QUIMICA INSTRUMENTAL

UNIDAD 1:INTRODUCCIÓN
¿Qué es la Química Analítica?
Es la ciencia que estudia qué hay en una sustancia (su composición) y cómo está formada (su naturaleza química). Usa
herramientas e instrumentos para hacerlo.

Análisis Químico:
Es la parte práctica que aplica estos métodos para resolver problemas reales, como saber cuánta glucosa hay en la
sangre.

Definiciones básicas:

• Muestra: Parte representativa de una sustancia que se va a analizar.

• Analito: Es lo que queremos medir, por ejemplo, glucosa.
• Matriz: Todo lo que está en la muestra excepto el analito.
• Interferente: Algo que puede alterar o confundir la medición del analito.

Ejemplo: Si queremos medir el azúcar (glucosa) en sangre, la glucosa es el analito, la sangre es la matriz, y cosas como
hemólisis o anticuerpos podrían interferir.

TIPO DE MUESTRA

-Sangre entera

-Liquido encéfalo raquídeo

-Muestra de orina

-Muestra de heces

TIPOS DE FILTRADOS:
DESTILACIÓN SIMPLE:

¿Qué hace? Separa un líquido de una mezcla usando calor, y su punto de ebullición.

¿Como funciona?

• Se coloca la mezcla líquida en un balón (frasco redondo).

• Se calienta con un mechero hasta que uno de los líquidos comienza a hervir.
• El vapor sube por el tubo y pasa por un refrigerante (tubo con agua fría alrededor).
• El vapor se condensa (vuelve a líquido) y cae en otro recipiente (vaso de precipitado).
• Lo que queda en el balón es el líquido de mayor punto de ebullición.

Ejemplo

Separar agua de salmuera (agua con sal). El agua se evapora, se condensa y se recoge. La sal queda atrás.
DESTILACIÓN FRACCIONADA

¿Para que sirve? Separa mezclas más complejas de varios líquidos con puntos de ebullición cercanos.

¿Como funciona?

• Igual que la destilación simple, pero se agrega una columna de fraccionamiento (tubo largo con bolitas de vidrio
o placas).
• Esta columna permite que los vapores se condensen y evaporen muchas veces dentro de ella.
• Solo el vapor más volátil (con menor punto de ebullición) llega hasta arriba y se condensa.

Ejemplo

Separar alcohol y agua. El alcohol hierve primero y sube. El agua queda abajo o sube más lento.

EXTRACCIÓN O DECANTACIÓN

¿Para que sirve? Para separar dos líquidos inmiscibles (que no se mezclan), como agua y aceite.

¿Como funciona?

• Se colocan ambos líquidos en una ampolla de decantación (frasco con válvula abajo).
• Se agita suavemente y se deja reposar.
 • El líquido más denso (por ejemplo, agua) se va al fondo, el más liviano (aceite) queda arriba.
• Se abre la llave para dejar salir el líquido inferior, separando ambos.

Ejemplo

Separar un compuesto orgánico disuelto en agua usando un solvente como éter.

PRECIPITACIÓN

¿Para qué sirve? Para aislar un sólido que está disuelto en un líquido, cuando ya no puede disolverse más

¿Como funciona?

• Se mezclan dos soluciones que contienen iones (por ejemplo: Ag + y Cl -)

• Los iones reaccionan entre sí y forman un compuesto insoluble (como AgCl), que se convierte en precipitado.
• El sólido se separa y cae al fondo del vaso.

Ejemplo

Agregar una solución de cloruro de sodio (NaCl) a una de nitrato de plata (AgNO₃). Se forma cloruro de plata (AgCl)
como sólido blanco.

Principio de Precipitación: La precipitación ocurre cuando dos iones en una solución se combinan para formar un sólido
que no se disuelve, debido a que se supera su capacidad de solubilidad.

Se describe como:

• Reacción química:
Dos iones (por ejemplo, Ag+ y Cl−) se juntan y forman un sólido como AgCl que precipita.
• Condición de solubilidad:
Cuando la cantidad de iones en el líquido supera su límite de solubilidad (Ksp), el sólido se forma.

Factores que afectan:

• Concentración: Más reactivos = más probabilidad de que precipite.

• Temperatura: Algunas veces más calor hace que los compuestos se disuelvan menos.
• pH: Algunos sólidos solo se forman en medio ácido o básico.
• Agentes precipitantes: Sustancias añadidas para que ocurra la precipitación más fácilmente.
CENTRIFUGACIÓN

Es un proceso físico que separa los componentes de una mezcla (como células y líquido) aplicando una fuerza
giratoria muy rápida.

¿Como funcionan?

• Se coloca la muestra (como sangre) en un tubo de ensayo.

• El tubo se pone en una centrífuga, que gira a gran velocidad.
• Por la fuerza centrífuga, las partes más pesadas (como las células) se van al fondo.
• Las partes más ligeras (como el suero o plasma) quedan arriba.

Principios físicos:

• Separar suero o plasma: En análisis de sangre para hacer pruebas químicas.

• Aislar células: Por ejemplo, en un hemograma.
• Concentrar microorganismos: Como virus o bacterias para estudiarlos.
• Purificar proteínas o ADN: Muy común en biología molecular.
• Analizar lipoproteínas: Como LDL y HDL para evaluar el riesgo cardiovascular.

Aplicación en análisis clínico:

• Separar suero o plasma: En análisis de sangre para hacer pruebas químicas.

• Aislar células: Por ejemplo, en un hemograma.
• Concentrar microorganismos: Como virus o bacterias para estudiarlos.
• Purificar proteínas o ADN: Muy común en biología molecular.
• Analizar lipoproteínas: Como LDL y HDL para evaluar el riesgo cardiovascular.

FILTRACIÓN
Es un método que se usa para separar sólidos de líquidos o gases, haciendo que la mezcla pase por un material
poroso (filtro) que retiene las partículas sólidas.

SIMPLE:

• Se utiliza un papel de filtro o material similar.

• El líquido pasa por el filtro y los sólidos se quedan atrapados.
• Es útil cuando las partículas sólidas son visibles o grandes.

Ejemplo:

Limpiar líquidos turbios y filtrar orina para quitar células o impurezas antes del análisis.
AL VACIO:

• Se usa una bomba de vacío para acelerar el filtrado.

