UNIVERSIDAD CATÓLICA DE SANTA

MARÍA
FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS, BIOQUÍMICAS Y
BIOTECNOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

6506297 | BIOQUÍMICA II

Trabajo: Informe semanal

VI SEMESTRE – I FASE
TEMA
“GLICÓLISIS

INTEGRANTES

 Condori Mamani, Julissa Fiorella

 Oymas Choquepata, Luis Angel
 Vilca Alarcon, Jose Carlos

DOCENTE

Brian Danny Aranibar Aragon

Arequipa – Perú
2024
 PRACTICA Nº 1

GLICOLISIS

RELACIÓN DE EXPERIMENTOS
1.- Glicólisis anaeróbica en un preparado de músculo esquelético de conejo
a) Determinación de glucosa basal y después de 1 hora
b) Determinación de ácido láctico basal y después de 1 hora.

INTRODUCCIÓN

La glicólisis es una vía metabólica que consiste en una secuencia de reacciones

citoplasmáticas a través de las cuales 1 mol de glucosa se convierte en 2 moles de piruvato con la
concomitante producción de ATP y la reducción del NAD + a NADH + H+ si es que ocurre en
presencia de oxígeno. En condiciones de anaerobiosis, es decir en ausencia de oxígeno, éstos 2
moles de piruvato se reducen a 2 moles de Lactato a expensas del NADH + H +. En presencia de
oxígeno los tejidos pueden posteriormente oxidar el piruvato totalmente hasta CO 2 y H2O a nivel
mitocondrial.

La glicólisis es una vía que ocurre en todas las células del organismo, con la finalidad de
hacer posible que la glucosa pueda degradarse, proporcionando la energía química necesaria para
la actividad celular en forma de compuestos fosfóricos ricos en energía (ATP). Así, por
molécula de glucosa que se convierte en 2 de ácido láctico, se produce una síntesis neta de 2
moléculas de ATP, de tal modo que el proceso global que ocurre en las células, podría resumirse
como:

Glucosa + 2ADP + 2Pi 2 Lactato + 2 ATP + 2 H2O

Tanto las reacciones así como las enzimas que catalizan las diversas etapas de la glicólisis se
encuentran en el citoplasma, no obstante existe una estrecha asociación con las mitocondrias en
donde se lleva a cabo la descarboxilación oxidativa del Piruvato, las reacciones del ciclo de
Krebs y la fosforilación oxidativa.

En la presente práctica se evaluará a la glicólisis a través del consumo de glucosa y la

producción de ácido láctico en un sistema de ensayo que contiene homogenizado de músculo
esquelético mantenido en condiciones de anaerobiosis a 37 ºC durante una hora.
 GLUCOSA Glucógeno
Fosforilasa
Fructosa ATP
HEXOQUINASA Glucosa 1 – P
Galactosa ADP
Manosa
Glucosa – 6 P Fosfofructomutasa
Fosforilación

FOSFOGLUCO
ISOMERASA

Fructosa – 6 P

FOSFOFRUCTO ATP
QUINASA ADP

Fructosa 1, 6 Bis P

ALDOLASA

TRIOSA FOSFATO
ISOMERASA Gliceraldehido 3-fosfato
Dihidroxiacetona fosfato (2)

Pi
+
NAD
(2) GLICERALDEHIDO
3P
NADH2 DESHIDROGENASA
Ac. LACTICO

Acido 1,3 difosfoglicérico (2)

NAD+

NADH2
ADP
FOSFOGLICERO
(2) Ac. Piruvico KINASA
ATP

Acido 3-fosfoglicérico (2
ATP
PIRUVATO )
KINASA
ADP FOSFOGLICERO
MUTASA

ENOLASA
Ac. Fosfoenol piruvico Acido 2-fosfoglicérico (2)
H 2O
(2)

FIGURA Nº 3.1 .- Vía Glicolítica

EXPERIMENTO 1

Glicólisis anaeróbica en un sistema preparado con músculo esquelético de cobayo

Objetivos
1. Demostrar como la glucosa en ausencia de oxígeno se transforma en ácido láctico,
utilizando como fuente enzimática un homogeneizado de músculo de cobayo o en caso
contrario de rata.
2. Comprobar el consumo de glucosa durante el proceso
3. Comprobar la producción de ácido láctico en condiciones de anaerobiosis

