AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN PARCIAL DEL COLESTEROL Y DE
ALGUNOS LÍPIDOS COMPLEJOS
Universidad Latina de Panamá, Facultad de Ciencias de la Salud Dr. Williams C.
Gorgas, Dr. En Medicina y Cirugía, Sede Santiago, Veraguas, Panamá.
1Álvaro Moreno, 2Victoria Osorio y 3Victoria Valderrama.
e-mail: 1morenoalvaro507@[Link], 2isavicky1604@[Link],
3victoriavalderrama457@[Link]
RESUMEN INTRODUCCIÓN
Los lípidos son moléculas hidrófobas con Los lípidos son moléculas hidrófobas que
funciones esenciales en los organismos vivos, pueden originarse completamente o en parte a
como el almacenamiento de energía, la través de condensaciones de tioésteres o
estructuración de membranas celulares y la unidades de isopreno. Estos compuestos
mediación hormonal. Se clasifican en lípidos tienen funciones como: aportadores de
simples, complejos y derivados, destacando el energía, estructuradores de la membrana
colesterol como un lípido esteroide celular, protectores de órganos, mediadores
fundamental en diversas funciones hormonales, entre otros, por lo que convierten
biológicas. Su estudio es crucial para en indispensables para la vida (Hoyos Serrano
comprender su papel en los sistemas & Rosales Calle). Desde un punto de vista
biológicos y sus implicaciones en la salud. molecular, son un grupo de principios
inmediatos muy heterogéneo pero que
En este trabajo, se realizó el aislamiento y
mantienen una característica común: la
caracterización parcial del colesterol y
solubilidad en disolventes orgánicos y la
algunos lípidos complejos a partir de un tejido
insolubilidad en medio acuoso. (Argueso
animal. Para ello, se llevaron a cabo métodos
Armesto, y otros)
de extracción y purificación, seguidos de
pruebas de identificación del colesterol, como Los lípidos pueden clasificarse en: lípidos
las reacciones de Salkowski y Liebermann- simples, lípidos complejos y derivados de
Burchard, cuyos resultados confirmaron su lípidos.
presencia. Además, se identificaron
Los lípidos simples son los que están
constituyentes de lípidos complejos mediante
compuestos mayormente átomos de oxígeno,
pruebas específicas, como la detección de
carbono e hidrógeno. Por ejemplo: los
fosfatos en lecitinas y cefalinas, y la
acilglicéridos (que al solidificarse se conocen
identificación de glúcidos en glucolípidos
como grasa y al hacerse líquidos como
mediante las pruebas de Molisch y Benedict.
aceites). (Concepto, s.f.)
También se evaluó el poder emulsionante de
Por otro lado, los lípidos complejos son
las lecitinas, demostrando su capacidad para
moléculas anfipáticas con una zona
estabilizar mezclas de agua y aceite.
hidrófoba, en la que los ácidos grasos están
unidos mediante enlaces ester a un alcohol
(glicerina o esfingosina), y una zona hidrófila,
originada por los restantes componentes no Ácido Sulfúrico Es tóxico
lipídicos que también están unidos al alcohol. concentrado
(UM, s.f.) Anhidrido acético Es una sustancia
tóxica y corrosiva.
Los lípidos derivados son compuestos Solución de Es tóxico.
biológicos insolubles en agua, pero solubles molibdato de
amonio
en disolventes orgánicos. Se denominan
Ácido nítrico Es tóxico.
lípidos derivados porque se forman a partir de concentrado
lípidos simples y complejos mediante el Solución alcohólica Es tóxico
proceso de hidrólisis. Incluyen sustancias de a-naftol al 5%
como esteroles, prostaglandinas y vitaminas Solución de ácido Es tóxico
liposolubles. (StudySmarter, s.f.) clorhídrico
Carbonato de sodio No es muy tóxico en
OBJETIVOS pequeñas
cantidades, pero
• Aislar el colesterol y algunos lípidos puede serlo si se
complejos de un tejido animal. ingiere en grandes
• Ensayar pruebas de identificación del cantidades
Reactivo de Si es tóxico.
colesterol
Benedict
• Identificar algunos de los constituyentes Tabla 1. Reactivos Utilizados
de los lípidos complejos
• Estudiar las propiedades de algunos
lípidos complejos y de sus DESARROLLO EXPERIMENTAL
constituyentes.
A. Aislamiento
MATERIALES a. Aislamiento y purificación del
colesterol
• Policial
• Vaso químico • Pesar 10g de sesos de res y
desmenusar. Agregar 15 ml de acetona
• Plancha para calentar Primer y homogenizar la muestra
Paso
• Pipeta
• Propipeta
• Filtrar a traves de un embudo- Los
• Tape (para rotular) extractos combinados de acetona
Segundo contiene el colesterol.