• El vacío succiona el líquido a través del filtro más rápidamente.
• Muy útil para líquidos viscosos o con partículas finas que filtran lento.

Ejemplo: Filtrar suspensiones densas y purificar muestras biológicas (como eliminar bacterias de un líquido).

ANALISIS CUALITATIVO
Es un tipo de análisis que identifica qué hay en una muestra, es decir, qué sustancias están presentes.

ANALISIS CUANTITATIVO
Este análisis mide cuánto hay de una sustancia específica, o sea, la cantidad de un componente.

Estos se calculan a partir de dos medidas:

-La primera medida es la masa o el volumen de la muestra que se está analizando.

- La segunda es la medida de una cantidad proporcional a la del analito en la muestra:

Gravímetro: Mide la masa del analito (la sustancia que se analiza). Se basa en pesar el precipitado formado.

Volumétrico: Mide el volumen de una disolución que reacciona completamente con el analito. Muy común en
laboratorios.

Electro analítico: Mide propiedades eléctricas (como corriente, voltaje o conductividad) relacionadas con la sustancia

Espectroscopio: Mide cómo una sustancia absorbe o emite luz. Se relaciona con la cantidad de analito presente.

EXACTITUD Y PRESICIÓN
Precisión: Es la capacidad de un instrumento o técnica para dar resultados muy parecidos entre sí, aunque no sean los
correctos.

Exactitud: Es qué tan cerca está un resultado del valor real o verdadero.

Baja: Pipeta Pasteur, vaso de precipitado

Media: Probeta, Erlenmeyer

Alta: Matraz aforado, pipeta volumetrica, bureta

Muy alta: Micro pipeta

¿Como elegir el instrumento correcto?

• Para mediciones exactas (como preparar una solución): usa matraz aforado, pipeta volumétrica o micro
pipeta.
• Para mediciones aproximadas (como mezclar): puedes usar un vaso de precipitado o un Erlenmeyer.

INSTRUMENTO EN EL LABORATORIO
Es el uso de instrumentos y equipos especiales para analizar la composición química de una muestra.
Permiten medir propiedades como luz, corriente, masa, etc.

¿Como funciona? Se puede entender como un sistema en bloques, con estas partes principales:

1. Estímulo: Algo que interactúa con la muestra (como luz, voltaje, etc.).
2. Muestra: La sustancia que se quiere analizar.
3. Respuesta (señal): Lo que se genera al medir (como intensidad de luz, corriente, etc.).
4. Detector: Capta la señal generada por la muestra.
5. Transductor: Convierte la señal física en una señal eléctrica.
6. Sistema de lectura o procesamiento: Muestra el resultado (pantalla, gráfica, etc.).

Componentes:

• Detector: Aparato que identifica cambios (temperatura, presión, luz, etc.).

• Sensor: Monitorea en tiempo real y de forma reversible (ej: sensor de luz o pH).
• Transductor: Convierte una señal (luz, calor, etc.) en una señal medible (como voltaje).

CALIBRACIÓN
Es el proceso por el cual se ajusta un equipo para que sus mediciones sean correctas y confiables.
Se hace usando soluciones con concentraciones conocidas del analito (la sustancia que se va a medir).

¿Como se hace?

• Se usan tres o más soluciones patrón (de concentración conocida).

• Se mide la señal de respuesta (por ejemplo: absorbancia, área de un pico, etc.) para cada una.
• Se construye una curva de calibración: una gráfica que relaciona la señal con la concentración.
• Así se puede saber la concentración desconocida de una muestra usando su señal.

¿Para que sirve?

• Para convertir una señal en concentración real.

• Para verificar que el instrumento esté funcionando bien.

Límite de detección: Es la mínima cantidad de una sustancia (analito) que el instrumento puede detectar, aunque no
pueda medirla con precisión
Límite de cuantificación: Es la mínima cantidad de analito que sí se puede medir con exactitud y precisión.

Sensibilidad: Es la capacidad del instrumento para detectar cambios pequeños en la concentración del analito.

• Se mide como la pendiente de la curva de calibración.

• Cuanto más empinada la pendiente, más sensible es el método.

¿Que influye en este valor? El ruido de fondo o señal del blanco: pequeñas fluctuaciones o interferencias en la señal
afectan los límites. La precisión del sistema de medida.

Efecto Matriz: Es cuando los otros componentes de una muestra (que no son el analito) interfieren en la medición y
alteran el resultado.

Calibración mediante adición estandar: Es una técnica usada cuando hay efecto matriz.
Sirve para obtener resultados más confiables en muestras complejas (como suero, plasma, alimentos).

¿Como se hace?

• Se toma la misma muestra varias veces.

• A cada parte se le añade una cantidad conocida de analito (el estándar).
• Se mide la señal en cada una.
• Se construye una curva con los resultados y se extrapola para encontrar la concentración real del analito en la
muestra original.

¿Que pasa si hay efecto matriz?

• La pendiente de la curva de calibración cambia (se hace más alta o más baja).
• Esto indica que los componentes de la matriz están afectando la sensibilidad del método.

INTERFERENTES
1. Interferencia de proteínas

• Algunas proteínas (como la albúmina) pueden unirse al analito o a los reactivos.

• Esto reduce la cantidad de analito libre que se puede medir.
• Es común en pruebas inmunológicas.

2. Interferencia de lípidos

• En muestras con muchos triglicéridos o colesterol (hiperlipidemia), se forma una capa aceitosa.
• Esa capa afecta la claridad de la muestra.
• Puede bloquear o alterar la señal en métodos como la espectrofotometría.

3. Interferencia de fármacos

• Algunos medicamentos (como antibióticos o analgésicos) modifican las reacciones químicas.

• También pueden interactuar con reactivos, afectando el resultado.

4. Interferencia de hemoglobina (por hemólisis)

• Si la muestra está hemolizada (los glóbulos rojos se rompen), la hemoglobina libre puede absorber luz y alterar
la medición en pruebas espectrofotométricas.

ESTRATEGIAS PARA MINIMIZAR EL EFECTO MATRIZ

1. Uso de calibradores y controles específicos

• Se utilizan calibradores hechos con una matriz similar a la muestra real (como suero o plasma).
• Esto compensa los posibles errores provocados por otras sustancias presentes.

2. Dilución de las muestras

• Diluir la muestra con un buffer puede disminuir la concentración de sustancias interferentes.

