UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE RECURSOS NATURALES RENOVABLES

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL

“Caracterización Edafoclimática En Huánuco de 1994 al 2003”

Integrantes Montoya Murga, Welmis

Morales Cierto, Leslie Martha

Puma Rodriguez, Aida Hamilet

Ramirez Macuyama, Josue Eduardo

Remigio Albino, Álvaro

Rojas Castillo, Janeth Angelica

Sánchez Serna, Yover Yomar

Trinidad Zambrano ,Rosaluz Katty

Curso : Microbiologia

Docente : Lopez Lopez, Cesar Samuel.

Ciclo : 2025 - I

Tingo María - 2025

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Contenido
I. INTRODUCCIÓN.....................................................................................................3
1.1. Objetivos.............................................................................................................4
Objetivo general:.......................................................................................................4
II. REVISIÓN LITERARIA..........................................................................................5
2.1. Calidad microbiológica del aire..........................................................................5
2.2. Métodos de muestreo microbiológico del aire....................................................5
2.2.1. Muestreo pasivo (gravimetría)....................................................................5
2.2.2. Muestreo activo...........................................................................................7
2.3. Medios de cultivo para bacterias y hongos.........................................................8
2.4. Importancia de la evaluación de la carga microbiana.........................................9
III. MATERIALES Y MÉTODOS.............................................................................10
3.1. Ubicación del muestreo....................................................................................10
3.2. Materiales empleados.......................................................................................10
3.3. Procedimiento experimental.............................................................................10
IV. RESULTADOS....................................................................................................12
4.1. Resultados del muestreo por gravimetría-burbujeo..........................................12
4.2. Resultados del muestreo con equipo automático y filtro HEPA......................13
V. DISCUSIÓN............................................................................................................16
VI. CONCLUSIÓN....................................................................................................17
VII. DISCUSIÓN.........................................................................................................18
VIII. ANEXOS..........................................................................................................19
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.................................................................22
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I. INTRODUCCIÓN

El aire que respiramos, aunque aparentemente limpio, está compuesto por una

variedad de microorganismos como bacterias, hongos, esporas y levaduras que se

mantienen suspendidos en forma de partículas microscópicas. Algunos de estos

organismos pueden representar un riesgo para la salud, especialmente en ambientes con

ventilación deficiente o aglomeraciones humanas. Por ello, resulta esencial evaluar la

calidad microbiológica del aire, especialmente en espacios cerrados.

Este estudio se enfocó en identificar la presencia de microorganismos en el aire

utilizando dos enfoques de recolección distintos. El primero, un método tradicional

denominado gravimetría-burbujeo, que consiste en dejar expuestas placas con medios

de cultivo para que los microorganismos en el aire decanten sobre ellas. El segundo,

más sofisticado, emplea un sistema automatizado con filtro HEPA, capaz de capturar

eficazmente partículas en suspensión mediante aspiración.

La comparación de ambas metodologías permite comprender mejor la carga

microbiana del aire en distintos entornos, proporcionando datos relevantes sobre la

calidad ambiental y sus implicancias en la salud pública.

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I.1. Objetivos

Objetivo general:

Analizar la carga microbiana presente en el aire de un entorno determinado

mediante el uso de técnicas microbiológicas de recolección: muestreo pasivo por

sedimentación y muestreo activo con filtro HEPA, con el propósito de evaluar la calidad

del aire y sus posibles efectos sobre la salud.

Objetivos específicos:

 Implementar el método de muestreo por sedimentación (gravimetría-

burbujeo) para capturar microorganismos suspendidos, utilizando placas

con medios de cultivo específicos.

 Utilizar un sistema automatizado con filtro HEPA que permita aspirar el

aire de manera eficiente, atrapando partículas biológicas.

 Analizar las colonias microbianas que crecen en las placas, evaluando su

número, morfología y tipo.

 Comparar la efectividad de ambos métodos en la detección de

microorganismos presentes en el ambiente.

 Promover la reflexión sobre la importancia del monitoreo microbiológico

del aire y su impacto en la prevención de enfermedades en espacios

interiores.
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II. REVISIÓN LITERARIA

II.1. Calidad microbiológica del aire

El aire es un medio de transporte para numerosos microorganismos, incluidos

bacterias, hongos y esporas, que pueden afectar la salud humana y la calidad ambiental

(Álvarez et al., 2020). Estos bioaerosoles provienen de suelos, plantas, animales,

personas o polvo, y su concentración depende de factores como la ventilación,

temperatura, humedad y densidad de ocupación de los espacios (Moreno et al., 2022).

