Universidad Nacional Mayor de San Marcos
Universidad del Perú. Decana de América
Facultad de Química e Ingeniería Química
Escuela Profesional de Química
ESPECTROFOTOMETRÍA UV VIS
ALUMNOS
Lucero Mereida Romaní Lara
19070009
Karen Sofia Arias Ccora
19070083
DOCENTE
Dr. Jorge Reinaldo Angulo Cornejo
CURSO
Síntesis y caracterización de compuestos inorgánicos
SECCIÓN / HORARIO
sección 1 / lunes y miércoles 18:00 – 20:00 horas
Lima, Perú
2025
UNMSM Espectrofotometría UV Vis E.P. Química
Resumen
El presente trabajo aborda los fundamentos teóricos y aspectos instrumentales de la espectrofotometría UV-
Visible, explicando sus principios básicos, el fenómeno de absorción molecular, la Ley de Beer-Lambert y
las transiciones electrónicas involucradas. Asimismo, se describen los componentes de un espectrofotómetro,
los tipos de equipos y su mantenimiento. Se desarrolla también la metodología experimental empleada, el
análisis e interpretación de espectros, así como aplicaciones específicas en distintas áreas como farmacia,
medio ambiente y bioquímica, discutiendo también ventajas, limitaciones y posibles mejoras de la técnica.
Palabras claves: Espectrofotometría UV-Visible, absorción molecular, Ley de Beer-Lambert, transiciones
electrónicas, espectrofotómetro, análisis cuantitativo, aplicaciones analíticas.
Introducción Esta ley presenta limitaciones, como desviaciones
a altas concentraciones, reacciones químicas en la
La espectroscopía UV-Visible es una técnica solución o efectos del solvente.
analítica basada en la absorción de radiación
electromagnética en las regiones ultravioleta (UV: Las transiciones electrónicas observadas incluyen:
190–400 nm) y visible (Vis: 400–800 nm) del • 𝑛 → 𝜋 ∗ : desde un orbital no enlazante a un
espectro. Cuando una molécula absorbe esta orbital π* (típico en compuestos con
energía, puede sufrir transiciones electrónicas, es heteroátomos).
decir, el salto de electrones desde un orbital de
• 𝜋 → 𝜋 ∗ : transición entre orbitales π y π*
menor energía a uno de mayor energía. Esta
(común en compuestos con dobles enlaces
interacción depende de la estructura electrónica de
conjugados).
la molécula, haciendo de esta técnica una
• 𝑛 → 𝜎 ∗ 𝑦 𝜎 → 𝜎 ∗ : menos comunes,
herramienta útil para identificar y cuantificar
requieren más energía (en la región UV
compuestos.
profunda).
La espectroscopía UV-Vis tiene aplicaciones en
Los cromóforos son los grupos funcionales
diversos campos como la química analítica,
responsables de la absorción UV-Vis (como C=C,
farmacología, control de calidad, bioquímica y
C=O, NO₂), mientras que los auxocromos (como –
ciencias ambientales, ya que permite el análisis
OH, –NH₂) pueden modificar la intensidad o
tanto cualitativo como cuantitativo de diversas
posición del pico de absorción.
sustancias.
El efecto del solvente, conocido como
Marco teórico solvatocromismo, puede provocar
desplazamientos en las longitudes de onda:
Absorción molecular
• Desplazamiento batocrómico (red shift):
El fenómeno de absorción de luz en esta técnica se
hacia longitudes de onda mayores.
explica mediante la Ley de Beer-Lambert, que
• Desplazamiento hipsocrómico (blue
establece que la absorbancia (A) es proporcional a
shift): hacia longitudes de onda menores.
la concentración (c) de la sustancia, a la longitud
del camino óptico (l) y a un coeficiente de • También se observan cambios en
absortividad molar (ε): intensidad:
Efecto hipercrómico: aumento de
𝐴= 𝜀×𝑐×𝑙 absorbancia.
Efecto hipocrómico: disminución de
Donde,
absorbancia.
• 𝐴: absorbancia
Instrumentación
• 𝜀: coeficiente de absortividad molar
(L. mol−1 . cm−1 ) Los componentes clave de un espectrofotómetro
• 𝑐: concentración de la solución (mol. L−1 ) UV-Vis son:
• 𝑙: longitud de celda (cm)
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• Una fuente de luz que genera una banda de forma que el haz del monocromador la
ancha de radiación electromagnética en atraviese. Se utilizan cubetas de vidrio, plástico o
todo el espectro UV-visible. cuarzo para muestras líquidas. Las muestras
• Un dispositivo de dispersión que separa la sólidas se mantienen en su posición mediante un
radiación de banda ancha en longitudes de soporte fijado a la base del compartimento. La luz
onda también puede extraerse del compartimento de
• Un área de muestra, donde la luz pasa a muestra mediante fibra óptica.
través de una muestra o se refleja en ella.
