1.

Fundamentos de la Inmunología

●​ Inmunidad innata vs. adaptativa: La inmunidad innata es la primera línea de

defensa (macrófagos, neutrófilos, células NK), mientras que la inmunidad adaptativa
es específica y tiene memoria (linfocitos B y T).
●​ Antígenos y epítopos: Son las moléculas o fragmentos reconocidos por el sistema
inmunológico.
●​ Receptores de antígeno: Incluyen el TCR (receptor de células T) y los
BCR/anticuerpos (receptor de células B).
●​ Presentación de antígenos: Moléculas del MHC-I (vía citotóxica) y MHC-II
(activación de linfocitos T cooperadores).

2. Anticuerpos y su Uso en Tecnología

●​ Estructura de los anticuerpos: Regiones Fab (específicas para el antígeno) y Fc

(interacción con el sistema inmune).
●​ Tipos de anticuerpos: Monoclonales, policlonales, recombinantes, IgM, IgG, IgA,
etc.
●​ Producción de anticuerpos monoclonales: Hibridomas y tecnologías
recombinantes.
●​ Modificación de anticuerpos: Fragmentos Fab, scFv, conjugados con enzimas o
fluoróforos.

3. Técnicas Inmunológicas Fundamentales

●​ ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay): Cuantificación de antígenos o

anticuerpos.
●​ Western Blot: Detección de proteínas mediante anticuerpos específicos.
●​ Inmunofluorescencia (IF) e Inmunohistoquímica (IHC): Localización de proteínas
en células o tejidos.
●​ Citometría de Flujo (FACS): Análisis multiparamétrico de células basado en
marcaje con anticuerpos fluorescentes.
●​ Inmunoprecipitación y Co-inmunoprecipitación: Identificación de interacciones
proteína-proteína.

4. Aplicaciones de las Inmunotecnologías

●​ Desarrollo de vacunas: Subunidades proteicas, ARNm, virus inactivados o

atenuados.
●​ Terapias basadas en anticuerpos: Anticuerpos monoclonales en inmunoterapia del
cáncer, enfermedades autoinmunes e infecciones.
●​ Diagnóstico inmunológico: Test serológicos, pruebas rápidas, biosensores.
●​ Ingeniería de receptores inmunológicos: CAR-T cells, CRISPR en inmunoterapia.

5. Tendencias Actuales y Avances en Inmunotecnología

●​ Uso de CRISPR-Cas para edición inmunológica.

 ●​ Plataformas de biología sintética para inmunoterapia.
●​ Nanotecnología aplicada a sistemas inmunológicos (nanoanticuerpos, delivery
de vacunas).
●​ Biomarcadores inmunológicos y medicina personalizada.

Este conocimiento te dará una base sólida para comprender cómo la inmunología se aplica
en la biotecnología y en el desarrollo de nuevas herramientas diagnósticas y terapéuticas.

Genética de los Receptores de Antígeno

Generación de Diversidad del Repertorio de Receptores

La genética de los receptores de antígeno, tanto del receptor de células T (TCR) como de
los anticuerpos (inmunoglobulinas, Ig), es un proceso altamente especializado que permite
la generación de una diversidad inmensa en el repertorio de reconocimiento de antígenos.
Esta diversidad es esencial para que el sistema inmunológico pueda detectar y responder a
una amplia gama de patógenos.

La generación de diversidad del repertorio de receptores ocurre a través de varios

mecanismos:

1.​ Recombinación V(D)J: Es el proceso central de diversificación genética. Los genes