• Muy útil cuando hay exceso de proteínas, lípidos o células.

3. Filtración o centrifugación previa

• Filtrar o centrifugar la muestra antes del análisis ayuda a eliminar partículas, grasas o células que causan
interferencias.

4. Optimización de la técnica analítica

• Se pueden usar métodos más específicos y menos sensibles al efecto matriz, como:
o Cromatografía líquida con espectrometría de masas (LC-MS)

5. Uso de reactivos y kits especiales

• Algunos reactivos están diseñados para resistir interferencias comunes.

• También incluyen mecanismos de verificación para detectar interferencias antes de mostrar un resultado.

6. Validación en distintas matrices

• Antes de usar un método, se prueba en diferentes tipos de muestras (suero, orina, plasma) para asegurar que
funcione bien en todas.
RUIDO, SEÑAL Y SU RELACIÓN
Señal: Es la respuesta útil del instrumento que está relacionada con el analito que queremos medir.

Ruido: Es cualquier interferencia o variación indeseada en la medición, que no está relacionada con el analito.

Relación señal/ruido (S/R):

Es una forma de medir la calidad de los datos.

Una relación alta significa que la señal es clara y se distingue bien del ruido.

• Relación S/R alta = buena calidad del dato

• Relación S/R baja = posible error o lectura dudosa

TIPOS DE RUIDO

1. Ruido químico

• Proviene de reacciones químicas no controladas o condiciones variables.

• Puede deberse a:
o Cambios de temperatura
o Cambios de presión
o Cambios de humedad
• Afecta la estabilidad del sistema químico.

2. Ruido térmico (también llamado de Johnson o Nyquist)

• Se debe a la agitación natural de los electrones en los componentes eléctricos (como resistencias).
• Es aleatorio (no se puede predecir).
• Aumenta con la temperatura.

3. Ruido de disparo (shot noise)

• Proviene del movimiento irregular de electrones o fotones a través de un detector.

• Es también aleatorio.
• Depende del flujo de corriente.

4. Ruido fluctuante (flicker noise o 1/f noise)

• Se origina por imperfecciones en los materiales electrónicos.

• Su causa exacta no se conoce bien.
• Depende de cómo se construyen los componentes, como resistencias o detectores ópticos.

5. Ruido ambiental

• Proviene del entorno externo: vibraciones, luces, aparatos eléctricos, etc.

• Afecta al instrumento si no está bien aislado.

Mejora Instrumental

Métodos de hardware: se incorpora al instrumento filtros, cortadores, moduladores, etc.

Métodos de software: utilizan algoritmos que permiten extrae las señales de los entornos ruidosos.
QUIMICA INSTRUMENTAL 2
AGUA Y SU USO EN LABORATORIO

El agua en el laboratorio debe estar muy limpia porque se usa en experimentos. Si tiene impurezas,
puede cambiar los resultados.

TIPOS DE AGUA

• Tipo I: La más pura. Se usa en análisis muy precisos.

• Tipo II: Tiene algo de impurezas, sirve para usos menos exigentes.
• Tipo III: Es la más común. Se usa para lavar materiales o preparar soluciones simples.

¿Para qué se usa el agua en un laboratorio?

• Preparar soluciones y reactivos

• Lavar instrumentos
• Reacciones químicas o biológicas
• Baños maría (control de temperatura)
• Refrigeración
• Esterilización (autoclaves)

Impurezas del agua

• Iónicas: Sales disueltas

• No iónicas: Partículas, microorganismos
• Gaseosas: CO₂, cloro, amoníaco

Parámetros que indican la calidad del agua

Físicos:

• Turbidez: Qué tan clara es.

• Color, olor, sabor
• Sólidos presentes
• Temperatura

Químicos:

• pH: Ácido o básico

• Conductividad: Cuántas sales tiene
• Dureza: Calcio y magnesio

Microbiológicos:

• Presencia de bacterias (como E. coli)

Métodos para purificar el agua

1.Destilación

Cómo funciona: El agua se evapora y luego se condensa, separándola de muchas impurezas.

Qué elimina: Impurezas inorgánicas no volátiles, microorganismos.

Limitaciones: No elimina gases disueltos ni compuestos orgánicos volátiles (como cloro o amoníaco).

Pureza: Agua tipo I, aunque puede recontaminarse si no se almacena adecuadamente.

2.Deionización (Intercambio iónico)

Cómo funciona: Se usa resinas que intercambian iones presentes en el agua por H⁺ y OH⁻, formando
H₂O.

Qué elimina: Iones disueltos (sales como Na⁺, Ca²⁺, Cl⁻).

Limitaciones: No elimina compuestos orgánicos ni microorganismos.

Pureza: Agua tipo II o III

3.Ósmosis inversa

Cómo funciona: El agua pasa a presión a través de una membrana semipermeable.

Qué elimina: 90–99% de sales, microorganismos y compuestos orgánicos.

Limitaciones: No elimina gases disueltos completamente.

Pureza: Agua tipo I o II.

4.Filtración

Cómo funciona: El agua pasa por medios físicos como arena o carbón activado.

Qué elimina: Partículas grandes, sedimentos.

Limitaciones: No elimina sales ni microorganismos.

Pureza: Agua tipo III.

5.Filtración por membrana

Cómo funciona: Usa membranas con poros específicos (micro, ultra o nanofiltración).

Qué elimina: Según el tipo, desde partículas hasta virus.

Pureza: Depende del tipo de membrana.

6.Ultrafiltración

Cómo funciona: Membranas con poros de 0.001–0.1 µm retienen bacterias, virus y proteínas.

Qué elimina: Endotoxinas, coloides, macromoléculas.

Limitaciones: No elimina iones ni gases.

Pureza: Agua tipo II.

7.Adsorción

Cómo funciona: Uso de materiales como carbón activado que retienen contaminantes orgánicos.

Qué elimina: Cloro, pesticidas, compuestos orgánicos.

Limitaciones: No elimina iones ni microorganismos.

Pureza: Agua tipo III.

8.Electrodiálisis

Cómo funciona: Separación de iones mediante membranas cargadas y corriente eléctrica.

Qué elimina: Sales disueltas, metales pesados.

Limitaciones: No elimina microorganismos ni materia no ionizable.

Pureza: Agua tipo II o III.

Cómo saber si el agua está pura

• Conductividad: Cuanta más baja, más pura.