Procedimiento:

a) Degradación de la glucosa:
1. En un Erlenmeyer de 125 ml. limpio y seco, medir 10 ml de una solución de glucosa
al 1%, disuelta en una solución Krebs Ringer Fosfato (*) conteniendo Nicotinamida
0.03 M, NAD+ 0.2 % y ATP 0.2 %.
2. Incubar la solución en baño maría a 37 ºC por 10 minutos.
3. Agregar al Erlenmeyer 50 ml de homogenizado de músculo al 10 % (P/V), preparado
previamente en solución Krebs Ringer Fosfato.
4. Mezclar y rápidamente tomar un volumen de aproximadamente 20 ml en una probeta
y colocarlo inmediatamente en hielo. Esta muestra constituye la muestra basal a
tiempo cero.
5. Después de haber extraído la muestra basal, añadir al Erlenmeyer con la muestra
sobrante, un volumen adecuado de parafina líquida, para crear las condiciones de
anaerobiosis. Proseguir entonces con la incubación a 37 ºC durante 60 minutos. Esta
será la muestra incubada en donde se habrá de producir la glicólisis.
6. Realizar las determinaciones de glucosa y ácido láctico, tanto en la muestra basal a
tiempo cero, así como en la muestra incubada por 60 minutos a 37ºC, siguiendo la
metodología para cada una de ellas.

b) Determinación de glucosa. ( Método de Nelson-Somogy ).

La de terminación de glucosa por este método, recomienda que la muestra a analizar

esté libre de proteínas, ya que de no ser así, éstas podrían reaccionar con el reactivo de
cobre utilizado dando interferencia en la coloración obtenida.
 Desproteínización:
a) Para cada muestra, medir en un tubo de ensayo 4 ml de agua destilada y agregar 2 ml.
de muestra respectiva.
b) Agregar 2 ml. de ZnSO4 al 5 %, agitar y dejar en reposo por 5 minutos.
c) Añadir 2 ml. de Ba(OH)2 0.3 N. Agitar y dejar en reposo por 5 minutos.
d) Transcurrido el tiempo, proceder a centrifugar o filtrar dichas muestras. El filtrado
libre de proteínas deber ser incoloro y transparente. La determinación de glucosa se
hará en este filtrado.

Procedimiento para cuantificar glucosa:

1. Preparar 4 tubos de Folin, de acuerdo a la siguiente tabla:

REACTIVOS 1 2 3 4
Filtrado de la muestra basal 1 ml --- --- --
Filtrado muestra incubada --- 1 ml --- ---
Solución Estandar (**) --- --- 1 ml ---
Agua destilada --- --- --- 1 ml
Reactivo Cúprico-alcalino 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml

(**) Solución estándar de glucosa conteniendo 50 ug/ml. La absorbancia leída del

sistema estándar fue de 0.254 D.O. (ó 67 UK).

2. Colocar los tubos en baño maría hirviente por 15 minutos.

3. Enfriar los tubos en agua corriente.
4. Añadir a cada tubo, 1 ml del reactivo arsenomolibdato, disolviendo con suave agitación
el Cu2O producido.
5. Completar con agua destilada a 25 ml y mezclar. Dejar en reposo 5 minutos.
6. Leer en el fotocolorímetro con filtro verde y anotar.
7. Hacer los cálculos respectivos y expresar la concentración de glucosa en mg %.

c) Determinación de Ácido Láctico (Método Volumétrico).

El ácido láctico se determinará por titulación con una solución de KOH 0.02 N, utilizando
al rojo de fenol como indicador.
 Procedimiento:
1. En cada uno de dos beakers medir aproximadamente 15 ml de las muestras basal e
incubada respectivamente y hacerlas hervir por 2 minutos teniendo cuidado de que no se
proyecten
2. Enfriar y filtrar a través de una gasa y luego a través de papel filtro.
3. Proceder a la titulación de 3 ml de cada muestra con KOH 0.02 N, agregando 1 gota del
indicador rojo de fenol, hasta obtener un color naranja-rosa.
4. Anotar el volumen de soda gastado y calcular la normalidad del ácido láctico.