• Tubos de ensayo Paso
• Gradilla
• Pasar lo extractos de acetona a un vaso
• Pinzas para tubos de ensayo químico de 250 ml y evaporar casi a
sequedad sibre una plancha caliente.
• Vidrio reloj Tercer Paso El colesterol se cristaliza en alcohol
frio
Reactivos Toxicidad • Centrifugar o filtrar el residuo de
Acetona Es tóxica colesterol y guardar para
Etanol al 95% Es tóxico Cuarto Paso procedimientos posteriores
Éter dietílico Es tóxico
anhidro
Cloroformo anhidro Es tóxico. Esquema 1. Metodología de la prueba A, Aislamiento
y purificación del colesterol.
• Transferir a un tubo de
b. Aislamiento de lecitinas y cefalinas ensayo seco 2 ml de la
solución clorofórmica de
• Tratar el residuo de las anteriores colesterol aislado. En otro
extracciones con acetona con 10 ml tubo poner 2 ml de la
de éter dietílicoanhidro en un vaso solución de colesterol al 1%
Primer Paso de 250 ml Primer Paso
y 2 ml de cloroformo al
tercer tubo
• Agitar bien para homogenizar, dejar • Agregar despacio a cada
reposar por 2 min. Filtrar y guardar tubo 2 ml de ácido sulfúrico
el filtrado étereo
Segundo Paso concentrado (bucar formar
dos capas, dejando deslizar
Segundo Paso por las paredes del tubo)
• Agregar acetona para precipitar las
lectinas, luego centrifugar las
muestras. Guardar en un recipiente
Tercer Paso apropiado con tapa.
• Dejar reposar los tubos y
observar la formación de un
anillo rojo entre las capas.
Tercer Paso
Esquema 2. Metodología de la prueba A, Aislamiento
de lecitinas y cefalinas
c. Aislamiento de esfingomielinas y
glucolípidos Esquema 4. Metodología de la prueba B, Prueba de
Salwoski
• Suspender en 25 ml de alcohol
hirviendo los residuos de las
Primer estracciones con éter b. Prueba de Liebermann-Buchard
Paso
• Identificar 3 tubos de ensayo,
poner 2 ml de soución
• Filtrar con un embudo la suspensión clorofórmica de colesterol aislado
estando calient, dejar enfriar y
Segundo guardar el filtrado
en el primero, 2 ml de solución de
Paso Primer Paso colesterol al 1% en el segundo y
2ml de cloroformo en el tercero
• Observar la precipitación de
esfingomielinas y glucósidos.
Guardar las muestras oara futuras • Agregar 10 gotas de anhídro
Tercer Paso pruebas de caracterización
Segundo acético a cada tubo y mezclar
Paso
Esquema 3. Metodología de la prueba A, Aislamiento • Adicionar 2 gotas de pácido
de esfingomielinas y glucolípidos sulfúrico concentrado a cada uno
de los tubos. Dejarlos reposar y
Tercer Paso orbservar el color azul o verde
B. Pruebas para el colesterol
a. Prueba de Salwoski
Esquema 5. Metodología de la prueba B, Prueba de
Liebermann-Buchard
C. Prueba de fosfatos
• Colocar unas pizcas de lectinas y
• Disolver en un tubo de ensayo, unos
cefalinas en la cápsula de porcelana cuantos mg de los glucósidos de la
Primer e incinerar la muestra Primer esfingosina en 2 ml de agua caliente y
Paso Paso calentar la solución
• Agregar 3 gotas de la solución de
alfa-naftol y mezclar bien. Inclinar el
• Agregar gota a gota ácido
clorhídrico concentrado hasta que la Segundo tubo y adicionar lentamente 2 ml de
Segundo solución sea ácida al papel tornasol Paso ácido sulfúrico concentrado
Paso
• Observar el desarrollo de alguna
• Dejar enfriar la cápsula y luego Tercer coloraciónen la interfase
añadir al residuo de 3 a 5 ml de Paso
agua hirviente. Filtrar la suspensión
Tercer Paso con embudo
Esquema 9. Metodología de la prueba E, Prueba de
• Agregar al filtrado 3 ml de la Molisch
solución de molibdato de amonio y 5
Cuarto Paso gotas de ácido nítrico concentrado b. Prueba de Benedict
• Disolver en un tubo de ensayo, unos cuantos
• Calentar a ebullición por 1 min y Primer mg de los glucósidos de la esfingosina en 2
dejar reposar. Repetir el ml de agua caliente y enfriar la solución
procedimiento usando una muestra Paso
Quinto Paso de esfingomielinas • Agregar 1 ml de la solución de ácido
Segundo clorhídricoo 6 N y calentar en Baño maría por
Paso 15 min
