Determinación de Clorofila en Aceite de
Oliva
El aceite de oliva se elabora presionando o extrayendo el rico aceite del fruto del olivo. Presionar
las aceitunas y recoger el aceite parece sencillo, pero existen muchos procesos de extracción de
aceite para los diferentes tipos de aceitunas que se cultivan en todo el mundo. Para complicar aún
más las cosas, también hay varios grados de aceite de oliva, y grupos de funcionarios
cuidadosamente seleccionados se reúnen para definir y redefinir la clasificación del aceite de
oliva. Para ayudar a que nuestro experimento sea un ejercicio más científico y menos político,
reduciremos nuestra investigación del aceite de oliva a unas pocas variables manejables.
Después del procesamiento, el aceite de oliva viene en tres grados comunes: virgen extra, regular
y ligero. El aceite de oliva virgen extra es considerado el de mayor calidad. Es el primer
prensado de aceitunas recién preparadas. Tiene un tinte amarillo verdoso y un aroma afrutado
distintivo debido a los altos niveles de materiales volátiles extraídos de la fruta. El aceite de oliva
regular se recolecta con la ayuda de una suspensión de agua tibia para aumentar el rendimiento,
exprimiendo hasta la última gota de aceite de las aceitunas. Es de color amarillo pálido, con un
ligero aroma, porque contiene menos compuestos volátiles. El aceite de oliva claro es de color
muy claro y prácticamente no tiene aroma porque ha sido procesado bajo presión. Esto elimina la
mayor parte de la clorofila y los compuestos volátiles. El aceite de oliva ligero se usa
comúnmente para freír porque no afecta el sabor de los alimentos fritos,
El espectro de absorbancia de luz visible de la clorofila da resultados interesantes. La química de
la clorofila (algunas referencias ubican cuatro tipos: a, b, c y d) crea picos de absorbancia en el
rango de 400 a 500 nm y en el rango de 600 a 700 nm. La combinación de luz visible que no se
absorbe parece verde para el ojo humano, pero diferentes fuentes de clorofilas tendrán diferentes
proporciones de estos picos, lo que crea varios tonos de verde. La capacidad de la clorofila para
absorber la energía de la luz en una amplia franja del rango visible ayuda a potenciar la
fotosíntesis con una eficiencia óptima en las plantas.
En este experimento, tendrá dos objetivos principales. Primero, analizará los distintos grados de
aceite de oliva para determinar los picos de absorbancia que están presentes y la cantidad relativa
de clorofila que se encuentra en cada grado. Utilizará un espectrómetro para medir la
absorbancia de las muestras de aceite de oliva en el espectro de luz visible. Luego, analizará una
muestra desconocida de aceite de oliva y la calificará como virgen extra, normal o ligera.
OBJETIVOS
En este experimento, usted
• Mida y analice los espectros de absorbancia de luz visible de tres aceites de oliva estándar:
virgen extra, normal y ligero.
• Mida el espectro de absorbancia de una muestra de aceite de oliva "desconocida".
• Identifique el aceite de oliva desconocido como uno de los tres tipos estándar.
Química con Vernier -1
MATERIALES
computadora aceite de oliva de grado desconocido
Registrador Pro cinco cubetas y tapas
Espectrómetro pipetas Beral de plástico
muestras de tres patrones de aceite de agua destilada
oliva:
virgen extra, regular y light alcohol isopropílico
PROCEDIMIENTO
1. Obtenga y use gafas protectoras.
[Link] el espectrómetro al puerto USB de su computadora.
3. Iniciar registrador Pro. Si ya se está ejecutando, seleccione Nuevo en el menú Archivo.
[Link] pequeños volúmenes de los tres aceites de oliva estándar y uno desconocido. Transfiera
una cantidad suficiente de una muestra de aceite de oliva para llenar 3/4 de una cubeta.
Coloque una tapa en la cubeta y marque la tapa. Prepare todas sus muestras de esta manera
para que tenga cuatro cubetas de aceite de oliva con tapas etiquetadas.
5. Calibre el espectrómetro.
a. Prepare un blanco llenando una cubeta vacía hasta 3/4 de su capacidad con agua destilada.
b. Elija Calibrar Espectrómetro en el menú Experimento.
c. Cuando finalice el período de calentamiento, coloque el blanco en el espectrómetro.
