Tema 19.
Genética
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@Contraste_Fases
Contrastedefases
ESTRUCTURA ADN
Ácidos nucleicos:
Existen dos tipos de ácidos nucleicos: el ADN y el ARN. La unidad básica de los ácidos nucleicos es el
nucleótido
Cada nucleótido está formado por tres componentes:
1) ácido fosfórico
2) azúcar en forma de pentosa
*Ribosa: en el ARN
*Desoxirribosa: en el ADN
3) base nitrogenada:
*Púrica: adenina y guanina
*Pirimidínicas: citosina, timina (ADN)
(uracilo en lugar de timina en el ARN).
-Si la molécula sólo tiene el azúcar unido a la base nitrogenada se denomina nucleósido.
-Si la molécula tiene el azúcar unido a la base nitrogenada y al ácido fosfórico se denomina nucleótido
ESTRUCTURA ADN
Estructura de ADN
-Doble hélice
-Las dos cadenas se alinean en forma antiparalelas, es
decir, son paralelas, pero en direcciones inversas (una en
sentido 5’ → 3’ y la complementaria en el sentido inverso).
-Las bases nitrogenadas quedan hacia el interior y los
fosfatos y desoxirribosas hacia el exterior.
- Adenina se une a timina (doble enlace) y guanina a
citosina (triple enlace)
-Los extremos de cada una de las hebras del ADN son
denominados 5’-P (fosfato) y 3’–OH (hidroxilo) en la
desoxirribosa.
ESTRUCTURA ADN
CONCEPTOS
Genética: ciencia que estudia el material hereditario (ADN/cromosomas) que se encuentra en todas las células de un
individuo, sus anomalías y variantes y su posible repercusión clínica.
Gen: Es una secuencia ordenada de nucleótidos en la molécula de ADN (o ARN, en el caso de algunos virus) que
contiene la información necesaria para la síntesis de una macromolécula con función celular específica,
habitualmente proteínas pero también ARNm, ARNr y ARNt.
Locus: posición de un gen
Exón: región codificante de un gen. No es separada durante el proceso de
corte y empalme y, por tanto, se mantienen en el ARN mensajero maduro
Intrón: región no codificante de un gen
Genoma: conjunto de genes contenidos en los cromosomas. Totalidad del
material genético que posee un organismo
Cromosoma: estructuras altamente organizadas, formadas por ADN y
proteínas, que contiene la mayor parte de la información genética de un
individuo.
CONCEPTOS
Cromosomas homólogos: miembros de un par de cromosomas en el que uno es heredado de la madre y otro del
padre
CONCEPTOS
Alelo: forma alternativa de un gen que ocupa un mismo locus
Hemicigoto: si sólo tiene una carga o dosis para un determinado gen. Se aplica, por ejemplo, en el caso de los
varones humanos a los genes del cromosoma X
CONCEPTOS
Alelo dominante: alelo expresado cuando está presente al menos en una sola dosis (expresado en homocigosis y
heterocigosis)
Alelo recesivo: alelo que está expresado solamente cuando es homocigoto
Alelos codominantes: alelos que no muestran dominación, que cuando están presentes juntos ambos se expresan
completamente
CONCEPTOS Dogma central
MENSAJERO
20 aminoácidos
CONCEPTOS Dogma central: replicación, transcripción, traducción
-Replicación: mecanismo que permite al ADN duplicarse (es decir, sintetizar una copia idéntica).
-Transcripción: proceso por el que las secuencias de ADN son copiadas a ARN mensajero.
-Traducción: proceso por el que las secuencias contenidas en el ARN mensajero son transformadas a proteínas.
CONCEPTOS
CONCEPTOS
Genotipo: constitución genética de un individuo o de un organismo.
Fenotipo: apariencia de un individuo como resultado de la interacción del genotipo y del medio ambiente
Penetrancia: proporción de individuos en una población que presentan el fenotipo correspondiente a su
genotipo. Si P<1 se habla de penetrancia incompleta
Expresividad: grado de intensidad con la que se expresa un genotipo determinado en un individuo
ESTRUCTURA CROMOSOMA
Solamente son visibles durante la mitosis (especialmente
metafase)
Brazo corto (p)
Brazo largo (q)
Centrómero: estrechamiento que divide a cromosoma en dos
partes denominadas brazos
Cinetocoro: estructura que hay en el centrómero a la que se
unen los microtúbulos del huso acromático
Satélite: extensiones terminales muy pequeñas de material
cromatínico
Indice centromérico: relación entre la longitud del brazo corto y
la longitud total del cromosoma metafásico
El ser humano dispone de 46 cromosomas (23 pares): 46 XX (mujeres), 46 XY (hombres)
ESTRUCTURA CROMOSOMA Clasificación
1) Posición del centrómero
2) Si son sexuales o no: cromosomas sexuales (X e Y), autosomas (del 1 al 22)
ESTRUCTURA CROMOSOMA Clasificación
3) Tamaño
ESTRUCTURA CROMOSOMA Clasificación
4) Patrón de bandas (tras tinción)
Cariotipo: Conjunto de los cromosomas de una célula, de un individuo o de una especie, después del proceso en que
se unen por pares de cromosomas idénticos y se clasifican según determinados criterios.
DIVISIÓN CELULAR Interfase
El proceso de división comienza con la INTERFASE (periodo que ocupa la mayor parte del ciclo celular, desde el
nacimiento de la célula hasta justo antes de que empiece la división).
Antes de dividirse la célula debe multiplicar su contenido, incluido el DNA.
Ello se produce en la interfase. La alternancia entre la interfase y la
división celular, se conoce como ciclo celular.
La interfase se divide en tres fases:
A) Fase G1:
En éste período se sintetizan activamente ARN y proteínas. Durante este período la célula posee tan sólo la cantidad de
ADN que ha recibido de su progenitora y cada cromosoma está formado por una sola cromátida, ya que aún no se ha
producido la replicación del ADN. Esta fase tiene una duración muy variable de unas células a otras. En un organismo
puede haber células que están en fase G1 unos días, otras que estén años, e incluso las hay que no se dividen. Cuando una
célula se detiene dentro de su ciclo celular lo hace siempre en G1. Esta situación se debe a la existencia, dentro de esta
fase, del llamado punto de restricción o punto R. Una vez superado este punto las células se ven obligadas a completar el
ciclo realizando las fases S, G2 y M. Pero las células pueden detenerse en su ciclo celular y quedar en un estado de
"reposo" o "quiescencia" sin superar el punto R y, por tanto, sin dividirse. Entonces se considera que la célula se encuentra
en la llamada fase G0 del ciclo celular.
