PRACTICA No 2.
REACCIONES DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS
INTRODUCCIÓN.
Las proteínas son polímeros de alto peso molecular, compuestos por aminoácidos
unidos entre sí por enlaces peptídicos, que en soluciones acuosas se comportan
como coloides. Presentan propiedades químicas y físicas que dependen
directamente de factores intrínsecos del propio polímero, como son su estructura y
composición de aminoácidos, o bien de factores extrínsecos, como pueden ser el
pH, la temperatura, la presencia de sales, etc.
Existen varios métodos para la identificación y cuantificación de las proteínas, pero
la mayoría tiene como principio alguna reacción química característica de los
grupos R de los diferentes aminoácidos.
Puede decirse que las proteínas reflejan las propiedades químicas de los residuos
de aminoácidos que contienen, por lo que la mayoría de las reacciones coloridas de
identificación dependen de la existencia de un aminoácido específico en ellas.
OBJETIVOS.
Identificar la presencia de aminoácidos con grupos R específicos que constituyen a
una proteína a través de reacciones coloridas.
MATERIAL
Gradilla Baño maría
Tubos de ensayo Agitador de vidrio
Pipetas de 1, 5 y 10 mL Pinzas para tubo
Vaso de precipitados de 100 mL
SOLUCIONES Y REACTIVOS
Hidróxido de sodio al 10% Ácido acético glacial
Acetato de plomo al 5% Reactivo de Biuret
Ninhidrina al 1% en butanol Gelatina al 5%
saturado con regulador de fosfatos Peptona al 5%
0.06 M, pH 7.4 Albúmina al 5%
Ácido nítrico concentrado Tirosina al 1%
Hidróxido de amonio concentrado Triptofano al 1%
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Oxido rojo de mercurio Fenilalanina al 1%
Nitrito de sodio Cisteína al 1%
Magnesio en polvo o en granallas Aspartame al 0.5%
Ácido oxálico (sol. saturada)
1.- REACCIÓN DEL PLOMO PARA CISTEINA.-Es una reacción característica para
grupos sulfhidrilos.
PROCEDIMIENTO
a) A 1 mL de las soluciones problema (marcadas con un asterisco en la tabla) se
adicionan 2 mL de NaOH al 10% y se calientan 1 minuto en baño maría. Adicionar
de 3 a 5 gotas de acetato de plomo al 5% y calentar nuevamente hasta ver la
aparición de un precipitado negro.
b) Anotar los resultados y observaciones en la tabla.
2. REACCIÓN DE LA NINHIDRINA.- Es una reacción característica para grupos
amino libres que se lleva a cabo a pH alcalino.
PROCEDIMIENTO
a) A 1 mL de las soluciones problema (marcadas con un asterisco en la tabla) se
adicionan 5 gotas de la solución de ninhidrina en butanol. Observar a temperatura
ambiente la aparición de un color azul o violeta, que se debe a la presencia de los
grupos amino libres; si es necesario, los tubos en los que no aparece el color,
calentar en baño maría de 1 a 2 minutos.
b) Anotar los resultados y observaciones en la tabla.
3. REACCIÓN DE HOPKINS-COLE.-Esta reacción es característica del anillo
indol del triptofano, por ser éste el único aminoácido que contiene este grupo.
El reactivo contiene ácido glioxílico que se prepara por reducción del ácido oxálico
con magnesio en polvo o con amalgama de sodio. Numerosos aldehídos pueden
dar una reacción similar con triptofano. La naturaleza del compuesto colorido
formado no se conoce totalmente. Los cloratos, nitritos y cloruros interfieren en la
reacción.
PROCEDIMIENTO
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a) A 1 mL de las soluciones problema (marcadas con un asterisco en la tabla) se
adicionan 5 gotas del reactivo de Hopkins-Cole y se mezclan bien. Estratificar
cuidadosamente con 1 mL de ácido sulfúrico concentrado, procurando que se forme
un límite bien definido entre ambos líquidos. La aparición de un anillo violeta-rojizo
en la interfase es una prueba positiva de la presencia del triptofano.
b) Anotar en la tabla los resultados y observaciones.
