LABORATORIO DE BIOLOGÍA GENERAL
Programa de Ingeniería Biológica
Departamento de Física y Química
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
PRACTICA DE MICROSCOPÍA
Docente Responsable: Javier Eduardo Castrillón Escudero
1. OBJETIVOS
• Identificar los componentes del microscopio
• Establecer las condiciones adecuadas para realizar montajes y observaciones usando el
Microscopio.
Es necesario que todos los estudiantes en la práctica usen bata manga larga y guantes de látex o nitrilo.
2. INTRODUCCIÓN
La célula es el componente estructural y funcional básico de todos los seres vivos. Sin embargo,
nosotros no tenemos la habilidad de poder observar su estructura solo con nuestros sentidos. La
curiosidad humana nos ha llevado a explorar el mundo de lo invisible, y tratar de entender cómo las
células, bacterias, hongos, protozoarios y virus interactúan en un mundo con relaciones muy
particulares entre sus integrantes.
El microscopio es el instrumento óptico que nos permite observar estas estructuras diminutas
mediante la combinación del poder de amplificación de lentes combinados con diferentes tipos de luces.
Inicialmente el aumento de imágenes fue usado por primera vez por Zaccharias Janssen en 1590, quien
usó varias lentes dispuestas en un tubo y observó que el objeto cerca del extremo del tubo parecía estar
muy agrandado; mucho más grande de lo que cualquier lupa podría lograr por sí sola. Usando esta
estrategia logro aumentos de hasta 9x. Posteriormente, Anton Van Leeuwenhoek (1632- 1723), desarrolló
sus propios microscopios simples, que tenían una sola lente y eran de mano. Van Leeuwenhoek logró un
mayor éxito que sus contemporáneos al desarrollar formas de fabricar lentes superiores, esmerilando y
puliendo una pequeña bola de cristal en una lente con un aumento de 270x, la mejor conocida para ese
momento. Hoy en día, usando diferentes tipos de microscopios, es posible obtener aumentos de hasta
1.000.000 de veces, lo que ha permitido una revolución en áreas como la biología, la microbiología, la
medicina, la ingeniería de materiales, entre otras.
2.1 TIPOS DE MICROSCOPIO
• Microscopio compuesto: es un instrumento óptico que presenta dos tipos de lentes (oculares y
objetivos) que permiten ampliar la imagen una cantidad especifica de veces (X), además,
presenta un sistema de iluminación que puede ser regulado a través de diferentes intensidades
lumínicas; hoy en día este tipo de instrumentos se pueden acoplar a sistemas de video y
software de procesamiento de imágenes que generalmente alcancen un aumento de 500 veces de la
muestra.
• Microscopio Confocal: este equipo usa como sistema de iluminación láser de diferentes
longitudes de onda que impactan el campo óptico y permiten visualizar las distintas
características de la muestra. En este tipo de microscopía se usa en las muestras de fluoróforos
o proteínas de fluorescencia, que son sustancias químicas que al ser excitadas por un láser
específico emiten una respuesta óptica que es capturada por el sistema y permiten a través de color
identificar estructuras específicas en la célula con un aumento similar al microscopio
compuesto.
• Microscopia electrónica: En este tipo de microscopía se usa un flujo o haz de electrones que
impactan con la muestra, posteriormente una serie de sensores acoplados al equipo registran la
interacción de los electrones produciendo una imagen. Este tipo de equipos pueden producir un
aumento de hasta 1.000.000 veces de la muestra.
2.2. PARTES DEL MICROSCOPIO
Sistema mecánico:
• Base: Es la parte inferior plana del Microscopio que está en contacto con la mesa.
• Brazo: Estructura que da soporte al sistema óptico, además de facilitar el transporte del
Microscopio.
• Platina: Superficie plana para sostener el portaobjetos que contiene las muestras.
• Tubo: Estructura cilíndrica en donde se encuentran los oculares.
• Revolver: Sistema giratorio en el cual se encuentran los objetivos.
• Tornillo macrométrico: Se encuentra generalmente en la parte inferior del brazo, permite
mediante acercamientos y alejamientos de la platina realizar el enfoque de la muestra.
• Tornillo micrométrico: Puede esta incorporado con el tornillo macrométrico o separado de él,
permite realizar el ajuste fino en la imagen observada.
• Platina: Superficie metálica en la cual se ubican las muestras para ser observadas, presenta un
orifico central para permitir el paso de luz desde la fuente hasta el objetivo atravesando la
muestra.
• Carro: Sistema de pinzas móviles ubicadas sobre la platina que permite sujetar la muestra.
Sistema óptico:
• Condensador: Conjunto de lentes encargados de proyectar los rayos lumínicos producidos por la
fuente de luz al centro de la platina.
• Filtro: Lente ubicada entre el condensador y la platina que permite el paso solo de luz
blanca hacia la muestra.
• Diafragma: Estructura con apertura y cierre que permite regular la intensidad de
luz que pasa hacia la muestra.
