INFORME DE LA PRACTICA DE LABORATORIO

TEMA:

ELECTROFORESIS

AUTORES: CODIGOS:

GISELA BUÑAY 985190

RONNYE BARAHONA 985037

MATEO CALDERON 985177

ROSITA RODRIGUEZ 985018

ARIEL VASCONEZ 985186

ASIGNATURA:

ANÁLISIS INSTRUMENTAL

FECHA DE REALIZACION:

23 DE JUNIO DEL 2025

FECHA DE ENTREGA:

30 DE JUNIO DEL 2025

PERIODO:

0CTUBRE 2024 – FEBRERO 2025

Guía realizada por: Dr. Mauricio Álvarez (Técnico Laboratorio de Química Instrumental)
 1. OBJETIVO:

1.1. OBJETIVO GENERAL

Familiarizar a los estudiantes con los procedimientos implicados en la electroforesis de gel

de agarosa, mediante la utilización de colorantes.

1.2. OBJETIVO ESPECIFICOS

➢ Preparar la solución tampón con el fin de mantener un pH constante que favorezca

la migración adecuada de las moléculas durante la electroforesis, mediante la

correcta disolución de fosfato de potasio (KH₂PO₄) y fosfato disódico (Na₂HPO₄)

en agua destilada, siguiendo las instrucciones establecidas en la guía de laboratorio.

➢ Elaborar el gel de agarosa para permitir la separación de los colorantes según su

tamaño molecular y carga eléctrica, calentando la mezcla de agarosa y solución

tampón hasta su completa disolución y luego enfriándola a temperatura adecuada

antes de verterla en el molde.

➢ Realizar la siembra de muestras y ejecución de la electroforesis con el propósito de

evidenciar el comportamiento de los colorantes bajo un campo eléctrico, utilizando

una pipeta automática para cargar las muestras en los pocillos del gel y conectando

la cámara a una fuente de corriente ajustada a 150 voltios durante 10 a 15 minutos.

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 2. MARCO TEORICO

La electroforesis es un método analítico en el que se utiliza una corriente eléctrica

controlada con la finalidad de separar biomoléculas según su relación tamaño a carga eléctrica,

usándose como base una matriz gelatinosa. Esta técnica tiene una variedad de usos prácticos, como

la medicina forense para la identificación de personas, el proyecto del genoma humano, la

investigación de proteínas y de mutaciones genéticas y pruebas de diagnóstico clínico.

Como se emplea en esta técnica

La electroforesis se lleva a cabo con un equipo compuesto de una carga negativa en un

extremo y una carga positiva en el otro, denominado sistema de electroforesis. Al insertar

moléculas cargadas, en este entorno, las negativas se irán a un extremo y las positivas al otro

correspondiente. Por ejemplo, al analizar las proteínas en un gel, en estos equipos, se toma la

proteína completa para analizar su tamaño. De esta forma, las más cortas migrarán a los polos de

manera más rápida y se verán reflejadas en la parte inferior del gel. En cambio, las más largas

quedarán en la parte superior (Kalstein, 2021).

Cuando una mezcla de moléculas ionizadas y con carga neta son posicionadas en un campo

eléctrico, estas experimentan una fuerza de atracción hacia el polo que posee carga opuesta,

dejando transcurrir cierto tiempo las moléculas cargadas positivamente se desplazaran hacia el

cátodo (polo negativo) y aquellas cargadas positivamente se desplazarán hacia el ánodo (polo

positivo).

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 La electroforesis es una técnica habitual en el laboratorio clínico. Permite separar especies

químicas (ácidos nucleicos o proteínas) a lo largo de un campo eléctrico en función de su tamaño

y de su carga eléctrica (Alejandro & Soledad, 2025).

Tipos de electroforesis

Electroforesis en papel de filtro y en acetato de celulosa: La técnica electroforética con

papel de filtro como soporte se usa muy poco, y su uso queda reducido a la separación de

aminoácidos. En cambio, la electroforesis en acetato de celulosa, o cellogel, tiene una serie de

ventajas respecto al papel de filtro. Permite la separación de proteínas, migraciones más rápidas y

posee mayor resolución.

➢ Electroforesis en gel de poliacrilamida: El gel de poliacrilamida está considerado como el

mejor soporte. Además poseen una gran estabilidad mecánica y son insolubles en agua.

Entre tanta ventaja surge un inconveniente que está limitando su uso: es neurotóxico. Se

utiliza para la separación de proteínas y, al igual que el gel de agarosa, permite la

separación de las moléculas en función de su tamaño.

