Microorganismos Probióticos
Concepto, funcionalidad y enfoque industrial
Martín Marcial
El ser humano y su microbioma
- Ubicuidad de los microorganismos
- Capacidad de adaptación y versatilidad
metabólica
Especial Microbioma humano revista Nature 2012
[Link]
Rojo et al, 2017
- # de células somáticas ≈ # células microbianas
- Genomas microbianos combinados ≈ 150 x genoma humano
Coevolución
Homeostasis del Órgano olvidado
hospedador (Subestimado)
Salud del hospedador
- Sistema nervioso
- Sistema inmune
- Maduración de órganos
- Metabolismo
- Aparato digestivo
Mayor biomasa Estructura de la microbiota intestinal
- 500 – 1100 especies
- Bacteroidetes / Firmicutes 90% (edad adulta)
- Otros filos: Actinobacteria, Proteobacteria,
Verrucomicrobia, Fusobacteria and Cyanobacteria
Factores que afectan composición de
microbiota intestinal
[Link]
Comunidad abundante y diversa - Parto / alimentación
Archaea, eucariotas, virus y (neonato)
principalmente Bacterias (1014 - Edad
células) - Sexo
- Actividad física
- Condiones de estrés
- Estilo de vida - Dieta
- Consumo de drogas / fármacos
≈ Disminución en
Microbiota alterada
diversidad
Disbiosis
Desórdenes gastrointestinales y
sistémicos
- Enfermedad de Chron
- Colitis ulcerativa
- Enfermedad intestinal
inflamatoria
- Síndrome de colon irritable
- Colitis pseudomembranosa
(C. difficile)
- Diabetes tipo II
- Obesidad
Probióticos
Modulación del Propiedades
Regulación de la sistema inmune Exclusión
antidiarréicas
barrera epitelial competitiva de
intestinal patógenos
“Microorganismos vivos que, cuando son administrados en
cantidades adecuadas, confieren un beneficio en la salud del
hospedador”
Actividad Reducción del
antimicrobiana Producción de Actividad colesterol sérico
vitaminas antiinflamatoria
Efectos benéficos dependientes de cepa
Ejemplos:
Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB-12
Bifidobacterium lactis HN019™
Lactobacillus rhamnosus GG®
DSM33560®
Lactobacillus acidophilus, DDS-1®
Lactobacillus paracasei, L. CASEI 431®
Lactobacillus gasseri, BNR17™
Lactobacillus reuteri, LRC®
Lactobacillus acidophilus, LA-5®
Lactobacillus paracasei, F-19®
Lactobacillus plantarum, UALp-05™
Lactobacillus acidophilus, UALa-01™
Streptococcus thermophilus, TH-4®
Sacharomyces boulardii
Lactobacillus delbrueckii Lactobacillus delbrueckii
Lactobacillus casei Lacticaseibacillus spp.
Lactobacillus paracasei Lacticaseibacillus paracasei
Lactobacillus rhamnosus Lacticaseibacillus rhamnosus
Lactobacillus reuteri Limosilactobacillus reuteri
Lactobacillus plantarum Lactiplantibacillus plantarum
Herrramienta de consulta: [Link]
Ejemplos:
E. coli Nissle 1917
Bacillus coagulans, UABc-20™
BC4
Bacillus clausii, ENTPro
Bacillus subtilis
Propionibacterium freudenreichii W200
Probióticos de nueva generación
- Miembros comensales de la microbiota intestinal que desempeñan funciones especiales
- Población reducida o eliminada en enfermedades asociadas a disbiosis de la microbiota intestinal
- Potencialmente aplicados en el tratamiento de enfermedades asociadas a disbiosis de microbiota
intestinal
Derrien et al. 2016 Miquel et al. 2013
Akkermansia muciniphila Faecalibacterium prausnitzii
Otros: Eubacterium halli, Bacteroides thetaiotaomicron, B. fragilis, B. uniformis, Christensenella
minuta, Clostridium grupo IV
Caracterización
Funcionalidad
Inocuidad para
Conceptoel uso deseado
Estudios clínicos Efectividad
Producción
Dosis eficaces Almacenamiento
Tránsito GI
“Microorganismos vivos que, cuando son
administrados en cantidades adecuadas, confieren
un beneficio en la salud del hospedador”
Caracterización
Identificación al nivel taxonómico más específico (especie o subespecie si se da el caso)
mediante métodos inequívocos
- Bacterias: Secuenciación de genoma completo
- Levaduras: Análisis filogenómico basado en secuencia de varios genes altamente
conservados.