Resultados
Anote sus resultados en la siguiente tabla :
MUESTRA BASAL MUESTRA INCUBADA

Glucosa en mg % 190.323 148.743

Acido láctico en mEq/L 7.33 18.67

En el siguiente espacio discuta los resultados obtenidos

La glucosa de 190.323 mg% indica que la glucosa fue utilizada como fuente de energía durante
el proceso de glicólisis en la muestra basal. Esto sugiere que el músculo esquelético estaba
metabolizando la glucosa para generar energía, lo cual es esperado en condiciones aeróbicas en
comparación a 148.743 mg% encontrado en condiciones anaeróbicas. Lo mismo ocurre al
observar el acido láctico en cual obtenemos una mayor producción en la muestra incubada en
condiciones anaeróbica en comparación a la muestra basal la cual se puede explicarse la
producción por el estrés del ratón.

INTERROGANTES

1. Defina la glicólisis anaeróbica y glicólisis aeróbica

 Glicólisis Anaeróbica
La glicólisis anaeróbica ocurre en ausencia de oxígeno. En esta vía, el piruvato producido
durante la glicólisis se convierte en lactato en animales (o en etanol y dióxido de carbono
en organismos como las levaduras). Este proceso también se conoce como fermentación
láctica o fermentación alcohólica. La conversión de piruvato en lactato o etanol permite
la regeneración del NAD⁺ a partir del NADH, lo que es necesario para que la glicólisis
continúe produciendo ATP (1).
  Glicólisis Aeróbica
La glicólisis aeróbica ocurre en presencia de oxígeno. En este caso, el piruvato generado
al final de la glicólisis se transporta a la mitocondria, donde entra en el ciclo de Krebs (o
ciclo del ácido cítrico) y luego en la cadena de transporte de electrones, donde se produce
una gran cantidad de ATP. El oxígeno actúa como aceptor final de electrones,
permitiendo la regeneración del NAD⁺ (1).

2. En que células o tejidos, la glucosa es degradada anaeróbicamente, y en cuales

aeróbicamente
 Degradación Anaeróbica de la Glucosa
En el musculo durante el ejercicio intenso, cuando la demanda de energía es alta y el
suministro de oxígeno no es suficiente, el músculo esquelético depende de la glicólisis
anaeróbica para obtener ATP rápidamente. Esto resulta en la acumulación de lactato, que
es lo que provoca la fatiga muscular (2).
 Degradación Aeróbica de la Glucosa
En el músculo cardíaco depende casi exclusivamente de la respiración aeróbica debido a su
alta demanda energética constante que están repletas de mitocondrias, encargados de
realizar la respiración celular, lo que les permite producir la energía, además en el hígado
también la glucosa se degrada aeróbicamente (3).

3. Escriba las reacciones de la glicólisis que requieren de ATP y las que producen ATP

a)Glucosa ATP →
→
ADP Glucosa 6−fosfato

b) Fructuosa 6−fosfato ATP →

→
ADP Fructuosa 1 ,6−fosfato

c)1 ,3−bisfosfatoglicerato ADP →

→
ATP 3−fosfoglicerato

d) Fosfoenolpiruvato ADP →
→
ATP Piruvato

4. Cuál es la producción neta de ATP en la oxidación anaeróbica de un mol de glucosa.

Haga los cálculos respectivos.
ATP producido en la fase de generación de energía: 4 ATP.
ATP consumido en la fase de rendimiento de energía: 2 ATP.
Se obtuvieron 4 ATP brutos de las cuales 2 ATP se vuelve a invertir de nuevo para continuar
con el ciclo, finalmente quedando 2 ATP netos.
5. Como se define la fosforilación a nivel de sustrato. Qué enzimas de la glicólisis
catalizan estas reacciones?
La fosforilación a nivel de sustrato es un proceso metabólico que genera ATP (adenosín
trifosfato) a partir de ADP (adenosín difosfato) mediante la transferencia directa de un grupo
fosfato de alta energía desde un compuesto intermedio fosforilado a ADP. Este proceso no
requiere la participación de la fosforilación oxidativa ni de la ATP sintasa, y ocurre en el
citoplasma de las células.

Las enzimas que catalizan las reacciones de la glucolisis son :

 Gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH): Esta enzima cataliza la oxidación

del gliceraldehído-3-fosfato, un intermedio de la glucólisis, y la adición de un grupo
fosfato inorgánico para formar 1,3-bisfosfoglicerato. Este grupo fosfato de alta energía se
transfiere posteriormente a ADP para formar ATP, impulsando la fosforilación a nivel de
sustrato.
 Fosfoglicerato quinasa (PGK): Esta enzima cataliza la transferencia del grupo fosfato
del 1,3-bisfosfoglicerato al ADP, produciendo ATP y 3-fosfoglicerato. Esta reacción es
también un ejemplo de fosforilación a nivel de sustrato.