DIVISIÓN CELULAR Interfase
B) Fase S:
Comienza cuando se inicia la replicación del ADN nuclear y termina cuando el
ADN se ha duplicado. Por lo que, después de la fase S, los cromosomas están ya
formados por dos cromátidas hermanas. Esta situación se mantiene durante
toda la fase G2, y hasta que las cromátidas se separan en la mitosis. A lo largo
de toda la fase S se van activando las unidades de replicación del ADN, hasta
que queda replicado; a la vez se sintetizan las histonas y las enzimas específicas
para la replicación del ADN y los ARN correspondientes. No todo el ADN se
replica de forma simultánea, sino que el ADN que se encuentra más
condensado (heterocromatina) se replica al final de la fase S, mientras que el
menos condensado (eucromatina) se replica al principio. Cuando el ADN se ha
replicado, la célula continúa su preparación para la mitosis entrando en la fase
G2.
C) Fase G2.
Se sintetizan una serie de proteínas esenciales para la división celular. La fase
G2 termina cuando comienza la profase del período M (es decir, cuando los
cromosomas, que han sufrido una condensación progresiva durante la fase G2,
se hacen visibles en el microscopio óptico)
DIVISIÓN CELULAR Mitosis
Proceso de reproducción de una célula que consiste,
fundamentalmente, en la división longitudinal de los
cromosomas y en la división del núcleo y del citoplasma;
como resultado se constituyen dos células hijas con el
mismo número de cromosomas y la misma información
genética que la célula madre.
De una célula 2n se obtienen dos células hijas 2n
DIVISIÓN CELULAR Mitosis
Interfase de la mitosis
Es el tiempo que pasa entre dos mitosis o división del núcleo celular. Durante esta fase, sucede la duplicación del número de cromosomas (es decir,
del ADN). Así, cada hebra de ADN forma una copia idéntica a la inicial. Las hebras de ADN duplicadas se mantienen unidas por el centrómero. La
finalidad de esta duplicación es entregar a cada célula nueva formada la misma cantidad de material genético que posee la célula original. Además,
también se duplican otros orgánulos celulares como, por ejemplo, los centríolos que participan directamente en la mitosis
Terminada la interfase, empieza la división celular, así como la conocemos, formada por las cuatro fases: Profase, Metafase, Anafase, Telofase.
Profase de la mitosis
Las hebras de ADN se condensan y van adquiriendo una forma determinada llamada cromosoma. Desaparecen el involucro nuclear y el nucléolo. Los
centríolos se ubican en puntos opuestos en la célula y comienzan a formar unos finos filamentos que en conjunto se llaman huso mitótico
Metafase de la mitosis
Las fibras del huso mitótico se unen a cada centrómero de los cromosomas. Estos se ordenan en el plano ecuatorial de la célula, cada uno unido a su
duplicado
Anafase de la mitosis
Los pares de cromosomas se separan en los centrómeros y se mueven a lados opuestos de la célula. El movimiento es el resultado de una
combinación del movimiento del centrómero a lo largo de los microtúbulos del huso y la interacción física de los microtúbulos polares
Telofase de la mitosis
Finalmente, las cromátidas llegan a los polos opuestos de la célula y se forman así las nuevas membranas alrededor de los núcleos hijos. Los
cromosomas se dispersan y ya no son visibles al microscopio óptico
Citocinesis: En esta fase se forman dos células hijas pero con el mismo número de cromosomas de la célula madre.
DIVISIÓN CELULAR Meiosis
Proceso de división celular, propio de las células reproductoras, en el que se reduce a la mitad el número de
cromosomas.
De una célula 2n (diploides) se obtienen cuatro células hijas n (haploides)
DIVISIÓN CELULAR Meiosis
PRIMERA DIVISIÓN MEIÓTICA (MEIOSIS I)
Al final de la primera división meiótica, se han producido dos células y cada una de ellas con la mitad de los cromosomas homólogos, esta es la
diferencia fundamental con la mitosis.
Profase I de la meiosis
La cromatina visible en el núcleo celular se condensa de modo que se forman estructuras con una forma de bastoncillo, llamados cromosomas. Cada
cromosoma aparece en forma de X, ya que está formado por dos cromatidas hermanas, unidos en un punto llamado centrómero. Las cromatidas
derivan del proceso de duplicación del ADN, por lo tanto cada uno es idéntico genéticamente al otro.
En esta fase, y es el aspecto más importante de la meiosis, una vez que los cromosomas homólogos están unidos entre sí, se realizan intercambios
cruzados (crossing-over o recombinación genética) véase foto 6. La membrana que rodea el núcleo desaparece y se forman unos microtúbulos
proteicos, que se extienden de un polo a otro de la célula. La importancia de la recombinación genética radica en que es el proceso por el cual se
aporta variabilidad a la composición genética de las células resultantes.
Metafase I de la meiosis
Los cuatro homólogos están dispuestos simétricamente en una línea imaginaria, en el plano ecuatorial, transversal a la zona. De esta manera, cada
uno se dirige hacia uno de los dos polos de la célula.
Anafase I de la meiosis
Las fibras del huso mitótico se ponen en contacto con los centrómeros; cada tétrada migra a un polo de la célula.
Telofase I de la meiosis
En los dos polos de la célula madre se forman dos grupos de cromosomas haploides, donde solo hay un cromosoma de cada tipo. Los cromosomas se
encuentran todavía en la fase tétrada. El citoplasma de las dos células se distribuye y se realiza a citocinesis, es decir la división celular de la célula
madre en dos células hijas separadas. Las fibras del huso mitótico se desintegran y los cromosomas se dispersan.
DIVISIÓN CELULAR Meiosis
INTERCINESIS:
Fase de reposo entre la 1ª y 2ª división meiótica. No hay duplicación de ADN
SEGUNDA DIVISIÓN MEIÓTICA
La segunda división meiótica no incluye replicación del ADN. Los cromosomas formados por dos cromatidas, se desplazan a la línea ecuatorial y se
pegan al huso mitótico: Las dos cromatidas de cada uno de los cromosomas se separan y migran a los polos. De este modo se forman cuatro células,
cada una de ellas con un conjunto haploide de cromosomas y sobre todo con una variedad de distintos cromosomas (origen materno y paterno).
Durante esta separación se verifica una distribución independiente de los cromosomas maternos y paternos, así que al final habrá una variedad
diferente de cromosomas en las cuatro células hijas
Profase II de la meiosis
La cromatina se condensa de nuevo, de modo que se pueden ver los cromosomas, formados por dos cromátidas unidos por el centrómero. Otra vez se
formará el huso mitótico de los microtúbulos.