que codifican las regiones variables de los TCR y de las inmunoglobulinas están
organizados en segmentos génicos denominados V (variable), D (diversidad, solo
en cadenas pesadas de Ig y en el TCR β y δ) y J (unión). Durante el desarrollo de
los linfocitos en el timo (para células T) o la médula ósea (para células B), los
segmentos de estos genes se recombinan de manera aleatoria mediante la acción
del complejo enzimático RAG1/RAG2, generando una gran diversidad de
secuencias posibles.
2.​ Imprecisiones en la unión de segmentos génicos: Durante la recombinación
V(D)J, las enzimas TdT (terminal deoxinucleotidil transferasa) y las exonucleasas
añaden o eliminan nucleótidos en los extremos de los segmentos antes de ser
unidos. Esto introduce variabilidad adicional, denominada diversidad de unión
(N-nucleótidos y P-nucleótidos).
3.​ Combinación de cadenas: En los anticuerpos, la combinación de diferentes
cadenas pesadas y ligeras, y en los TCR, la combinación de las cadenas α/β o γ/δ,
amplía aún más la diversidad del repertorio.
4.​ Hipermutación somática (solo en células B): Después de la activación, los genes
que codifican la región variable de las inmunoglobulinas sufren mutaciones
puntuales en los centros germinales de los ganglios linfáticos, aumentando la
afinidad del anticuerpo por el antígeno.
5.​ Cambio de clase (solo en células B): Permite que un mismo receptor cambie de
isotipo (IgM, IgG, IgA, IgE, IgD) sin alterar la especificidad antigénica, adaptando la
respuesta inmunológica a diferentes funciones efectoras.

Estos mecanismos permiten que el sistema inmune tenga un repertorio de millones de

receptores diferentes, capaces de reconocer prácticamente cualquier patógeno o antígeno
extraño, incluso aquellos que no han sido previamente encontrados por el organismo.
La Molécula de Inmunoglobulina

Estructura Cuaternaria Básica

Las inmunoglobulinas (Igs) son glicoproteínas producidas por los linfocitos B que forman
parte de la inmunidad humoral. Su estructura cuaternaria está compuesta por:

●​ Dos cadenas pesadas (H, heavy chains): Determinan la clase de inmunoglobulina

(IgG, IgA, IgM, IgE, IgD).
●​ Dos cadenas livianas (L, light chains): Pueden ser de tipo kappa (κ) o lambda (λ),
pero en una misma molécula siempre son del mismo tipo.
●​ Puentes disulfuro: Unen las cadenas pesadas entre sí y las pesadas con las
livianas.
●​ Región Fab (Fragment Antigen Binding): Contiene los sitios de reconocimiento del
antígeno.
●​ Región Fc (Fragment Crystallizable): Responsable de la interacción con células
inmunitarias y otras moléculas efectoras.

Dominio de Igs: Estructura Mínima Tridimensional

Las inmunoglobulinas presentan un dominio inmunoglobulina (Ig-like domain),

caracterizado por un plegamiento tipo sandwich β, compuesto por dos hojas β antiparalelas
unidas por enlaces disulfuro. Cada dominio Ig es parte de la superfamilia de proteínas
inmunoglobulina (IgSF), una de las más conservadas en evolución.

Evolución del Sistema Inmune e Inmunoglobulinas

Las inmunoglobulinas son el principal factor soluble de la respuesta adaptativa en los

vertebrados. Su evolución ha permitido la generación de distintos isotipos en diferentes
especies, optimizando la respuesta inmune. Algunos ejemplos de variación incluyen:

●​ Mamíferos: Presentan los cinco isotipos clásicos (IgG, IgA, IgM, IgE, IgD).
●​ Aves: No poseen IgE ni IgA, pero tienen IgY, funcionalmente similar a IgG e IgE.
●​ Peces cartilaginosos: Presentan formas más primitivas como IgW.

Diversidad entre Especies y Diferentes Tipos de Inmunoglobulinas

Las Igs presentan distintos isotipos con funciones específicas:

●​ IgG: Principal en la respuesta secundaria, atraviesa la placenta en mamíferos.

●​ IgA: Predominante en mucosas, se secreta como dímero.
●​ IgM: Primera respuesta inmune, forma pentámeros.
●​ IgE: Implicada en alergias y respuesta antiparasitaria.
●​ IgD: Función menos comprendida, pero importante en la activación de linfocitos B.