Detector
• Uno o más detectores para medir la
intensidad de la radiación reflejada o Un detector convierte la luz de la muestra en una
transmitida señal eléctrica. Al igual que la fuente de luz, debe
ofrecer una respuesta lineal en un amplio rango de
Otros componentes ópticos, como lentes, espejos o longitudes de onda, con bajo nivel de ruido y alta
fibra óptica, transmiten luz a través del sensibilidad.Cada detector tiene una sensibilidad y
instrumento. un rango de longitud de onda diferentes. En
Fuente de luz sistemas con varios detectores, el sistema
conmutará al detector correspondiente al rango de
Emite radiación continua en el rango UV-Vis. Se longitud de onda requerido para la medición. Los
usan lámparas de deuterio para UV y de tungsteno- detectores de espectrofotómetros UV-Vis incluyen
halógeno para el visible. tubos fotomultiplicadores (PMT) y diodos de
silicio (Si). Los fotodiodos de arseniuro de indio y
Monocromador
galio (InGaAs) y los detectores de sulfuro de
Todas las fuentes de luz producen una luz blanca plomo (PbS) se encuentran en sistemas UV-Vis-
de amplio espectro. Para reducir la luz a una banda NIR de alto rendimiento para mejorar la cobertura
de longitud de onda seleccionada, esta pasa a de longitud de onda o la sensibilidad.
través de un monocromador, que consta de:
Sistema de procesamiento de datos
• Una ranura de entrada
Computadora o sistema digital que registra, grafica
• Un dispositivo de dispersión, para
y analiza los resultados.
distribuir la luz en diferentes longitudes de
onda (como un arcoíris) y permitir la
selección de una banda designada de
longitudes de onda.
• Una rendija de salida por donde la luz de
las longitudes de onda designadas pasa a
través y sobre la muestra.
Un espectrofotómetro de un solo monocromador
se utiliza para espectroscopía de propósito general
y puede integrarse en un sistema óptico compacto.
Un monocromador doble se encuentra
habitualmente en instrumentos de alto
rendimiento.
Compartimiento de muestra
Contiene la cubeta con la muestra (normalmente de
Figura 1. Esquema del diseño interno de un
cuarzo o plástico).
espetrofotómetro UV-Vis que muestra los
El compartimento de muestra de un componentes principales.
espectrofotómetro UV-Vis suele ser una caja negra
Existen dos tipos de espectrofotómetros:
con tapa. El interior negro mate del compartimento
ayuda a absorber la luz difusa que pueda entrar. En
el compartimento de muestra, la muestra se coloca
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• Haz simple: la luz pasa directamente a Análisis de datos y obtención de
través de la muestra. Son más económicos, resultados
pero menos estables.
• Doble haz: divide la luz en dos caminos: Una vez obtenidos los espectros, se realiza la
uno pasa por la muestra y otro por un interpretación de los picos de absorbancia,
blanco, lo que permite una corrección determinando:
automática de variaciones en la intensidad
• Longitud de onda de máxima absorción
de la fuente. Ofrecen mayor precisión y
(λmáx).
estabilidad.
• Valor de absorbancia (A).
La calibración del equipo es fundamental para • Forma del pico (ancho, intensidad,
asegurar la exactitud de los resultados. Se realiza simetría).
usando estándares certificados, y el mantenimiento
incluye limpieza regular de las cubetas, Luego se construye una curva de calibración,
graficando la absorbancia en función de la
verificación de alineación óptica, y revisión de la
concentración de los estándares. A partir de esta
fuente de luz y detector.
recta, se calcula la concentración de analitos
Preparación de muestras desconocidos usando la ecuación de la línea
obtenida (generalmente por regresión lineal).
Para llevar a cabo un análisis mediante
espectrofotometría UV-Visible, es fundamental También se puede determinar el coeficiente de
una preparación adecuada de las muestras. Se debe absortividad molar (ε) mediante la Ley de Beer-
seleccionar un solvente transparente en el rango Lambert. El análisis puede ser:
UV-Vis (como agua, etanol, metanol o
• Cualitativo: identificar la sustancia por su
acetonitrilo), el cual no interfiera con la
λmáx.
absorbancia del analito.
• Cuantitativo: determinar concentraciones
Las celdas o cubetas utilizadas deben estar limpias, con precisión.
sin rayaduras y ser compatibles con el rango
espectral de interés: las cubetas de cuarzo se usan Aplicaciones
para el UV, mientras que las de plástico o vidrio La espectrofotometría UV-Visible tiene una gran
pueden emplearse en el visible. variedad de aplicaciones, entre ellas:
La preparación incluye: Farmacia y análisis de medicamentos:
• Disolución del analito en el solvente cuantificación de principios activos en
elegido. formulaciones (ej. paracetamol, ácido
acetilsalicílico).
• Preparación de soluciones estándar de
concentración conocida para construir una • Medio ambiente: determinación de
curva de calibración. nitratos, fosfatos o metales complejados.
• Preparación de muestras problema o • Alimentos: análisis de colorantes,
desconocidas, que serán analizadas bajo antioxidantes o compuestos fenólicos.
las mismas condiciones. • Bioquímica: medición de proteínas, ácidos
Las condiciones experimentales deben nucleicos, enzimas y cinética enzimática.
establecerse cuidadosamente: Entre sus ventajas, destacan su rapidez,
• Longitud de onda de máxima absorción simplicidad, bajo costo, sensibilidad adecuada y
(λmáx). versatilidad. Sin embargo, presenta limitaciones,
como baja especificidad (en mezclas complejas),
• Rango de escaneo (por ejemplo, 200–800
interferencias espectrales, o sensibilidad limitada
nm).
frente a trazas muy bajas.
• Número de repeticiones.
• Tiempo de integración o tiempo de
respuesta.
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En comparación con otras técnicas, como HPLC o Harvey, D. (2000). Modern analytical chemistry.
espectrometría de masas, la UV-Vis puede ser McGraw-Hill.
menos sensible o selectiva, pero mucho más
Lakowicz, J. R. (2006). Principles of fluorescence
accesible y útil en laboratorios rutinarios.
spectroscopy (3rd ed.). Springer.
Referencias bibliográficas Rouessac, F., & Rouessac, A. (2007). Chemical
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136. (9.ª ed.). Cengage Learning.
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40422001000100021