Metafase II de la meiosis
Los cromosomas están dispuestos en una línea ecuatorial, transversal respecto a las fibras del huso mitótico, de modo que cada cromátidas mire a
uno de los polos de la célula. Los centrómeros pierden contacto con las fibras.
Anafase II de la meiosis
Las cromatidas migran cada uno de ellos a los polos de la célula, moviéndose a través del huso mitótico, de esta manera cada cromátida se convierte
en un cromosoma.
Telofase II
En los dos polos de la célula, se forman dos grupos de cromosomas, las fibras del huso mitótico se disgregan, los cromosomas empiezan a desaparecer
y al final se forma una membrana nuclear. El citoplasma de la célula se divide en dos, y eso lleva a la formación de dos células hijas haploides
DIVISIÓN CELULAR Mitosis vs Meiosis
MITOSIS MEIOSIS
Una división por ciclo Dos divisiones por ciclo
2N -> 2N 2N -> N
Células hijas idénticas a célula madre Células hijas diferentes entre sí y con la madre
(variabilidad genética)
Dos células hijas Cuatro células hijas
No hay cross-over (intercambio genético entre Sí hay recombinación
cromosomas homólogos)
Se llevan a cabo en todas las células (células Células especializadas en línea germinal
somáticas) (reproductivas)
Comienza en la etapa cigota y continúa durante toda En los organismos superiores, se efectúa después de
la vida del organismo que el individuo ha comenzado a madurar
Los productos mitóticos generalmente pueden Los productos meióticos no pueden experimentar
efectuar otras divisiones mitóticas división meiótica, aun cuando puedan realizar
divisiones mitóticas
En la anafase se separan cromátidas Cromosomas homólogos en la 1ª y cromáditas en la
2ª división
DIVISIÓN CELULAR Gametogénesis
LEYES MENDEL
Las enfermedades monogénicas también reciben el nombre de enfermedades mendelianas Son conocidas con esta denotación porque siguen los
patrones de herencia que GREGOR MENDEL, reconocido como el padre de la Genética, describió en 1866. Estos patrones de transmisión de la
información hereditaria se rigen en base a tres leyes fundamentales que postuló Mendel a partir de unos estudios que realizó con plantas de guisante,
extrapolables al resto de seres vivos.
1ª LEY DE MENDEL: LEY DE LA UNIFORMIDAD DE LOS HÍBRIDOS DE LA
PRIMERA GENERACIÓN FILIAL. Al cruzar una raza pura de una especie (AA)
con otro individuo de raza pura de la misma especie (aa), la descendencia de
la primera generación filial será fenotípicamente y genotípicamente igual
entre sí (Aa) y fenotípicamente igual a uno de los miembros de la generación
parental, en concreto, al portador del alelo dominante (A).
2ª LEY DE MENDEL: LEY DE LA SEGREGACIÓN. La segunda generación filial,
obtenida a partir del cruce de dos individuos de la primera generación filial, se
recupera el genotipo y fenotipo del individuo recesivo de la primera
generación parental (aa) en un 25%. Del 75% restante, fenotípicamente
iguales, el 25% tiene el genotipo del otro parental inicial (AA) y el 50%
restante se corresponde con el genotipo de la primera generación filial. Es
decir, los factores hereditarios son entidades definidas que pueden separarse,
segregarse, durante la formación de células sexuales
LEYES MENDEL
3ª LEY DE MENDEL: LEY DE LA TRANSMISIÓN INDEPENDIENTE O
DE LA INDEPENDENCIA DE LOS CARACTERES. Durante la formación
de los gametos, la segregación de los diferentes rasgos hereditarios
se da de forma independiente unos de otros, por lo tanto, el patrón
de herencia de uno de ellos no afectará al patrón de herencia del
otro
CONCLUSIONES:
-Los caracteres hereditarios están controlados por factores que se encuentran a pares en cada organismo (organismos
diploides).
-Cada factor del par procede de cada uno de los progenitores del organismo.
-En la formación de gametos, los factores emparejados se segregan al azar, de modo que cada gameto recibe uno u otro con
igual probabilidad.
-Puede haber formas diferentes para cada factor. Cuando 2 variantes distintas responsables de un carácter, coexisten en un
individuo, una puede dominar (conocida como alelo dominante) sobre la otra (conocida como alelo recesivo).
-Los cromosomas son los portadores de los factores hereditarios y son la base del mecanismo mendeliano de la segregación y
transmisión independiente (Teoría cromosómica de la herencia)
TRASTORNOS GENÉTICOS
Mutación: se define como cualquier cambio en la secuencia de un nucleótido o en la organización del ADN (genotipo) de un ser
vivo, que produce una variación en las características de este y que no necesariamente se transmite a la descendencia.
Se presenta de manera espontánea y súbita (al azar) o por la acción de mutágenos (radiaciones ionizantes, no ionizantes,
pesticidas, sustancias químicas, etc).
Clasificación (en función de la cantidad de material hereditario afectado):
a) Mutaciones génicas: afecta a la secuencia de nucleótidos de un gen
b) Mutaciones cromosómicas: alteraciones en la secuencia de genes de un cromosoma
c) Mutaciones genómica: alteraciones en el número de cromosomas
TRASTORNOS GENÉTICOS
Mutación
a) Mutaciones génicas: afecta a la secuencia de nucleótidos de un gen
TRASTORNOS GENÉTICOS Clasificación
TRASTORNOS GENÉTICOS Técnicas empleadas
CITOGENÉTICA: campo de la genética que comprende el estudio de la estructura, función y comportamiento de los
cromosomas. Incluye análisis del cariotipo, bandeado G en cromosomas y otras técnicas de bandeado citogenético, y
también la citogenética molecular del tipo de hibridación por fluorescencia in situ (FISH) e hibridación genómica
comparativa (CGH).
GENÉTICA MOLECULAR: el campo de la genética que estudia la estructura y la función de los genes a nivel
molecular. Ejemplos de técnicas: PCR, secuenciación, MLPA, NGS, etc
TRASTORNOS GENÉTICOS Alteraciones cromosómicas
1) CROMOSÓMICAS: NUMÉRICAS
Euploidía: uno o más juegos completos de cromosomas. Puede ser:
*Monoploidía: un único juego (N)
*Poliploidía: varios juegos (3N, 4N, etc)
1.1. POLIPLOIDÍAS
Alteración del número de cromosomas que afecta a juegos completos (N).
