Pineda Herrera Mildred Dianey
Rendón Salazar Luis Gabriel
González Saldaña Dana Paola
Roja Romero Raúl Eduardo
Equipo 5: QUIMITOX
Practica 3: Determinación de la CL50
Licenciatura en QFBT
13 Septiembre del 2024
7mo Semestre
Determinación de la CL50
Resumen y Palabras claves 1
Introducción 2
Planteamiento del problema 4
Justificación 4
Objetivo general:
• Determinar la concentración letal media de (CL50) de las lentejas germinadas.
Objetivos Específicos:
• Preparar diluciones con diferentes concentraciones de la sustancia química a evaluar.
• Registrar y analizar la mortalidad de los organismos en función de la concentración
de la sustancia.
• Calcular la CL50 mediante métodos estadísticos como el Sistema Reed Muench.
Hipótesis
El tratamiento de las semillas de lechuga con diferentes concentraciones de solución
afectará la tasa de germinación y el crecimiento de las plántulas. Se espera que las
concentraciones más altas de la solución reduzcan la tasa de germinación y el crecimiento en
comparación con las concentraciones más bajas y para el ecosistema de lenteja germinada de
igual forma se espera que a mayor concentración de herbicida las plantas mueran más rápido
y se detenga su crecimiento en comparacion de las de menos concentracion.
Metodología
Resultados
• Lentejas Germinadas
Antes de comenzar con este proceso, germinamos lentejas, de tal modo que en una
charola transparente colocamos una cama de papel para cocina lo bastante gruesa
como para absorber el agua, luego de ellos colocamos por toda la superficie del plato
una cama de lentejas a las cuales se les añadió agua cada día durante 7 días, de lo cual
obtuvimos pequeños brotes saliendo de cada semilla, lo suficientemente grandes como
para poder ser sembradas.
Figura 1. Lentejas germinadas por 7 días
De estás lentejas, seleccionamos alrededor de 60 brotes, para poderlos colocar en una
charola con tierra fértil y humedecida previamente, por casilla colocamos una capa de
tierra y posterior a ellos las semillas con su raíz hacia abajo y el brote en la parte
superior, con poca más tierra cubrimos la semilla dejando su tallo descubierto.
Figura 2. Semillas germinadas de lenteja colocadas en charola germinadora, además
del uso de tierra para jardinería.
Una vez colocadas todas las semillas en sus casillas con tierra de jardinería, con ayuda
de una micropipeta, se le colocó en cada casilla cantidades distintas de un herbicida, en
este caso el producto menciona en instrucciones que se debe diluir en agua, pero
nosotros usamos esto, así que esperamos obtener resultados de muerte por
intoxicación al producto por parte de la mayoría de las plantas en sus respectivas
casillas.
Figura 3. Semillas germinadas de lenteja, sometidas a distintas cantidades de herbicida
comercial, para poder medir la Dosis letal 50
• Semillas de Lechuga
Colocamos las semillas dentro de agua de grifo, para que estas absorbieran la mayor
cantidad de esta misma posible. Más tarde, contamos 100 semillas divididas en 10
grupos de 10. Para preparar la caja Petri donde se desarrollará el proceso de
supervivencia por parte de la semilla, cortamos 10 círculos de papel filtro del tamaño
de la base de la caja los cuales humedecimos con alcohol etílico para eliminar
contaminantes de dicho papel, los cuales esperamos a que evaporará todo el alcohol del
papel.
Figura 4. Semillas de lechuga previamente sumergidas en agua de grifo, separadas en
10 grupos de 10 semillas.
En el tiempo que el papel filtro evaporaba el alcohol, la profesora preparo 8 soluciones
de concentraciones distintas de una solución de ZnCl2, el practicario marca que estás
deben ser seriadas, pero en este caso solo fueron de concentraciones cada vez menores.
Figura 5. Soluciones de Cloruro de zinc (ZnCl2), en concentraciones cada vez más
elevadas desde 37.5% hasta 0.58%.
Una vez seco el papel filtro, los colocamos en la tapa de la caja Petri, cabe recalcar que
con el uso de guantes ya que buscábamos reducir presencia de contaminantes externos.
Una vez colocado el papel, añadimos 2 mL de agua buscando empapar todo el papel,
para posteriormente colocarle las semillas de manera que se formaran grupos de 3
como se muestra en la figura 6. Luego de ellos añadimos 5 mL de cada una de las
soluciones con ayuda de una pipeta Pasteur, pero de tal modo que fuera por debajo del
papel del fondo. Finalmente las tapamos y encintamos para llevar a guardar.
Figura 6. Cajas Petri con 10 semillas de lechuga cada una, en el fondo de la caja una
solución de ZnCl2. Las cajas selladas resguardadas en un lugar con temperatura y luz no
tan abundantes.
