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OBSERVACIÓN Y RECONOCIMIENTO DE CÉLULAS EUCARIOTAS
I. FUNDAMENTO
En 1939, en base a observaciones realizadas por los científicos alemanes Schleiden y Schwan, se plasmó la teoría
celular, la cual produjo un cambio radical en las ciencias biológicas. Esta teoría postula que los “cuerpos de todos
los animales y vegetales están formados de células y que solo pueden aparecer nuevas células por división de las
células preexistentes”. De ahí que los organismos por muy sencillos que sean están constituidos por unidades vivas
denominadas células.
La célula eucariota es más compleja que la célula procariota y contiene, a diferencia de esta última, núcleo celular.
Los organismos más simples (protozoarios) están constituidos de una sola célula eucariota mientras que los más
complejos o multicelulares están formados por un gran número de células eucariotas que se hallan organizadas en
tejidos, órganos y sistemas.
La forma de la célula es variada y relacionada a la función que realizan en los diferentes tejidos, algunas tienen
formas típicas, como las neuronas (células del tejido nervioso), son más largas que anchas y otras, como las del
parénquima (un tipo de célula de las plantas) y eritrocitos (glóbulos rojos de la sangre), son equidimensionales;
otras, como los leucocitos, son de forma cambiante. Muchas células cuando se encuentran en medio líquido tienden
a tomar la forma esférica y, cuando están agrupadas en grandes masas forma poliédrica.
El tamaño de la célula está en relación con su función. La mayor parte de las células eucariotas sólo son visibles
con el microscopio, estando su diámetro comprendido entre 10 y 100 um (salvo excepciones). Por lo general el
tamaño resulta constante para cada tipo celular e independiente del tamaño del organismo, es decir una célula del
riñón de un caballo es del mismo orden que la de un ratón. La diferencia en el tamaño del órgano se debe
al número de células y no al tamaño de estas.
II. OBJETIVOS
Observar y caracterizar células eucariotas de tipo vegetal (epidermis de cebolla).
Observar y caracterizar células eucariotas de tipo animal (epitelio bucal, tejido adiposo y sangre).
[Link]ÍA
MATERIALES
Recursos y equipos que encontrarás en el laboratorio:
Microscopio óptico Agua destilada
Láminas portaobjeto Hematoxilina
Láminas cubreobjeto Eosina
Lanceta estéril Sudan III
Mechero de Alcohol Azul de metileno
Tubos de ensayo Wright
Pinzas de madera Lugol
Gotero Formol
Cubeta de tinción Fósforo
Soporte para tinción
Bisturí
Pinzas
Traerás al laboratorio:
- Cebolla
- Hisopos
- Agua estancada de 15 días guardada en frasco oscuro con trocitos de lechuga
- Levadura de pan
- Gotas de sangre obtenidas en el laboratorio por punción en un dedo con lanceta hematológica
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PROCEDIMIENTO
A, Observación de células vegetales (Células epiteliales de Allium cepa)
Las células de la epidermis de las hojas internas del bulbo de la cebolla son de forma alargada y bastante
grande. La pared celular celulósica se destaca muy clara teñida por el colorante. Los núcleos son grandes y muy
visibles. En el citoplasma se distinguen algunas vacuolas grandes débilmente coloreadas.
1 Separe una de las capas del bulbo de la cebolla. Con ayuda de una pinza desprenda la membrana
epidérmica que cubre la parte interna de la cebolla (catafilo) y extiéndala en el portaobjetos.
2 Utilizando una hoja de afeitar obtenga una porción de medio centímetro cuadrado, cúbrala con una gota de
Lugol, coloque cuidadosamente el cubreobjeto y observe en el microscopio.
3 Reconozca las partes de la célula vegetal.
B. Observación de organismos unicelulares
1 Coloque una gota de agua estancada sobre un portaobjeto y cubra con una laminilla.
2 Observe con el objetivo de menor aumento.
3 Ajuste el diafragma para incrementar el contraste.
4 Observe la forma, tamaño y movimiento de los organismos unicelulares.
C. Observación de levaduras del pan
1 Diluya un trocito de levadura de pan (Saccharomyces cerevisiae) con agua destilada, en un tubo de ensayo.
2 Luego coloque una gota del tubo sobre un portaobjeto y cubra con una laminilla.
3 Observe con el objetivo de mayor aumento.
4 Ajuste el diafragma para incrementar el contraste.
5 Observe la forma y tamaño de estos organismos.
D. Observación de células animales (Epitelio bucal)
El azul de metileno tiñe intensamente el núcleo y con menos color el citoplasma de las células. Este suele ser
algo granuloso.