-Si afecta a más de dos juegos se denomina poliploidía. Ejemplos triploidía
(3N), tetraploidía (4N).
-Puede deberse a la unión de cromosomas homólogos (autoploidía) o a
cromosomas no homólogos (aloploidía).
TRASTORNOS GENÉTICOS Alteraciones cromosómicas
1) CROMOSÓMICAS: NUMÉRICAS
1.2. ANEUPLOIDÍA: Alteración en el número de cromosomas sin afectar a juegos completos.
-Monosomía (2N-1). Ausencia de un cromosoma. Puede darse en todos los cromosomas. Ejemplo: Síndrome de Turner
(45X). Pacientes con fenotipo femenino, tala baja, aspecto senil, orejas de mayor tamaño, cuello corto, órganos sexuales
internos poco desarrollados, ausencia de menstruación, etc.
TRASTORNOS GENÉTICOS Alteraciones cromosómicas
1) CROMOSÓMICAS: NUMÉRICAS
1.2. ANEUPLOIDÍA: Alteración en el número de cromosomas sin afectar a juegos completos.
-Trisomía (2N+1). Existencia de un cromosoma extra. Ejemplos:
*Síndrome de Down (trisomía 21): rostro de luna llena, mayor
separación de los ojos, repliegue de la piel en el ángulo interno del
ojo, achatamiento nasal, lengua más grande, protrusión de la lengua,
hipotonía muscular, discapacidad intelectual, retraso del desarrollo,
etc.
*Síndrome de Edwards (trisomía 18): rasgos dismórficos, manos
cortas, discapacidad intelectual, alta mortalidad antes del año de vida,
etc
*Síndrome de Patau (trisomía 13): malformaciones somáticas
múltiples, discapacidad intelectual profunda, cabeza pequeña, ojos
pequeños o ausentes, labio leporina, anomalía de órganos internos,
etc
*Síndrome Klinefelter (47XXY): testículos pequeños, ginecomastia,
talla elevada, tendencia a obesidad, menor desarrollo de los
caracteres sexuales secundarios, ausencia de espermatogénesis
*Síndrome XYY
*Síndrome XXX
TRASTORNOS GENÉTICOS Alteraciones cromosómicas
1) CROMOSÓMICAS: NUMÉRICAS
TRASTORNOS GENÉTICOS Alteraciones cromosómicas
1) CROMOSÓMICAS: ESTRUCTURALES
DELECIÓN: parte del cromosoma se pierde. A mayor afectación mayores consecuencias
fenotípicas. Ejemplo: síndromes de microdeleción
DUPLICACIÓN: ganancia de parte del cromosoma: Ej: sínd. de microduplicación
TRANSLOCACIÓN: intercambio de material genético entre cromosomas no homólogos. Se pueden clasificar en:
balanceadas (si no conlleva ganancia/pérdida de material genético; no tendrán consecuencias genotípicas) o no
balanceadas
TRASTORNOS GENÉTICOS Alteraciones cromosómicas
1) CROMOSÓMICAS: ESTRUCTURALES
TRANSLOCACIÓN: Existe un tipo de translocación denominada Robertsoniana en el que se unen los brazos largos de
dos cromosomas acrocéntricos (13,14,15,21,22) por el centrómero. El fenotipo es normal, pero hay riesgo de enotipo
anormal en la descendencia
TRASTORNOS GENÉTICOS Alteraciones cromosómicas
1) CROMOSÓMICAS: ESTRUCTURALES
INVERSIÓN: resultado de dos roturas en un cromosoma seguidas de reinserción del fragmento en su sitio original pero
en orden inverso. Si incluye el centrómero se denomina pericéntrica, si no, paracéntrica
ISOCROMOSOMA: cromosoma en el que se ha perdido un brazo y el otro se ha duplicado de forma especular
INSERCIÓN: Es un tipo de translocación no recíproca que ocurre cuando un segmento deprendido de un cromosoma
se inserta en otro cromosoma en su orientación usual o invertido.
CROMOSOMA EN ANILLO
MARCADOR
TRASTORNOS GENÉTICOS
2) MONOGÉNICAS Son aquellas producidas por alteraciones en la secuencia de ADN de un solo gen.
2.1. Herencia mendeliana
Autosómico recesivo
Ej: hemofilia A
Ej: Neurofibromatosis Ej: fibrosis quística
TRASTORNOS GENÉTICOS
2) MONOGÉNICAS 2.2. Herencia no mendeliana
IMPRONTA GENÓMICA. Es la expresión selectiva de un gen según el origen parental del alelo (paterno o materno). La
represión del gen suele hacerse por metilación.
DISOMÍA UNIPARENTAL. Las dos copias de un cromosoma provienen del mismo progenitor, en lugar de que una copia
provenga de la madre y la otra copia del padre. Ejemplos: Síndrome de Prader-Willi (UPD15 paterno), Síndrome de
Angelman (UPD15 materno), Síndrome de Russell-Silver (UPD7 materno), Síndrome de Beckwith-Wiedemann (UPD11
materno)
EXPANSIÓN DE TRIPLETES. Mutación que aumenta el número de repeticiones de un triplete de nucleótidos (CGG/GCC,
CAG/GTC, CTG/GAC y GAA/CTT) en una sección determinada del ADN (tanto en secuencias codificadoras, como no
codificadoras). Reciben el nombre de mutaciones dinámicas, porque la región cromosómica afectada se hace inestable y
tiende a aumentar el número de repeticiones durante el proceso de división celular o mitosis. Puede producir ganancia o
pérdida de la función génica. Ejemplos: Corea de Huntington (autosómica dominante), ataxia de Friedreich (autosómica
recesiva), la enfermedad de Kennedy y el síndrome del X frágil (repeticiones CGG) (ligadas al cromosoma X)
MOSAICISMOS. Alteración genética en la que, en un mismo individuo, coexisten dos o más poblaciones de células con
distinto genotipo (dos o más líneas celulares
TRASTORNOS GENÉTICOS
2) MONOGÉNICAS 2.2. Herencia no mendeliana
Síndrome del X frágil (repeticiones CGG) (ligadas al cromosoma X)
TÉCNICAS EMPLEADAS
NIVELES DE ALTERACIONES GENÉTICAS
NIVEL SECUENCIA DEL ADN
TÉCNICAS MOLECULARES:
PCR, secuenciación, NGS...