Figura 7. 01 de septiembre, se observa la mitad de la población de las plantas
muriendo. Casilla 1 (0 micro L) observamos un crecimiento comparado al día de su
siembra, casilla 2 (100 micro L) no se observan cambios aparentes en su apariencia y
crecimiento, casilla 3 (500 micro L) se observa que es una muerte inminente en estos
retoños, por la gran disminución de su tamaño y falta de líquido en sus hojas.
Figura 8. 1 de septiembre, no se observa algún tipo de cambio en las semillas de lechuga,
estas parecen permanecer intactas y con signos de humedad.
Figura 9. 6 de septiembre, se observan signos de muerte en varias de nuestras plantas,
en este caso en la casilla 4 se observa la muerte en la totalidad de las plantas,
presentando cambios en su coloración, signos de deshidratación y algunas hojas caídas.
Ene l caso de la casilla 3, solo uno de nuestros ejemplares sigue con vida, pero con signos
de deshidratación, en el caso de los otros dos ejemplares estos perdieron su coloración y
tamaño por lo que consideramos que murieron. En las casillas 1 y 2 las plantas aún
permanecen con un tamaño adecuado, pero con cambios en cuanto a su coloración, su
crecimiento parece detenido a comparación de la primera semana.
Figura 10. 6 de septiembre, observamos crecimiento de algunos de nuestros ejemplares, en
los casos de las muestras control comenzaron los brotes en las semillas. En el caso de
nuestra caja con 0.58% se presentó el crecimiento de unas de las semillas, generando una
pequeña planta de las 9 semillas. En el caso de nuestras demás muestras no se presentaron
cambios aparentes.
Figura 11. 11 de septiembre, se observa que la mayoría de nuestros especímenes
murieron, tales fueron el caso de las casillas 2, 3 y 4, solo se muestra una rama sin
coloración y de pequeño tamaño. En el caso de la casilla 1 aún se puede ver alta
coloración en las plantas, pero con hojas completamente deshidratadas. Se percibe el
crecimiento de una especia de moho sobre las plantas,
Análisis de resultados
• Lentejas Germinadas
El herbicida concentrado puede tener varios efectos negativos sobre las semillas
germinadas de lenteja, dependiendo del tipo de herbicida, su mecanismo de acción y la
dosis aplicada. Por lo cual algunos de los principales efectos que un herbicida puede
causar en plántulas de lenteja:
- Inhibición de la germinación, interfiriendo con los procesos iniciales de
crecimiento de la planta, impidiendo que la semilla absorba el agua suficiente o
interfiriendo con la activación en enzimas necesarias para su crecimiento.
- Retardo en la germinación, en este caso en la casilla número 2 con 100 um de
herbicida, observamos como se detuvo el proceso de crecimiento no generando
una muerte total, aunque este herbicida lo que puede provocar una emergencia
más lenta de las plántulas.
- Reduce el tamaño de las raíces, causando que estás se acorten y desarrollen en
menor medida, reduciendo la capacidad de la planta para absorber agua y otros
nutrientes.
- Necrosis reticular, en este caso las dosis altas de herbicida pueden ocasionar la
muerte de las células de la raíz generado áreas necrosadas, tales como los casos
de los carriles 3 y4 donde las concentraciones de este mismo fueron más
elevadas.
- Inhibición de crecimiento de tallo y hojas, esto debido a que la sustancia
interfiere directamente con los procesos celulares responsables de la división y
crecimiento celular, lo que resulta en los tallos más cortos y con menos
coloración.
- Clorosis o amarillamiento de las hojas, debido a que el hierbicida inhibe la
fotosíntesis al afectar os cloroplastos, lo que provoca la pérdida de clorofila y el
amarillamiento de las hojas jóvenes. Esto disminuye la capacidad de la plántula
para producir energía, dando como resultado una perdida de la pigmentación de
la planta.
- Alteración de la respiración celular, en este caso el herbicida puede afectar el
transporte de electrones en las mitocondrias, bloqueando la producción de ATP,
lo que lleva a una reducción en el crecimiento.
- Un estrés oxidativo, puede inducir la generación de especies reactivas de
oxígeno (ROS), lo que lleva a un estrés oxidativo. Este estrés puede causar daño
en las membranas celulares, proteínas y ADN, lo que a su vez conduce a una
reducción del crecimiento y posibles mutaciones o la muerte celular.
Todos estos factores se relacionan directamente con las dosis aplicadas de herbicida a
las planas, por lo que es fundamental conocer los efectos dependientes de la dósis: Dosis
bajas (subletales): Puede causar un crecimiento ralentizado, clorosis leve y menor
desarrollo radicular. Las plántulas podrían sobrevivir, pero con un crecimiento
significativamente afectado.
