PRACTICA No.
CROMATOGRAFÍA EN PAPEL PARA SEPARACIÓN DE AA
INTRODUCCION
En 1903 el botánico ruso M. T. Sweet elaboró la primera técnica para separar
distintos componentes coloreados de un extracto vegetal. A esta técnica se la ha dado
el nombre de cromatografía debido a que la separación de las sustancias da diferentes
colores. Existen diferentes tipos de cromatografía. La cromatografía en papel es una
forma sencilla que ha llegado a ser un instrumento analítico extraordinariamente
valioso para el químico orgánico y para el bioquímico. En esta técnica se emplea
papel filtro, una gota de solución que contiene la muestra y que se coloca en cierto
punto sobre el papel de donde hay una migración como resultado de flujo por una
fase móvil. El movimiento de la fase móvil es causado por fuerzas capilares. La
gravedad también contribuye al movimiento. La cromatografía en papel es un tipo de
cromatografía por partición en el que la fase estacionaria es agua absorbida sobre la
superficie hidrofílica del papel. Un disolvente orgánico actúa como fase móvil. Por
tratamiento apropiado del papel, el agua puede ser sustituida por una fase líquida
estacionaria no polar; pueden usarse soluciones acuosas como reveladores. En otra
variación, el papel es impregnado con sílice anhidra o una resinade intercambio de
iones. La trayectoria de una muestra se puede describir en función de su factor de
retardo o relación al frente que se define como:
(𝑎) 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑚𝑜𝑣𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑑𝑒𝑙
𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑟𝑒𝑡𝑎𝑟𝑑𝑜
= 𝑅𝑓 = 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 (𝑏) 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑙
𝑚𝑜𝑣𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑑𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒
Para compensar las variables inter controladas, la distancia recorrida por un soluto se
compara frecuentemente con la de una sustancia estándar en idénticas condiciones.
La cromatografía presta valiosa ayuda en el análisis de sustancias complejas como
proteínas, tierras raras, etc.
OBJETIVO:
1. Separar una mezcla de compuestos químicamente semejantes para su identificación.
MATERIAL REACTIVOS
2 Tiras de papel filtro Ninhidrina
2 Frascos con disolvente y tapa Solución disolvente (butano:ácido
acético: Agua, [Link])
1 Parrilla de calentamiento Aminoácidos: leucina y ácido aspártico
PROCEDIMIENTO
1. En un extremo del papel filtro, hacer dos pequeñas marcas con lápiz a un extremo
del borde y separarlas entre sí una distancia de un centímetro.
2. Poner una gota en una de las marcas señaladas del aminoácido No. 1.
3. Repetir la operación con una gota del aminoácido No. 2.
4. En otro papel colocar una gota de una mezcla de los aminoácidos.
5. Introducir las tiras de papel filtro en un frasco o vaso que contenga la mezcla del
solvente (utilice un frasco para cada tira).
6. Dejar avanzar el frente del solvente hasta aproximadamente 1 cm antes de que
llegue al borde superior.
7. Una vez seco el papel, rociar con solución de ninhidrina (revelador específico) para
aminoácido.
8. Dejar secar nuevamente.
9. Calentar las hojas de papel filtro en una parrilla eléctrica (tener cuidado de no
quemarlas) hasta la aparición de manchas coloreadas. Ellas representan el sitio donde
se encuentran los aminoácidos que reaccionaron con la ninhidrina.
RESULTADOS
OBSERVACIONES
DISCUSIÓN
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFÍA
ORIENTACIÓN PARA EL ANÁLSIS DE RESULTADOS
1. Analizar los temas: Cromatografía.
2. Elaborar un diagrama de flujo en el que describa el o los
procedimientos utilizadosen esta práctica.
3. Medir la distancia desde el punto de colocación de la solución
de los aminoácidosal centro de las manchas (a).
4. Medir la distancia del sitio de colocación de los aminoácidos al sitio
donde llegó elsolvente (b) (Figura 1).
5. Calcular el Rf para cada aminoácido, de acuerdo a la siguiente fórmula:Rf =
a/b.
Figura 1. Esquema para identificar la distancia del sitio de
colocación de la muestra al sitio donde llega el disolvente.
6. El Rf se calculará para cada uno de los aminoácidos individuales y
para la mezcla.
7. Identificar cada aminoácido.
8. ¿Cuál corrió más y por qué?, Hacer una discusión tipo artículo
científico sobre ello.