NIVEL SECUENCIA DEL ADN PERO
INTERPRETACION CROMOSOMICA
TÉCNICAS DE CITOGENÉTICA MOLECULAR:
FISH, ARRAY CGH
NIVEL CROMOSÓMICO
TÉCNICAS DE CITOGENÉTICA CONVENCIONAL:
Cariotipo estándar. Cariotipo de alta resolución
TÉCNICAS EMPLEADAS Preanalítica
Heparina: Cariotipo Todas las pruebas genéticas deben ir acompañadas de un
CONSEJO GENÉTICO pretest y postest
Muestras que se tienen que cultivar
EDTA: Pruebas de genética
molecular
Ejemplos:
-Secuenciación
-Carga viral (plasma EDTA)
-MLPA Proceso comunicativo para informar, educar y dar soporte a individuos y
-Array CGH familias que tienen una enfermedad genética o el riesgo de tenerla. El
consejo genético les brinda a los pacientes información acerca de su
enfermedad y les ayuda a tomar decisiones informadas.
TÉCNICAS EMPLEADAS
CARIOTIPO (cariograma)
Conjunto de cromosomas de una célula metafásica ordenados de acuerdo a su morfología (metacéntricos,
submetacéntricos, telocéntricos, subtelocéntricos y acrocéntricos) y tamaño.
-El cariotipo normal de una mujer es 46 XX y el del hombre 46XY
-Se puede realizar en sangre periférica heparinizada (cariotipo constitucional,
hematológico), fibroblastos de líquido amniótico y vellosidad corial (cariotipo
prenatal), en médula ósea (cariotipo hematológico), aborto (cariotipo en restos
abortivos), etc
-Vellosidad corial (8-11 semanas gestación), Líquido amniótico (14-15 semanas
gestación)
-Indicado para diagnóstico de alteraciones genéticas cromosómicas numéricas y
estructurales
Constitucional: discapacidad intelectual, rasgos dismórficos, retraso del crecimiento, infertilidad, etc
Hematológico: diagnóstico y seguimiento enfermedades oncohematológicas
Prenatal: alteraciones ecográficas, cribado del primer trimestre positivo, etc.
Restos abortivos: infertilidad
TÉCNICAS EMPLEADAS CARIOTIPO
ETAPAS DE UN CARIOTIPO
• Obtención y conservación de la
muestra
• Cultivo
• Sacrificio del cultivo
• Obtención de los cromosomas
• Técnicas de tinción. Bandas
• Estudio
• Diagnóstico
• Consejo genético
TÉCNICAS EMPLEADAS CARIOTIPO. Cultivo
-Las células del paciente se deben cultivar in vitro a fin de obtener células en metafase.
-Se pueden utilizar casi cualquier muestra de células siempre que contenga células viables y nucleadas (recoger de forma
estéril y mantener a Tº ambiente o corporal, excepto tejido sólido a 4ºC)
-Composición: Agua, Sales, Glucosa, Vitaminas, Suero (bovino), Aminoácidos (L-glutamina), Factores de crecimiento
(mitógenos como Fitohemaglutinina, Pokeweed, Concanavalina A que es un mitógeno específico de Linfocitos T, LPS
mitógeno específico de Linfocitos B), Reguladores de pH (HEPES), Indicadores de pH (rojo fenol), Antibióticos (penicilina
y estreptomicina), etc
-Ejemplos: RPMI 16 (más utilizado para el cultivo diseñado para el crecimiento de linfoblastos y líneas celulares
leucémicas en suspensión), BONE MARROW-MAX, Chang (Fibroblastos)
-El cultivo necesita una atmósfera de CO2 (5%) en equilibrio con el bicarbonato sódico del medio (pH óptimo)
-Tipos: en suspensión (flotando) como las células sanguíneas y de médula ósea o en monocapa (fijadas a superficie)
como fibroblastos de líquido amniótico o tejido o vellosidad corial
-Los linfocitos no se dividen en cultivo. Necesitan de mitógenos para ello.
-Tejidos o vellosidad corial tratamiento previo con colagenasa. Fibroblastos de líquido amniótico disociación del líquido
mediante centrifugación
-Crecimiento: médula ósea (24-48 h), linfocitos (3-4 días), vellosidad corial (5-10 días), líquido amniótico (hasta 15 días)
TÉCNICAS EMPLEADAS CARIOTIPO
En el cultivo de células de líquido amniótico al hacer el subcultivo, para romper las uniones intercelulares y poder
seleccionar un solo tipo celular, la sustancia que se añade es: TRIPSINA.
SACRIFICIO
-Después de las horas de incubación, según el cultivo, se adiciona:
*Colchicina: deshace los filamentos del huso acromático, parando la división celular en el estado de metafase.
*Bromuro de ethidio se intercala entre las hebras del ADN evitando su completa compactación.
-Se incuba en la estufa durante 1 hora, esta vez con el tubo cerrado.
-Pasados los tiempos pertinentes de incubación, se realiza el Sacrificio Celular
CHOQUE HIPOTÓNICO. Las células del cultivo son tratadas con una solución salina hipotónica (ClK), la célula debido a la
presión osmótica se hinchan (posteriormente en la extensión cuando se lance la muestra contra el porta se romperá la
célula, quedando todos los cromosomas en una zona contigua y separados)
-FIJACIÓN. La reacción hipotónica se para con 2 ml de Solución de Carnoy (Fijador) que es una mezcla de Metanol y
Ácido Acético en la proporción (3:1).
-Tratamiento con una mezcla de metanol:acético para fijar los cromosomas a los restos de membranas evitando así que
se dispersen.
-Lavados para eliminar impurezas.
-Posteriormente se van realizando sucesivas centrifugaciones, quitando el sobrenadante y añadiendo Fijador.
Se trata la muestra media hora a -21ºC, se rompen los hematíes y la muestra se fija mejor en frío.
TÉCNICAS EMPLEADAS CARIOTIPO
EXTENSIÓN
-Las células del sedimento resultante final son extendidas en portaobjetos echando la gota de muestra desde alto para
que las metafases se expandan.
-Metafases médulas de peor calidad.
ENVEJECIMIENTO
-Para mejorar la calidad de la tinción, antes de teñirse se pueden envejecer mediante deshidratación en estufa:
*Sangres 24 horas a 60º C.
*Médula ósea 3 horas a 80º C.
TÉCNICAS EMPLEADAS CARIOTIPO
BANDEO:
Bandas G: tripsina para digerir las proteínas y tinte Giemsa. Cada par de cromosomas se tiñe de una forma
característica de bandas claras y oscuras (bandas G)
-Las bandas oscuras son regiones ricas en A-T de
replicación tardía Poseen muy pocos genes activos.