• TOC (Carbono Orgánico Total): Mide compuestos orgánicos.
• Microbiología: Cuenta bacterias.
• pH y otros como sílice y absorbancia UV.

Cómo almacenar agua sin contaminarla

• Usa recipientes limpios y cerrados.

• Almacena a baja temperatura (≤ 4°C).
• No mezcles tipos de agua.
• Evita dejar el agua estancada.

Tipos de baños termostatizados

• Baño de agua: Hasta 99°C

• Baño de aceite: Hasta 200°C
• Baño refrigerado: Hasta -40°C
• Baño circulante: Mantiene temperatura constante con recirculación

Tipo de
agua
Uso en el laboratorio ¿Por qué? / Ejemplo
recomenda
do

Preparación de
Necesita máxima pureza para que los
soluciones y reactivos Tipo I
resultados sean precisos.
estándar

Enjuague final de Depende del nivel de limpieza requerido

Tipo II o III
material de vidrio (enjuague final después del lavado).

Reacciones químicas Se usa como medio en cultivos celulares o

Tipo I o II
o biológicas sensibles experimentos moleculares.

Baños maría o Para mantener temperatura estable

Tipo II o III
termostatizados durante las reacciones o incubaciones.

Si no tiene partículas que tapen los

Refrigeración de
Tipo III circuitos, sirve para condensadores y
equipos
enfriamiento.
 Control de calidad o
Depende de cuán sensible sea el análisis o
preparación de Tipo I o II
experimento.
cultivos

Esterilización en Debe evitar incrustaciones para no dañar

Tipo II o III
autoclaves el equipo.

PARAMETROS EN LA CALIDAD DE AGUA: FISICO

Para saber si el agua es buena para el laboratorio, se analizan algunas características físicas:

1. Turbidez

• Mide qué tan clara es el agua.

• Si tiene muchas partículas suspendidas, no deja pasar la luz.
• Para reducirla se usa filtración, sedimentación o coagulación.

2. Color

• Puede indicar la presencia de coloides o sustancias disueltas.

• Es independiente de la turbidez (el agua puede ser clara pero con color).

3. Sólidos

• Se refiere a cualquier partícula presente en el agua, ya sean visibles o disueltas.

• Afectan la calidad del agua.

4. Visibilidad

• Mide hasta qué profundidad puede penetrar la luz.

• Si hay mucha turbidez, la visibilidad baja.

5. Olor y sabor

• Aparecen por materia orgánica en descomposición.

• No deseables, porque indican contaminación.

6. Temperatura

• Afecta la velocidad de las reacciones químicas y el funcionamiento de los tratamientos del

agua.
• También cambia la viscosidad del agua.

PARAMETROS DE LA CALIDAD DE AGUA: QUIMICOS

Estos parámetros ayudan a detectar si hay sustancias químicas disueltas en el agua que puedan
afectar los experimentos.
1. Conductividad

• Mide cuántas sales disueltas tiene el agua (como sodio, calcio, cloruros, etc.).
• Alta conductividad = agua con muchas impurezas.

2. pH

• Indica si el agua es ácida, básica o neutra.

• El pH puede alterarse por gases como el CO₂ o por sustancias químicas.
• Un pH fuera de lo normal puede causar malos olores, sabores o problemas en los
experimentos.

3. Dureza

• Es la cantidad de sales de calcio (Ca²⁺) y magnesio (Mg²⁺) en el agua.

• El agua dura:
o Produce incrustaciones (como sarro).
o Obstruye cañerías y equipos.
o Suele ser alcalina.

4. Sustancias químicas varias

• Como el agua disuelve muchas cosas, puede contener:

o Metales.
o Compuestos orgánicos.
o Contaminantes industriales.
• Algunas afectan la calidad del agua de forma grave, aunque no se vean.

PARAMETROS DE LA CALIDAD DE AGUA: MICROBIOLOGOS

El agua puede contener microorganismos peligrosos, por eso hay que controlarlos especialmente en
laboratorios.

¿Por qué importa?

El agua es un medio ideal para que crezcan bacterias, virus y otros microbios. Esto puede contaminar
los experimentos o ser un riesgo para la salud.

Microorganismos que se revisan como indicadores:

1. Escherichia coli (E. coli)

a. Indica contaminación fecal reciente.
b. Si está presente, el agua no es apta para laboratorio.
2. Enterobacter, Klebsiella y Citrobacter
a. Aparecen cuando el agua ha estado en contacto con materia orgánica en
descomposición.
3. Streptococcus faecalis
a. Es un indicador específico de contaminación fecal humana.
Usos del agua en el laboratorio

El agua se usa en muchas funciones distintas, dependiendo de su calidad y pureza.

1. Como disolvente

• Se usa para:
o Disolver muestras.
o Preparar disoluciones químicas.

2. Para transmitir calor

• Se usa en:
o Baños maría.
o Baños termostatizados.
o Sistemas de refrigeración.

➡ Ayuda a mantener temperaturas estables durante reacciones.

3. Como elemento de limpieza

• Se usa para lavar material de laboratorio.

• El último enjuague debe hacerse con agua purificada, para no dejar residuos.

4. Como reactivo

• El agua también puede participar en la reacción química.

o Ejemplo: con carburos produce gas.

5. Como medio de reacción

• En procesos como:
o Fermentaciones
o Fotosíntesis
o Cultivos celulares

6. Como vehículo

• En la preparación de medicamentos, el agua transporta los ingredientes activos.

