1.
Introducción
El colesterol es un lípido esencial para el organismo humano, desempeñando funciones
vitales como la formación de membranas celulares, síntesis de hormonas esteroideas y
producción de ácidos biliares. No obstante, niveles elevados de colesterol en sangre
están asociados con un incremento en el riesgo de enfermedades cardiovasculares,
incluyendo aterosclerosis, infarto de miocardio y accidentes cerebrovasculares.
La determinación precisa de los niveles de colesterol en suero es fundamental para el
diagnóstico y seguimiento de pacientes con riesgo cardiovascular. Este informe describe
el procedimiento para la determinación de colesterol total en muestras de suero
utilizando el método enzimático colorimétrico basado en los reactivos de Linear
Chemicals, reconocidos por su precisión y confiabilidad en análisis clínicos.
2. Objetivos
Objetivo General
Determinar la concentración de colesterol total en muestras de suero
humano mediante el método enzimático colorimétrico utilizando reactivos
de Linear Chemicals.
Objetivos Específicos
Explicar el fundamento teórico del método enzimático colorimétrico para la
determinación de colesterol.
Describir detalladamente el procedimiento experimental siguiendo las
especificaciones de Linear Chemicals.
Realizar los cálculos necesarios para obtener la concentración de colesterol en
las muestras analizadas.
Interpretar los resultados obtenidos en comparación con los valores de referencia
establecidos.
Concluir sobre la eficacia y aplicabilidad del método en el contexto clínico.
3. Marco Teórico
El colesterol en plasma se encuentra principalmente unido a lipoproteínas, formando
complejos que permiten su transporte en el torrente sanguíneo. Las principales
fracciones lipoproteicas son:
LDL (Lipoproteínas de Baja Densidad): Transportan colesterol desde el
hígado hacia los tejidos periféricos. Niveles elevados están asociados con riesgo
aterogénico.
HDL (Lipoproteínas de Alta Densidad): Facilitan el transporte inverso de
colesterol desde los tejidos hacia el hígado para su excreción.
El método enzimático colorimétrico es ampliamente utilizado en laboratorios clínicos
debido a su especificidad y sencillez. Este método se basa en una secuencia de
reacciones enzimáticas que culminan en la formación de un compuesto coloreado, cuya
intensidad es proporcional a la concentración de colesterol presente en la muestra.
Reacciones involucradas:
1. Hidrólisis de ésteres de colesterol:
Colesterol esteˊr+H2O→Colesterol estearasaColesterol libre+Aˊcidos grasos\
text{Colesterol estér} + \text{H}_2\text{O} \xrightarrow{\text{Colesterol
estearasa}} \text{Colesterol libre} + \text{Ácidos grasos}Colesterol esteˊr+H2
OColesterol estearasaColesterol libre+Aˊcidos grasos
2. Oxidación del colesterol libre:
Colesterol libre+O2→Colesterol oxidasaColest-4-en-3-ona+H2O2\
text{Colesterol libre} + \text{O}_2 \xrightarrow{\text{Colesterol oxidasa}} \
text{Colest-4-en-3-ona} + \text{H}_2\text{O}_2Colesterol libre+O2
Colesterol oxidasaColest-4-en-3-ona+H2O2
3. Reacción cromogénica:
H2O2+Fenol+4-aminoantipirina→PeroxidasaQuinoneimina (compuesto colorea
do)+2H2O\text{H}_2\text{O}_2 + \text{Fenol} + 4\text{-aminoantipirina} \
xrightarrow{\text{Peroxidasa}} \text{Quinoneimina (compuesto coloreado)} +
2\text{H}_2\text{O}H2O2+Fenol+4-aminoantipirinaPeroxidasaQuinoneimina (
compuesto coloreado)+2H2O
La absorbancia del compuesto coloreado se mide espectrofotométricamente a una
longitud de onda específica (generalmente 500 nm). La concentración de colesterol se
determina comparando la absorbancia de la muestra con la de un estándar de
concentración conocida.
4. Procedimiento
Materiales y Reactivos
Reactivo de colesterol (Linear Chemicals): Contiene colesterol estearasa,
colesterol oxidasa, peroxidasa, 4-aminoantipirina y fenol.
Estándar de colesterol: Solución de colesterol con concentración conocida (por
ejemplo, 200 mg/dL).
Muestras de suero: Obtenidas mediante venopunción y separadas por
centrifugación.
Espectrofotómetro: Ajustado a una longitud de onda de 500 nm.
Cubetas de vidrio o plástico adecuadas para el espectrofotómetro.
Pipetas y puntas desechables.
Baño María a 37°C.