Sitio de Reconocimiento y Definición de Parátopo

El parátopo es la región específica del anticuerpo que reconoce y se une a un antígeno. Se

encuentra en las regiones variables de las cadenas pesada y liviana y está conformado por
los CDRs (regiones determinantes de complementariedad).
Epítopo: La Contraparte del Parátopo en el Antígeno

El epítopo es la porción del antígeno reconocida por el parátopo del anticuerpo. Puede ser:

●​ Lineal: Secuencia continua de aminoácidos.

●​ Conformacional: Depende del plegamiento tridimensional de la proteína.

Tipos de Antígenos: Naturaleza y Características Fisicoquímicas

●​ Proteicos: Los más inmunogénicos, pueden presentar múltiples epítopos.

●​ No proteicos: Polisacáridos, lípidos y ácidos nucleicos, generalmente requieren
conjugación con proteínas para inducir respuesta inmune.
●​ Por tamaño: Antígenos completos (>10 kDa) versus haptenos (moléculas pequeñas
que necesitan un transportador para ser inmunogénicos).

Conceptos de Alotipo e Idiotipo

●​ Alotipo: Variaciones en las inmunoglobulinas dentro de una misma especie,

determinadas por diferencias en la secuencia de aminoácidos en las regiones
constantes de las cadenas pesadas o livianas.
●​ Idiotipo: Conjunto de variaciones en los CDRs del Fab que determinan la
especificidad del anticuerpo hacia un antígeno particular.

Estos conceptos son fundamentales para entender la especificidad de los anticuerpos, la

variabilidad inmunológica y su aplicación en inmunotecnologías.

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Genética de los Receptores de Antígeno de los Linfocitos

Los linfocitos B y T poseen receptores especializados para reconocer antígenos:

●​ Receptor de células B (BCR): Versión de membrana de los anticuerpos.

●​ Receptor de células T (TCR): Reconoce antígenos presentados por moléculas del
MHC.

Ambos receptores presentan una gran diversidad, generada a nivel genético mediante
varios mecanismos que permiten la adaptación a casi cualquier antígeno.

Mecanismos de Generación de Diversidad del Repertorio de los

Receptores de Antígeno

1.​ Recombinación V(D)J

○​ Ocurre en la médula ósea (BCR) o en el timo (TCR).
○​ Los genes que codifican los receptores están organizados en segmentos:
■​ V (Variable)
■​ D (Diversity, solo en cadenas pesadas del BCR y en el TCR β/δ)
■​ J (Joining)
 ○​ La enzima RAG-1/RAG-2 (Recombination Activating Gene) corta y une
diferentes combinaciones de estos segmentos, generando miles de
variantes.
2.​ Uniones Imprecisas por la Reparación del ADN
○​ La adición o eliminación aleatoria de nucleótidos en las uniones V(D)J,
mediada por la terminal deoxinucleotidil transferasa (TdT), genera
diversidad adicional.
3.​ Emparejamiento de Cadenas
○​ En el BCR: Se combinan cadenas pesadas y livianas.
○​ En el TCR: Se combinan cadenas α y β (o γ y δ en algunos casos).
4.​ Hipermutación Somática (solo en linfocitos B activados)
○​ Ocurre tras la activación del linfocito B en los centros germinales.
○​ La enzima AID (Activation-Induced Deaminase) introduce mutaciones en
la región variable del BCR, permitiendo la selección de anticuerpos con
mayor afinidad.
5.​ Cambio de Clase de Inmunoglobulina (solo en linfocitos B)
○​ Permite que un mismo BCR cambie su región constante sin alterar la
especificidad antigénica.
○​ Se da por recombinación guiada por AID, cambiando de IgM/IgD a IgG, IgA
o IgE.

Estos mecanismos permiten que el repertorio de receptores de antígeno sea prácticamente

infinito, dotando al sistema inmune adaptativo de la capacidad de reconocer una gran
variedad de patógenos y moléculas extrañas.