Esquema 6. Metodología de la prueba C, Prueba para • Enfriar la solución y agregar carbonato de
sodio en pequeñas cantidades hasta
fosfatos Tercer
neutralizar el ácido usando papel tornasol
Paso
D. Poder emulsionante de las lecitinas • Efectuar la prueba de Benedict usando 5 ml
Cuarto del reactivo de Benedict con 1 ml del
• Disolver en un tubo de ensayo, Paso hidrolizante neutralizado
unos cuantos mg de lectina en 5 ml
Primer de agua. Colocar en otro tubo 5 ml
Paso de agua y 5 gotas de aceite vegetal Esquema 8. Metodología de la prueba E, Prueba de
Benedict
• Agitar ambos tubos y comparar el
comportamiento entre uno y otro. RESULTADOS
Segundo Agregar 5 gotas de aceite vegetal al
Paso a tubo que contiene las lectinas. B. Pruebas para el colesterol
a. Prueba de Salwoski
• Agitar nuevamente ambos y dejar
reposar. Observar cual de ellos Reactivo Formación Número Coloración
Tercer forma una emulsión de Anillo de
Paso Capas
Solución Si 2 Amarillo
clorofórmica
Esquema 8. Metodología de la prueba D, Poder de colesterol
emulsionante de las lecitinas aislado
Solución del Si 2 Terracota
E. Prueba de glúcidos colesterol al
1%
a. Prueba de Molisch Solución de No 1 No cambio
cloroformo de color
Tabla 1. Resultados de la prueba B, la prueba de
Salkowski
b. Prueba de Liebermann-Buchard
Reactivo Formación de Coloración B. Pruebas para el colesterol
Anillo a. Prueba de Salwoski
Solución No Verde Oscuro Como lo muestra la literatura, en la
clorofórmica reacción de Salkowski el colesterol o
de colesterol
aislado esterol debe estar en una solución de
Solución del No Amarillo verdoso cloroformo con ácido sulfúrico
colesterol al concentrado, para dar el color rojo en la
1%
Solución de No No cambio de
capa de cloroformo y verde fluorescente
cloroformo color en la capa de ácido (Sujata V. Bhat, B .A .
Tabla 2. Resultados de la prueba B, la prueba de Nagasampagi, 2006). Esto se asemeja a
Liebermann-Buchard los resultados obtenidos en esta prueba, en
la que la solución clorofórmica de
C. Pruebas para fosfatos colesterol aislado (Tubo A) y la solución
REACTIVO PRECIPITADO COLORACIÓN
de colesterol al 1% (Tubo B) se tornaron
Lecitinas y Si Amarillo de un color rojo verdoso, confirmando la
cefalinas presencia esteroides (colesterol).
aisladas
Tabla 3. Resultados de la prueba C, Pruebas para
fosfatos
D. Poder emulsionante de las lecitinas
REACTIVO EMULSIÓN COLORACIÓN
Lecitinas Si Blanco
aisladas
Agua No Transparente
destilada
Tabla 4. Resultados de la prueba D, Poder
emulsionante de las lecitinas Figura 1. Reacción de Salwoski.
E. Pruebas para glúcidos b. Prueba de Liebermann-Buchard
a. Prueba de Molisch La prueba de Liebermann-Burchard
REACTIVO PRESENCIA COLORACIÓN utiliza anhídrido acético y ácido sulfúrico
DE ANILLO
Colesterol Si Morado (anillo) como reactivos para detectar colesterol.
Aislado Amarillo/Blanco Cuando se mezclan estos reactivos con
Tabla 5. Resultados de la prueba E, Reacción de una muestra que contenga colesterol, se
Molisch forma un color verde o verde azulado en
unos minutos, indicando la presencia de
b. Prueba de Benedict
colesterol (Rodríguez, 2021). Esta
REACTIVO PRESENCIA COLORACIÓN
DE ANILLO reacción da como resultado un color que
Colesterol No Marrón Oscuro/ comienza rosado-violeta y se vuelve verde
Aislado Negro oscuro debido a la reacción del grupo
Tabla 6. Resultados de la prueba E, Reacción de
hidroxilo del colesterol con los reactivos,
Benedict
lo cual coincide con los resultados
DISCUSIÓN obtenidos en los tubos 1 (Coloración
amarillo verdoso) y 2 (Coloración que puede combinarse con grasas y aceites
Amarillo verdosa, luego verde intenso), como con el agua. Las sustancias inmiscibles,
siendo positivos para la presencia de como el aceite y el agua, forman emulsiones
esteroides. estables gracias a la lecitina. Esta propiedad
se emplea, por ejemplo, en la producción de
chocolate y polvo de cacao, margarina untable
y grasas que no chorrean, y pasta crujiente
(Fismer, s.f.).
