Reparación del DNA.
ESTABILIDAD GENÓMICA:
1. Los mecanismos de duplicación cromosómica aseguran que los patrones de histonas
se puedan heredar
2. Para que un organismo sobreviva necesita de esta estabilidad para que no ocurra
mutaciones por fallas del DNA (mayor mortalidad en genes)
3. ¿Qué se necesita? Mecanismo fiel y seguro de replicación del DNA y eficientes para
su reparación de múltiples lesiones (son continuas)
4. Células germinales: Perpetúa especie
5. Células somáticas: Previene el cáncer
6. Una célula debe ser regulada por un mitógeno para tener estabilidad genómica
DETECCIÓN Y REPARACIÓN DE ERRORES DURANTE REPLICACIÓN:
1. DNA polimerasa tiene propia función correctora: Es el primer mecanismo que evita
mutaciones (los otros solo reparan lesiones y previenen posibles daños).
2. Detecta un nucleótido incorrecto y lo elimina a través de la prueba de lectura
exonucleotídica 3´a 5´ por otro sitio activo (DNA pol delta y épsilon) ¿Cómo ocurre
esto? La DNA polimerasa está agregando los nucleótidos, es aquí donde la hebra
sintetizada se desaparea y entra en el sitio de edición que remueve la base por esta
actividad exonucleasa 3´a 5´ y continúa la síntesis de 5´a 3´
3. Errores por tautomería: Las bases se aparean anómalamente, por ejemplo, se
cambia una purina por otra y una pirimidina por otra siendo causas frecuentes de
errores en la replicación (predominan formas amino sobre el imino en el N y cetónica
sobre enólica en el O). ¡Este error se puede eliminar por la escisión de bases!
DAÑOS ESPONTÁNEOS:
Miles de cambios son producidos al azar en el DNA por calor, accidentes metabólicos,
radiaciones y exposición a sustancias ambientales, sin embargo, son temporales porque el
proceso de reparación del DNA los corrige inmediatamente (0,02 se acumulan como
mutaciones permanentes):
Nucleótidos dañados:
a) C a A desanimadas
b) Bases oxidadas o alquiladas
c) Bases con anillos abiertos
d) Bases con alteraciones en dobles enlaces de carbono
Daño por oxidación
a) Radiación UV: Causa dímeros de timina-timina o timina-citosina entre
nucleótidos adyacentes (la célula detecta estos dímeros, saca los nucleótidos por
un corte de los enlaces fosfodiéster con ayuda de endonucleasas, lo rellena con
DNA polimerasa y repara con DNA ligasa)
Ataque hidrolítico:
Son reacciones químicas que con mayor frecuencia causan daño serio al DNA. Es
causado por la acción del agua sobre enlaces covalentes del DNA. Estas ocurren en el
DNA doble hebra y no rompen los enlaces fosfodiéster del esqueleto y si no se
corrige, pueden resultar en una deleción de una o más pares de bases o a una
sustitución del nucleótido durante la replicación:
a) Depuraciones: Remueve Guaninas o Adeninas por rotura de enlace glucosídico
que une a la base de azúcar de la columna vertebral del DNA
b) Deaminaciones: Conversión de Citosina a Uracilo
Metilaciones:
Se añade un grupo metilo (-CH3) a una base nitrogenada. Si ocurre en sitios
incorrectos, puede silenciar genes importantes como supresores de tumores o
activar oncogenes, y si es una metilación indebida, puede inducir errores al añadir
bases incorrectas o provocar fallos en el reconocimiento de las secuencias genéticas
(mutaciones permanentes)
SISTEMAS DE REPARACIÓN DEL DNA:
Es importante saber que la doble hebra favorece la reparación del DNA ya que tiene 2
copias de la información genética, por ende, si una se daña, la otra se puede utilizar como
templado para la reparación.