- Ejemplo: genes AFToL (nucLSU, nucSSU, ITS, RPB1, RPB2, EF1-alpha, mitATP6,
mitSSU), alineados frente a 18S rDNA/ITS o genoma completo de la misma especie
A nivel comercial: Obligatorio declarar cepa
Inocuidad
Identificación adecuada para ubicar dentro de lista:
Estatus GRAS – Generally Recognized as Safe
Estatus QPS – Qualified Presumption of Safety
Ejemplo de requisitos:
- Ausencia de elementos móviles correspondientes a
genes de resistencia a antibióticos
Estudios clínicos
Estudios in vitro
- Resistencia a pH gástrico (1.5 - 3) y exposición a bilis
- Estimulación de células inmunes
- Inducción de citoquinas antiinflamatorias (receptor antagonista de IL-1, IL-4, IL-6,
IL-10, IL-11, e IL-13)
- No inducción de citoquinas pro inflamatorias (IL-1, IL-6, IL-8, IL-12, IFN-γ, IL-18, y
TNF)
- Adherencia a células Caco-2
- Adherencia a moco intestinal
- Reforzamiento de uniones epiteliales estrechas
Srimahaeak et al., 2021
Estudios clínicos
Estudios in vivo
- Modelos animales
- Evaluación doble ciego en humanos
- Colonización del intestino
- Reversión de síntomas clínicos inducidos (colitis inducida por DSS)
- Química sanguínea (Ej: vitaminas)
Dosis eficaces
108 – 1011 UFC/g al momento de la ingesta
- Inóculo a partir de amplio stock
con bajo número de generaciones.
- Medio y condiciones de cultivo
Producción
optimizado en función de
Elevada viabilidad Almacenamiento requerimientos nutricionales
Tránsito GI
Máximo rendimiento y
funcionalidad conservada
Dosis eficaces
Tránsito GI
Probióticos deben alcanzar sitio de acción
Estómago:
- pH 1 – 3
- Pepsina
- Aerobiosis intermedia
Intestino delgado:
- pH 5.9 – 6.7 (región proximal)
- Sales biliares
- Amilasa pancreática, lipasa y quimiotripsina
Hillman et al. 2017 y Pereira and Berry 2017
Microencapsulación
Factores estrés
Inmovilización y recubrimiento de células en una
red polimérica de enlaces covalentes o iónicos
- Barrera física:
Estrés oxidativo, pH bajo y sales biliares
• Alginato
• Goma xantana
Biopolímeros de • Gelano
grado alimenticio • Pectina
Factores estrés
• Almidón
• Gelatina
• Caseina
Producción
Producto final Formato deshidratado
Anhidrobiosis = Actividad metabólica disminuida a su mínimo nivel, de forma temporal
Estabilidad a largo plazo y conservación a temperatura ambiente
- Disminución de costos de almacenamiento
- Alta concentración / Elevada viabilidad
- Facilidad de inclusión en matrices alimentarias
Almacenamiento
Increased aw and moisture content may
activate the repressed metabolism of an
Elevated ambient temperature may lead to
anhydrobiont , in an environment that do not allow
degradation of life essential macromolecules
reproduction, leading to cell death
Molecular oxygen can oxidize
cell compounds, producing free
radicals that are toxic to probiotics
Proper packaging techniques can limit the
The protectant agent used during desiccation, exposure to oxygen and atmospheric humidity
surrounds the cells in the form of a highly
viscous amorphous glass, inhibiting deleterious
reactions
Marcial-Coba et al., 2021
Selección de un vehículo apropiado
Bebidas lácteas o jugos Matrices con contenido de agua
bajo o intermedio
• Refrigeración constante Estabilidad a largo plazo bajo
• pH bajo temperatura ambiente
• Oxígeno disuelto
• Interacción con cultivos iniciadores
Baja aw ambiente estable para
anhidrobiontes
Perspectivas
Mercado de probióticos 2018 = $ 48.38 billones (Expansión 6.9% - 2025)
Mercado competitivo Innovación
Base científica - tecnológica
¡GRACIAS!