Diagrama de Flujo del Procedimiento
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flowchart TD
A[Preparación de reactivos] --> B[Preparación de tubos: blanco,
estándar y muestras]
B --> C[Adición de reactivo de colesterol]
C --> D[Mezcla e incubación a 37°C por 10 min]
D --> E[Lectura de absorbancia a 500 nm]
E --> F[Cálculo de concentración de colesterol]
Pasos Detallados
1. Preparación de Reactivos:
o Preparar el reactivo de colesterol según las instrucciones del fabricante
(Linear Chemicals).
2. Preparación de Tubos:
o Blanco de reactivo:
1.0 mL de reactivo de colesterol.
10 µL de agua destilada.
o Estándar:
1.0 mL de reactivo de colesterol.
10 µL de estándar de colesterol (200 mg/dL).
o Muestras:
1.0 mL de reactivo de colesterol.
10 µL de muestra de suero.
3. Mezcla e Incubación:
o Mezclar suavemente cada tubo.
o Incubar los tubos a 37°C durante 10 minutos o a temperatura ambiente
durante 20 minutos, según las especificaciones del reactivo.
4. Lectura Espectrofotométrica:
o Ajustar el espectrofotómetro a 500 nm y calibrar con el blanco de
reactivo.
o Medir la absorbancia del estándar y de cada muestra.
5. Cálculo de Concentración:
o Utilizar la absorbancia del estándar y de las muestras para calcular la
concentración de colesterol.
5. Cálculos
La concentración de colesterol en las muestras se calcula utilizando la siguiente
fórmula:
Colesterol (mg/dL)=(AMuestraAEstaˊndar)×Concentracioˊn del Estaˊndar\
text{Colesterol (mg/dL)} = \left( \frac{A_{\text{Muestra}}}{A_{\text{Estándar}}} \
right) \times \text{Concentración del Estándar}Colesterol (mg/dL)=(AEstaˊndar
AMuestra)×Concentracioˊn del Estaˊndar
Donde:
AMuestraA_{\text{Muestra}}AMuestra = Absorbancia de la muestra.
AEstaˊndarA_{\text{Estándar}}AEstaˊndar = Absorbancia del estándar.
Concentración del Estándar = 200 mg/dL (o el valor específico del estándar
utilizado).
Ejemplo de Cálculo:
Absorbancia del estándar (AEstaˊndarA_{\text{Estándar}}AEstaˊndar): 0.500
Absorbancia de la muestra (AMuestraA_{\text{Muestra}}AMuestra): 0.650
Colesterol (mg/dL)=(0.6500.500)×200 mg/dL=260 mg/dL\text{Colesterol (mg/dL)} = \
left( \frac{0.650}{0.500} \right) \times 200 \, \text{mg/dL} = 260 \,
\text{mg/dL}Colesterol (mg/dL)=(0.5000.650)×200mg/dL=260mg/dL
6. Resultados
Tabla de Resultados:
Tubo Absorbancia (A) Colesterol (mg/dL)
Blanco 0.000 N/A
Estándar 0.500 200
Muestra 1 0.650 260
Muestra 2 0.420 168
Muestra 3 0.540 216
Interpretación:
Muestra 1: 260 mg/dL (Elevado)
Muestra 2: 168 mg/dL (Deseable)
Muestra 3: 216 mg/dL (Moderadamente elevado)
7. Conclusiones
El método enzimático colorimétrico con reactivos de Linear Chemicals es
efectivo y confiable para la determinación de colesterol total en suero.
Los resultados obtenidos permiten identificar pacientes con niveles elevados de
colesterol, facilitando intervenciones clínicas oportunas.
La muestra 1 presenta hipercolesterolemia, lo que indica un riesgo
cardiovascular elevado y la necesidad de evaluación médica.
Es esencial seguir protocolos estandarizados y calibrar adecuadamente el
espectrofotómetro para garantizar la precisión de los resultados.
8. Bibliografía
1. Linear Chemicals S.L. (Año). Instrucciones de uso del reactivo enzimático
colorimétrico para determinación de colesterol total. Barcelona, España.
2. Burtis, C. A., & Bruns, D. E. (2015). Fundamentos de Química Clínica y
Diagnóstico Molecular de Tietz. 7.ª edición. Elsevier.
3. McPherson, R. A., & Pincus, M. R. (2017). Henry's Clinical Diagnosis and
Management by Laboratory Methods. 23.ª edición. Elsevier.
4. Organización Mundial de la Salud (OMS). (2021). Guía para la gestión y
prevención de dislipidemias.
Nota: Este informe ha sido elaborado siguiendo los procedimientos estándar y
utilizando información proporcionada por Linear Chemicals y fuentes bibliográficas
reconocidas en el ámbito clínico y bioquí