Figura 2. Reacción de Liebermann-Buchard.
Figura 4. Reacción del poder emulsionante de las
C. Prueba para fosfatos lecitinas.
Los fosfatos reaccionan con el molibdato de F. Pruebas para glúcidos
amonio, en medio ácido, para formar a. Prueba de Molisch
fosfomolibdato de amonio, que es reducido a La prueba de Molisch es una prueba
azul de molibdeno por el ácido ascórico, cuya cualitativa para detectar la presencia de
intensidad de color (amarillento) es carbohidratos en una muestra. Se realiza
proporcional a la concentración de agregando el reactivo de Molisch y ácido
FÓSFORO (Ortofosfatos) presente en la sulfúrico a la muestra, lo que producirá un
muestra (LAB, s.f.). Los resultados de esta anillo de color violeta si hay carbohidratos
experiencia arrojaron un color amarillo, presentes (Caicedo, 2014). Los resultados de
apenas visible. Esto afirma la presencia de esta experiencia se asemejan a literatura,
fosfatos en la muestra, aunque en poca puesto que, se observó la formación de un
cantidad (por su escasa coloración amarilla). anillo de color intenso en la fase intermedia,
lo cual indica la presencia de carbohidratos.
Figura 3. Reacción de la Prueba para fosfatos.
D. Poder emulsionante de las lecitinas
Se pudo observar como el tubo que contenía Figura 5. Reacción de la prueba de Molisch.
agua y lecitina crearon una emulsión entre
ambas sustancias. Esto se debe a que la
lecitina es un extraordinario emulsionante, ya b. Prueba de Benedict
La solución de Benedict se utiliza para en lugares donde hay muchas personas se
detectar azúcares reductores, normalmente puede corregir trabajando ordenadamente
monosacáridos o disacáridos. Proporcionará dentro del laboratorio y trabajando
un resultado positivo para los azúcares conjuntamente con el grupo de laboratorio
reductores, una coloración marrón asignado. Sobre la mala distribución del
generalmente (Labster, s.f.). La coloración tiempo, se puede corregir planificando la
marrón intensa obtenida en los resultados de experiencia con antelación.
esta prueba es positiva, afirmando a presencia
de azucares reductores, y coincidiendo los Juicio crítico (Victoria Osorio)
principios teóricos sobre esta prueba. Fortalezas Debilidades
Conocimiento previo Desconocimiento de los
acerca de ciertas resultados que debían
pruebas presentes en esperarse en la primera
el laboratorio parte de los
procedimientos
Dominio del uso de Complicaciones al
los instrumentos del momento de describir
laboratorio para cada los resultados de una
una de las pruebas a manera adecuada
realizar
Capacidad de realizar No se tuvo la
Figura 6. Reacción de la prueba de Benedict. los procedimientos oportunidad de observar
con agilidad y los resultados de una
eficacia parte del laboratorio de
forma presencial
JUICIO CRÍTICO
Tabla 8. Juicio Crítico de la estudiante Victoria Osorio
Juicio crítico (Álvaro Moreno)
Sugerencias:
Fortalezas Debilidades
Trabajo en equipo Dificultad para • Mejorar la comunicación entre los
comprender algunas
compañeros del equipo para mayor
guías de laboratorio
Buen manejo de los Dificultad a la hora de comprensión de la manera en la que se
utensilios y materiales trabajar en lugares obtuvieron los resultados
de laboratorio donde hay muchas
personas • Investigación previa sobre las pruebas a
Precisión a la hora de Mala distribución del realizar, para tener conocimiento base de
realizar diversos tiempo (no pudimos los resultados que Debian esperarse
procedimientos terminar la
experiencia).
Tabla 7. Juicio Crítico del estudiante Álvaro Moreno.
Juicio crítico (Victoria Valderrama)
Sugerencias: es de suma importancia prestar
atención a la explicación previa al laboratorio
sobre la guía del mismo, esto ayuda a que se
pueda comprender todas las actividades con
mucha actividad. La dificultad para trabajar
Fortalezas Debilidades fosfatos en lecitinas y cefalinas, así
Buena utilización de Desconocimiento de como la identificación de glúcidos en
los instrumentos. las pruebas realizadas. glucolípidos.