1 Con un hisopo limpio extraiga suavemente la mucosidad de la cavidad bucal.
2 Deposite la mucosidad extraída en el centro de una lámina portaobjetos y extiéndalo con un frotis.
3 Agregue unas gotas de azul de metileno y espere 3 minutos.
4 Elimine el exceso de colorante utilizando agua destilada y deje secar.
5 Coloque un cubreobjetos y observe la muestra a menor aumento y localice: células asociadas y dobladas.
6 Luego visualice a mayor aumento y reconozca los componentes celulares.
F. Observación de células animales (Sangre)
Al microscopio las células sanguíneas se
verán predominantemente los glóbulos rojos,
hematíes o eritrocitos teñidos de color rojo por
la eosina. No tienen núcleo y son más
delgados por el centro que por los bordes.
Los glóbulos blancos o leucocitos se identifican
fácilmente por la presencia de núcleo, teñido
de morado por la hematoxilina.
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Hay varias clases de leucocitos:
Linfocitos: de tamaño aproximado al de los glóbulos rojos, presentan un núcleo redondeado y un citoplasma
basófilo, que tan solo se observa como una fina capa alrededor del núcleo. Se dividen en dos categorías, los
linfocitos B y T.
Monocitos: son los leucocitos grandes, poco frecuentes. Tienen un núcleo muy grande y oval en forma de riñón
que aparece teñido en color violeta, son más móviles y su función principal es la fagocitosis. Los monocitos
circulan por el torrente sanguíneo entre 12 y 100 horas para después penetrar en el tejido conectivo, donde se
diferencian en macrófagos, adquiriendo la capacidad de fagocitar bacterias, presentar antígenos y limpiar los
restos celulares. En el hueso, los osteoclastos son células derivadas de los monocitos.
Leucocitos con núcleos lobulados o Polimorfonucleares o Polinucleares (PMN) presentan el núcleo
fragmentado o arrosariado y pueden ser:
Neutrófilos: de tipo granulocito, es el más abundante de la sangre del ser humano. Tiene un periodo de vida
corto (de horas o pocos días), y su función principal es la de fagocitosis de hongos y bacterias (es decir, las
rodean con su membrana citoplasmática y las introducen al interior celular). Estas células de núcleo lobulado
contienen gránulos primarios y gránulos específicos secundarios. En una extensión sanguínea aparecen
débilmente teñidos de rosa. Constituyen el 60-70% de los leucocitos circulantes.
Eosinófilos, con granulaciones abundantes de color rojizo y el núcleo teñido de color azul marino. Estos
glóbulos aumentan su número en caso de parasitosis o procesos alérgicos.
Basófilos presentan un núcleo teñido de rojo y las granulaciones del citoplasma de color muy oscuro. es el
menos abundante en la sangre. Son los responsables del comienzo de la respuesta alérgica, a través de la
liberación de histamina y serotonina en bajas concentraciones, teniendo una participación activa en la
respuesta inmunitaria.
Las plaquetas o trombocitos no son visibles ya que precisan una técnica especial de tinción.
Efectúa los siguientes pasos para ambas coloraciones, Wright y Hematoxilina-Eosina:
1 Con ayuda de una lanceta desechable, realice una punción del pulpejo del dedo anular de la mano izquierda,
previa desinfección con algodón y alcohol.
2 Tome una gota de sangre y haga un frotis fino sobre el portaobjeto. Se hace colocando una pequeña gota
de sangre sobre un extremo del portaobjetos, con el lado de otro portaobjetos, en un movimiento uniforme,
extiende la gota sobre el primero. Dejar secar al aire.
3 Colocar el frotis ya seco, sobre una base plana en posición totalmente horizontal.
Para la coloración de Wright:
1 Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tinción, y;
2 Coloree con unas gotas de colorante Wright, inmediatamente agregar sobre el colorante el mismo número de
gotas de agua destilada y mezclar rápidamente, soplando suavemente hasta que se forme una capa
plateada.
3 Dejar reposar la mezcla por 8 - 10 minutos, observando la intensidad de color.
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4 Lave con agua destilada y dejar secar al medio ambiente, si es posible con la lámina en forma vertical.
5 Observe al microscopio. Utilice el objetivo de 10X para ubicar la muestra y luego de 100X para la observación
de las células y núcleos.
6 Diferencie las diferentes formas de núcleo en los neutrófilos, basófilos, eosinófilos, monocitos y linfocitos.
7 Dibuje cada forma de núcleo.
Para la coloración de Hematoxilina-Eosina:
1 Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tinción y añadir unas gotas de alcohol absoluto y dejar que el
alcohol se evapore para fijar la preparación.
2 Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. Evitar la desecación del colorante
agregando más líquido.
3 Lavar la preparación y añadir unas gotas de eosina dejándola actuar 1 minuto.
4 Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante.
5 Dejar secar aireando la porta o bien al calor muy lento de la llama del mechero.
6 Observar al microscopio. Utilice el objetivo de 10X y luego de100X para la observación de las células y
núcleos.
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