Por ello, monitorear la calidad microbiológica del aire es esencial en entornos

hospitalarios, industriales y educativos para controlar riesgos y cumplir normativas

ambientales.

II.2. Métodos de muestreo microbiológico del aire

Existen diversas técnicas para la detección y cuantificación de microorganismos

en el aire. Las más comunes son los métodos pasivos y activos.

II.2.1. Muestreo pasivo (gravimetría)

El método gravimétrico o de sedimentación consiste en exponer medios de

cultivo durante un tiempo determinado para que las partículas suspendidas en el aire se

depositen por gravedad. Es una técnica sencilla y económica, pero limitada para

cuantificar con precisión y estandarizar los resultados, ya que depende de factores

ambientales y no asegura un volumen conocido de aire muestreado (WHO, 2021).

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Figura 1.

Esquema de análisis gravimétrico indirecto

Nota. El esquema muestra las etapas principales para determinar la cantidad de un

analito en una muestra mediante métodos gravimétricos indirectos, que incluyen

disolución, formación de precipitado, calentamiento, pesaje y cálculo de composición.

En la práctica realizada, se empleó una variación conocida como gravimetría-

burbujeo, donde el aire se aspira con una jeringa estéril e inyecta en un medio líquido

(caldo peptona), lo que permite recuperar una mayor cantidad de microorganismos y

realizar siembras posteriores en medios sólidos.

II.2.2. Muestreo activo

Los métodos activos implican aspirar un volumen conocido de aire a través de

un sistema que impacta las partículas sobre un medio de cultivo o las filtra. Estas

técnicas son más precisas, reproducibles y permiten cuantificar los microorganismos por

unidad de volumen de aire.

En la práctica también se utilizó un muestreador con filtro HEPA, que capta

partículas y microorganismos en un filtro de alta eficiencia para su posterior cultivo.

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Este tipo de equipos suele emplearse en ambientes controlados donde es fundamental

asegurar la calidad del aire, como salas blancas, laboratorios y hospitales (ISO 14644-

1:2015).

Figura 2.

Muestreador de aire microbiano ActiveCount100

Nota. El equipo ActiveCount100 de Lighthouse Worldwide Solutions permite la

captura precisa de microorganismos en el aire mediante muestreo activo, controlando el

volumen de aire aspirado y asegurando resultados confiables para la evaluación

microbiológica de ambientes.

Entre los dispositivos activos destacan equipos como el Muestreador de aire

microbiano ActiveCount100 de Lighthouse Worldwide Solutions. Este muestreador

portátil está diseñado para monitorear la calidad microbiológica del aire en ambientes

críticos, ofreciendo alta precisión y portabilidad. Tiene un flujo de 100 L/min, permite

seleccionar modos de muestreo (continuo, periódico, por gas), registra datos por usuario

y ubicación, y exporta los resultados en formato .csv. La versión ActiveCount100H

añade un filtro HEPA en el escape para minimizar el riesgo de recontaminación del

ambiente, cumpliendo con la normativa EN17141. Su diseño permite desinfección y

esterilización de las partes en contacto con el aire y el medio de cultivo, y una batería
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recargable le otorga autonomía por varias horas de trabajo (Lighthouse Worldwide

Solutions, 2024).

Este tipo de muestreadores supera ampliamente en precisión a los métodos

manuales como jeringas o placas de sedimentación, ya que asegura volúmenes exactos y

estandariza las condiciones de captura, lo cual es clave para obtener resultados

confiables (Forbes et al., 2018).

II.3. Medios de cultivo para bacterias y hongos

Los medios utilizados para el crecimiento y diferenciación de los

microorganismos también son fundamentales en la evaluación. El medio CLED

(Cystine-Lactose-Electrolyte-Deficient) es adecuado para el aislamiento y

diferenciación de bacterias, especialmente del tracto urinario, pero también es útil para

muestras ambientales (Atlas, 2021). Por su parte, el agar Sabouraud, con su bajo pH y

alta concentración de dextrosa, es el medio preferido para el crecimiento de hongos y

levaduras ambientales (Forbes et al., 2018).