➢ Electroforesis capilar: Esta técnica difiere bastante de las anteriores. El soporte es distinto,

ya que utiliza capilares de sílica fundida, cubiertos con una capa de polimina. La

visualización de los resultados se hace a través de la pantalla de un ordenador (Cesur,

2023).

➢ Electroforesis en gel de agarosa: El gel de agarosa es un buen soporte electroforético.

Además, su naturaleza le otorga la característica de poder separar las moléculas en función

de su tamaño. Este soporte permite separar ácidos nucleicos en función de su tamaño. Se

utiliza para separar moléculas grandes (Khan Academy, 2023).

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 3. INSTRUCCIONES

• Cumpla con las normas de seguridad y utilice todo el equipo de protección personal

necesario.

• Siga los pasos descritos en la presente guía y las indicaciones del Docente o Técnico

de Laboratorio.

• Interactúe y consulte si tiene alguna duda.

• Realice las observaciones y toma de datos.

• Observe, Investigue y Concluya.

• Disponga los residuos generados durante la práctica de acuerdo con –las indicaciones

del Docente o Técnico de Laboratorio.

3.1 Equipos y materiales

• Equipo de electroforesis

• Balanza analítica

• Pipeta automática

• Matraz Erlenmeyer de 250 mL

• Varilla de vidrio

• Vasos de precipitación

• Probeta

3.2 Reactivos y sustancias

• Agua destilada

• Agarosa.

• Colorantes.

• Solución Tampón

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 4. ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:

4.1 Preparación de la solución tampón

4.2 Preparación del gel de agarosa

• Pese 0,7 gramos de agarosa y deposítelos en un matraz Erlenmeyer de 250 mL.

• Agregue 100 mL de solución tampón y agite la mezcla para disolver los grumos de

agarosa.

• Caliente la solución a punto de ebullición (la solución final debe ser clara sin partículas

aparentes).

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 • Enfríe la solución de agarosa más o menos a 55°C (para acelerar el proceso se puede

colocar el envase debajo de un grifo de agua mientras se agita).

• Si se produce mucha perdida por evaporación, añada tampón de electroforesis hasta

recuperar el volumen inicial).

4.3 Preparación del gel para la electroforesis

• Añada la solución de agarosa al molde hasta que el gel se solidifique.

• Coloque la solución tampón en la cámara de electroforesis, asegúrese que el gel está

totalmente cubierto de tampón.

• Saque el peine que ha formado los pocillos con mucho cuidado de no romper ningún

pocillo.

4.4 Siembra del gel y electroforesis

• Con la pipeta automática, proceda a la siembra de 10 uL de cada uno de los colorantes

en los diferentes pocillos.

• Cuidadosamente, coloque la cubierta de la cámara de electroforesis.

• Conecte los cables a la fuente de corriente.

• Configure la fuente de corriente a 100 voltios por 30 minutos.

• Vigile que los colorantes no salgan del gel.

• Después de que la electroforesis ha terminado, apagar la fuente de corriente, desconecte

los cables y saque la cubierta.

• Coloque el gel en una hoja de papel blanco y observe los resultados.

5. RESULTADOS OBTENIDOS

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 Reacción Cantidad de Preparación

Preparación de la solución tampón O,7 g de KH2PO4 + 15 ML DE H2O + 1G DE

Na2HPO4

Preparación del gel de agarosa 0.7 g de agarosa + 100 ml de solución tampón

Preparación del gel para la electroforesis Solución agarosa en un molde

Siembra del gel y electroforesis 10 ul en cada pocillo

6. OBSERVACIONES Y ANÁLISIS DE RESULTADOS (Discusión)

En este punto, el estudiante debe centrarse en interpretar los resultados obtenidos.

Aquí se deben remarcar los aspectos más significativos visualizados en el proceso de

ejecución de la práctica y deben estar relacionadas estrictamente con los objetivos

planteados, como también la concordancia o no de los principios teóricos con los

resultados prácticos. Aquí se pueden también incluirse comentarios a las respuestas a las

preguntas o inquietudes planteadas en el cuestionario y que estén relacionadas con la

práctica que se está realizando.

7. CONCLUSIONES

Respecto a la determinación experimental logramos determinar experimentalmente la

variación de conductividad eléctrica en función del tipo de solución utilizada, cumpliendo

el objetivo de evaluar la influencia de la disociación iónica en electrolitos fuertes y débiles.