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Conceptos de Monoclonalidad y Policlonalidad

●​ Monoclonalidad: Se refiere a una población de anticuerpos o células derivadas de

un único clon de linfocito B, lo que significa que todos los anticuerpos producidos
tienen la misma especificidad y afinidad por un epítopo particular. Los anticuerpos
monoclonales (mAbs) se obtienen mediante la fusión de un linfocito B con una célula
de mieloma, creando un hibridoma capaz de producir anticuerpos de forma
indefinida.
●​ Policlonalidad: En contraste, una respuesta policlonal involucra múltiples clones de
linfocitos B, generando una mezcla de anticuerpos que reconocen distintos epítopos
de un mismo antígeno. Los anticuerpos policlonales (pAbs) se obtienen inmunizando
un animal con un antígeno, lo que induce la activación de diferentes linfocitos B y la
producción de una mezcla de inmunoglobulinas con especificidad variable.

Producción de Anticuerpos Policlonales

Hiperinmunización
La producción de anticuerpos policlonales se basa en la inmunización repetida de un animal
con un antígeno específico para inducir una respuesta inmune robusta. El protocolo general
incluye:

1.​ Primera inmunización: Se inyecta el antígeno (a menudo combinado con un

adyuvante como CFA - Complete Freund’s Adjuvant) para estimular la respuesta
inmune.
2.​ Dosis de refuerzo: Se administran inyecciones adicionales con el antígeno en
intervalos específicos para aumentar la producción de anticuerpos.
3.​ Extracción de suero: Se obtiene la sangre del animal inmunizado y se purifican los
anticuerpos del plasma mediante precipitación con sulfato de amonio o
cromatografía.

Animales Utilizados Frecuentemente

Diferentes especies animales se utilizan para la producción de anticuerpos policlonales,

dependiendo del volumen de suero requerido y la compatibilidad con el huésped
experimental.

Animal Volumen de Sangre Usos Comunes

Extraíble

Conejo (Oryctolagus 50-70 mL cada Inmunizaciones estándar, investigación en

cuniculus) pocas semanas laboratorio

Cabra (Capra 500-1000 mL Producción a gran escala

aegagrus hircus)

Oveja (Ovis aries) 500-1000 mL Similar a la cabra, usado en diagnóstico

Caballo (Equus ferus 2-5 L Producción de antisueros terapéuticos

caballus) (antitoxinas, antisueros para venenos)

Ratón (Mus 0.5-1 mL Investigación básica, modelos

musculus) inmunológicos

Pollo (Gallus gallus) 20-40 mL de yema Alternativa sin extracción sanguínea

de huevo (IgY)

Tipos de Inmunoglobulinas según el Animal

Las principales clases de inmunoglobulinas varían entre especies:

●​ Mamíferos: IgG, IgA, IgM, IgE, IgD (aunque la proporción varía).

●​ Aves (Pollo): Producen IgY en la yema del huevo en lugar de IgG en el suero.
●​ Reptiles y Peces: Pueden presentar variantes como IgM e IgW en tiburones.

Los anticuerpos policlonales tienen una gran aplicabilidad en inmunodiagnóstico,

inmunoterapia pasiva y neutralización de toxinas, pero su variabilidad entre lotes y menor
especificidad respecto a los monoclonales pueden ser desventajas en ciertas aplicaciones.
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INTRODUCCIÓN

Órganos del Sistema Inmune

El sistema inmunológico se organiza en órganos primarios y secundarios:

●​ Órganos primarios: Incluyen la médula ósea (donde maduran los linfocitos B) y el

timo (donde maduran los linfocitos T). Son responsables de la generación y
maduración de células inmunitarias.
●​ Órganos secundarios: Comprenden los ganglios linfáticos, el bazo, las placas
de Peyer y las amígdalas, donde ocurre la activación y diferenciación de linfocitos
tras el reconocimiento de antígenos.

Características de los Inmunógenos

Los inmunógenos son moléculas capaces de inducir una respuesta inmune. Sus
características incluyen:

●​ Tamaño molecular: Moléculas mayores a 10 kDa son generalmente más

inmunogénicas.
●​ Complejidad estructural: Proteínas y polisacáridos complejos generan respuestas
más fuertes que lípidos o ácidos nucleicos.
●​ Haptenización: Moléculas pequeñas pueden volverse inmunogénicas si se unen a
proteínas transportadoras.
●​ Dosis y vía de administración: Influye en la magnitud de la respuesta (inyección
intradérmica suele ser más efectiva que oral).

