UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL
CUSCO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
0
UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL
CUSCO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
INTRODUCCIÓN
1
UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL
CUSCO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
Células post morten tecnica de fijacion e
inclusion
Para incrementar el contraste de las estructuras
tisulares y preservarlos a través del tiempo, se
debe realizar los siguientes procedimientos:
Fijación, deshidratación, aclaración, inclusión,
corte y tinción.
FIJACIÓN DE TEJIDOS: CLASIFICACION GENERAL DE LOS FIJADORES
La fijación es un método por el cual se llega a
preservar la morfología y composición química
de la célula. La mayor parte de los fijadores
actúan especialmente sobre la parte proteica de
CLASIFICACION GENERAL DE LOS FIJADORES Las ventajas fijación por congelación La fijación Química
la célula, actúan solidificando el protoplasma por
medio de la coagulación o precipitación
Consiste en sumergir células o trozos de tejidos
Fijadores físicos: Para estudios citoquímicos ∙ No causa retracción del tejido. en fijadores químicos simples o compuestos
∙ No se produce extracción de sustancias Actúan solidificando el protoplasma por medio
Calor: húmedo o seco
solubles. de la coagulación o precipitación
∙ La fijación es homogénea en todo el espesor de
Frío: Congelación (cryostato) cámara de CO2 B.-
la pieza. - La composición química se mantiene
Fijadores químicos
sin cambios.
∙ Las estructuras de las células por lo general se
Simples: Los que en su fórmula llevan una
conservan con muy escasas modificaciones
solución fijadora.
producidas por los cristales de hielo.
Compuestos: Los que en su fórmula presentan ∙ La rapidez de la fijación permite también
varias soluciones fijadoras, por ejemplo: sorprender a las células en momentos críticos de
Bromuro de cajal, alcohol amoniacal, su función
2
UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL
CUSCO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
COMPETENCIA
Realiza fijación e inclusión en parafina de los diferentes tejidos de
órganos de un animal y comprende su finalidad.
MATERIALES
- 01 cuy vivo
- Piezas o trozo de tejidos y órganos de cuy
- Formaldehido al 20%
- Solución fisiológica
- Batería de alcohol a 70%, alcohol absoluto
- Neo-clear
- Parafina líquida caliente
- Frascos Coplin
- Frascos de vidrio con boca ancha con tapa
- Cajas Petri
- Horno
- Escuadras de Leukart
- Cinta indicadora del pH
- Bolsita de gasa
- Papel Canson
- Tablero de disección
- Hilo, aguja
- Tinta china
- Lápiz
- Estuche de disección
3
UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL
CUSCO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
PROCEDIMIENTO
1. Con el cuy desparasitado (ectoparasitos) 24 horas antes, proceder a
. . .
matarlo
2. C Realizar cortes de disección, comenzando con un corte
longitudinal luego transversal a lo largo del cuerpo del cuy y otro
longitudinal, desde el cuello hasta la parte baja del abdomen.
. . .
4
UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL
CUSCO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
3. Extraer los siguientes órganos, roturarlos con lápiz en papel
Canson y asegurarlos con hilo, mientras se manipula se coloca en
solución fisiológica, para luego proceder a la fijación:
Órgano obtenido Tejido a obtener
Cerebro Nervioso
Cartílago de pabellón auricular Cartilaginoso
Corazón Cardiaco
Estómago Muscular liso
Intestinos Muscular liso
Riñón Renal
Hígado Hepático
Músculo Esquelético
Pulmón Muscular liso
Lengua Muscular estriado
. . .
. . .
5
UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL
CUSCO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
FIJACIÓN:
1. Los órganos extraídos se colocan en frasco conteniendo formol al
20%, por una hora.
. . .
1. Los órganos se colocan en formol A al 20% por 1 hora.
2. Luego en Formol B por 1 hora también.
3. Lavar las muestras en agua a chorro continuo por aproximadamente
10min.
INCLUSIÓN:
DESHIDRATACIÓN EN ALCOHOLES:
Los tejidos lavados colocar en alcoholes de la siguiente manera:
1. Alcohol A de 70° por 15 minutos.
2. Alcohol B de 70° por 15 minutos.
3. Alcohol C de 70° por 15 minutos.
. . .
