UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO
FACULTAD DE INGENIERIA PESQUERA Y DE ALIMENTOS
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA PESQUERA
TEMA:
DETERMINACIÓN SIMULTANEA DE COMPUESTOS POR ESPECTROFOTOMETRÍA
UV - VIS
ASIGNATURA:
ANALISIS DE PRODUCTOS PESQUEROS POR INSTRUMENTACIÓN
PROFESOR:
Ing. Mg. Ricardo Rodríguez Vílchez
ALUMNOS:
UMPIRE PORTOCARRERO, RICARDO
AÑO:
2025
I. INTRODUCCIÓN
La espectrofotometría es un método científico utilizado para medir cuánta luz absorbe una
sustancia química, midiendo la intensidad de la luz cuando un haz luminoso pasa a través de la
solución muestra, basándose en la Ley de Beer-Lambert. Esta medición también puede
usarse para medir la cantidad de un producto químico conocido en una sustancia ya sea para 1
componente como para varios. Frecuentemente es preciso analizar mezclas de dos o más
sustancias.
A veces es posible hacerlo a través de determinaciones espectrofotométricas simultáneas, en
lugar de efectuar las separaciones físicas o químicas necesarias para analizar los componentes
puros por separado. Se conocen varios métodos para determinar las concentraciones de sistemas
con dos o más compuestos, el más conocido requiere establecer los picos de absorción de cada
componente y cada uno de ellos se encuentre prácticamente libre de absorciones de los otros
compuestos, además se debe considerar que las absorbancias de cada uno son aditivas.
Existe otro método para sistemas en los cuales las curvas de absorción se traslapan, de manera
que requiere un barrido de longitudes de onda. En este caso se debe utilizar la metodología
propuesta por Blanco et al. (989) en el cual se establece la correlación lineal que permite con
base en la pendiente y la ordenada al origen conocer las concentraciones de mezclas binarias.
II. OBJETIVOS
Mostrar el empleo de la espectrofotometría para cuantificar simultáneamente 2 sustancias en
una mezcla que presentan diferentes espectros de Absorción.
El método consiste en efectuar mediciones a dos longitudes de onda, donde la relación de las
absortividades molares, sean máximas y formular un sistema de 2 o más ecuaciones
simultáneas.
III. FUNDAMENTO TEORICO
La espectrofotometría y la Ley de Beer – Lambert permiten la cuantificación simultánea de
compuestos. Frecuentemente es preciso analizar mezclas de dos o más sustancias. A veces es
posible analizar determinaciones simultáneas. Se requiere disponer de picos de absorción para
cada componente y que se encuentren libres de absorciones por los otros componentes. Además,
se considera que las absorbancias de cada uno de los componentes son aditivas.
Conociendo las absortividades molares de cada elemento y a cada longitud de onda podremos
calcular las concentraciones de una mezcla problema de ambos componentes al medir la
Absorbancia. Nos basaremos en la siguiente ecuación:
1 1 1
𝐴𝐴𝜆𝜆 = 𝜀𝜀 𝜆𝜆 ∗ 𝑏𝑏𝐶𝐶𝑀𝑀 + 𝜀𝜀 𝜆𝜆 ∗ 𝑏𝑏𝐶𝐶𝑁𝑁
2 2 2
𝐴𝐴𝜆𝜆 = 𝜀𝜀 𝜆𝜆 ∗ 𝑏𝑏𝐶𝐶𝑀𝑀 + 𝜀𝜀 𝜆𝜆 ∗ 𝑏𝑏𝐶𝐶𝑁𝑁
VI. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS
Materiales Reactivos
1. 12 Tubos de ensayo de vidrio Pyrex. 1. Solución de 0.2M de CoCl2 100 ml.
2. 03 Pipetas de 5 ml. 2. Solución de 0.2M de NiCl2 100 ml.
3. 03 Pipetas de 10 ml. 3. HCl 1M 250 ml.
4. 02 gradillas 4. KMnO4 (3mM)
5. Piseta y Bagueta. 5. K2Cr2O7 (1 mM)
6. Cubetas porta muestra de vidrio. 6. H2SO4 (0.5 M)
Equipo
Espectrofotómetro Perkin Elmer Lambda 3B UV Visible.
4 celdas portan muestras de vidrio.
V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Curva de Calibración:
1. Etiquetar 5 tubos de ensayos limpios y secos, 1-5.
2. Se preparan 2 series de disoluciones patrones de Ni+2 y Co+2 de los siguientes volúmenes:
2.0 – 3.0 – 4.0 – 5.0 – 6.0 ml y completar con HCl 1NM hasta 10 ml.
3. Una muestra en blanco será, llenando una cubeta hasta ¾ de su capacidad con HCl 1M.
4. Leer las disoluciones a diferentes longitudes de onda, a 720 nm para Ni+2 y 510 nm para
Co+2 en la mezcla.