7. Para mantener el pH

• El agua puede actuar como dador o aceptor de protones, ayudando a estabilizar el pH de

soluciones.
CUADRO COMPARATIVO: METODO DE PURIFICACIÓN DE AGUA

Tipo
Método Qué elimina de Usos en el laboratorio
agua

Desionizaci Tipo Preparación de soluciones,

Iones (Na⁺, Cl⁻, Ca²⁺...)
ón (DI) II y III lavado de material

Ósmosis 90–99% de sales, microbios, Tipo I Análisis químico, biología

Inversa (OI) orgánicos y II molecular, HPLC

Filtración
Partículas grandes, Tipo Pretratamiento para otros
convencion
sedimentos III métodos
al

Filtración
Tipo Esterilización, eliminación de
por Microorganismos, partículas
II o III microbios
membrana

Ultrafiltraci Virus, proteínas, Tipo Biotecnología, eliminación

ón (UF) endotoxinas, coloides II de contaminantes biológicos

Orgánicos, cloro, algunos Tipo Pretratamiento (compuestos

Adsorción
metales pesados III orgánicos)

Desalinización,
Electrodiáli Tipo
Sales, metales pesados pretratamiento para ósmosis
sis II y III
inversa

Sales, microorganismos, Producción de agua

Destilación compuestos orgánicos Tipo I ultrapura para análisis
volátiles sensibles
PRUEBAS PARA PURIFICAR EL AGUA

¿Qué Método Valores

Prueba Importancia
detecta? usado esperados

Iones
Conductiv Indica cuánta sal
disueltos Tipo I: ≤ 0.056
idad o Conductivímet hay; más
(sales, µS/cm (≥18.2
resistivida ro conductividad =
ácidos, MΩ·cm)
d menos pureza
bases)

Carbono Oxidación +
Compuestos Clave en análisis
Orgánico medición Tipo I: < 10
orgánicos biológicos o
Total (conductivida ppb
disueltos cromatográficos
(TOC) d/IR)

Tipo I: ≤ 10
Conteo Esencial en
Bacterias Filtración y UFC/ml
microbiol microbiología y
(UFC/ml) cultivo en agar Tipo II: ≤ 100
ógico cultivos celulares
UFC/ml

Toxinas Crítico en
Ensayo LAL
Endotoxin bacterianas biotecnología, uso
(con cangrejo < 0.03 EU/ml
as (de Gram clínico o
Limulus)
negativos) farmacéutico

Método
Presencia de colorimétrico Importante en
Sílice Ultrapura: <
sílice (afecta o electrónica y
disuelta 0.01 ppm
equipos) espectrofotom calderas
etría

Variable
Potenciómetro
Acidez o (difícil de Influye en
pH o papel
alcalinidad medir en agua estabilidad química
indicador
ultrapura)
 Absorban Contaminant Menor Detecta
Espectrofotom
cia UV es orgánicos absorbancia = contaminación
etría UV
(254 nm) aromáticos mayor pureza orgánica invisible

EVITAR CONTAMINACIÓN DE AGUAS ALMACENA:

Utilizar recipientes adecuados

•Preferir envases de vidrio boro silicato o plástico de alta pureza (PE, PP, PTFE).

•Evitar materiales que puedan liberar contaminantes, como ciertos plásticos de baja calidad.

Mantener los recipientes cerrados

•Minimizar la exposición al aire para evitar la entrada de partículas y microorganismos.

•Usar tapones herméticos y sistemas de almacenamiento con filtros de aire estériles.

Almacenar en condiciones controladas

•Mantener el agua purificada a temperaturas adecuadas (≤ 4 °C para agua Tipo I).

•Evitar la luz directa y fuentes de calor que favorezcan el crecimiento microbiano.

Evitar la reutilización de envases sin una limpieza adecuada

•Lavar los recipientes con agua purificada y detergentes neutros.

•Enjuagar con el mismo tipo de agua que se almacenará.

Evitar el estancamiento

•Usar sistemas de recirculación o agitación para evitar biofilms y sedimentos.

•Renovar el agua regularmente según el tipo de pureza.

Monitorear la calidad del agua almacenada

•Realizar pruebas periódicas de conductividad, TOC y carga microbiológica.

•Usar filtros de 0.22 μm para evitar la proliferación microbiana.

Evitar la contaminación cruzada

•No mezclar aguas de diferente pureza en el mismo recipiente.

•Usar tuberías y bombas sanitarias libres de materiales contaminantes.

Evitar el contacto con materiales no estériles

•No introducir pipetas, mangueras o instrumentos sin desinfección previa.

•Usar dispensadores automáticos en lugar de manipulación directa.

BAÑO TERMOSTATICO

El baño termostático se utiliza principalmente en laboratorios y procesos industriales para mantener

una temperatura constante y controlada en un líquido.

Baño de Agua:

• Uso: Utiliza agua como fluido para mantener una temperatura constante.
• Rango de Temperatura: Generalmente entre 0°C y 100°C.
• Ventaja: Económico y fácil de manejar.

Baño de Aceite:

• Uso: Utiliza aceite (generalmente mineral o sintético) para alcanzar temperaturas más altas.
• Rango de Temperatura: Entre 100°C y 300°C.
• Ventaja: Soporta altas temperaturas sin evaporarse, ideal para calibración de termómetros de
altas temperaturas.

Baño Refrigerado:

• Uso: Utiliza un sistema de enfriamiento para mantener bajas temperaturas.

• Rango de Temperatura: Desde temperaturas bajo cero hasta 20°C.
• Ventaja: Permite trabajar a bajas temperaturas, útil en reacciones químicas frías o
conservación de muestras.

Baño Circulante:

• Uso: Utiliza circulación constante del fluido para asegurar una temperatura uniforme en todo el
baño.
• Ventaja: Mantiene una temperatura homogénea, ideal para experimentos que requieren
precisión térmica.
QUIMICA INSTRUMENTAL 3
MICROSCOPIA

Poder resolutivo y límite de resolución

• ¿Qué es el poder resolutivo?

o Es la capacidad del microscopio para ver separados dos puntos que están muy cerca.
o Cuanto más cerca estén esos dos puntos y aún así el microscopio los vea separados, mejor es el
poder resolutivo.
• ¿Qué es el límite de resolución?
o Es la distancia mínima entre dos puntos para que se puedan ver como separados.
o Si el límite de resolución es pequeño, significa que el microscopio puede ver detalles muy finos.

PARTES DE UN MICROSCOPIO

Sistema de iluminación:

1. Lámpara:
a. Es la fuente de luz del microscopio.
b. Puede tener distintas potencias: por ejemplo, 6V, 5-15 W o 12V, 50-100 W.
2. Diafragma de campo:
a. Está en la base del microscopio.
b. Regula cuánta luz se deja pasar y a qué zona ilumina.
c. Sirve para que solo se vea iluminado lo que estás observando, no todo el campo visual.
 3. Condensador:
a. Se ubica entre la platina y la fuente de luz.
b. Su función es concentrar toda la luz en la muestra para que se vea bien.
c. Si se sube mucho, deja entrar más luz hacia la muestra.
4. Diafragma (del condensador):
a. Está dentro del condensador.
b. Controla la cantidad de luz, igual que el diafragma de campo.