Dosis bajas (subletales): Puede causar un crecimiento ralentizado, clorosis leve y
menor desarrollo radicular. Las plántulas podrían sobrevivir, pero con un crecimiento
significativamente afectado.
Dosis moderadas: Se observarían efectos más severos, como la inhibición casi total del
crecimiento de las raíces y tallos, clorosis más marcada, y potencial necrosis en algunas
áreas de las plántulas.
Dosis altas: La exposición a una cantidad elevada de herbicida concentrado puede
provocar un daño irreversible, con muerte rápida de las plántulas debido al colapso de
los procesos metabólicos y celulares.
• Semillas de Lechuga
Dentro del proceso no fue posible llevar cálculos de CL50, esto debido al número de
muestras trabajas para la obtención de resultados, debido a esto realizamos un censo
muestral de cada placa para contar el número de semillas germinadas en el transcurso
de 2 semanas, los valores obtenidos se colocaron en la tabla 1.
Tabla 1. Semillas Germinadas de lechuga sometidas a sol. De Cloruro de Zinc
Caja Número de semillas germinadas
Control 1 3
Control 2 4
0.53% 2
1.17% 1
2.3% 1
4.68% 0
9.37% 0
18.75% 0
37.5% 0
En nuestras muestras control fe donde se presentó el mayor número de semillas germinadas,
esto en gran parte de que no se sometieron a alguna de las concentraciones usadas en el
proceso, sino a solo agua destilada, pero es un gran factor del porqué la poca población de
semillas germinadas.
En este caso existen varias influencias negativas del por qué el agua destilada no es la ideal
para regar semillas, esto debido a los factores mencionados a continuación:
- Falta de minerales esenciales como el calcio, magnesio y potasio, que son muy
importantes para el crecimiento de la planta.
- Desbalancea iones, debido a que la falta de minerales esenciales puede causar un
estrés ene la semilla, afectando su germinación y posterior crecimiento.
Por lo que a primera instancia se bedao usar agua corriente normal, para poder humedecer
nuestras cajas control.
En el caso de nuestras muestras con concentraciones de ZnCl2, este compuesto puede causar
gran daño en las semillas, por lo que su germinación posterior era innegable, esto debido a
varios factores como:
- Causa daño a las células vegetales, el Zinc en concentraciones elevadas pueden
interferir con la función celular normal, dañando las membranas celulares, lo que
impide el transporte adecuado de agua y nutrientes.
- Interfiere en la fotosíntesis, el cloruro de zinc llega a inhibir la capacidad de la planta
para llevar a cabo la fotosíntesis al dañar los cloroplastos, que son esenciales en este
proceso. La reducción de la capacidad fotosintética afecta el crecimiento y desarrollo
de la semilla.
- Genera un desbalance nutricional, el zinc es un micronutriente esencial en pequeñas
cantidades para las plantas, pero en exceso puede competir con otros nutrientes
esenciales, como hierro o magnesio.
- Alteración del pH, el ZnCl2 altera directamente el pH de su suelo de las semillas
(papel filtro), siendo que un cambio en el pH puede afectar la disponibilidad de
nutrientes para las plantas haciéndolos más o menos accesibles.
En general, la toxicidad ocurre cuando los niveles de zinc superan lo que la planta puede
tolerar, lo que conduce a efectos perjudiciales en su fisiología y crecimiento. Los niveles
tolerables de zinc en una semilla germinada varían según el tipo de semilla y la etapa de
crecimiento. Sin embargo, algunos de los rangos generales de concentración de zinc que se
consideran seguros para las semillas germinadas:
- Concentración óptima: 0,5-2,0 mg/L (miligramos por litro)
- Concentración tolerable: 2,0-5,0 mg/L
- Concentración tóxica: >5,0 mg/L
Con los valores obtenidos de concentración óptima de ZnCl2, determinamos que nuestras
cajas con concentraciones de 0.53% ya se consideran elevadas para el desarrollo de la planta,
pero tuvo una tasa de supervivencia del 18%, en el caso de las muestras de 1.17 % y 2.3% ya
eran elevadas, por lo que las semillas germinadas dentro de estas cajas pueden ser
consecuencia de factores externos, en estos casos se presentaron tasas de supervivencia del
9%. La toxicidad del zinc varía según factores como el pH del medio de cultivo, la presencia
de otros nutrientes y la sensibilidad específica de la semilla.
En general, se considera que los niveles de zinc por debajo de 2,0 mg/L son seguros para la
mayoría de las semillas germinadas. Sin embargo, es importante realizar pruebas específicas
para determinar los niveles óptimos de zinc para cada tipo de semilla y condiciones de
crecimiento.
Conclusión 4
Referencias todos
