Revista Cubana de Medicina Militar.
2015;44(1):33-40
ARTÍCULO ORIGINAL
Identificación fenotípica de cepas de Acinetobacter
circulantes
Phenotypic identification of Acinetobacter circulating strains
DrC. Rafael Nodarse Hernández, Lic. María Elena Fuerte Calvo
Hospital Militar Central “Dr. Luis Díaz Soto”. La Habana, Cuba.
RESUMEN
Introducción: en la actualidad, a nivel mundial, las infecciones hospitalarias más
graves incluyen a cepas de Acinetobacter resistentes a múltiples antibióticos.
Objetivo: identificar desde el punto de vista fenotípico cepas de Acinetobacter spp
y caracterizar su resistencia a los antibióticos.
Métodos: estudio observacional analítico en una muestra de 60 cepas de
Acinetobacter spp, de origen hospitalario, aisladas en el Hospital Militar Central
“Dr. Luis Díaz Soto” en el primer trimestre de 2014, las cuales se clasificaron en un
primer momento según esquema de Bouvet y Grimont (modificado por Gemer-
Smidt y otros). Posteriormente se les realizó prueba de sensibilidad a
antimicrobianos con discos: piperacilina, piperacilina/tazobactam, cefoperazona,
ceftriaxona, ceftazidima, cefepime, imipenem, meropenem, aztreonam,
gentamicina, amikacina y ciprofloxacina; e-test: colimicina y por último, producción
de biopelícula in vitro por técnica de slime-test.
Resultados: la aplicación del esquema solo permitió identificar fenotípicamente a
las cepas pertenecientes a la especie Acinetobacter baumannii (88,3 %); en los
casos restantes la identificación no fue conclusiva. El 51,6 % de las cepas de
Acinetobacter baumannii fue aislado en la Unidad de Cuidados Intensivos de adultos
y el 46,6 % a partir de secreciones bronquiales. La resistencia de las cepas de
Acinetobacter baumannii fue mayor de 80 %, lo que contrastó con la baja
resistencia de las cepas “no baumannii”. Con la aplicación del E-test para colimicina
en cepas de Acinetobacter baumannii se constató que el 90 % de ellas fue inhibida
a concentraciones inhibitorias mínimas ≤ 0,5 µg/mL. La totalidad de las cepas de
Acinetobacter baumannii fueron productoras de biofilm.
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Conclusiones: la cepa de Acinetobacter baumannii constituye uno de los
microorganismos más aislados en el hospital en pacientes graves, con una
resistencia bacteriana importante, excepto para colimicina.
Palabras clave: Acinetobacter, Acinetobacter baumannii, resistencia bacteriana.
ABSTRACT
Introduction: currently, worldwide, the most serious hospital infections include
Acinetobacter strains resistant to multiple antibiotics.
Objective: phenotypically identify Acinetobacter spp and characterize their
resistance to antibiotics.
Methods: an observational study was conducted in a sample of 60 Acinetobacter
spp strains of hospital waste origin, which were isolated in Dr. Luis Díaz Soto
central military hospital in 2014 first quarter. These strains were initially classified
according to Bouvet and Grimont scheme (modified by Gemer-Smidt and others).
Subsequently these strains underwent antimicrobial susceptibility testing with
disks: piperacillin, piperacillin/tazobactam, cefoperazone, ceftriaxone, ceftazidime,
cefepime, imipenem, meropenem, aztreonam, gentamicin, amikacin and
ciprofloxacin; E-test: colimycin and finally, in vitro biofilm production by slime-test
technique.
Results: the implementation of this scheme only allowed to phenotypically identify
Acinetobacter baumannii strains (88.3 %); in other cases the identification was not
conclusive. 51.6 % of Acinetobacter baumannii strains was isolated in the adult
intensive care unit and 46.6 % from bronchial secretions. Acinetobacter baumannii
resistance was 80 % higher, which contrasted with the no-baumannii strains low
resistance. The e-test implementation for colimycin in Acinetobacter baumannii
strains found 90 % inhibited at minimum inhibitory concentrations ≤ 0.5 µg/mL. All
Acinetobacter baumannii strains were biofilm producing.
Conclusions: Acinetobacter baumannii strain is one of the most isolated
microorganisms in critical patients in hospital, with significant bacterial resistance,
except for colimycin.
Keywords: Acinetobacter, Acinetobacter baumannii, bacterial resistance.
INTRODUCCIÓN
En la actualidad las infecciones hospitalarias más graves incluyen a cepas de
Acinetobacter resistentes a múltiples antibióticos.
Dentro de esta especie se considera al Acinetobacter baumannii como uno de los
más problemáticos patógenos en instituciones de salud a nivel mundial.1
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Este germen ataca fundamentalmente a los pacientes ingresados más vulnerables,
o sea, pacientes graves, que presentan brechas en la integridad de su piel o reciben
ventilación asistida. Tal y como se informa desde la década del 70 del siglo XX, la
neumonía hospitalaria es todavía la infección más común producida por esta
bacteria.2
La taxonomía del género Acinetobacter es larga, compleja y cambiante. En 1911,
Beijerinck, microbiólogo holandés, propone el nombre de Micrococcus calcoaceticus.
