TEMA 22: BIOTECNOLOGÍA.
1.Ingeniería genética.
-finalidad: generar grandes cantidades de genes
-Proceso:
1. Aislar pequeños fragmentos de ADN que contengan los genes a estudiar ( va a contener
también otros). Puede emplearse:
ADN genómico total
ADN sintetizado a partir de un molde de ARN, por transcripción inversa.
ADN sintetizado por la reacción en cadena de la polimerasa.
ADN sintetizado in Vitro, a partir de nucleotidos.
2. los fragmentos de ADN se unen a un vector (pequeños elementos genéticos que pueden
replicarse con autonomía. Si el ADN y el vector cortan con determinadas enzimas de
restricción pueden unirse por acoplamiento de los extremos cohesivos.
3. Amplificación génica: ADN1 se introduce en organismo huésped donde pueda
replicarse y así obtener copias de ADN recombinante o clones= genoteca( representa la
totalidad del genoma del organismo y permite purificar muchos clones)
4. Se destecta y seleccina el clon deseado para producir células que contengan el clon
buscado para su aislamiento y estudio.
2.Vectores de clonación.
Plasmidos.
-pequeñas moléculas de ADN circular bacteriano
-puede replicarse independientemente del cromosoma de la bacteria huésped , ya que
poseen genes para ello y frecuentemente otros que proporcionan importantes propiedades a
los huéspedes.
-Proces de reconbinación in Vitro.
-Muy estable.
-Ser pequeño-> muy manejable
Utiles por -Presencia d eun origen de replicación independiente.
-existencia de varias copias en una célula-> amplificación del ADN
-Presencia de marcadores característicos-> facil detección y selección
Virus bacteriófagos o fagos.
-Durante su transducción algunos genes de la baceria huésped pueden in corporarse a su
genoma.
-cuando el fago infecte otra bacteria puede transferirle los genes de la 1ª.
Ej: fago lambola.
Cosmidos.
-contienen ADN foráneo, y el denominado sitio cos (extremo cohesivo) procedente del
genoma de un fago y que se requieren para el empaquetamiento del ADN dentro de los
viriones.
-Pueden utilizarse para clonar fragmentos grandes de ADN y por ello necesita menor
numero de clones para obtener una representación de todo el contenido de un ser vivo.
Vectores de expresión.
-Para obtener síntesis de la proteina codificado por el gen foráneo clonado dentro del vector.
-contiene las secuencias reguladoras necesarias para que la expresión del gen pueda
manipularse.
Cromosomas artificiales de levadura.
-puede albergar grandes segmentos de ADN-> tamaño de la genoteca limitado.
Vectores a partir de adenovirus y del virus de la vacuna.
Retrovirus
Cromosomas humanos artificiales
4 huespedes para vectores de clonación
1
ADN recombinante: segmentos que no se encuentran juntos de modo natural
-capacidad de crecimiento rápido y en un medio de cultivo barato.
-no ser dañino o patógeno
Características -ser capaz de aceptar el ADN exógeno y que este permanezca estable en el
Cultivo.
-Tiene enzimas para permitir la replicación del vector.
Escherichia coli
Presenta peligros en la producción a gran escala.
Producesn endotoxinas que pueden contaminar los productos.
Clonación en eucariotas.
Saccharomyces cerevisiae con vectores: plasmados y cromosomas artificiales de levadura.
Investigación sobre el ser humano-> cultivos de células de mamifero que poseen sistemas de
procesamiento postraducionales necesarios para maduración de ARN (ARN transcrito->ARN
funcional)
Búsqueda del clon idóneo.
Con virus como vector-> buscar la presencia de placas de lísis víricas.
Gen se expresa( por sintetizarse la proteina que codifica) en el huésped. Se pueden utilizar
procedimientos para encontrar la proteína en las colonias transformantes si la proteina posee
función detectable u otros metodos para funciones no detectables( como anticueros específicos).
Si el gen no se expresa o no se dispone de anticuerpos se suele utilizar una sonda de
ac.nucleico marcada complementaria en una región del gen.
5.Clonación y expresión de genes de mamífero.
Dificultades: genoma muy extenso/ eliminación de intrones.
Obtención de genes a partir de ARNm.
No contiene intrones y se le identifica por las colsas poli-A en 3´
ARNm(aislado/transcriptasa inversa) ADN complementario(monocatenario) molde para
ADN bicatenario sin intrones insertado en vector.
Cuando no se puede aislar:
-Producción de ADN sintético para la obtención de grandes cantidades de genes.
*La enzima ADN-polimerasa copia moléculas de ADN
*Reacción en cadena de la polimersas(PCR) requiere conocer la secuencia de nucleotidos del
gen ya que se necesitan oligonucleótidos iniciadores, complementarios de secuencias presentes
en el gen/es de interés.
*ADN-sintético es complementario de una parte del ARNm por lo que se tiene que conocer la
secuencia de la proteina correspondiente.
-precipitación de polirribosomas.
*aislamiento de ribosomas en los que este sintetizando la proteína de interés, utilizando un
anticuerpo específico para esta proteína.
* ARNm y polipéptido precipitan precipitan y el ARNm se puede utilizar para sintetizar ADN
complementario.
6. la biotecnología e medicina.
Fabricación de productos farmaceuticos.
-utilización de bacterias de crecimiento facil-> producción de proteínas útiles para el ser
humano.
-Insulina-> diabetes
1 gen codifica la preproinsulina, la insulina (formada por péptidos A y B) y un polipéptido
de unión ausente en la insulina madura.
Proceso:
Aislando gen:
1) producir proinsulina y conversión por métodos químicos en insulina
2) producir cadenas A y B ( en cultivos separados) y se da la union por métodos quimicos
para dar la insulina
3) ( sin aislar gen) sintetizar secuencia adecuada de ADN e introducir en tejido para
producción normal de insulina.
Terapia génica:
-Uso de tecnología del ADN reconbinante y estudios génicos para localizar en cromosomas los
genes causantes de enfermedades y se amplifica o reemplaza por otro funcional un gen no
funcional.
-SCID: deficienciaa inmunitaria combinada causada or adenosinadesaminasa( en metabolismo
de purinas en la médula ósea)
Con retrovirus(vector) se inserta una copia correcta del gen y se devuelve al cuerpo células
corregidas= terapia de células somáticas.
-plantean muchos problemas éticos y cuestiones sociales.
Producción de vacunas.
-vacuna: suspensión de microorganismos patógenos, muertos, atenuados o modificados, o
fracciones específicas asiladas de los mismos que, cuando se inyectan, producen inmunidad
frente a una enfermedad.
-Clonar genes de las proteínas de la cubiertas y expresarlas en bacterias o virus no patógenos.
