UNIVERSIDAD NACIONAL HERMILIO VALDIZÁN
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA EDUCACIÓN
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA, QUÍMICA Y CIENCIA DEL AMBIENTE
Fijación de tejidos.
Sesión 17
Fijación de tejidos.
La fijación del material con el que se va a trabajar es el primer paso y el más importante de todos, pues solo a partir del
material bien fijado se pueden esperar buenos resultados.
La fijación es una operación destinada a matar las células lo más rápidamente posible y conservarlas en el estado más
parecido al que tenían mientras estaban vivas. Debe lograr mantener todas sus partes constituyentes sin que aparezcan
estructuras nuevas producidas artificialmente. Un tejido bien fijado presentará las células turgentes, que no se han
plasmolizado, deshidratadas, hinchadas ni arrugadas.
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Un buen fijador debe tener las siguientes cualidades:
1. Debe tener un rápido poder de penetración, de modo que la fijación se produzca tanto en las capas profundas de un
tejido como en las capas superficiales.
2. Debe ser ácido para poder producir la coagulación total de las proteínas en forma paulatina, de modo que las células
no sufran contracciones. Solo para determinados estudios (nucléolos, mitocondrias, etc.) se utilizan fijadores básicos.
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Fijadores.
FAA
Es una mezcla de formol, alcohol etílico, ácido acético y agua, cuyas proporciones pueden variar según el material a
fijarse. Es el más utilizado para realizar estudios morfológicos o histológicos cuando el material se ha de cortar a mano
alzada o con micrótomo. También sirve como conservador y el material puede permanecer en él indefinidamente. Se debe
dejar actuar de 24 a 48 horas como mínimo.
Craff III
Es una mezcla de dos soluciones: una es de formol y la otra está formada por ácido crómico y ácido acético. Ambas
soluciones se mezclan en partes iguales antes de su uso. El material se fija durante 12-24 horas. También actúa como
conservador. Se lo puede utilizar para los mismos fines que el anterior.
Cuando se usan estos fijadores se debe evitar el contacto con la piel porque son altamente corrosivos. 4
Farmer
Sus componentes son alcohol absoluto y ácido acético glacial. Comúnmente es llamado “Carnoy” a pesar de que éste
difiere no solo en proporciones de dichos componentes, sino, además, en que el último incluye en su fórmula cloroformo.
Se le utiliza para realizar estudios meióticos y recuentos de cromosomas. Para anteras o ápices de raíces el tiempo de
fijación varía de 30 minutos a 24 horas, según el grosor de las mismas.
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Glutaraldehído
Es un fijador no coagulante, por lo tanto, apropiado para realizar estudios citoplasmáticos. Es el que otorga a los tejidos la
mejor preservación conocida hasta el momento. No es un compuesto muy estable.
Se comercializa en solución acuosa al 25% o 50%, frecuentemente con bastantes impurezas; debido a ello se recomienda
destilarlo nuevamente en el laboratorio y guardarlo en heladera ya fraccionado en frascos de 5 mL.
Se debe usar conjuntamente con una solución tampón de pH aproximado a 7,4 para evitar que por acidificación se
produzca la precipitación de las proteínas y de los ácidos nucleicos. Una vez mezclado con el buffer, es conveniente usarlo
dentro de las 24 horas.
El tiempo de fijación a temperatura ambiente varía desde 2 a 24 horas, mientras que en heladera (0 a 4°C) con 3 horas es
suficiente. Una excepción son las técnicas citoquímicas para estudios enzimáticos que requieren solo 10 minutos de
fijación.
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Tetróxido de osmio
Es muy volátil y sus vapores son tóxicos. Al igual que el glutaraldehído se le emplea con soluciones buffer, pero se le
agrega cloruro de calcio porque los iones calcio favorecen su acción fijadora. Se le puede utilizar como fijador primario o
como posfijador, luego del glutaraldehído. De acuerdo con ello varían los tiempos: si actúa con fijador, de 2 a 12 horas en
heladera (0 a 4°C) y si actúa como posfijador, 2 horas.
La extensa difusión como posfijador se debe a que fija y “tiñe” los organelos, dando un contraste positivo a sus
membranas. Se comercializa en forma de cristales, en ampollas cerradas al vacío.