4. REACCIÓN DE MILLON.- El reactivo de Millon contiene una mezcla de nitritos y
nitratos mercúricos en ácido nítrico concentrado. Debido a la presencia del grupo
fenólico se produce un compuesto de color rojo. El aminoácido tirosina da positiva
para esta prueba.
PROCEDIMIENTO
a) Adicionar a 1 mL de las soluciones problema (marcadas con un asterisco en la
tabla) de 2 a 5 gotas del reactivo de Millon y calentar en baño maría. La aparición de
un color rojo será una prueba positiva.
b) Anotar en la tabla los resultados y observaciones
5. REACCIÓN XANTOPROTEICA.- Esta reacción es positiva tanto para
aminoácidos aromáticos activados como proteínas en solución, aunque es mucho
más sensible cuando éstas se encuentran perfectamente secas. Esta reacción
depende de la nitración de los anillos bencénicos activados produciendo un color
amarillo. La prueba resulta negativa para proteínas que no contengan aminoácidos
aromáticos activados.
Ciertos derivados del benceno, como el ácido pícrico, reaccionan formando el
nitro-derivado amarillo. Es positiva para tirosina y triptofano.
PROCEDIMIENTO
a) A 1 mL de las soluciones problema (marcadas con un asterisco en la tabla) se
adicionan 1 ml de ácido nítrico concentrado, se calienta la mezcla y se enfría.
Estratificar cuidadosamente con 1 mL de hidróxido de amonio concentrado. La
aparición de un color amarillo o naranja en la interfase será prueba positiva.
b) Anotar en la tabla los resultados obtenidos.
6.- REACCIÓN DEL BIURET.- Esta es una prueba general para proteínas y
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péptidos de cadena no menor de 3 unidades de aminoácidos. Esta reacción tiene
utilidad en seguir el proceso de una hidrólisis proteínica, ya que la reacción será
negativa cuando la hidrólisis sea completa.
PROCEDIMIENTO
a) A 1 mL de las soluciones problema (marcadas con un asterisco en la tabla) se
adicionan 2 mL de NaOH al 10% y de 3 a 5 gotas del reactivo del Biuret, mezclar bien.
La formación de un color violáceo o la precipitación de hidróxido cúprico será una prueba
positiva.
Si el color de la reacción del Biuret no se presenta inmediatamente, dejar reposar de 10 a 15
minutos.
b) Anotar en la tabla los resultados y observaciones.
NOTA: Solo se realizarán para cada prueba las muestras marcadas con asterisco.
Reacción Reacción Reacción de Reacción Reacción Reacción
para de la Hopkins-Cole de Millón Xantoproteíca del Biuret
grupos Ninhidrina
-SH
Gelatina * * * * * *
Peptona * * * * * *
Albúmina * * * * * *
Aspartame *
Tirosina * * * *
Triptofano * * * *
Fenilalanina * * * * *
Cisteína *
Agua * * * * * *
Interpretación
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INFORME
1.- Introducción.
2.- Objetivos.
3.- Resultados en forma de tabla.
4.- Fundamentos de las reacciones.
5.- Interpretación y conclusión de cada una de las reacciones.
6.- Discusión.
7.- Conclusiones generales.
8.- Bibliografía.
9.- Preguntas extra.
BIBLIOGRAFÍA
1. McKee T. y McKee J. R. “Bioquímica” La Base Molecular de la Vida. Ed.
McGraw-Hill- Interamericana, pp. 152- 154, (2003).
2. Nelson D.L., Cox M.M., “Lehninger. Principios de Bioquímica” 3a. Ed. Omega., pp
113- 242, (2000)
3. Mertz E.T. “Bioquímica” Editorial Publicaciones Cultural, S.A. de C.V., pp 71-85, 10ª
Reimpresión
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