MEDIOS DE CULTIVOS
Recuento total de bacterias aerobias mesófilas
1. INTRODUCCIÓN .
En la asignatura de Microbiología, una de las competencias fundamentales es la aplicación
de técnicas de cultivo para la detección y análisis de microorganismos presentes en
muestras alimentarias. El bolo de guayaba, producto de la trituración de la pulpa de esta
fruta, representa un ejemplo típico de muestra compleja donde coexisten bacterias, hongos
y otros microorganismos. Su estudio permite poner en práctica los fundamentos de:
● La preparación de inóculos mediante suspensión en agua peptonada,
garantizando una distribución homogénea de los microorganismos.
● Técnicas de siembra superficial (para medios sólidos) y mezcla en medio fluido
(para recuento cuantitativo).
● Uso de medios selectivos y diferenciales:
○ MacConkey para diferenciación de enterobacterias según fermentación de
lactosa.
○ Sabouraud para aislamiento de hongos (levaduras y mohos), con un pH
acidificado y cloranfenicol para inhibir bacterias.
● Uso de medios no selectivos: PCA (Agar de recuento en placa), que permite medir
la carga microbiana total.
● Control de condiciones de incubación, considerando temperatura y oxígeno, para
favorecer los distintos grupos microbiológicos.
El presente informe detalla de forma estructurada el diseño y ejecución de las siembras en
los tres medios, así como las condiciones empleadas para la incubación. La claridad en
estos procedimientos resulta esencial para garantizar resultados fiables y comparables
dentro de un entorno académico y profesional en microbiología.
2. OBJETIVOS
● Describir con precisión el proceso de siembra y condiciones de incubación utilizadas,
garantizando claridad en los medios sólidos y en el flujo de trabajo.
● Comprender la importancia y aplicación de los medios de cultivo en microbiología,
para el aislamiento, identificación, crecimiento y estudio de microorganismos.
● Identificar los componentes esenciales de un medio de cultivo y su función en el
crecimiento microbiano.
● Observar el crecimiento de diferentes microorganismos en medios específicos,
reconociendo sus características morfológicas (colonias, hemólisis, fermentación,
etc.).
3. MATERIALES
3.1 Materiales de laboratorio:
● Placas Petri estériles
● Pinzas estériles
● Asa de Drigalsky (esterilizada entre usos)
● Tijeras estériles
● Balanza analítica
● Alcohol etílico al 96 %
● Micropipetas (0,1 y 1 mL) con tips estériles
3.2 Equipos:
● Agitador vortex
● Mechero Bunsen
● Incubadora (35–37 °C)
3.4 Reactivos y medios:
● 90 mL de agua peptonada (5 g peptona/L)
● Agar MacConkey
● Agar Sabouraud con cloranfenicol
● Agar de recuento en placa (PCA), entibiar
antes de usar
3.5 Muestra:
● 10 g de bolo de guayaba
4. METODOLOGÍA
4.1Preparación de la suspensión
1. Se pesaron aproximadamente 10 g de bolo de guayaba y se
colocaron en un frasco estéril con 90 mL de agua peptonada.
2. La mezcla se homogeneizó en vortex durante 2 min,
obteniendo la suspensión de inóculo.
4.2 Siembra en medios sólidos (MacConkey y Sabouraud)
1. Las placas contenían agar ya
solidificado antes de iniciar la
siembra.
2. Se pipetean 0,1 mL de la
suspensión sobre la superficie del
agar.
3. Con el asa de Drigalsky flameada,
se extendió el inóculo en zig-zag.
4. Las placas fueron incubadas boca abajo:
○ MacConkey: 37 °C durante 24–48 h.
○ Sabouraud: se colocó dentro de una bolsa semiabierta y se incubó a
temperatura ambiente (aprox. 25–30 °C) durante 3–5 días, favoreciendo el
crecimiento de hongos.
4.3 Siembra en agar de recuento (PCA)
1. El agar PCA previamente esterilizado se calentó hasta 45–50 °C y se mantuvo a
temperatura entibiada.
2. Se adicionó 1 mL de la misma suspensión al agar líquido de la
placa.
3. Se vertió cuidadosamente y se mezcló con movimientos
giratorios en forma de “8” para homogeneizar el inóculo.
4. Una vez solidificado, se incubo la placa boca abajo a 30–37 °C
durante 48 horas.
4.4 Buenas prácticas y control de esterilidad
● El asa de Drigalsky se esterilizó colocando en alcohol y luego flameando con llama entre
cada siembra, lo mismo con la cuchara para que se usó al pesar la muestra.
● Se abría el frasco con la suspensión cerca de la llama para evitar la contaminación al
pipetear
● Cada tip utilizado se expulsó en un frasco con hipoclorito.
● Se utilizó alcohol 96 % para limpiar pinzas y
superficie de trabajo antes de cada etapa.
● Las placas se incubaron invertidas para
evitar condensación y contaminación
cruzada.
● El agar Sabouraud fue incubado en una
bolsa semiabierta para favorecer el
intercambio gaseoso y crecimiento fúngico.
5. RESULTADOS
6. CONCLUSIONES
7. ANEXOS
MATERIALES DE LABORATORIO
Cajas de puntos de pipetas mechero bunsen
micropipetas 0,1 y 1ml
medio de cultivo por 48 hrs