Trabajar de forma Desconocimiento de la 4. Finalizando el laboratorio, se estudiaron
rápida y organizada ubicación de ciertos las propiedades relevantes de los lípidos
reactivos complejos y sus componentes, como el
Realizar los Poco entendimiento de
poder emulsionante de las lecitinas, lo
procedimientos de la guía que evidencia su capacidad para
manera adecuada estabilizar mezclas de agua y aceite.
Tabla 9. Juicio Crítico de la estudiante Victoria
Valderrama
Sugerencias: Investigar y tratar de entender PREGUNTAS
las pruebas que se realizaran con antelación, 1. ¿Cuál es la naturaleza química del
tratar de ubicar los reactivos mucho antes de colesterol?
iniciar el laboratorio y tratar de leer con más
detenimiento la guía de laboratorio para una R/ El colesterol es un lípido esteroide, es
mejor comprensión. decir, una sustancia cerosa y grasa.
Contiene un núcleo fenantreno.
2. ¿En qué órganos y tejidos se encuentra
CONCLUSIONES la mayor concentración del colesterol?
1. Durante el desarrollo de este R/ Se encuentra en grandes cantidades en
laboratorio, los integrantes del equipo el cerebro, como también formando parte
lograron aislar el colesterol y algunos de la membrana plasmática de las células
lípidos complejos como las lecitinas, de muchos tejidos y de lipoproteínas del
cefalinas y las esfingomielinas a partir plasma sanguíneo.
de un tejido animal (cerebro), utilizando
métodos de extracción y purificación 3. Investigue que sustancias tienen
adecuados. colesterol como su precursor’
R/ Es precursor de muchos esteroides
2. Los integrantes del equipo realizaron presentes en los tejidos animales tales
diversas pruebas de identificación del como las hormonas sexuales y los ácidos
colesterol, como las pruebas de biliares.
Salkowski y Liebermann-Burchard,
obteniendo resultados positivos que 4. ¿Cuáles son los diversos grupos de los
confirmaron la presencia esteroides lípidos clasificados como fosfolípidos?
(colesterol).
R/ Las lectinas, cefalinas y
esfingomielinas son grupos de los lípidos
3. Durante la prueba C, se identificaron
clasificados dentro de los fosfolípidos.
algunos de los constituyentes de los
lípidos complejos mediante pruebas
específicas, como la detección de
5. ¿Qué componente tienen en común los R/ Indica que la sustancia analizada posee
diversos fosfolípidos y en cuales se carbohidratos.
diferencian?
R/ Los diversos fosfolípidos tienen en 9. ¿Qué indica una prueba de Benedict
común los ácidos grasos, el residuo de positiva con el hidrolizado?
ácido fosfórico y la colina. Pero también
R/ Indica la presencia de azucares
tienen diferencias como el tipo de colina
que tienen en su estructura y que los reductores, como la galactosa.
esfingomielinas tienen alcohol amínico y
otras características diferentes.
10. ¿Cuál es el monosacárido que
6. ¿Qué propiedad de las lecitinas se generalmente forma parte de los
comprueba al facilitar estas la
glucolípidos presentes en el cerebro?
formación de una emulsión de aceite y
agua? R/ Galactosa.
R/ La propiedad de las lecitinas es el
poder emulsionante, ya que poseen una
parte polar hidrofílica y otra apolar REFERENCIAS
lipofílica, responsable de esta propiedad Argueso Armesto, R., Díaz Díaz, J., Díaz
que reduce la tensión interfacial entre una Peromingo, J., Rodríguez González, A.,
mezcla aceite y agua. Castro Mao, M., & Diz-Lois, F. (s.f.). Lípidos,
colesterol y lipoproteínas.
7. ¿Con qué propósito se emplea a las
Concepto. (s.f.). Concepto. Obtenido de
lecitinas en la preparación de algunos
Lípido: [Link]
cosméticos y ciertos productos
Hoyos Serrano, M., & Rosales Calle, V. V.
alimenticios? (s.f.). Lípidos: Características Principales y
R/ Gracias a su capacidad, puede ayudar a su Metabolismo.
estabilizar, emulsionar y mejorar la StudySmarter. (s.f.). StudySmarter. Obtenido
textura de los productos. Además, puede de Lípidos derivados:
[Link]
extender la vida útil de ciertos productos ica/quimica-organica/lipidos-derivados/
(cosméticos y alimentarios). UM. (s.f.). Lípidos. Obtenido de Lípidos:
8. ¿Qué indica una prueba Molisch [Link]
positiva?