- Las bandas claras son regiones ricas en C-G de
replicación temprana. Estas bandas tienen un mayor
significado biológico ya que se consideran regiones
genéticamente muy activas
TÉCNICAS EMPLEADAS CARIOTIPO
BANDEO:
Bandas G:
El nivel de resolución mínimo exigible para un análisis citogenético constitucional común
para la detección de aneuploidias es de un patrón de bandeo de 400 bandas
TÉCNICAS EMPLEADAS CARIOTIPO
BANDEO:
Bandas C (obtenidas con hidróxido Bárico usando Giemsa). Tiñe la región centromérica de cada cromosoma y otras
regiones que contienen heterocromatina constitutiva: 1q, 9q,16q, Yq.
TÉCNICAS EMPLEADAS CARIOTIPO
BANDEO:
Bandas Q: tinción con mostaza de quinacrina. Bandas fluorescentes brillantes y oscuras. Las bandas Q brillantes
corresponden casi exactamente a las bandas G oscuras.
Las bandas Q y bandas C son útiles para detectar variantes ocasionales de la morfología (heteromorfismos). Son
generalmente benignas y reflejan diferencias en la cantidad o tipo de secuencias de ADN satélite.
Bandas R: tratamiento especial (calor) antes de la tinción. Las bandas claras y oscuras son las inversas que las obtenidas
por bandeo G o Q. Europa.
Bandas NOR (Nucleolar Organizer Regions): tinción con plata de los satélites de los cromosomas acrocéntricos.
Bandas T: tiñe telómeros
Bandas de alta resolución: técnicas de bandeo G o R en profase o prometafase. Útiles cuando se sospecha que existe una
pequeña anomalía estructural en un cromosoma. Se sincronizan los cultivos con timidina y metitrexato.
Bandas Q Bandas R Bandas NOR
TÉCNICAS EMPLEADAS CARIOTIPO
Bandas DA/DAPI: tiñe con fluorescencia las constricciones secundarias de los cromosomas 9, 16, en los brazos cortos del
cromosoma 15 y los brazos largos del cromosoma Y.
CAPTURA FOTOGRÁFICA (manual o automática) Y REALIZACIÓN DE CARIOTIPO:
TÉCNICAS EMPLEADAS CARIOTIPO
NOMENCLATURA:
Los autosomas se enumeran del 1 al 22 en orden decreciente de tamaño y se clasifican según posición del
centrómero (ver diapositivas estructura cromosoma).
Las regiones y bandas se numeran desde el centrómero hasta el telómero del brazo correspondiente.
Se define por tanto cada región del cromosoma como: cromosoma + brazo + citobanda. Ej: 19p13.2
TÉCNICAS EMPLEADAS CARIOTIPO
NOMENCLATURA:
46,XX cromosoma femenino normal
46,XY cromosoma masculino normal
47,XX,+21: mujer con S.Down
46,XX,r(16): mujer con cromosoma 16 en anillo
46,XY,1q+: Hombre con duplicación 1q
46,XY,t(8;14)(q12;q22): Hombre con traslocación
de los cromosomas 8 y 14 en los que la rotura del
cromosoma 8 se ha dado en la región q12 y en el
cromosoma 14 en la región q22
mos 45,X [28] / 46, XX [15]: mujer con mosaicismo
Turner presente en 28 metafases (15 metafases
normales)
TÉCNICAS EMPLEADAS
FISH (Hibridación in situ fluorescente)
Técnica citogenética de marcaje de cromosomas mediante la cual estos son hibridados con sondas específicas de la región
que se quiere estudiar, que emiten fluorescencia y permiten la visualización, distinción y estudio de los cromosomas así
como de las anomalías que puedan presentar.
Se conoce como astringencia a la afinidad de la sonda por su ácido nucleico diana
Aplicaciones: determinación de aneuploidías, microdeleciones, duplicaciones, inversiones, así como la adjudicación de un
marcador genético a un cromosoma
TÉCNICAS EMPLEADAS
FISH (Hibridación in situ fluorescente)
Cariotipo espectral FISH subtelomérica
FISH prenatal, FISH espermatozoides, FISH en neoplasias hematológicas, FISH en la detección de
síndromes de deleción/duplicación, FISH en DGP
TÉCNICAS EMPLEADAS
FISH (Hibridación in situ fluorescente)
FISH en DGS (screening genético preimplantacional)
Técnicas biología molecular en DGP (diagnóstico genético preimplantacional)
TÉCNICAS EMPLEADAS
CARIOTIPO FISH
Requiere células en división No requiere (generalmente)
Requiere tejido fresco Permite estudiar material congelado o
parafinado
Permite detectar alteraciones de todo el Sólo estudia la región que cubre la sonda que
genoma se utiliza
Bajo coste reactivos Moderado coste
TÉCNICAS EMPLEADAS
Técnicas de transferencia o blotting Se utilizan para separar y caracterizar ADN, ARN o proteínas
Métodos
Southern: ADN Regla mnemotécnica:
Northern: ARN NoRthern: NRa
Western: Proteínas
Ejemplos:
Western-blot: Confirmatorio de VIH
TÉCNICAS EMPLEADAS
Técnicas de transferencia o blotting
Procedimiento Southern:
-Se extrae el ADN de la muestra y se fracciona mediante
enzimas de restricción.
-Separación electroforética (en gel de agarosa o
poliacrilamida) del ADN.
-Transferencia del ADN a un soporte sólido (ej:
nitrocelulosa)
-Detección del ADN mediante sonda específica. La sonda
específica es un fragmento de 15-20 nucleótidos (de ADN
o ARN) marcado enzimáticamente o radioactivamente con
capacidad de hibridar específicamente con la hebra
complementaria del AND buscado.
En el caso del Western la detección es por Ac específicos
TÉCNICAS EMPLEADAS
ARRAY CGH (Hibridación genómica comparada)
Se compara todo el genoma de un paciente con el de un control (referencia) con objeto de detectar
deleciones o duplicaciones de regiones cromosómicas
TÉCNICAS EMPLEADAS
ARRAY CGH (Hibridación genómica comparada)
Aplicaciones: diagnóstico de síndromes de deleción/duplicación (rasgos dismórficos, retraso del
crecimiento, discapacidad intelectual, convulsiones, epilepsia, malformaciones, trastornos del
espectro autista, etc)
Se puede emplear tanto en el diagnóstico prenatal como postnatal
TÉCNICAS EMPLEADAS
PCR (Reacción en cadena de la polimerasa)
Técnica de gran sensibilidad que sirve para la amplificación de fragmentos cortos y específicos de ADN.