6. Cuál es la producción neta de ATP por la oxidación aeróbica de 1 mol de glucosa hasta
CO2 y H2O. Describa de manera general las etapas en donde se forma ATP.
1. Glicólisis:
· Producción neta de ATP: 2 ATP (4 ATP producidos - 2 ATP consumidos).
· Producción de NADH: 2 NADH (equivalente a 5 ATP ).

2. Descarboxilación del piruvato:

· Producción de NADH: 2 NADH (equivalente a 5 ATP).

3. Ciclo de Krebs (Ciclo del Ácido Cítrico):

· Producción de GTP (equivalente a ATP): 2 GTP.
· Producción de NADH: 6 NADH (equivalente a 15 ATP).
· Producción de FADH2: 2 FADH2 (equivalente a 3 ATP).

4. Cadena de Transporte de Electrones y Fosforilación Oxidativa:

· Los NADH y FADH2 generados en las etapas anteriores se utilizan para
producir ATP mediante la cadena de transporte de electrones en la membrana
interna mitocondrial.

 Glicólisis: 2 ATP + 5 ATP = 7 ATP

 Descarboxilación del piruvato: 5 ATP = 5 ATP
 Ciclo de Krebs: 2 ATP + 15 ATP + 3 ATP = 20 ATP
 TOTAL: 7 ATP + 5 ATP + 20 ATP = 32 ATP por mol de glucosa
7. Cual es la importancia de la glicólisis para los eritrocitos y las neuronas
En los eritrocitos, la glicólisis es esencial ya que carecen de mitocondrias, lo que les impide
llevar a cabo la respiración celular aeróbica. Por lo tanto, la glicólisis se convierte en su
única fuente de energía para mantener sus funciones vitales. Además, la glicólisis
proporciona ATP necesario para las bombas de membrana que mantienen el gradiente de
electrolitos entre el plasma y el citoplasma de los eritrocitos, lo cual es crucial para
mantener su forma y flexibilidad, permitiéndoles circular eficientemente por los vasos
sanguíneos. Asimismo, la glicólisis suministra precursores para la síntesis de metabolitos
esenciales como el glutatión, que protege a los eritrocitos del daño oxidativo.

En el caso de las neuronas, aunque pueden utilizar la respiración celular aeróbica para
producir ATP, la glicólisis es de vital importancia para el suministro rápido y constante de
energía. La glicólisis también provee ATP para las bombas de membrana que mantienen el
gradiente de iones en las neuronas, esencial para la transmisión sináptica y la comunicación
neuronal. Además, la glicólisis suministra precursores para la síntesis de neurotransmisores
como el glutamato y el GABA, fundamentales para las funciones neuronales. Por último, la
glicólisis contribuye a la plasticidad neuronal, que es la capacidad del cerebro para adaptarse
y cambiar en respuesta a la experiencia.

8. Mediante un esquema demuestre la función del NAD + en la glicólisis. Por qué no

aparecen NADH y NAD+ en la reacción neta?

La enzima gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa cataliza la oxidación del

gliceraldehído-3-fosfato a 1,3-bisfosfoglicerato. En esta reacción, el NAD+ actúa como
aceptor de electrones, reduciéndose a NADH.
 El NADH y NAD+ no aparecen en la reacción neta porque se consumen y se regeneran
durante el proceso. En otras palabras, el NAD+ se reduce a NADH en un paso y luego se
oxida de nuevo a NAD+ en otro paso. Por lo tanto, el NAD+ y NADH actúan como
intermediarios en la glicólisis y no se encuentran en la reacción neta.

9. A qué se llama enlaces fosfóricos ricos en energía. Qué intermediarios de la glicólisis lo

presentan?
Los enlaces fosfóricos ricos en energía son enlaces químicos que liberan una gran cantidad
de energía libre cuando se rompen por hidrólisis. Estos enlaces se caracterizan por tener un
alto potencial de transferencia de grupo fosfato, lo que significa que son capaces de transferir
fácilmente un grupo fosfato a otra molécula.