• Objetivos: Son un conjunto de lentes que se ubican en el revolver y que aumentan
la imagen de acuerdo con el número que tengan escrito (10x, 40X, 100X).
• Oculares: Son una o dos lentes que se ubican en la parte superior del tubo y
permiten ampliar las imágenes que provienen del objetivo, el aumento del ocular
dependerá del número que tenga escrito en él (2x, 8x, 10x); el aumento total será el
producto de multiplicar en el valor del ocular por el del objetivo, ejemplo:
Ocular(10X) x objetivo(40 X)
= 400X
Figura 1. Partes de un microscopio.
2.3 MONTAJE DE LA MUESTRA
Se denomina montaje al ubicar la muestra sobre la placa de vidrio o portaobjetos y luego cubrirla
con lalaminilla llamada cubre objetos. Estos montajes pueden ser:
• Frescos: Son montajes que se realizan con material fresco y buscan en el menor
tiempo posible visualizar fenómenos o estructuras celulares; en algunas ocasiones es
necesario usar colorantes que permitan teñir las estructuras de interés.
• Permanentes: Las muestras son inmortalizadas para poder observarlas por mucho
tiempo, para esto se usan soluciones especiales como alcoholes en diferentes
concentraciones que deshidratan la muestra, posteriormente esta es fijada en parafina
histológica, seguido a esto la muestra es cortada en laminas muy delgadas usando un
micrótomo y dispuestas sobre el portaobjetos.
2.4 CUIDADOS CON EL MICROSCOPIO
• Utilice papel absorbente para limpiar objetivos y oculares.
• No quite ninguna parte óptica o mecánica del Microscopio.
• Una vez usado el Microscopio debe quedar con la platina abajo, el objetivo de
menor aumento, la fuente de poder sin energía.
• Para transportar el microscopio con una mano sujete la base y con la otra tómelo
del brazo, siempre se debe transportar en posición vertical y nunca debe quedar
en el borde de la mesade trabajo.
3. MATERIALES
• Microscopio.
• Laminas portaobjetos.
• Laminas cubre objeto.
• Toallas absorbentes.
• Muestras para observar: (palabras impresas de periódico, hilos de colores,
hojas de plantas, insectos, sal de cocina, agua de lluvia y corcho).
4. PROCEDIMIENTO
1. Reconozca las partes del microscopio (ópticas y mecánicas).
2. Tome un portaobjetos y en el centro de este ubique una palabra impresa en periódico.
3. Ubique encima de la palabra una gota de agua y cubra con el cubreobjetos, el montaje debe quedar
embebido con agua.
4. Retire el exceso de humedad.
5. Encienda el Microscopio y verifique que se encuentre el objetivo de menor aumento en posición de
observación.
6. Ubique el montaje en el centro de la platina y fíjelo usando las pinzas del carro.
7. Abra suave y completamente el diafragma.
8. Ubique sus ojos en los oculares.
9. Usando el tornillo macrométrico suba despacio la platina hasta que pueda observar estructuras
definidas a través del ocular, de ajuste fino a la imagen usando el tornillo micrométrico.
10. Ilumine de forma homogénea el campo usando para esto el diafragma y el condensador, a más
aumento es necesario tener más luz.
11. Después de tener una imagen definida observe las estructuras que le llamen la atención, pase el
objetivo siguiente en aumento girando con cuidado el revolver, ajuste la imagen usando el tornillo
macro y micrométrico.
12. Repita el ejercicio hasta llegar al objetivo de inmersión (100X).
13. Antes de llegar al objetivo de 100X deposite una gota de aceite de inmersión sobre la muestra,
después ubique el objetivo de 100X en el centro del campo, incremente la iluminación y con el mayor
cuidado posible use el tornillo micrométrico para ajustar la imagen.
14. Después de realizar la observación en 100x limpie el objetivo con una toalla absorbente no
abrasiva y prepare el microscopio para una nueva observación.
15. Repita el procedimiento con todas las muestras usando todos los aumentos.
16. Repita el procedimiento con los granos de sal sin usar agua.
17. Para cada muestra realice gráficos (o fotos) de lo observado en cada aumento.
5. PREGUNTAS PARA EL INFORME
1. En un gráfico ubique las partes del microscopio.
2. ¿Cuál es la razón para que el microscopio proporcione una imagen real invertida?
3. ¿Qué diferencias existen entre microscopio y estereoscopio?
4. Explique 4 tipos de microscopía y de un ejemplo de sus usos.
5. ¿Qué papel juega la combinación entre oculares y objetivos en la amplificación de la imagen?
6. ¿Qué características tiene el aceite de inmersión que le permiten ser usado en la observación
de muestras?
7. Defina apertura numérica, poder de resolución, dispersión e índice de refracción.
8. Mediante un ejemplo explique: ¿Por qué es útil el uso del Microscopio en su área de trabajo?
Por favor revise estos enlaces:
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