En 1954, Brisou y Prévost designan a la especie como Acinetobacter, del griego
akineto, que significa inmóvil. En la edición de 1974 del Manual Bergey aparece el
término Acinetobacter calcoaceticus. Posteriormente esta especie fue subdividida en
dos subespecies o biovares: anitratus e iwoffii. En 1986, Bouvet y Grimont plantean
12 genoespecies: A. baumannii, A. iwoffii, A. calcoaceticus, A. johnsonii, A. junii, A.
haemolyticus, entre otras.
Las especies de A. calcoaceticus, A. baumannii, Acinetobacter genoespecie 3 y A.
genoespecie 13TU están muy relacionadas y es difícil diferenciarlas por sus
propiedades fenotípicas, por lo que se creó el llamado “complejo A. calcoaceticus-A.
baumannii”.3
Al ser el A. calcoaceticus un germen ambiental y que nunca ha sido implicado en
enfermedades, la designación “complejo A. calcoaceticus-A. baumannii” resulta
engañosa y no es apropiada en el contexto clínico. Es por esto que en 2011, Nemec
propone el nombre de Grupo baumannii, que incluye: A. baumannii, A. pittii (antes
genoespecie 3) y A. nosocomialis (antes genoespecie 13 TU).4
En la actualidad se considera de importancia la diferenciación dentro del llamado
“complejo A. baumannii-calcoaceticus” debido a que A. baumannii y A. pittii
producen infecciones graves; A. nosocomialis es un habitante del medio
hospitalario, pero de baja patogenicidad y A. calcoaceticus predomina en el suelo y
no es patógeno sino excepcionalmente.
Para lograr la diferenciación se creó un esquema de identificación de especies de
Acinetobacter, diseñado por Bouvet y Grimont,5 el cual fue modificado por Gemer-
Smidt y otros,6 basado en el uso de diferentes temperaturas de incubación y
reacciones bioquímicas, que tiene la ventaja de poder ser aplicado sin grandes
recursos materiales.
La importancia clínica de Acinetobacter baumannii se ha incrementado, sobre todo
en los últimos 15 años, por su significativa habilidad para adquirir resistencia a los
antibióticos.
Dentro de los mecanismos de resistencia a antimicrobianos que posee
Acinetobacter baumannii,7 destacan los dirigidos contra los betalactámicos, que
incluyen la producción de enzimas betalactamasas, ya sea de espectro extendido o
carbapenemasas; alteraciones en las proteínas de la membrana externa, las
bombas de expulsión y las alteraciones en la afinidad o expresión de las proteínas
fijadoras de penicilina. De igual forma los aminoglucósidos, las quinolonas y las
tetraciclinas (incluida tigeciclina) se ven afectadas en su acción debido a diferentes
mecanismos de resistencia creados por esta bacteria.8 Otro mecanismo es la
producción de biopelícula o biofilm, como posible explicación a la resistencia a la
desecación y los desinfectantes.9
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Este trabajo tiene como objetivo realizar la identificación fenotípica de cepas de
Acinetobacter spp y caracterizar su resistencia a los antibióticos.
MÉTODOS
Se realizó un estudio observacional analítico, en una muestra de 60 cepas
identificadas presuntivamente como Acinetobacter spp (Kligler: no fermentador,
oxidasa: negativa, motilidad: negativa, OF: oxidante), de origen hospitalario y
aisladas en el Hospital Militar Central “Dr. Luis Díaz Soto” durante el primer
trimestre de 2014. A todas se les realizó:
1. Clasificación según esquema de Bouvet y Grimont (modificado por Gemer-Smidt
y otros).6
2. Pruebas de sensibilidad: difusión con discos frente a 12 antimicrobianos; de ellos
nueve betalactámicos que incluyeron dos penicilinas (piperacilina y
piperacilina/tazobactam), tres cefalosporinas de tercera generación (cefoperazona,
ceftriaxona y ceftazidima), una cefalosporina de cuarta generación (cefepime), dos
carbapenemos (imipenem y meropenem) y un monobactámico (aztreonam). Se
incluyeron también dos aminoglucósidos (gentamicina y amikacina) y una
fluoroquinolona (ciprofloxacina). Se utilizó un lipopéptido, colimicina, el cual fue
probado por el método de e-test. En todos los casos se siguieron los criterios del
Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorios (CLSI, en inglés), para pruebas
de sensibilidad in vitro.10
3. Producción de biopelícula in vitro: por técnica de slime-test.9
RESULTADOS
La identificación fenotípica de las cepas de Acinetobacter spp mostró que la
inmensa mayoría de ellas (88,3 %) pertenecían a la especie A. baumannii.