Se trata de hacer sucesivas copias de ADN utilizando como molde ADN presente en la muestra con ayuda de una
ADN polimerasa.
Requiere: Procedimiento:
-Cuatro desoxirribonucleósidos trifosfato (dATP, 1) Desnaturalización (Tª 94º durante 1 min). El ADN de
dCTP, dGTP, dTTP) doble cadena se abre en dos hebras sencillas.
-ADN polimerasa termoestable (Taq polimerasa) 2) Hibridación (54º durante 45 segundos). Acoplamiento de
-Dos oligonucleótidos cebadores de cadena los primers.
simple (primers) que delimitan el material 3) Amplificación (72º durante 2 min). Síntesis de la cadena
genético que quiere amplificarse. complementaria en dirección 5´-3´.
-Mg2Cl, KCl
-Tampón tris-HCl Esto se repite durante 25-30 ciclos. En cada ciclo se
-Termociclador: aparato que permite programar duplican las moléculas de ADN.
los ciclos de temperatura que requiere la PCR.
En cada ciclo se amplifica 2^n veces
Después de 20 ciclos se ha ampliado del orden de
millones de veces
El producto específico de ADN ampliado se
denomina amplicón
TERMOCICLADOR
TÉCNICAS EMPLEADAS Algunos tipos de PCR
PCR transcriptasa inversa (PCR-RT o PCR-TI)
Amplifica ARN. Para ello a partir de ARN se produce ADNc por transcriptasa inversa, posteriormente se amplifica ADNc
TÉCNICAS EMPLEADAS Algunos tipos de PCR
PCR anidada (nested PCR)
El producto de una PCR (amplificado) es usado como molde para una segunda amplificación
Posee dos grupos de cebadores: los primeros amplifican la secuencia original, y los segundos los productos amplificados de la
primera ronda de amplificación
Gran sensibilidad (aumenta el nº total de ciclos) y especificidad (debido al anidamiento de los segundos cebadores)
TÉCNICAS EMPLEADAS Algunos tipos de PCR
PCR múltiple
Se amplifica simultáneamente varias secuencias.
Hay una mezcla de varios cebadores dirigidos a
diferentes dianas
PCR competitiva
Se basa en la amplificación simultánea de la región diana y de un ADN control que también es amplificado con los mismos
cebadores y condiciones de PCR.
La amplificación de ambas secuencias es equivalentes, por lo que compiten en la amplificación
TÉCNICAS EMPLEADAS Algunos tipos de PCR
PCR en tiempo real
-Cada vez que se produce una amplificación (después de cada ciclo) se va detectando el producto amplificado
-Tanto la amplificación como la detección se producen en el mismo tubo.
-Generalmente se mide por intensidad de fluorescencia y hay diversos métodos:
*Enzima 5´nucleasa y tecnología Taqman
Sonda de marcaje dual. En un extremo de la sonda se encuentra un colorante
fluorescente (5´)que sirve como reporter y en el otro extremo (3´) se encuentra
un colorante inhibidor que bloquea su emisión (quencher). La actividad nucleasa
de la enzima ADN polimerasa libera el reportero cuya fluorescencia es detectada
*Sondas SYBR Green
*Sondas FRET (transferencia de Energía de Resonancia Fluorescente)
Se diseñan dos sondas que hibridan en regiones cercanas. Una en el que el
extremo 3´tiene un colorante donador y otra en el que en el extremo 5´tiene un
colorante aceptor. El fluoróforo dador, que es excitado por una fuente de luz,
transfiere su energía a un fluoróforo aceptor solo cuando se encuentra situado
en proximidad directa con el primero.
TÉCNICAS EMPLEADAS Algunos tipos de PCR
PCR en tiempo real
TÉCNICAS EMPLEADAS Algunos tipos de PCR
QF PCR
PCR multiplex de amplificación de marcadores de cromosomas y cuantificación (detección fluorescente cuantitativa) tras
electroforesis
Aplicación: diagnóstico prenatal de aneuploidías (estimación del número de copias de cromosoma 13,18, 21, X, Y).
TÉCNICAS EMPLEADAS
MLPA (Multiplex Ligation Probe Amplification)
Es un es un método de cuantificación relativa del
número de copias normales y anormales, basado en la
PCR
Aplicaciones:
-Detección de principales aneuploidías (13,18,21,X,Y)
-Detección de deleciones o duplicaciones
cromosómicas grandes: DiGeorge, Williams, Atrofias
espinales (SMA), regiones subteloméricas…
-Detección de ganancias y pérdidas génicas en tejidos
tumorales: Her2-neu (ERBB2), TP53, MYC…
-Detección de deleciones y duplicaciones de exones y
genes simples: RHD, BRCA1 and 2, MSH2, MLH1, VHL,
SHOX, MECP2, APC, NF2...
TÉCNICAS EMPLEADAS MLPA (Multiplex Ligation Probe Amplification)
Discrimina secuencias que difieren en sólo un nucleótido
Mismatch Perfect match
Mismatch at the probe ligation site → Ligation of the two probe oligonucleotides
No ligation, no amplification product → Amplification product
Normal
TÉCNICAS EMPLEADAS
MLPA (Multiplex Ligation Probe Amplification)
VENTAJAS INCONVENIENTES
- DETECTA HASTA 45 SECUENCIAS DNA O
RNA SIMULTANEAS (PCR) - INSTRUMENTACION COSTOSA
- 20 ng DNA (tejidos, etc)
- DISCRIMINA SECUENCIAS POR UN SOLO - REACTIVOS DE INVESTIGACION SIN MARCADO
NUCLEOTIDO CE PARA DX.
- METILACION SNPs Y MUTACIONES
CONOCIDAS - NUEVOS ENSAYOS REQUIEREN MUCHO
- DISCRIMINA IMPRINTING TIEMPO Y ESFUERZO
- PROTOCOLO IDENTICO PARA MUCHAS
APLICACIONES - NO ACEPTA MUESTRAS CONTAMINADAS (SG
- BAJO COSTE MATERNA)
- RESULTADOS <24 HORAS
- ALTO RENDIMIENTO - NO DETECTA TRIPLOIDIAS NI
TRASLOCACIONES BALANCEADAS
TÉCNICAS EMPLEADAS
Secuenciación
Técnicas destinadas a conocer el orden que tienen los nucleótidos (A, G, C, T) en la molécula de ADN
*Secuenciación Sanger (gold standard)
*NGS (Next Generation Sequencing)
TÉCNICAS EMPLEADAS
Secuenciación Sanger
TÉCNICAS EMPLEADAS
NGS
Esquema de trabajo:
Profundidad de campo: el número de veces que una región
-Preparación de la muestra
diana es secuenciada o leída.