Conjugación de Haptenos

Los haptenos son moléculas pequeñas incapaces de inducir una respuesta inmune por sí
solas, pero pueden volverse inmunogénicas al unirse covalentemente a proteínas
transportadoras como la albúmina sérica bovina (BSA) o la hemocianina de lapa (KLH).
Esta conjugación permite que los linfocitos B reconozcan el hapteno mientras que los
linfocitos T colaboran reconociendo la proteína transportadora.

Afinidad de Anticuerpos Policlonales

Los anticuerpos policlonales (pAbs) son una mezcla de inmunoglobulinas producidas por
diferentes clones de linfocitos B, lo que les confiere:

●​ Reconocimiento de múltiples epítopos en un mismo antígeno.

●​ Alta sensibilidad, útil en inmunodiagnóstico.
●​ Variabilidad en afinidad, con una distribución de anticuerpos de alta y baja afinidad
dentro del mismo suero.
●​ Menor especificidad en comparación con anticuerpos monoclonales, lo que puede
generar reactividad cruzada.
ANTICUERPOS MONOCLONALES

Características

Los anticuerpos monoclonales (mAbs) son inmunoglobulinas idénticas producidas por un

solo clon de linfocito B fusionado con células de mieloma, lo que los hace inmortales. Se
caracterizan por:

●​ Alta especificidad para un único epítopo.

●​ Menor variabilidad entre lotes, crucial para diagnósticos y terapias.
●​ Mayor reproducibilidad, útil en aplicaciones clínicas e industriales.
●​ Mayor costo y dificultad de producción comparado con los anticuerpos
policlonales.

Producción de Anticuerpos Monoclonales

El método clásico para producir mAbs es la tecnología de hibridomas, desarrollada por

Köhler y Milstein, que incluye los siguientes pasos:

1.​ Inmunización del animal (normalmente ratón) con el antígeno de interés.

2.​ Extracción de linfocitos B del bazo y fusión con células de mieloma mediante
PEG (polietilenglicol) para formar hibridomas.
3.​ Selección de hibridomas mediante cultivo en medio HAT
(hipoxantina-aminopterina-timidina), que permite sobrevivir solo a células
fusionadas.

Ensayos para la Selección de Clonas de Hibridomas

Para identificar los hibridomas que producen anticuerpos específicos, se utilizan ensayos
como:

●​ ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay): Detecta la unión del anticuerpo al

antígeno.
●​ Western Blot: Confirma la especificidad frente a proteínas nativas o
desnaturalizadas.
●​ Inmunofluorescencia: Evalúa la capacidad del anticuerpo para reconocer epítopos
en células o tejidos.
●​ Citometría de Flujo: Analiza la unión del anticuerpo en células vivas.

Conservación de Clones

Los hibridomas seleccionados pueden ser almacenados mediante:

●​ Criopreservación en nitrógeno líquido (-196°C) con DMSO como crioprotector.

●​ Mantenimiento en cultivo continuo, aunque esto aumenta el riesgo de mutaciones
o contaminación.

Expansión de Clones y Caracterización de Anticuerpos

Los clones seleccionados se expanden en:

●​ Cultivos celulares in vitro, utilizando medios ricos en suero o sistemas de

biorreactores.
●​ Ratones con ascitis, técnica menos usada por razones éticas.

Finalmente, los anticuerpos monoclonales se caracterizan según:

●​ Isotipo y subclase (IgG1, IgG2a, etc.).

●​ Afinidad y especificidad mediante ensayos de ELISA o SPR (Resonancia de
Plasmones Superficiales).
●​ Pureza mediante electroforesis o cromatografía.

Los anticuerpos monoclonales tienen aplicaciones en inmunoterapia, diagnóstico clínico

(ELISA, inmunohistoquímica) y biología molecular (Western Blot, FACS), representando una
herramienta fundamental en la inmunotecnología moderna.