Sistema mecánico:

1. Base:
a. Es la parte de abajo del microscopio.
b. Soporta todo el aparato.
2. Brazo:
a. Es la estructura vertical que une la base con la parte óptica.
b. Sirve para sostener el microscopio al moverlo. Se debe tomar de ahí para transportarlo.
3. Platina:
a. Es una plataforma metálica con un agujero en el centro.
b. Allí se coloca el portaobjetos con la muestra.
4. Pinzas:
a. Están sobre la platina y sujetan la muestra para que no se mueva.
5. Tornillo macrométrico:
a. Sirve para hacer el enfoque general, moviendo la platina de forma más visible.
6. Tornillo micrométrico:
a. Sirve para enfocar con más precisión, moviendo la platina muy suavemente.

Sistema óptico:

1. Tubo del ocular:

a. Es el tubo donde se coloca el ocular (el lente por donde mirás).
2. Revólver:
a. Es una pieza giratoria que tiene los objetivos (lentes de distintos aumentos).
b. Te permite cambiar de aumento girando el revólver.
3. Tubo binocular:
a. Son los dos tubos (si el microscopio es binocular) donde van los oculares.
b. Dentro tiene prismas y espejos que dividen la luz para cada ojo.
4. Oculares:
a. Son los lentes que están en la parte superior, por donde mirás.
b. También amplían la imagen. Vienen con aumentos como 10X, 12X, 16X o 20X.
5. Tubo:
a. Es la estructura que conecta el ocular con los objetivos.
b. Puede ser monocular (1 ojo) o binocular (2 ojos).

Objetivos:

• Son los lentes que están cerca de la muestra.

• Captan la imagen y la amplían.
• Tienen anillos de colores que indican su aumento (por ejemplo, 4X, 10X, 40X, 100X).
• Algunos tienen una palabra escrita: “oil” (aceite en inglés).
o Esto significa que ese objetivo (normalmente el de 100X) debe usarse con aceite de inmersión.
¿Qué es el aceite de inmersión y por qué se usa?

• Se pone una gota de aceite especial entre el portaobjetos y el objetivo.

• El aceite tiene el mismo índice de refracción que el vidrio, así que no desvía los rayos de luz.
• Así, más luz entra al lente, y la imagen se ve más clara y detallada.

Comparación:

• (a) Sin aceite (interfase de aire):

o La luz se dispersa un poco.
o Solo algunos rayos entran bien al lente.
• (b) Con aceite (interfase de aceite):
o La luz entra derecha y sin perderse.
o Se ve más nítido y brillante.

OPTICAS: Los objetivos se clasifican por su calidad óptica, es decir, qué tanto corrigen los errores en la
imagen que producen.

1. Óptica acromática (objetivos acromáticos)

• Son los más básicos y comunes.

• Corrigen el error de color (aberración cromática) en dos colores: rojo y azul.
• El centro de la imagen se ve bien enfocado, pero los bordes pueden verse algo borrosos.

2. Óptica semi-plana (semi-planacromáticos o semi-planos)

• También corrigen dos colores, pero tienen mejor corrección de plano que los acromáticos.
• Enfocan una mayor parte del campo visual con nitidez, no solo el centro.
• Son un intermedio entre acromáticos y planos.

3. Óptica plana (planacromáticos o planos)

• Corrigen aberraciones cromáticas y esféricas.

• Enfocan con nitidez todo el campo visual, desde el centro hasta los bordes.
• Son más caros, pero dan imágenes de alta calidad y muy precisas.

TRAYECTORIA DE LA LUZ: Esta parte describe cómo viaja la luz dentro del microscopio y cómo se calcula el aumento
total de lo que estás observando.

Trayectoria de la luz en el microscopio:

1. Fuente de luz blanca:

 a. Es la lámpara del microscopio.
b. Da una iluminación uniforme para que todo se vea claro.
2. Diafragma:
a. Controla el tamaño del haz de luz que llega a la muestra.
b. Solo deja pasar la luz necesaria al lugar que querés observar.
3. Condensador:
a. Dirige la luz con fuerza y precisión hacia la muestra.
4. Objetivo:
a. Es el primer lente que forma una imagen de la muestra.
b. La imagen que forma es real, aumentada e invertida.
5. Ocular:
a. Es como una lupa.
b. Amplía aún más la imagen que ya formó el objetivo.

¿Cómo se calcula el aumento total?

Se usa una fórmula muy simple:

Aumento total = aumento del ocular × aumento del objetivo

Ejemplo: si el ocular es 10X y el objetivo es 40X, entonces:

Aumento total = 10 × 40 = 400X

MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO

1. Limpieza regular

Lentes (oculares, objetivos, condensador):

• Usar papel especial para lentes o un paño de microfibra.

• No usar cualquier tela (pueden rayar los lentes).
• Si hay mucha suciedad:
o Usar una gota de alcohol isopropílico al 70% o xilol en el paño.
⚙️ Partes mecánicas:

• Quitar el polvo con un pincel fino o con aire comprimido.

• No aplicar lubricantes por tu cuenta, eso puede dañar el mecanismo (solo con autorización técnica).

2. Protección del microscopio

• Siempre cubrirlo con una funda plástica o de tela cuando no se use.

• Evitar lugares con:
o Luz solar directa
o Mucha humedad
o Polvo
• Para transportarlo correctamente:
o Sostenerlo con ambas manos, agarrando el brazo y la base.

3. Manejo de la iluminación

• Apagar la lámpara cuando no estés usando el microscopio.

o Esto evita que se caliente demasiado y se dañe.
• No usar la luz a máxima intensidad por mucho tiempo.
o Eso puede acortar la vida útil de la bombilla.

4. Aceite de inmersión

• Solo usar aceite especial en los objetivos que lo indiquen (por ejemplo, el de 100X con la marca “oil”).
• Después de usarlo:
o Limpiar el aceite inmediatamente del objetivo.
o Si el aceite se seca, puede dañar la lente.

TIPOS DE MICROSCOPIOS

Tipo de
¿Cómo ¿Qué ¿Para Qué se Ventajas8789
Microscopi Desventajas
Funciona? Muestra? Usa? Principales
o

Muestras
Luz en forma de No necesita Imagen
brillantes Microorganism
Campo cono hueco. Solo colorantes. limitada si la
sobre os vivos, sin
Oscuro se refleja en la Resalta muestra es
fondo teñir.
muestra. detalles finos. opaca.
oscuro.

