UD 3, RECUENTOS CELULARES: EL HEMOGRAMA.

1.​ INTRODUCCIÓN.

Hemograma: determinación analítica que estudia los elementos formes de la sangre desde un
punto de vista cuantitativo y cualitativo.

-​ ¿Cuándo se solicita?
-​ Revisión rutinaria.
-​ Sintomatología relacionada con enfermedades hematológicas (fatiga,
hemorragia…), infecciosa (fiebre, dolor) o neoplasias.
-​ Cirugías.
-​ Embarazo.
-​ Seguimiento tto, quimioterapia, radioterapia.
-​ Evolución de enfermedades crónicas.

-​ ¿Qué incluye?
-​ Recuentos celulares: GR, GB, PLQT.
-​ Índices corpusculares: morfología y tamaño.
-​ Concentración de hemoglobina.
-​ Fórmula leucocitaria.
-​ VSG (opcional)

2.​ PARÁMETROS ANALÍTICOS INCLUIDOS EN EL HEMOGRAMA.

Se realiza a partir de SANGRE TOTAL con EDTA (rosa o lila), porque mantiene su morfología.
Se realiza de forma manual o mediante equipos automáticos.

2.1 SERIE ROJA

-​ Incluye: Recuento de hematíes / concentración de hemoglobina / índices corpusculares

/ hematocrito. Esto sirve para el DIAGNÓSTICO de ANEMIAS.

-​ Los valores dependen de la EDAD, SEXO y MÉTODO UTILIZADO para el ESTUDIO.

A)​ RECUENTO DE HEMATÍES.

-​ Nº de hematíes por UD de volumen - Millones / microlitros.

-​ Valores por encima VN: aumento de GR se produce poliglobulia, eritrocitosis o
policitemia. Valores por debajo VN: disminución de GR se produce anemia.
-​ Valores normales ADULTOS: Mujeres - 3´9 - 5´2 millones / microlitros. Hombres - 4´3 -
5´75 millones / microlitros.

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 B)​ CONCENTRACIÓN HEMOGLOBINA.

-​ Cantidad de hemoglobina por volumen de sangre (g/dl)

-​ Valores por debajo de VN: produce anemias, hemorragias, alteración medular, carencia
nutricional (vit B12, ácido fólico…), enfermedades crónicas… Valores por encima de VN:
enfermedades pulmonares (EPOC), fibrosis pulmonar, cardiopatía, patologías
medulares (policitemia vera)
-​ Valores normales ADULTOS: Mujeres - 12 - 15´6 g/dl. Hombres - 13´5 - 17 g/dl.

C)​ HEMATOCRITO.

-​ Volumen de sangre ocupado por los hematíes (%).

-​ Depende del nº de hematíes y de su tamaño.
-​ Valores, sus alteraciones son por las mismas razones que hemoglobina.
-​ Valores normales ADULTOS: Mujeres - 35 - 45 %. Hombres - aprox 50%.

D)​ ÍNDICES CORPUSCULARES.

-​ Informan del tamaño y concentración de hemoglobina de los hematíes.

-​ Son valores calculados a partir de: hematocrito / concentración de hemoglobina /
recuento GR.

D1. VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO.

-​ El volumen medio de los GR se mide en fl - fentolitro.

-​ ¿Para qué sirve? - Diagnóstico de anemias.
-​ VCM menor al rango de normalidad - ANEMIA MICROCÍTICA.
-​ VCM dentro del rango de normalidad - ANEMIA NORMOCÍTICA.
-​ VCM mayor al rango de normalidad - ANEMIA MACROCÍTICA.
-​ Valor normal - 80 - 90 fl.

D2. HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA.

-​ Hb promedio en cada eritrocito se va a medir en (pg: picogramos).

-​ Clasifica las anemias en:
-​ HCM menor al rango de normalidad - ANEMIA HIPOCRÓMICA.
-​ HCM dentro del rango de normalidad - ANEMIA NORMOCRÓMICA.
-​ HMC mayor al rango de normalidad - ANEMIA HIPERCRÓMICA.
-​ Valor normal - 27 - 33´5 pg.

D3. CONCENTRACIÓN DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA.

-​ Concentración de hemoglobina en un volumen determinado de hematíes (g/dl).

-​ Importante en las anemias:

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 -​ CHCM menor al rango de normalidad - Anemias por falta de hierro: TALASEMIA.
-​ CHCM dentro del rango de normalidad - ANEMIA MEGALOBLÁSTICA.
-​ CHCM mayor al rango de normalidad - Esferocitosis, xerocitosis y células
falciformes.