Asegúrese de alinear la cubeta de modo que los lados transparentes queden frente a la
fuente de luz del espectrómetro.
d. Haga clic en Finalizar calibración y, a continuación, haga clic en .
Parte I Comparando Tres Grados de Aceite de Oliva e Identificando un Desconocido
Para la Parte I de este experimento, calibrará el espectrómetro con agua destilada. Sus objetivos
son: (1) comparar los espectros de absorbancia de los diferentes grados de aceite de oliva; y (2)
para identificar el grado de una muestra desconocida de aceite de oliva.
6. Realice un análisis de espectro completo de una muestra de aceite de oliva.
a. Coloque una de las muestras de aceite de oliva en el espectrómetro.
b. Hacer clic . Se mostrará un gráfico de espectro completo del aceite de oliva. Revise
el gráfico para identificar los valores máximos de absorbancia. Hacer clic para
completar el análisis.
[Link] guardar sus datos, seleccione Almacenar última ejecución en el menú Experimento.
[Link] los pasos 6 y 7 con las muestras estándar de aceite de oliva restantes.
[Link] el Paso 6 con la incógnita. Nota:No almacene la última ejecución.
[Link] las parcelas de las muestras de aceite de oliva. Antes de continuar con la recopilación
de datos, responda las preguntas de Análisis de datos de la Parte I. Imprima o guarde el
archivo de su experimento, si se le indica que lo haga.
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Determinación de Clorofila en Aceite de Oliva
11. Enjuague y limpie las cubetas y otros recipientes que contengan aceite con alcohol
isopropílico.
Parte II Comparación de la Concentración de Clorofila del Aceite de Oliva Virgen Extra y Regular
En la Parte II, utilizará el grado ligero de aceite de oliva para calibrar el espectrómetro y
supondrá que el aceite de oliva ligero no contiene clorofila. A continuación, comparará el
contenido de clorofila del grado regular con el grado virgen extra.
12. Configure un nuevo archivo y calibre el espectrómetro con aceite de oliva ligero.
a. Elija Nuevo en el menú Archivo.
b. Prepare un blanco llenando una cubeta vacía 3/4 de su capacidad con aceite de oliva
ligero.
c. Elija Calibrar Espectrómetro en el menú Experimento.
d. Cuando finalice el período de calentamiento, coloque el blanco de aceite de oliva ligero en
el espectrómetro. Asegúrese de alinear la cubeta de modo que los lados transparentes estén
orientados hacia la fuente de luz del espectrómetro.
e. Haga clic en "Finalizar calibración", y luego haga clic en .
[Link] el espectro de absorbancia del aceite de oliva virgen normal y extra.
a. Retire la cubeta de aceite de oliva ligero del espectrómetro y reemplácela con la cubeta de
aceite de oliva normal.
b. Hacer clic . Se mostrará un gráfico de espectro completo del aceite de oliva normal.
Tenga en cuenta la ligera diferencia en el gráfico como resultado del uso del aceite de
oliva ligero como blanco de calibración. Hacer clic .
c. Para guardar sus datos, seleccione Almacenar última ejecución en el menú Experimento.
d. Mida el espectro de absorbancia del grado virgen extra de la misma manera.
14. Imprima o guarde el archivo de su experimento como se indica.
ANÁLISIS DE LOS DATOS
Parte I Comparando Tres Grados de Aceite de Oliva e Identificando un Desconocido
1. Describe la gráfica de cada una de las soluciones
estándar de aceite de oliva. Enfatice las diferencias
entre cada grado de aceite de oliva, identificando los
picos de absorbancia y otras características
distintivas.
2. Compare los espectros de absorbancia de los tres grados
de aceite de oliva con el gráfico de muestra de la
Figura 1. ¿Qué evidencia hay de que el aceite de
oliva normal y extra virgen contiene clorofila
mientras que el aceite de oliva de grado ligero no la
contiene?
3. Identifique su aceite de oliva desconocido como virgen
extra, normal o ligero. Explica tu elección. Figura 1
Parte II Comparación de la Concentración de Clorofila del Aceite de Oliva Virgen Extra y Regular
Química con Vernier -3
4.¿Qué grado de aceite de oliva, normal o virgen extra, contiene la mayor cantidad de clorofila? Use
sus gráficos de espectro de absorbancia para especular sobre cuánta clorofila más contiene un
grado en comparación con el otro.