Cambia la fase de Menor

Detalles No requiere
la luz para Células vivas, contraste
Contraste internos de tinción. Ideal
mostrar estructuras que
de Fase células sin para ver
diferencias en internas. fluorescencia
teñir. células vivas.
densidad. .

Usa fluorocromos Alta Requiere

Fluoresce Partes Identificar
que brillan con luz especificidad preparación
ncia específicas proteínas, ADN,
ultravioleta o azul. y sensibilidad. especial.
 de la célula microorganism
brillan. os.

No ve
Electrónic Interior Máxima
Electrones Virus, muestras
o de celular con resolución
atraviesan la organelas, vivas.
Transmisió gran para ver el
muestra. proteínas. Preparación
n (TEM) resolución. interior.
compleja.

Estructuras
Electrónic
Electrones Imagen 3D externas, Imagen
o de Solo muestra
rebotan en la de la materiales, tridimensional
Barrido el exterior.
superficie. superficie. insectos, detallada.
(SEM)
tejidos.
QUIMICA INSTRUMENTAL 4
CONCEPTOS DE LUZ
La luz se puede entender de dos formas distintas, como una onda y como una partícula. Ambas teorías son correctas,
dependiendo del fenómeno que se estudie.

Teoría Ondulatoria (como onda)

• La luz es una onda que viaja en el espacio.

• Tiene campos eléctricos y magnéticos que se mueven en forma de ondas.
• Esta teoría explica cosas como:
o Reflexión (la luz rebota).
o Refracción (la luz cambia de dirección al pasar por otro material).
o Interferencia (cuando dos ondas se mezclan).

Teoría Corpuscular (como partícula)

• La luz está formada por partículas muy pequeñas llamadas fotones.

• Estas partículas se mueven en línea recta, como si fueran balas de una pistola.
• Explica fenómenos como:
o Reflexión y refracción, pero desde un punto de vista de impactos.
o Por qué la luz puede viajar incluso en el vacío (donde no hay aire ni materia).

Einstein y el fotón

• En 1905, Einstein dijo que la luz está hecha de fotones, que son partículas sin masa ni carga.
• La energía de un fotón depende del color de la luz (más corta la longitud de onda, más energía).

¿Entonces la luz es una onda o una partícula?

¡Las dos cosas! La luz tiene un comportamiento dual: a veces actúa como una onda, otras veces como una partícula.
Esto depende de cómo interactúe con la materia.

ONDA: Una onda es como un "movimiento" que transporta energía, pero no transporta materia. Ejemplo: cuando tirás
una piedra al agua, ves las ondas moverse, pero el agua no se va con ellas.

Partes importantes de una onda

1. Amplitud (A)
a. Es qué tan alta es la onda.
b. Mide cuánta energía tiene.
c. Se mide desde el centro hasta el punto más alto.
2. Longitud de onda (λ)
a. Es la distancia entre dos picos (o valles) de una onda.
b. Se mide en nanómetros (nm) cuando hablamos de luz.
3. Período (T)
a. Es cuánto tiempo tarda la onda en hacer un ciclo completo.
b. Se mide en segundos (s).
Estas propiedades ayudan a describir la luz cuando se comporta como una onda

INTERACCIÓN LUZ-MATERIA

Cuando la luz toca un objeto, pueden pasar varias cosas. Estas se llaman fenómenos de interacción

Tipos de interacción:

1. Absorción
a. La materia “toma” la energía de la luz.
b. Ejemplo: cuando un átomo absorbe un fotón, uno de sus electrones sube de nivel (se excita).
c. Es como si le dieras energía al átomo.
2. Emisión
a. Ocurre cuando un átomo devuelve esa energía que había absorbido.
b. Vuelve a su estado original y emite luz.
3. Fluorescencia
a. Es un tipo especial de emisión.
b. Primero la materia absorbe luz (normalmente UV), y luego emite otra luz, muchas veces de otro color
(como en los resaltadores).
4. Dispersión
a. La luz se desvía en varias direcciones cuando pasa por partículas pequeñas (como en la niebla o leche).

Cada molécula tiene su propio patrón

• Cada sustancia absorbe diferentes longitudes de onda.

• Esto nos permite identificar sustancias al mirar qué colores de luz absorben o emiten.

¿Qué es un barrido espectral?

Es un proceso donde se mide cuánta luz absorbe una muestra en varios colores (longitudes de onda).

Se usa un espectrofotómetro para eso.

¿Cómo se hace?

1. Se pone la muestra y un blanco (generalmente solo el solvente) en el espectrofotómetro.

2. Se programa un rango, por ejemplo de 350 a 800 nm.
3. La máquina mide la absorbancia en cada longitud de onda.
4. Se hace una curva con picos (cada pico representa una zona donde el compuesto absorbe mucha luz).
5. Se elige el pico más alto: esa es la longitud de onda óptima (λₘₐₓ).
¿Cómo elegir la mejor longitud de onda (λ óptima)?

• Donde el analito absorbe más luz → mejor sensibilidad.

• Donde el solvente o el blanco absorban poco → menos errores.
• Donde no haya interferencias (como hemoglobina o grasas).
• Donde la relación señal/ruido sea buena → más precisión.

Ventajas de elegir bien λ óptima

• Medidas más precisas y confiables.

• Mejores resultados en curvas de calibración.
• Menos interferencias y errores.

¿Qué es la emisión?

• Cuando una sustancia se excita (por ejemplo, al absorber luz o calor), sus electrones suben de nivel de energía.
• Cuando esos electrones vuelven a su estado normal, liberan esa energía en forma de luz.
Eso es la emisión.

Ejemplo: ciertos elementos brillan cuando se calientan, como el sodio que da una llama amarilla.

Técnicas espectrales (tipos de espectroscopía)

Estas son técnicas que usan la luz y su interacción con la materia para identificar y medir sustancias. Hay varios tipos:

1. Espectrometría Infrarroja (IR)

a. Usa luz infrarroja para detectar enlaces químicos.
b. Se usa mucho en química orgánica.
2. Espectrometría de Absorción Atómica (AA)
a. Se usa para medir metales en concentraciones muy bajas.
3. Espectroscopía UV/Visible (UV/Vis)
a. Usa luz ultravioleta y visible para medir sustancias coloreadas o que absorben UV.
b. Es la más usada en química clínica.
4. Espectrometría de Emisión Atómica
a. Mide la luz que emiten los átomos excitados, especialmente metales.