D4. AMPLITUD DE DISTRIBUCIÓN ERITROCITARIA.

-​ Da idea de la variación de tamaño de los GR respecto a un valor medio.

-​ Valores: Curva estrecha - valores muy parecidos en tamaño, ADE bajo.. Curva ancha -
gran variedad de tamaño, ADE alto produce ANISOCITOSIS.

D5. AMPLITUD DE DISTRIBUCIÓN DE LA HEMOGLOBINA.

-​ Da idea de la variación de la concentración de hemoglobina en cada GR.

-​ Valores altos de ADH dan lugar a una concentración de hemoglobina muy diferente, por
lo que se produce una - ANISOCROMÍA.

2.2 SERIE BLANCA.

-​ Recuento de leucocitos.
-​ Fórmula leucocitaria.

A.​ RECUENTO DE LEUCOCITOS.

-​ El nº de leucocitos por unidad de volumen.
-​ VN - 4 mil - 10 mil leucocitos / microlitros en sangre.
-​ Valores: por encima de VN - LEUCOCITOSIS - infecciones víricas o bacterianas
/ - procesos oncológicos (leucemia). Por debajo de VN - LEUCOPENIA -
infecciones víricas o bacterianas son GRAVES / - procesos neoplásicos.
-​ Reacción LEUCEMOIDE. Recuentos por encima de 50 mil leucocitos /
microlitros, se debe a una infección muy grave que provocó
AGRANULOCITOSIS o NEUTROPENIA (leucopenia) y se instauró un
tratamiento con factor estimulante de COLONIAS GRANULOPOYÉTICAS
(produe la síntesis de leucocitos de forma exagerada). (esta parte cae en
examen)

B.​ FÓRMULA LEUCOCITARIA.

-​ Recuento diferencial de los leucocitos.

B1. EOSINÓFILOS.
-​ VN - 0´02 - 0´5 x 10^3 / microlitros.
-​ Valores: por encima se llama EOSINOFILIA, producido por procesos alérgicos y
parasitarios. Por debajo se llama EOSINOPENIA.

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B2. BASÓFILOS.
-​ VN - mayores de 0´2 x 10^3 / microlitros.
-​ Valores: por encima se llama BASOFILIA, que es una infección vírica y reacción de
hipersensibilidad. Por debajo se llama BASOPENIA, se produce por corticoides, estrés o
enf de Cushing.

B3. NEUTRÓFILOS.
-​ VN - (1´5 - 7´7) x10^3 / microlitros.
-​ Valores: por encima se produce una NEUTROFILIA puede provocar procesos
inflamatorios o una infección bacteriana la cual produce una neutrofilia o una aparición
de neutrófilos inmaduros como: neutrófilos en cayado, mielocitos, metamielocitos
(neutrófilos inmaduros), todo esto se reconocerá como una desviación a la IZQUIERDA.
Por debajo se produce una NEUTROPENIA, se producen infecciones.

B4. LINFOCITOS.
-​ VN - (1´1 - 4´5) x10^3 / microlitros.
-​ Valores: por encima se produce una LINFOCITOSIS, a causa de una infección vírica,
procesos hematológicos, (linfocitosis fisiológicas (niños hasta los 10 años)). Por debajo
se produce una LINFOCITOPENIA, a causa del uso de medicamentos, o algunos virus
como el SIDA.

B5. MONOCITOS.
-​ VN - (0´10 - 0´90) x10^3 / microlitros.
-​ Valores: por encima se producen MONOCITOSIS, debido a infecciones víricas por
Epstein Barr o microorganismos intracelulares: Leishmania o Toxoplasma. Por debajo se
produce MONOCITOPENIA, debido a quimioterapias, procesos hematológicos o
infecciones del sistema inmune.

2.3 PLAQUETAS.

-​ Recuento de plaquetas e índices plaquetarios.

-​ Índices: plaquetocrito / volumen plaquetario medio / índices de dispersión de plaquetas.

A.​ RECUENTO DE PLAQUETAS.

-​ Nº de plaquetas por UD de volumen - (150 - 370) x10^3 / microlitros.

B.​ PLAQUETOCRITO.
-​ Volumen de sangre ocupado por plaquetas.
-​ 0´1 - 0´4 %.
-​ Valor SIN diagnóstico.

C.​ VOLUMEN PLAQUETARIO MEDIO.

-​ Tamaño medio de las PLQT.

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 D.​ ÍNDICE DE DISPERSIÓN DE PLAQUETAS.
-​ Grado de variación morfológica de las plaquetas (distinto tamaño).