5. Con las series de disoluciones preparadas, hallar la pendiente que será, según la Ley de Beer
Lambert, la absortividad molar ε a 2 diferentes longitudes de onda.
6. Las muestras serán leidas a las longitudes de onda de Ni y Co. Utilizar la ecuación para la
matriz de 2 sustancias (mezcla).
𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺 𝑪𝑪𝑪𝑪+𝟐𝟐
Para λ = 500-550
para determinar ε (pendiente)
λ A %T
500 0.65 22.39
510 0.82 15.14
520 0.9 12.59
530 0.75 17.78
540 0.55 28.18
550 0.4 39.81
λ A %T
500 0.63 22.38 λ A %T
510 0.81 15.15 500 0.64 14.16666667
520 0.89 12.6
530 0.74 17.77
510 0.816666667 13.63333333
540 0.54 28.19 520 0.893333333 16.33333333
550 0.41 39.8 530 0.743333333 23
540 0.546666667 34.26666667
λ A %T 550 0.403333333 48.26666667
500 0.64 22.39
510 0.82 15.14
520 0.89 12.61
530 0.74 17.78
540 0.55 28.18
550 0.4 39.82
Hallado ε (pendiente)
Para determinar la pendiente ε (E), se debe realizar un ajuste lineal de los
datos de la forma:
A=a+b⋅λ
Donde:
• A es la absorbancia,
• λ es la longitud de onda,
• b es la pendiente, que en este caso corresponde a ε.
A
1
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
y = -0.0061x + 3.8889
0.4
0.3
0.2
0.1
0
490 500 510 520 530 540 550 560
El valor de la pendiente ε calculado a partir de tus datos es:
ε =−0.0061
%T
60.000
50.000
y = 0.683x - 333.66
40.000
30.000
20.000
10.000
0.000
490 500 510 520 530 540 550 560
Ley de Beer-Lambert:
A= ε⋅l⋅C
𝜺𝜺 = 1.72 𝑥𝑥 105 𝐿𝐿/(𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚 ∗ 𝑐𝑐𝑐𝑐)(valor estimado para Co²⁺)
l=1cm
Longitud de onda (nm) Absorbancia (A) Concentración (mol/L)
500 0.64 14.16666667
510 0.816666667 13.63333333
520 0.893333333 16.33333333
530 0.743333333 23
540 0.546666667 34.26666667
550 0.403333333 48.26666667
Claro, usando la fórmula para convertir mol/L a ppm para
Cobalto (Co²⁺):
Sustancia: Cobalto (Co²⁺)
Masa molar (aprox.): 58.93 g/mol
ppm=Cmol/L×58930 =
Concentración (ppm) Absorbancia (A)
0.22 0.640
0.28 0.817
0.31 0.893
0.25 0.743
0.19 0.547
0.14 0.403
Absorbancia (A)
1.000
0.900 y = 2.9187x - 1E-15
0.800
0.700
0.600
0.500
0.400
0.300
0.200
0.100
0.000
0.10 0.15 0.20 0.25 0.30
ppm
La pendiente 2.9187 indica que por cada incremento de 1 mol/L en concentración, la
absorbancia aumenta aproximadamente en 2.9187 unidades.
𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺 𝑵𝑵𝑵𝑵+𝟐𝟐
Para λ = 650-750
λ A %T
650 0.05 89.13
660 0.1 79.43
670 0.2 63.1
680 0.35 44.67
690 0.5 31.62
700 0.65 22.39
710 0.7 19.95
720 0.6 25.12
730 0.45 35.48
740 0.3 50.12
750 0.15 70.79
λ A %T
650 0.04666667 89.1266667
660 0.10666667 79.42
λ A %T 670 0.19333333 63.1
650 0.04 89.12
660 0.11 79.42
680 0.34666667 44.67
670 0.19 63.15 690 0.49333333 31.6166667
680 0.34 44.68 700 0.64333333 22.3933333
690 0.5 31.6 710 0.7 19.9466667
700 0.64 22.4
710 0.69 19.94
720 0.59666667 25.11
720 0.6 25.11 730 0.44333333 35.4666667
730 0.44 35.45 740 0.3 50.1266667
740 0.31 50.14 750 0.15 70.79
750 0.14 70.8
λ A %T
650 0.05 89.13
660 0.11 79.41
670 0.19 63.05
680 0.35 44.66
690 0.48 31.63
700 0.64 22.39
710 0.71 19.95
720 0.59 25.1
730 0.44 35.47
740 0.29 50.12
750 0.16 70.78
A
0.8
0.7 y = 0.0025x - 1.3824
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
640 660 680 700 720 740 760
El valor de la pendiente ε calculado a partir de tus datos es:
ε =0.0025
%T
100
90
80
70
60
y = -0.3114x + 266.33
50
40
30
20
10
0
640 660 680 700 720 740 760
λ
El valor de la pendiente ε calculado a partir de tus datos es:
ε =-0.3114
Ley de Beer-Lambert:
A= ε⋅l⋅C
𝜺𝜺 = 3.8 𝑥𝑥 105 𝐿𝐿/(𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚 ∗ 𝑐𝑐𝑐𝑐)(valor estimado para Ni²⁺)
l=1cm
Longitud de onda (nm) Absorbancia (A) Concentración (mol/L)
650 0.04666667 89.1266667
660 0.10666667 79.42
670 0.19333333 63.1
680 0.34666667 44.67
690 0.49333333 31.6166667
700 0.64333333 22.3933333
710 0.7 19.9466667
720 0.59666667 25.11
730 0.44333333 35.4666667
740 0.3 50.1266667
750 0.15 70.79
Claro, usando la fórmula para convertir mol/L a ppm para níquel
(Ni²⁺):
Sustancia: níquel (Ni²⁺)
Masa molar (aprox.): 58.69 g/mol
ppm=Cmol/L×58690 =
Concentración (ppm) Absorbancia (A)
0.721 0.04666667
1.647 0.10666667
2.986 0.19333333
5.354 0.34666667
7.619 0.49333333
9.936 0.64333333
10.811 0.7
9.215 0.59666667
6.847 0.44333333
4.633 0.3
0.721 0.04666667
A
0.8
0.7
0.6
y = 0.0647x + 8E-16
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0.000 2.000 4.000 6.000 8.000 10.000 12.000
El valor de la pendiente ε calculado a partir de tus datos es:
ε =0.06
𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺𝑺 𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭𝑭
Para λ = 500-600
λ A %T
500 0.05 89.13
510 0.12 75.86
520 0.25 56.23
530 0.45 35.48
540 0.65 22.39
550 0.8 15.85
560 0.85 14.13
570 0.7 19.95
580 0.5 31.62
590 0.3 50.12
600 0.15 70.79
λ A %T
λ A %T 500 0.047 89.12
500 0.04 89.12 510 0.123 75.86
510 0.12 75.86 520 0.250 56.23
520 0.26 56.23 530 0.443 35.49
530 0.44 35.49 540 0.647 22.39
540 0.64 22.39 550 0.797 15.85
550 0.79 15.85 560 0.847 14.12
560 0.85 14.12 570 0.697 19.95
570 0.69 19.95 580 0.503 31.61
580 0.5 31.61 590 0.300 50.11
590 0.31 50.11 600 0.147 70.79
600 0.15 70.79
λ A %T
500 0.05 89.12
510 0.13 75.86
520 0.24 56.23
530 0.44 35.49
540 0.65 22.39
550 0.8 15.85
560 0.84 14.12
570 0.7 19.95
580 0.51 31.61
590 0.29 50.11
600 0.14 70.79
A
0.900
0.800 y = 0.0024x - 0.9003
0.700
0.600
0.500
0.400
0.300
0.200
0.100
0.000
480 500 520 540 560 580 600 620
El valor de la pendiente ε calculado a partir de tus datos es:
ε =0.0024
%T
100.00
90.00
80.00
70.00
60.00
y = -0.2799x + 197.7
50.00
40.00
30.00
20.00
10.00
0.00
480 500 520 540 560 580 600 620
El valor de la pendiente ε calculado a partir de tus datos es:
ε =-0.2799
Ley de Beer-Lambert:
A= ε⋅l⋅C
𝜺𝜺 = 1.7 𝑥𝑥 104 𝐿𝐿/(𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚 ∗ 𝑐𝑐𝑐𝑐)(valor estimado para FENOLFTALEINA)
l=1cm
Longitud de onda (nm) Absorbancia (A) Concentración (mol/L)
500 0.047 89.12
510 0.123 75.86
520 0.250 56.23
530 0.443 35.49
540 0.647 22.39
550 0.797 15.85
560 0.847 14.12
570 0.697 19.95
580 0.503 31.61
590 0.300 50.11
600 0.147 70.79
Claro, usando la fórmula para convertir mol/L a ppm para
fenolftaleína:
Sustancia: fenolftaleína
Masa molar (aprox.): 318.32 g/mol
ppm=Cmol/L×318320 =
Concentración (ppm) Absorbancia (A)
0.87 0.047
2.31 0.123
4.68 0.250
8.30 0.443
12.11 0.647
14.92 0.797
15.85 0.847
13.04 0.697
9.42 0.503
5.62 0.300
2.75 0.147
A
0.900
0.800
0.700 y = 0.0534x
0.600
0.500
0.400
0.300
0.200
0.100
0.000
0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00
El valor de la pendiente ε calculado a partir de tus datos es:
ε =0.0534