¿Qué es la espectrofotometría de absorción?

Es una técnica que mide cuánta luz absorbe una sustancia cuando pasa un rayo de luz a través de ella.
Se usa mucho para saber qué cantidad de una sustancia hay en una muestra (como glucosa, colesterol, etc.).

¿Cómo funciona?

• Se usa un espectrofotómetro, que tiene:

o Luz: pasa a través de la muestra.
o Cubeta: es donde va la muestra líquida.
o Detector: mide cuánta luz sale del otro lado.

¿Qué se mide?

• I₀: es la luz que entra (incidente).

• I: es la luz que sale (transmitida).
• Parte de esa luz se absorbe por la muestra.
Transmitancia (T)

Es la parte de la luz que pasó:

T=I/I°

Absorbancia (A)

Es la cantidad de luz que se absorbió:

A=-log(T)=-log(I/I°)

Más concentración → más absorbancia → menos luz pasa.

Ley de Lambert–Beer

Esta ley dice que la absorbancia A es directamente proporcional a:

• La concentración (c) de la sustancia.

• El camino óptico (b) que recorre la luz.
• La capacidad de absorción (a) de esa sustancia.

Fórmula:

A=a.b.c
Esta relación permite calcular concentraciones si ya se conoce la absorbancia.

Estas técnicas ayudan a:

• Saber qué sustancia hay (análisis cualitativo).

• Saber cuánto hay de esa sustancia (análisis cuantitativo).

DESVIOS

¿Qué son los desvíos?

A veces, la ley de Lambert–Beer no se cumple perfectamente. Eso significa que la absorbancia no crece de forma
proporcional a la concentración.
Esto puede hacer que los resultados sean incorrectos si no se tiene cuidado.

Causas comunes de desvíos

1. Concentración muy alta

a. Si la muestra está muy concentrada, la luz no puede pasar bien, y la relación deja de ser lineal.
2. La luz no es monocromática
a. Si la luz que se usa tiene varios colores mezclados, el instrumento mide mal.
3. El solvente absorbe más que el analito
a. Si el líquido donde está la muestra también absorbe luz, puede alterar la medición.
4. Problemas con la luz emitida
a. Puede haber fallas en la lámpara o en la fuente de luz del equipo.
5. Cubetas defectuosas
a. Si los lados de la cubeta no son paralelos o están rayados, la luz se refleja o dispersa mal.

¿Qué se hace para evitar estos errores?

• Usar concentraciones adecuadas (ni muy altas ni muy bajas).

 • Verificar que el equipo tenga luz monocromática.
• Usar cubetas limpias y en buen estado.
• Medir siempre un blanco como referencia.

FOTOMETRIA Y ESPECTOFOTOMETRIA

¿Para qué sirve la espectrofotometría?

Se usa para:

• Medir la concentración de una sustancia específica en una muestra.

• Identificar sustancias por su espectro (huella óptica).
• Hacer análisis cualitativos y cuantitativos más precisos.

Ejemplos en química clínica:

• Glucosa, colesterol, creatinina, proteínas, bilirrubina, etc.

• Detectar interferencias (como hemólisis o ictericia).
• Elegir la longitud de onda óptima para minimizar errores.

Es más precisa y se puede usar en un rango más amplio (UV, visible e infrarrojo).

¿Para qué sirve la fotometría?

Se usa para:

• Medir la intensidad de luz que pasa por una muestra.

• Hacer mediciones rápidas y simples, como reacciones colorimétricas.
• Analizar una muestra en una sola longitud de onda fija.

Ejemplos en laboratorios:

• Tiras reactivas que cambian de color.

• Ensayos de rutina donde no se necesita mucha precisión.

Es más económica y simple, pero menos exacta que la espectrofotometría.

FOTOMETRIA Y ESPECTROFOTOMRTRIA

Característica Fotometría Espectrofotometría

Tipo de luz Con filtro (menos precisa) Monocromática (más precisa)
Información obtenida Un valor Curva completa A(λ)
Complejidad del equipo Sencillo Más complejo
Costo Bajo Más alto

Uso Ensayos rápidos, rutina Análisis clínicos detallados

INTERFERENTES EN ESPECTROFOTROMETRIA

Interfer ¿Qué lo causa? ¿Qué efecto tiene en la medición?

ente
Hemóli Ruptura de glóbulos rojos → libera ↑ Absorbancia falsa (especialmente a 415 nm).
sis hemoglobina y enzimas. ↑ Potasio (K⁺), AST, LDH.
↓ Glucosa y creatinina.
Lipemi Exceso de grasa en sangre (quilomicrones). ↑ Absorbancia falsa por dispersión de luz.
a ↓ Electrolitos (Na⁺, Cl⁻) por dilución.
Icterici Exceso de bilirrubina (color amarillo). La bilirrubina absorbe luz (λ ≈ 450 nm) y puede reaccionar
a con reactivos.
↓ Creatinina y proteínas totales.
Turbide Presencia de partículas en suspensión. Dispersa la luz → ruido y pérdida de linealidad.
z Dificulta elección de λ óptima.

CONTROLES DE ESPECTROFOTROMETRO

Control ¿Para qué sirve?

Evita que llegue al detector luz no deseada que no pasó por la muestra, lo cual puede
Luz espuria (stray light)
alterar la absorbancia.

Volumen mínimo Asegura que haya suficiente líquido en la cubeta para que la medición sea válida.

Verifica que estén limpias, sin rayas y con paredes paralelas, para que la luz pase
Cubetas
correctamente.

Centro de banda (λ Asegura que la longitud de onda seleccionada por el equipo sea la real (la que sale del
correcta) monocromador).

Controla que la absorbancia aumente de forma proporcional cuando sube la

Linealidad fotométrica
concentración → se cumple la ley de Lambert–Beer.

Verifica si el valor medido coincide con un valor verdadero o certificado usando

Veracidad fotométrica
patrones.

Precisión fotométrica Mide si los resultados se repiten al analizar varias veces la misma muestra bajo las
(repetibilidad) mismas condiciones.