Más de la mitad de las cepas (51,6 %) fueron aisladas en pacientes ingresados en
la Unidad de Cuidados Intensivos de adultos y el 25 % correspondió a las salas de
Quemados y a la Unidad de Cuidados Intermedios Quirúrgicos. En la Unidad de
Cuidados Intermedios de Medicina y la sala de Ortopedia, el porcentaje en ambas
fue de 8,3 %, seguido por las salas de Medicina (3,3 %) y la de Ginecología y
Cirugía (1,6 % cada una) (tabla 1).
En los aislamientos por muestras sobresalió la secreción bronquial (46,6 %),
seguida por la quemadura (15 %), lesiones en piel (13 %), catéter (10 %) y
úlceras por presión, heridas quirúrgicas y hemocultivos (14,3 % de conjunto)
(tabla 2).
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Con relación a la resistencia a los antimicrobianos utilizados en el estudio según las
especies identificadas se obtuvieron altos valores por A. baumannii (más de 80 %)
en comparación con las cepas “no baumannii” (tabla 3). Sin embargo, se pudo
constatar mediante el método e-test, que el 90 % de las cepas de A. baumannii fue
inhibido a concentraciones inhibitorias mínimas menores o iguales a 0,5 µg/mL
(punto de corte para “sensibilidad”, ≤ 2 µg/mL), por lo que el porcentaje de
resistencia fue de 10 %.
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Otro resultado del estudio, que no está comprendido en las tablas, es el análisis de
las resistencias según la lectura interpretada del antibiograma. En relación con la
posibilidad de detección de enzimas betalactamasas de espectro extendido en las
cepas estudiadas (utiliza discos de cefalosporinas de tercera generación, C3G,
enfrentados a disco con inhibidor), se observa que estas no fueron detectadas. No
hubo posibilidad de detección de enzimas carbapenemasas. En cuanto a la aparición
de resistencias inducidas (con discos de C3G y aztreonam enfrentados a discos con
imipenem y meropenem con halos cortados) se encontraron en cuatro aislamientos,
mayormente de cepas “no baumannii”.
Por otra parte, en cuanto a la producción de biopelícula por parte de las cepas se
constató que el 100 % de A. baumannii fue positivo a esta reacción, a diferencia de
las “no baumannii” cuyo valor fue de 42,8 %.
DISCUSIÓN
La identificación fenotípica de los aislamientos de Acinetobacter spp mostró que
dentro de este género sigue siendo A. baumannii la especie más aislada en el
ambiente hospitalario, tal y como se plantea en otros estudios.7,11,12
A pesar de que otros autores reportan la utilidad del esquema de Bouvet y Grimont
(modificado por Gemer-Smidt) para la identificación fenotípica de cepas patógenas
del género Acinetobacter,5,6,11 en este estudio solo fue pertinente la identificación de
A. baumannii, ya que para otras especies esta prueba no fue conclusiva debido a
que los resultados no se adaptaban adecuadamente a lo planteado en dicho
esquema. De igual forma, el origen de las cepas según la sala de procedencia, así
como el tipo de muestra, están acordes con los informes actuales, se debe tener en
cuenta que este microorganismo afecta preferentemente a los pacientes graves,
que son sometidos a ventilación mecánica (como es el caso de los pacientes
ingresados en unidades de cuidados intensivos) o que presentan brechas en la
integridad de su piel (quemados, heridas).1,2
Los resultados del estudio de la sensibilidad in vitro de las cepas concuerdan con el
planteamiento de que A. baumannii es uno de los microorganismos que más
resistencia crean frente a los antibióticos más comúnmente utilizados en la práctica
médica, ya que la mayoría de los valores de resistencia son extremadamente altos,
a excepción de los que corresponden a colimicina, muy similares a los informados
por autores nacionales y extranjeros.7,11,13-15
En el caso de colimicina (o colistina) hay que aclarar que el método de e-test es el
establecido, en lugar del uso del disco, ya que es necesario comprobar el valor de
las concentraciones inhibitorias mínimas como única forma de establecer la
sensibilidad del germen a este fármaco. Los valores de este estudio indican la
extrema sensibilidad de la mayoría de las cepas probadas a este antibiótico, aunque
el porcentaje de resistencia de 10 % difiere de lo notificado por otros autores
(0-5 %),7,11,15 sin embargo, está muy cercano a lo planteado por Vakili (11,6 %).14
En conclusión, el Acinetobacter baumannii constituye uno de los microorganismos
más aislados en el hospital, fundamentalmente en pacientes graves, y muestra una
resistencia bacteriana importante, excepto para colimicina; este hecho se debe
tomar en cuenta en la atención y manejo de esos pacientes, sobre todo en los
casos de neumonía asociada a la ventilación.
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Recibido: 12 de agosto de 2014.
Aprobado: 9 de septiembre de 2014.
Rafael Nodarse Hernández. Hospital Militar Central “Dr. Luis Díaz Soto”. Ave.
Monumental y Carretera del Asilo, CP 11700, La Habana, Cuba.
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