Figura 3.

Crecimiento bacteriano en agar CLED

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Nota. El agar CLED (Cystine-Lactose-Electrolyte-Deficient) es un medio diferencial

utilizado para aislar y diferenciar bacterias, mostrando distintas morfologías y colores

según las especies presentes.

II.4. Importancia de la evaluación de la carga microbiana

Monitorear la presencia de microorganismos en el aire permite prevenir

infecciones, controlar la calidad del ambiente y evaluar la eficacia de sistemas de

ventilación y filtración. La comparación entre métodos pasivos y activos demuestra que

los métodos activos proporcionan datos más precisos y permiten tomar decisiones más

fundamentadas sobre las medidas de control ambiental necesarias (Moreno et al., 2022).

III. MATERIALES Y MÉTODOS

III.1. Ubicación del muestreo

Las actividades experimentales se llevaron a cabo en el laboratorio de

Microscopía de la Universidad Nacional Agraria de la Selva.

III.2. Materiales empleados

Materiales básicos: Se utilizaron instrumentos esterilizados

 Matraces

 Jeringas

 Placas Petri

 Pipeta automática

 Mechero

Equipos: Se contó con un muestreador de aire automatizado equipado con un filtro

HEPA, adecuado para capturar eficazmente microorganismos presentes en suspensión.

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Medios de cultivo: Se utilizaron medios selectivos como el caldo peptona (para

bacterias generales), CLED (para diferenciación bacteriana) y agar Sabouraud (para

hongos y levaduras).

III.3. Procedimiento experimental

Muestreo por gravimetría-burbujeo: Consistió en recolectar aproximadamente 1 L de

aire mediante múltiples aspiraciones con jeringas estériles, inyectando el contenido en

un matraz con caldo peptona al 2 %. Luego, la mezcla se incubó a 37 °C por 24 horas.

Posteriormente, se extrajeron alícuotas de 100 µL que fueron sembradas en placas con

medios CLED y Sabouraud, las cuales se incubaron en condiciones específicas para

observar el crecimiento microbiano.

Muestreo con filtro HEPA: Se utilizó un dispositivo automático que permitió hacer

pasar aire por placas con medio CLED y Sabouraud durante aproximadamente 2

minutos por placa. Estas fueron luego incubadas (a 37 °C por 24 horas para bacterias y a

temperatura ambiente por 3 a 5 días para hongos) y se realizó el conteo de colonias.

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IV. RESULTADOS

IV.1. Resultados del muestreo por gravimetría-burbujeo

En la Tabla 1 se detalla el procedimiento de recolección del aire ambiental,

llevado a cabo en un entorno abierto frente a la Facultad de Sistemas, mediante la

técnica de muestreo por gravimetría-burbujeo. Se efectuaron 20 repeticiones, aspirando

50 cc de aire en cada una con una jeringa estéril, alcanzando así un volumen total de

1000 cc (1 litro).

Tabla 1: Volumen total de aire recolectado mediante jeringas estériles.

Repetición Volumen (cc)

1 - 20 50 (cada una)

Total 1000

Fuente elaboración propia

Cada fracción de aire recolectada fue inyectada cuidadosamente en un matraz

que contenía caldo peptona al 2 %, el cual fue incubado a 37 °C durante 24 horas para

favorecer el crecimiento bacteriano.

Tabla 2: Colonias formadas en el baño UNAS y laboratorio de microbiología

colonias
Volumen
Baño 8 1000cc
laboratorio 110 100ml
Fuente elaboración propia

Al obtener el número de colonia por cada 100ml de volumen, se utilizó la Tabla

de conversión de Feller para ver el número de unidades formadas de colonia (UFC)
contada en placa de Petri de 90mm de agar después de la incubación (R)

Tabla 3: Números más probables de microorganismos

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Baño Laboratorio microbiológico

PAGR 8 137
Fuente elaboración propia

PAGR: Numero más probable (NMP) de microorganismos en el volumen del aire

muestreado.