6
UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL
CUSCO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
4. Alcohol A de 96° por 15 minutos.
5. Alcohol B de 96° por 15 minutos.
7
UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL
CUSCO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
. . .
6. Alcohol C de 96° por 15 minutos
ACLARAMIENTO:
1. Neo-clear A por 15 minutos.
2. Neo-clear B por 15 minutos.
8
UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL
CUSCO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
. .
PREPARAMOS TODO PARA LA INCLUSIÓN EN PARAFINA:
INCLUSIÓN EN PARAFINA:
1. Parafina A por 30 minutos.
2. Parafina B por 30 minutos.
. .
Diluir parafina aproximadamente 300g, después de diluida colocar la
parafina en dos pomos aproximadamente de 150 g en cada pomo,
después colocar ambos pomos en el horno a 60°C
. . .
9
UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL
CUSCO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
PREPARACIÓN DE TACOS:
La parafina se coloca en los moldes de los tacos e inmediatamente después
. . .
se coloca las muestras en los moldes en posición central y se espera que
solidifique la parafina para después colocar dichos tacos en refrigeración
durante 30 minutos.
. . .
10
UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL
CUSCO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
RESULTADOS Y ANÁLISIS
Esquematice los resultados de la práctica.
El formoaldehido reacciona
con los grupos amino libres de
FIJACION: las proteinas, formando
puentes cruzados entre las
moleculas , que ayuda a
prevenir la auttolisis
Ppara la inclucion en
parafina, que es lipofilica
INCLUSION: (no se mezcla con el agua),
requiere que el tejido este
completamente libre de
agua, mediante la osmosis
con la ayuda del xilol que funciona como
un intermediario, para la fijacion de la
ACLARAMIENTO: parafina, asi mismo el alcohol no es
compatible con la parafina, el xilol lo deja
listo para ser infiltrado en parafina
Realiza un cambion
con el xilol para dejar
endurecer formando
INCLUSION EN un bloque solidos, lo
PARAFINA: cual nos ayudara para
realizar cortes bien
finos (3-5 micras)
11
UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL
CUSCO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
CONCLUSIONES
Con forme el procedimiento se daba, pusimos observar la gran importancia de
cada etapa y los compuestos utilizados como el Formol, Alcohol, Xilol y
finalmente la fijación con parafina, nos brinda de gran ayuda evitar la
putrefacción, mantenerlo almacenado por años en algún archivo histológico así
como realizar cortes bien finos de 3-5 micras, lo cual nos ayudar a las
observaciones de diferentes partes de la células, núcleos, citoplasma,
membranas, etc.
CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es la acción de la solución fijador y de que dependió
realizar una adecuada fijación de tejido animal?
Lo que nos permite la solución fijador detener la descomposición de los tejidos,
preservándolos por varios años, para una adecuada fijación depende mucho de el
tamaño de los tejidos, la temperatura del formol, del tiempo de contacto de
nuestra muestra en los diferentes pasos , la cantidad del fijador .
12
UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL
CUSCO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
2. ¿Cuál es el motivo del lavado a chorro continuo luego de la
aplicación del fijador?
Ayuda al quitar el exceso de formol en los tejidos, así facilitara al alcohol quitar
todo el exceso de agua que se encuentra en los tejidos, como sabemos la
parafina es lipofílica, lo cual significa que no se mescla con el agua.
3. ¿Cuál es la finalidad de realizar la inclusión definitiva en parafina?
La finalidad de esta, nos ayudara a preservar los tejidos por años, como también
ayuda a las observaciones de las diferentes partes de la células por la facilidad
de realizar cortes finos de 3-5 micras, núcleos, citoplasma, membranas, etc.
BIBLIOGRAFÍA
1. Fox, C. H., Johnson, F. B., Whiting, J., & Roller, P. P. (1985). Formaldehyde
fixation. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry, 33(8), 845–853.
[Link] en PubMed Central:
[Link]
2. Elsevier. (s.f.). Tissue fixation. ScienceDirect Topics. Recuperado el 15 de
abril de 2025, de
[Link]
3. Leica Biosystems. (s.f.). Fixation and Fixatives 1: The Process of Fixation
and the Nature of Fixatives. Recuperado el 15 de abril de 2025, de
[Link]
process-of-fixation-and-the-nature-of-fixatives/
13
UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL
CUSCO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
14