3.​ MÉTODO MANUAL PARA LA DETERMINACIÓN DEL HEMOGRAMA.

3.1 RECUENTOS CELULARES.

-​ ¿Cómo se hace? (ESTE ES EL PROTOCOLO GENERAL)

1.​ Diluir la sangre anticoagulada.

2.​ Cargar la muestra en la cámara de recuento (Neubauer)
3.​ Hacer un conteo con el objetivo 40x.
4.​ Calcular según dilución en células/microlitros.

A)​ CÁMARA DE NEUBAUER. EXAMEN.

-​ Portaobjetos especial, con un gran grosor formado por 2 surcos laterales y uno
central, que delimita 2 cámaras de recuento.
-​ Cada cámara es de 3mm x 3mm (9 mm2), dividida en cuadrados de distintos
tamaños.
-​ ¿Cómo se contea?

1.​ Colocar el cubre cámara.

2.​ Realizar la dilución sanguínea.
3.​ Depositar 10 microlitros en la franja central y dejar, que por capilaridad difunda por la
cámara.
4.​ Dejar reposar.
5.​ Efectuar el conteo.
6.​ Hacer los cálculos pertinentes según la dilución.

-​ A tener en cuenta:
-​ Se cuentan todas las células dentro del cuadrado.
-​ Se cuentan las células que están sobre 2 de las 4 líneas.

B) RECUENTO DE HEMATÍES.

-​ Dilución 1/200 de sangre anticoagulada con EDTA con líquido de Hayem.

-​ Se cuentan 5 cuadrados de 2 mm de lado (CUADRANTE SECUNDARIO).
-​ Cálculos:

1.​ Se contean 5 cuadrados.

2.​ Suma.
3.​ Se multiplica por 10 elevado a 4 - RBC (red blood cell) /microlitros.

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 C) RECUENTO DE LEUCOCITOS.

-​ Se hace un dilución 1/20 de sangre anticoagulada con EDTA y un líquido de

TÜRCK: que lleva en su composición colorante para núcleos y ácido acético
glacial para lisar los hematíes.
-​ Conteo:

1.​ Se cuentan 4 cuadrado (CUADRANTE PRIMARIO)

2.​ Sumar.
3.​ Multiplicar por 50 - WBC/microlitros.

D) RECUENTOS DE PLAQUETAS.

-​ Dilución 1/100 de sangre con anticoagulante EDTA.

-​ Diluyente contiene:
-​ Una sustancia que produce la lisis de GR.
-​ Antiagregante.
-​ Colorante: Azul cresil brillante.
-​ Conteo:

1.​ Se contea 5 cuadrados SECUNDARIOS.

2.​ Suma.
3.​ Multiplicar por 5x10 3 - PLQT/microlitros.

3.2 HEMOGLOBINA.

Se determina su concentración por métodos colorimétricos, conocido como MÉTODO de la

CIANHEMOGLOBINA. Se basa en 2 reacciones complementarias:

1.​ El ión ferroso está unido (Hb) y yo lo pongo en presencia de ferrocianuro potásico y se
transforma a ión férrico obteniéndose metahemoglobina.
2.​ Metahemoglobina se pone en presencia de cianuro potásico obteniéndose
cianhemoglobina, quiero llegar a aquí ya que tiene una densidad óptica a 540 nm.

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 -​ ¿Cómo se hace? A través de una curva patrón, con valores conocidos de la
concentración de hemoglobina, por interpolación.

3.3 HEMATOCRITO.

Medida del volumen que ocupan los hematíes tras aplicar la fuerza centrífuga.

A)​ MACROHEMATOCRITO.

-​ Se realiza en tubos de WINTROBE.

-​ Procedimiento:

1.​ Tomar sangre anticoagulada con una pipeta Pasteur.

2.​ Introducir la pipeta dentro del tubo y descargar la sangre sin subir la pipeta por encima
del nivel de sangre (BURBUJAS).
3.​ Enrasar hasta 100 mm, centrifugar y observar la escala.

B)​ MICROHEMATOCRITO.

Se puede realizar con sangre anticoagulada de un tubo o sangre capilar de la yema del dedo
(capilar con heparina). El procedimiento es:

1.​ Llenar el capilar ¾ de su volumen.

2.​ Centrifugar.
3.​ Leer el resultado (regla milimetrada / lector hematocrito)

-​ EQUIPOS:
-​ Centrífuga de microhematocrito: tiene ranuras planas para colocar los capilares.
Presenta una banda elástica en la periferia, en este banda se coloca el extremo
sellado con plastilina.
-​ Regla milimetrada: se mide y se calcula el %.
-​ Lector de hematocrito, presenta:
-​ Ranura para insertar el capilar.
-​ Punto rojo, cercano a él se coloca la parte del tubo con hematíes.
-​ Franja central, se coloca el límite de las dos zonas.
-​ Escala graduada, da el valor del %.