IV.2. Resultados del muestreo con equipo automático y filtro HEPA

El segundo método consistió en el uso de un muestreador microbiano automático

con filtro HEPA (marca Lighthouse), instalado en una oficina cerrada con ventilación

limitada. Se aspiró aire de forma controlada durante aproximadamente 2 minutos por

cada placa, utilizando medios CLED y agar Sabouraud.

Las condiciones de incubación se indican en la siguiente tabla:

Tabla 4: Condiciones de incubación para los medios de cultivo.

Medio de cultivo Temperatura Tiempo de incubación

CLED 37 °C 24 horas

Agar Sabouraud Temperatura amb. 72 a 90 horas

Elaboración propia

Luego del tiempo estimado, se observaron las placas, obteniendo los siguientes

resultados:

Imagen 9. Imagen 10.

Placa sembrada CLED. Placa sembrada A. Sabouraud.

Una vez

finalizado el

periodo de
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incubación, se procedió al recuento de unidades formadoras de colonias (UFC),

obteniéndose los siguientes resultados:

Tabla 5: Cuantificación de microorganismos tras incubación

Medio de Tipo de microorganismo Resultado observado Observación

cultivo
CLED Bacterias incontables incontables

Agar Sabouraud Hongos incontable incontables

Durante el muestreo realizado mediante la técnica de gravimetría-burbujeo, se

observó que las placas inoculadas con medio CLED presentaban un crecimiento

bacteriano tan denso que no fue posible realizar un conteo individual de las colonias

formadas. Las unidades formadoras de colonias (UFC) se encontraban distribuidas de

manera confluente en la superficie del medio, lo que impedía diferenciar los límites

entre una colonia y otra. Debido a esta condición de crecimiento masivo e incontable,

no fue factible aplicar la tabla de corrección de Feller, ya que esta requiere un recuento

numérico claro y delimitado para su correcta utilización. Esta situación sugiere una alta

carga microbiana en el ambiente abierto muestreado, posiblemente influenciada por

factores como la circulación de personas, la presencia de polvo y la exposición directa

al entorno externo.

Tabla 6. Colonias formadas en el baño UNAS y laboratorio de microbiología

Colonias
Volumen
Baño 8 1000 cc
Laboratorio 110 100 ml
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Al obtener el número de colonia por cada 100ml de volumen, se utilizó la Tabla de

conversión de Feller para ver el número de unidades formadas de colonia (UFC)
contada en placa de Petri de 90mm de agar después de la incubación (R)

Tabla 7. Números más probables de microorganismos

Laboratorio
Baño microbiológico
PAGR 8 137

PAGR: Numero más probable (NMP) de microorganismos en el volumen del aire

muestreado
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V. DISCUSIÓN

En la Tabla 1, se observa una notable diferencia entre las colonias desarrolladas

en cada ambiente: mientras que en el baño se contaron 8 colonias, en el laboratorio de

microbiología se detectaron 110 colonias. Esto se traduce, según la Tabla 2, en un NMP

de 8 UFC/1000 cc para el baño y 137 UFC/100 mil para el laboratorio.

Contrario a lo esperado, el laboratorio de microbiología, que debería tener

mayores controles sanitarios y un ambiente más estéril, presentó una carga microbiana

considerablemente mayor. Esta situación podría explicarse por varios factores:

 Mayor afluencia de personas y manipulación constante de materiales biológicos

en el laboratorio, lo que genera mayor dispersión de microorganismos.

 Posibles fallas en la ventilación o en el sistema de extracción de aire del

laboratorio.

 El baño podría contar con una limpieza reciente o sistemas de desinfección más

frecuentes, lo cual reduciría momentáneamente la carga microbiana en el

ambiente.

VI. CONCLUSIÓN

El análisis microbiológico del aire mostró que el laboratorio de microbiología

presenta una mayor concentración de microorganismos viables en comparación con el

baño del área UNAS, con 137 y 8 de aire respectivamente. Estos resultados revelan la

importancia de implementar medidas más estrictas de control ambiental en espacios

destinados a trabajos microbiológicos, como mejoras en la ventilación, protocolos de

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limpieza más eficaces y monitoreos periódicos de bioseguridad. También se recomienda

complementar este tipo de estudios con métodos activos de muestreo de aire para

obtener datos más representativos de la calidad microbiológica ambiental.