Análisis de comportamiento iónico nos dieron resultados que confirman que los electrolitos

fuertes, como el HCl o NaOH, presentan mayor conductividad eléctrica debido a su

completa disociación, mientras que los electrolitos débiles como CH₃COOH muestran una

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 menor conductividad, cumpliendo el objetivo de comparar el comportamiento entre ambos

tipos.

Relación entre concentración y conductividad comprobamos que a mayor concentración

de electrolito, mayor es la conductividad eléctrica de la solución, validando el objetivo de

establecer la relación cuantitativa entre concentración molar y conductividad.

8. RECOMENDACIONES

Antes de iniciar la práctica, se recomienda verificar y calibrar adecuadamente todos los

instrumentos utilizados, especialmente los equipos de medición como el conductímetro o

termómetro, para asegurar lecturas precisas.

Durante la manipulación de soluciones químicas es importante reforzar las medidas de

seguridad personal, como el uso de guantes, gafas y mandil correspondiente para evitar

posibles accidentes o contaminación cruzada.

Es aconsejable que los estudiantes repasen los fundamentos de los cálculos estequiométricos

antes de la práctica, para reducir errores en los resultados experimentales y mejorar la

interpretación de los datos.

Se sugiere anotar cada dato observado inmediatamente durante el desarrollo de la práctica para

evitar omisiones y facilitar la elaboración del informe final.

Se recomienda contrastar los resultados obtenidos con valores teóricos o reportados en

literatura científica, para fortalecer el análisis crítico y la discusión de errores experimentales.

9. CUESTIONARIO.

1. ¿En base a qué la electroforesis de agarosa separa moléculas?

La electroforesis de agarosa separa moléculas principalmente por tamaño molecular y

carga eléctrica. El gel de agarosa actúa como una matriz porosa que ofrece resistencia al paso de

las moléculas. Cuando se aplica un campo eléctrico, las moléculas cargadas migran hacia el

electrodo de carga opuesta. Las moléculas más pequeñas se mueven con mayor facilidad a través

de los poros del gel, mientras que las más grandes se desplazan más lentamente, quedando así

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separadas a lo largo del gel. Este principio se utiliza ampliamente en el análisis de ácidos nucleicos,

proteínas y otros compuestos con carga neta.

2. Explique la migración de los colorantes en base a la carga.

La migración de los colorantes depende de su carga neta en solución. Bajo un campo eléctrico, los

colorantes que poseen carga negativa migrarán hacia el ánodo (polo positivo), mientras que los

que tienen carga positiva lo harán hacia el cátodo (polo negativo). Además de la carga, influyen la

masa molecular y la estructura tridimensional del colorante.

Por ejemplo, el azul de bromofenol y el xileno cianol, utilizados como marcadores de migración

en ADN, tienen carga negativa y migran en dirección al ánodo, pero lo hacen a velocidades

diferentes debido a sus diferencias de tamaño. Este comportamiento permite inferir no solo la

carga, sino también el tamaño relativo de las moléculas.

3. ¿Qué sucedería si en el proceso se utilizara agua destilada en lugar del tampón de

electroforesis?

• Si se utiliza agua destilada en lugar del tampón, el proceso de electroforesis se vería

seriamente afectado debido a que el agua pura no conduce electricidad eficientemente, al

carecer de suficientes iones. Esto ocasionaría:

• Baja o nula migración de las moléculas, ya que la corriente eléctrica no se transporta

adecuadamente.

• Desbalance de pH en la solución, lo cual puede alterar la carga de las moléculas, afectando

su migración o incluso desnaturalizándolas.

• Riesgo de sobrecalentamiento en el sistema, ya que el agua tiene una menor capacidad de

disipar la energía eléctrica.

10. BIBLIOGRAFÍA.

Guía realizada por: Dr. Mauricio Álvarez (Técnico Laboratorio de Química Instrumental)
Alejandro, D., & Soledad, A. (2025). Electroforesis. McGraw Hill Medical.

[Link]

Cesur. (2023, February 28). Tipos de electrofóresis, ¿cuales existen?|Cesur FP®.

[Link]; Cesur. [Link]

electroforesis

Kalstein. (2021, July 24). ¿Qué es la electroforesis? - Kalstein. Kalstein. [Link]

es-la-electroforesis/

Khan Academy. (2023). [Link]. [Link]

expression-and-regulation/biotechnology/a/gel-electrophoresis

11. GRAFICOS Y/O FOTOGRAFÍAS.

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