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 ●​ A tener en cuenta: se debe hacer por duplicado. Si la diferencia entre las
mediciones es mayor al 2%, se debe repetir.

4.​ EXPRESIÓN DE RESULTADOS Y GENERACIÓN DE INFORMES.

Tras el procesamiento de las señales captadas, obtenemos 3 tipos de resultados:

-​ Numéricos: valor cuantitativo de los parámetros. Pueden ser calculados o medidos

directamente.
-​ Gráficos: histogramas o citogramas.
-​ Alarmas: resultado anómalo, ante un resultado anómalo se hace una revisión,
comprobación u otros estudios.
-​ Cualitativas: alteración morfológica.
-​ Cuantitativa: alteración en los recuentos.

INFORMES:
-​ Para el operador, el informe incluye datos numéricos y gráficos. Necesitan una
validación técnica y facultativa.
-​ Para el facultativo, el informe incluye unos valores numéricos validados.

4.1 CAUSAS DE ERROR.

A)​ Errores del equipo:

1.​ De coincidencia. 2 o más células pasan al mismo tiempo por el lector.

2.​ Incapacidad para discriminar. El equipo no es capaz de diferenciar entre células,
artefactos o moléculas del mismo tamaño.
3.​ Cambio en la intensidad de la señal.
4.​ Contaminación de los diluyentes con polvo.
5.​ Obstrucción de capilares.
6.​ Contaminación entre muestras. Se debe a los restos de una muestra de altos valores y
después se realiza otra medida con valores muy pequeños.
7.​ Presencia de burbujas.
8.​ Averías.

B)​ Errores de la muestra:

1.​ Coagulación de la muestra.

2.​ Falta de homogeneidad con el aditivo. Para evitarlo se debe agitar previamente.
3.​ Presencia de crioaglutininas, que son anticuerpos que atacan a los GR. Para evitarlo se
debe aumentar la temperatura previamente.
4.​ Hemólisis (aumento de hemoglobina), lipemia (gran cant de grasa, ictericia (aumento de
bilirrubina).
5.​ Recuento de leucocitos por encima de 50 mil/microlitros.

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 6.​ Presencia de agregados (plaquetas).
7.​ Lisis deficiente de los hematíes necesario para el recuento de GB en el canal de
basófilos.

4.2 CALIBRACIÓN Y MANTENIMIENTO DE LOS CONTADORES HEMATOLÓGICOS.

(EXAMEN)

A)​ CALIBRACIÓN. Conjunto de operaciones, realizadas por el personal técnico con el fin
de establecer una correspondencia entre los valores indicados por el equipo y los
valores de un material de referencia (CALIBRADOR).

¿Cuándo se realiza?

1.​ En el momento de instalación.

2.​ Cuando se cambia un componente del equipo, incluidas reparaciones ópticas.
3.​ De forma sistemática: cuando hay cambio de lote de reactivos, reactivos envejecidos…

B) MANTENIMIENTO. Son actividades encaminadas a mantener el equipo en perfecto

funcionamiento.

-​ INICIO DEL DÍA.

1.​ Encender el equipo y comprobar su correcto funcionamiento.
2.​ Realizar una supervisión de los reactivos y del resto de materiales (cubetas,
residuos…).
3.​ Tras la rutina de inicio, se debe realizar un control para comprobar su correcto
funcionamiento.

-​ FINAL DE LA JORNADA.
1.​ Realizar una limpieza programada y otra manual en las partes externas del
equipo.
2.​ Apagar el equipo. Normalmente habrá más de uno en el laboratorio y se irán
alternando.

5.​ MORFOLOGÍA CELULAR DIGITAL.

En casos de alarmas por datos fuera de los rangos normales.

-​ Revisión mediante extensión sanguínea manual o automática.

-​ Se hacen mediante extensores o teñidores automáticos. Y un sistema de
morfología celular digital, que nos permite la visualización de células en un
ordenador, que serán estudiadas por un citólogo.

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 6.​ VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR.

Mide la precipitación o sedimentación de los hematíes en un tiempo determinado. La sangre

está anticoagulada con citrato sódico al 3´2 %, y se deja reposar en un tubo durante 1 hora. De
forma automática, el equipo mide el resultado.

Este dato no tiene valor clínico.

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