-Extracción de DNA
Cobertura: porcentaje de regiones diana que son analizadas
-Preparación de las librerías
-Secuenciación La situación ideal es tener una profundidad de cobertura mínima de 20x con
una cobertura de 100% de las secuencias codificantes (exones) de los genes y
-Análisis de los datos de las regiones flanqueantes que regulan el splicing, y con una cobertura
-Informe media superior a 100x
TÉCNICAS EMPLEADAS
NGS. Ejemplo: Illumina
https://www.youtube.com/watc
h?v=fCd6B5HRaZ8&t=2s
TÉCNICAS EMPLEADAS
ANEXO: Extracción de ADN
Fases:
Desnaturalizaci
Lisis del tejido Separación de Separación de
ón proteica y
(química y/o compuestos otros
separación de
física) lipídicos contaminantes
proteínas
Muestra: piezas sólidas, como tejidos, tumores (frescos o parafinados), biopsias, vellosidades de corion, etc. o a partir de
muestras líquidas (sangre, líquido amniótico, saliva, etc.). La muestra de sangre preferible es EDTA
Métodos: diferentes variaciones, los más comunes son el método fenol/cloroformo para la extracción del ADN y por gradiente de
cloruro de cesio y ultracentrifugación para la extracción del ARN
- El ADN es soluble en alcohol, pero se torna insoluble en presencia de sal (NaCl) porque el sodio neutraliza la carga negativa de
los grupos fosfatos.
ANEXO: Extracción de ADN
Fases:
Desnaturalizaci
Lisis del tejido Separación de Separación de
ón proteica y
(química y/o compuestos otros
separación de
física) lipídicos contaminantes
proteínas
1) Si la muestra es sólida se realiza una lisis mecánica y a continuación se añade una solución de lisis química, compuesta de
una concentración de sales que da lugar a un choque osmótico, proteinasa K y detergentes
2) Los lípidos y las proteínas se separan en solventes orgánicos. La fase acuosa y la orgánica se separan por centrifugación lo
que permite aislar al ADN (generalmente utilizando columnas que retienen el ADN) . Los solventes que se usan
frecuentemente son el fenol, el cloroformo y el alcohol isoamílico
3) Precipitación de ADN. Se adiciona etanol y soluciones con altas concentraciones de iones de sodio. La centrifugación
permite que el ADN permanezca en el fondo del tubo mientras que el etanol es desechado. Los restos de etanol se
eliminan con un lavado con etanol al 70% y el remanente se elimina por evaporación.
4) Redisolución de ADN. Se hidrata el ADN para mantenerlo en solución
ANEXO: Extracción de ARN
Fases:
-El ARN es una molécula muy lábil, que puede degradarse en pocos minutos.
-Por esta razón, la recogida de la muestra es un paso crítico y debe añadirse inmediatamente algún inhibidor de las RNAsas,
como por ejemplo el trizol. Si se trata de una biopsia, el tejido debe congelarse inmediatamente a –70 ºC o en nitrógeno
líquido (no deben transcurrir ni minutos). La congelación rápida es muy importante para poder medir cantidades de un
determinado RNA en la muestra, ya que si no se evita su degradación se obtendrían valores falsamente disminuidos. Una vez
recogida la muestra, puede utilizarse cualquiera de los reactivos comerciales preparados para ello. Son similares a los
utilizados para DNA (columnas).
-Para trabajar con RNA los reactivos deben haber sido tratados con dietilpirocarbonato (DEPC), un inhibidor de RNAsas. Este
tratamiento consiste en añadir el 1/‰ de DEPC al reactivo a tratar, dejarlo en agitación unas 12 horas y después tratarlo en un
autoclave con el fin de eliminar el DEPC, transformándolo en H2O y CO2, ya que es un potente inhibidor enzimático.
-El material de vidrio y de plástico que vaya a utilizarse para la manipulación de RNA también debe tratarse en el autoclave.
- Además, siempre debe trabajarse con guantes.
ANEXO: Valoración de la extracción
-Una vez extraídos los ácidos nucleicos, debe valorarse tanto la CANTIDAD como la CALIDAD.
-Se realiza mediante espectrofotometría.
*Ácidos nucleicos absorbancia máxima a 260 nm Relación 260/280 1,7-1,9 pureza correcta
*Proteínas presentan un máximo a 280 nm
*Ácidos nucleicos absorbancia mínima a 234 nm Relación 234/260 <0,5 pureza correcta (más sensible)
-La espectrofotometría permite valorar la cantidad de ácidos nucleicos así como su pureza, pero no informa acerca de su
integridad. Para valorar la posible degradación se debe realizar una electroforesis en geles de agarosa y teñirlos con bromuro
de etidio.
El ARN en gel de agarosa desnaturalizante del 1% deben observarse dos bandas (la
más alta debe ser el doble de intensa que la más baja), correspondientes a dos
El ADN en gel de agarosa del 0,8% debe observarse RNAs ribosómicos (de 28s y 18s). Además, debe observarse de fondo una mancha
difuminada, que corresponde a los RNAs mensajeros que tienen diferentes
sólo una banda, equivalente a unas 20 kb tamaños
Anexo: Manipulación in vitro ADN
DEGRADACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS
*Degradación química:
-El pH bajo produce la hidrólisis de los grupos fosfodiéster del ADN y del ARN, así como la ruptura de los enlaces N-
glucosídicos.
-A pH elevado el ADN es resistente a la hidrólisis pero el ARN no lo es.
*Degradación enzimática: mediante ADNasas o ARNasas
Anexo: Manipulación in vitro ADN
SÍNTESIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS
-ADN polimerasas o ARN polimerasas: a partir de una cadena molde sintetizan ADN o ARN complementario,
respectivamente.
-Ligasas: enzimas que unen fragmentos de ADN
-Fosfatasas: enzimas que eliminan el fosfato de la región 5´de ADNs, ARNs y nucleótidos trifosfato.
-Quinasa: enzimas que incorporan el fosfato al extremo 5´OH que han dejado las fosfatasas.
-Enzimas de restricción: endonucleasas que reconocen secuencias de base de ADN y cortan el ADN a ese
nivel. Se emplean para cortar el ADN en fragmentos de más fácil manejo en el laboratorio. Las más
empleadas son las enzimas de restricción tipo II.
