vistos al microscopio.
B) Objetivos:
● Constatar la presencia de microorganismos en el aire, agua, piel, boca y en
la faringe.
● Constatar a través frotis coloreados con Gram y su examen al microscopio la
morfología, el tamaño y el color adquirido por los microorganismos.
C) Material y equipo:
● Microscopio
● Bolsas con hisopos estériles.
● Bolsas con baja lenguas estériles.
● Asas bacteriológicas redondas
● Láminas portaobjetos de 3x1 pulgadas.
● Laminillas cubre objeto
● Set de colorantes de Gram.
● Solución salina estéril al 0.85%P/V
● Cultivos de ambiente y de la piel incubados en práctica anterior.
● Agua de charco recolectada por los estudiantes.
D) Procedimiento:
a) Frotis de piel: Tome un hisopo estéril y sumérjalo en solución salina de la
forma descrita en el literal anterior, cuando ya esté húmedo, páselo por las
áreas interdigitales (principalmente) y palmas de las manos, procurando que,
por rotación, el hisopo quede completamente contaminado. Tome una
lámina portaobjeto, límpiela y haga un frotis con el hisopo contaminado,
déjelo secar y luego fíjelo al calor, coloree y vea al microscopio. Esquematice
lo observado y discútalo con su instructor.
b) Frotis faríngeo o de la boca y anexos: Cerca del área del mechero, rompa
una bolsa con baja lenguas y tome uno, tome también un hisopo estéril y
proceda de la siguiente manera: Pídale a un compañero que abra la boca y
con una iluminación adecuada observe en busca de zonas anormalmente
enrojecidas, al localizarlas debe tomar el bajalenguas en la mano izquierda y
el hisopo en la derecha, pida al compañero que abra la boca, coloque el baja
lenguas sobre el dorso de lengua de su compañero, pídale que diga ”aaaaah”
y con el hisopo frote las zonas enrojecidas, ya con el hisopo contaminado
haga un frotis, déjelo secar, fíjelo al calor y coloree. Vea al microscopio y
esquematice lo observado.
c) Preparación al fresco de agua de charco: Coloque en una lámina
portaobjetos una gota de agua de charco, cúbrala con una laminilla cubre
objeto sin dejar burbujas y obsérvelo al microscopio al 10X y 40X.
Esquematice lo observado.
d) Cultivos del ambiente y de la piel: Observe el crecimiento que ha habido
en las placas inoculadas con la muestra de superficie de piel y del ambiente,
haga una descripción de las colonias y elabore frotis de estas, coloréelos y
obsérvelos al microscopio al 100X.
Nota: Recuerde que el microscopio debe ser usado con cuidado y esmero, si
tiene alguna duda sobre su uso, pregunte a su docente.
CELULA EPITELIAL DE LA PIEL CON
ABUNDANTES BACILOS
GRAMPOSITIVOS. NOTE EL
NÚCLEO DE LA CELULA, SU
CITOPLASMA Y MEMBRANA
CELULAR Y LAS BACTERIAS QUE
SE ENCUENTRAN SOBRE ELLA.