EXTENSIONES
1. La clorofila es una molécula fluorescente. Las moléculas fluorescentes pueden absorber luz de
una longitud de onda y luego volver a emitir luz en una longitud de onda de luz nueva y más
larga. Como ha visto en este ejercicio, la clorofila absorbe luz en las regiones violeta y azul
del espectro. Si hiciera brillar una luz violeta o azul a través de una muestra de aceite de oliva
virgen extra, vería que el aceite se vuelve de color rojo. La intensidad del color rojo es una
indicación de cuánta clorofila hay en el aceite de oliva. Para este fin, se puede utilizar la “Luz
de bolígrafo UV de onda larga” de Bio-Rad Laboratories, Inc. (n.º de catálogo 166-
0530EDU). Haga brillar la luz de la lámpara UV de onda larga a través de una cubeta que
contiene aceite de oliva virgen extra. ¿La muestra que es golpeada por la luz se vuelve de
color rojo? Repita esta prueba para el aceite de oliva normal, el aceite de oliva ligero y su
incógnita. ¿Podría utilizar este método para determinar si una muestra de aceite de oliva es
realmente aceite de oliva virgen extra? ¿Podría utilizar este método para determinar el grado
de cualquier muestra de aceite de oliva? -
2. La espectroscopia de fluorescencia es otro método que se puede utilizar para determinar la
calidad del aceite de oliva. En la espectroscopia de fluorescencia, una muestra se puede
"excitar" con una longitud de onda de luz elegida y la fluorescencia resultante de la muestra
se puede medir y cuantificar. El SpectroVis Plus de Vernier Software & Technology se
puede utilizar para este propósito. Siga las instrucciones a continuación para medir la
fluorescencia de todas sus muestras de aceite de oliva utilizando SpectroVis Plus.
a. Use un cable USB para conectar el espectrómetro a su computadora. Elija Nuevo en el
menú Archivo.
b. Coloque la cubeta que contiene el aceite de oliva virgen extra en la ranura para cubetas del
espectrómetro.
c. Elija Cambiar unidades ►Espectrómetro en el menú Experimento y seleccione
Fluorescencia 405 nm.
d. Elija Configurar sensores ►Espectrómetro en el menú Experimento y cambie el tiempo
de muestra a 150 ms.
e. Hacer clic . Se mostrará un gráfico de espectro completo de la fluorescencia del
aceite. Tenga en cuenta que un área del gráfico contiene un pico a aproximadamente 675
nm. Este pico es de clorofila. Hacer clic .
f. Ajuste el tiempo de muestra para aumentar o disminuir el tamaño del pico fluorescente. Si
la intensidad máxima es superior a 1, reduzca el tiempo de muestra en 10 ms y obtenga un
nuevo espectro fluorescente. Continúe disminuyendo el tiempo de muestra hasta que el
pico sea completamente visible. Si el pico fluorescente está por debajo de 0,3, aumente el
tiempo de muestra en 10 ms y obtenga un nuevo espectro fluorescente. Continúe
aumentando el tiempo de muestra hasta que la amplitud fluorescente máxima de la
clorofila esté por encima de 0,8.
g. Una vez que tenga un buen pico, almacene sus datos eligiendo Store Latest Run en el
menú Experiment.
h. Recopile gráficos de espectro completo de las muestras de aceite de oliva restantes. No
ajuste el tiempo de muestra.
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Determinación de Clorofila en Aceite de Oliva
i. Compare los espectros fluorescentes de los tres grados de aceite de oliva. El pico que es
visible a aproximadamente 675 nm es de clorofila. ¿Qué muestra tiene el pico más grande
en esta región?
j. Usando la fluorescencia de las muestras de aceite de oliva conocidas como sus estándares,
determine la calidad de su muestra de aceite de oliva desconocida.
k. Compare sus resultados usando espectroscopia fluorescente con sus resultados usando
espectroscopia tradicional. ¿Es un método mejor que el otro? Si es así, explique por qué.
l. Imprima o guarde el archivo de su experimento como se indica.
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