VII. DISCUSIÓN

Al analizar los hallazgos que logramos, pude observar diferencias notables entre

los entornos muestreados y entre las metodologías que aplicamos. En el caso del

muestreo mediante gravimetría-burbujeo, realizado en frente de la Facultad de Sistemas

(servicio higiénico - caballeros), el crecimiento bacteriano en el medio CLED fue tan

elevado que no pudo ser contabilizado. Esto llevó a pensar que, debido a ser una zona al

aire libre, hay una mayor cantidad de bacterias en circulación, posiblemente por la

continua afluencia de personas, polvo y otros factores ambientales que favorecen la

dispersión de microorganismos. Sin embargo, en el agar Sabouraud no se detectó

presencia de hongos, lo que podría deberse a que, durante el muestreo, las condiciones

ambientales no favorecieron su captura o desarrollo.

En contraste, cuando utilizamos el muestreador automático con filtro HEPA en

un ambiente cerrado (laboratorio de microbiología), el número de bacterias fue mucho

más controlado y preciso. Ahí se identificaron 110 colonias bacterianas, que al utilizar

la tabla de Feller correspondieron a 137 microorganismos por litro de aire. Este dato fue

considerablemente menor que el registrado en el espacio del servicio higiénico de

caballeros, lo que confirma que los entornos cerrados suelen tener menos carga

bacteriana debido a su mayor protección contra factores externos. Nuevamente, también

se observó la ausencia de crecimiento de hongos en el agar Sabouraud.

Finalmente, observé que el método de gravimetría-burbujeo proporciona una

visión general sobre la presencia de microorganismos, pero no permite un recuento

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preciso, mientras que el muestreador HEPA brinda resultados más específicos y

confiables. Esto demuestra que el tipo de entorno y la técnica utilizada afectan

significativamente los resultados, enfatizando la relevancia de seleccionar

adecuadamente el método según lo que se quiera analizar.

VIII. ANEXOS

Anexo A: Imágenes de las Placas de Cultivo

Imagen 9: Placa sembrada con medio CLED

Descripción:

La placa muestra un crecimiento bacteriano denso e incontable, con colonias

distribuidas de manera confluente en la superficie del medio. La imagen fue tomada tras

24 horas de incubación a 37 °C, utilizando el método de muestreo con filtro HEPA en

una oficina cerrada con ventilación limitada.

Fuente: Elaboración propia.

Imagen 10: Placa sembrada con agar Sabouraud

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Descripción:

La placa exhibe un crecimiento de hongos incontable, con colonias difusas y

extensas tras 72 a 90 horas de incubación a temperatura ambiente. El muestreo se

realizó con el mismo equipo automatizado con filtro HEPA en las mismas condiciones.

Fuente: Elaboración propia.

Imagen 11: Placa del muestreo por gravimetría-burbujeo

Descripción:

La placa muestra colonias bacterianas y posiblemente fúngicas, recolectadas

mediante el método de gravimetría-burbujeo tras la incubación de 100 µL de alícuotas

en medio CLED, con un volumen total de aire muestreado de 1000 cc. La imagen refleja

el crecimiento observado después de 24 horas a 37 °C.

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Fuente: Elaboración propia.

IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Álvarez, J., Díaz, S., & López, R. (2020). Microbiología del aire y su impacto

en la salud pública. Revista de Salud Ambiental, 20(3), 205–214.

[Link]

2. Atlas, R. M. (2021). Microbiology: Fundamentals and Applications. 12th ed.

Pearson.

3. Forbes, B. A., Sahm, D. F., & Weissfeld, A. S. (2018). Bailey & Scott's

Diagnostic Microbiology. 14th ed. Elsevier.

4. ISO 14644-1:2015. (2015). Cleanrooms and associated controlled environments

— Part 1: Classification of air cleanliness by particle concentration.

International Organization for Standardization.

5. Lighthouse Worldwide Solutions. (2024). ActiveCount100 Microbial Air

Sampler. [Link]

samplers/

6. Moreno, P., Jiménez, E., & Torres, G. (2022). Evaluación de la calidad

microbiológica del aire en ambientes hospitalarios. Revista Médica, 28(2),

123–131.

7. WHO. (2021). Guidelines on air quality: particulate matter, ozone, nitrogen

dioxide, and sulfur dioxide. World Health Organization.

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