En la glicólisis, dos intermediarios presentan enlaces fosfóricos ricos en energía:

 1,3-Bisfosfoglicerato (1,3-BPG): Este intermediario se forma en el paso 6 de la

glicólisis, cuando el gliceraldehído-3-fosfato se oxida a 1,3-bisfosfoglicerato por la
gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH). El 1,3-BPG contiene un grupo
fosfato de alta energía unido al carbono 1 y otro grupo fosfato unido al carbono 3. Este
enlace fosfato en el carbono 1 es un enlace fosfórico rico en energía.
 Fosfoenolpiruvato (PEP): Este intermediario se forma en el paso 9 de la glicólisis,
cuando el 2-fosfoglicerato se deshidrata a fosfoenolpiruvato por la enolasa. El PEP
contiene un grupo fosfato de alta energía unido al carbono 2. Este enlace fosfato es un
enlace fosfórico rico en energía.

10. Escriba las reacciones irreversibles de la glicólisis, indicando las enzimas que las
catalizan

11. ¿Cómo se regula la glicólisis?

Hay 3 vías de regulación de la glicolisis:
 1) En la enzima glucoquinasa por un tipo de regulación por expresión genética con
activadores como insulina e inhibidor cortisol y AMPc.
2) En la enzima fosfofructoquinasa I con una modulación alostérica y expresión genética
como activadores insulina, AMP y fructosa 2,6 bifosfato y como inhibidor ATP y citrato.
3) En la enzima piruvato quinasa con una regulación mediante modulación alostérica y
modificación covalente como activador fructosa 1,6 bifosfato y como inhibidor la
alanina, ATP y AMPc.
12. ¿Qué inhibidores de la glicólisis conoce Ud.? Indique el lugar y el mecanismo de acción
de estas sustancias.
Existen muchos inhibidores de la glicolisis que se están utilizando mas como agentes
cancerígenos, entre ellos tenemos:
 2-deoxi-D-glucosa
 2-bromopiruvato
 5-tioglucosa
 Ácido dicloroacético (DCA)
 Arseniato
 Yodoacetato
Mecanismos de acción: por ejemplo la 2-deoxi-D-glucosa, que es derivado de glucosa,
inhibiendo el crecimiento de la célula; el ácido dicloroacético o su forma de sal se utiliza
como inhibidor de la vía glicolitica ya que inhibe la actividad de la enzima piruvato
deshidrogenasa kinasa; el yodoacetato inhibe a la enzima a la enzima gliceraldehido-3-fosfato
deshidrogenasa al reaccionar con los grupos sulfhidrilo de la cisteina y así afecta la velocidad
de la glicolisis; Arseniato inhibe a las enzimas al reaccionar con los grupos tioles de los
aminoácidos cisteina, ypuede reemplazar a los fosfato lo que impide la síntesis de ATP [4].

13. Si se añadiese CN y/o dicumarol en el experimento de la presente práctica, se afectaría

la síntesis de ATP de la glicólisis?
Si añadiese cianuro y/o dicumarol en la siguiente práctica no afectarían la síntesis de ATP,
debido a que estos compuestos interfieren con el transporte de electrones y la fosforilación
oxidativa, que son procesos posteriores en la membrana mitocondrial, mientras que la
glicolisis si se desarrollaría de forma regular produciendo ATP.
Bibliografía:
1. Alberts, Bruce; Johnson, Alexander; Lewis, Julian; Morgan, David; Raff, Martin; Roberts,
K.; Walter, P. (2016). Biología molecular de la célula (6ª edición). Barcelona: Omega S.A.
ISBN 978-84-282-1638-8.
2. Matus-Ortega Genaro, Romero-Aguilar Lucero, Luqueno-Bocardo Oscar Ivan, Hernandez-
Morfin Katia, Guerra-Sanchez Guadalupe, Matus-Ortega Maura et al . Las funciones
metabólicas, endocrinas y reguladoras de la expresión genética del lactato. Rev. Fac. Med.
(Méx.) [revista en la Internet]. 2020 Oct [citado 2024 Ago 27] ; 63( 5 ): 7-17. Disponible
en: [Link]
17422020000500007&lng=es. Epub 05-Mar-2021.
[Link]
3. Romano AH, Conway T. Evolution of carbohydrate metabolic pathways. Res Microbiol
[Internet]. 1996 [citado el 27 de agosto de 2024];147(6–7):448–55. Disponible en:
[Link]
4. Xintaropoulou C, Ward C, Wise A, Marston H, Turnbull A, Langdon SP. A comparative
analysis of inhibitors of the glycolysis pathway in breast and ovarian cancer cell line models.
Oncotarget [Internet]. 2015 [citado el 28 de agosto de 2024];6(28):25677–95. Disponible en:
[Link]