Las 2 primeras contiene 3 etapas para reparar el DNA: La primera es el reconocimiento del
error de la hebra recién sintetizada, la segunda es la escisión de la región que contiene el
desajuste y la tercera es la resíntesis del segmento escindido utilizando la hebra vieja como
templado:
1. Reparación por escisión de bases (BER)
a) Reconocimiento del daño: La enzima ADN glicasa detecta la base dañada y corta
el enlace glucosídico entre la base y la desoxirribosa (azúcar-fosfato), dejando un
sitio vacío
b) Escisión del sitio vacío: Una endonucleasa de AP (apurínica/apirimidínica) corta
la cadena de DNA en este sitio
c) Síntesis y sellado: Una DNA polimerasa B + dNTPs rellena el espacio vacío
insertando la base correcta, y, por último, la DNA ligasa sella la ruptura en el
azúcar-fosfato
2. Reparación por escisión de nucleótidos (NER): Repara grandes daños por causa de
compuestos químicos que distorsionan la doble hélice, daño en la reacción covalente
del DNA con hidrocarburos (benzopirenos cancerígenos del tabaco) o por dímeros de
pirimidinas (T-T,T-C,C-C) producidos por radiación UV.
a) Reconocimiento del daño: Un complejo de enzimas detectan la distorsión en la
doble hélice.
2
b) Escisión del fragmento dañado: Nucleasas hacen cortes en ambos lados del
segmento dañado (24-32 nucleótidos), helicasa desarma la doble hélice y lo
eliminan
c) Relleno del hueco: La DNA polimerasa B + dNTPs sintetiza una nueva cadena de
DNA para reemplazar el fragmento eliminado
d) Sellado: La DNA ligasa une los extremos recién sintetizados con la cadena de
DNA original
3. Reparación hebra dirigida de pares erróneos (Strand directed mismatch repair): Es
un proceso celular que corrige errores de apareamiento de bases durante la
replicación, estos errores de la DNA polimerasa sobrepasa su actividad exonucleasa.
a) Se debe identificar cuál de las 2 hebras es la incorrecta, y en eucariotas se cree
que la hebra recién sintetizada es reconocida por la presencia de fragmento de
Okazaki (se utiliza como templado la hebra parental)
b) Escisión: Proteína MutS une las bases mal apareadas, recluta la proteína MutL y
rastrea un espacio y la abrazadera (PCNA) en el DNA cercano. MutL se activa y
empieza a cortar el DNA hasta el punto mal apareado.
c) La DNA pol delta llena el espacio y la DNA ligasa sella.
4. DNA polimerasas de Trans-lesión en reparaciones de emergencias:
Son polimerasas con mecanismo de emergencia, son versátiles en la reparación
(solución temporal) pero menos seguras (menor fidelidad). Carecen de la actividad
exonucleotídica de prueba de lectura y son menos discriminatorias del nucleótido
que incorporan ( agregan pocos nucleótidos) TIENEN RIESGO PARA LA CÉLULA EN LA
PRODUCCIÓN DE MUTACIONES POR SUSTITUCIONES DE BASES O DELECIONES QUE
SE ACUMULAN EN LOS GENÓMAS.
5. Reparación de rompimientos de la doble hebra (DBR) y de cortes de la doble hélice
con lesiones severas: Es un daño muy peligroso porque no cuenta con una hebra
templado para la reparación. SI ESTA NO SE REPARA LLEVARÍA A RUPTURA DE
CROMOSOMAS EN PEQUEÑOS FRAGMENTOS Y PÉRDIDA DE GENES DURANTE
DIVISIÓN CELULAR
a) Recombinación No homóloga (fase G1): Se activa cuando se pierden algunos
nucleótidos (mutación por deleciones), la proteína Ku (dímero) reconoce y
captura los extremos del quiebre del DNA, y otras proteínas mantienen juntos los
extremos y remueven cualquier base dañada antes de su unión, por último, se
reanuda la síntesis y el DNA ligasa sella (los telómeros evitan que esto ocurra
entre cromosomas sin daño y un cromosoma fragmentado puede ligarse a con
otro)
b) Recombinación homóloga (Fase S/G2): Es un método preferente para reparar
rupturas de la doble hebra que se producen post replicación cuando las hebras
hermanas están cercanos (reparación de alta fidelidad). Los complejos de
proteínas reconocen los extremos separados y hacen la dinámica de invadir el
DNA hermano y utilizan esta secuencia como plantilla para sintetizar el DNA
perdido y restaurar la secuencia correcta (se entrecruzan, aparean, intercambian
hebras)
