ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y

BIOQUIMICA
CATEDRA DE FITOQUIMICA

PRACTICA N° 1
BIOSEGURIDAD EN LABORATORIO DE FITOQUIMICA

INTRODUCCIÓN

La bioseguridad es un conjunto de medidas probadamente eficaces para evitar la

adquisición accidental de infecciones con patógenos contenidos en las muestras, así
como los riesgos relacionados con la exposición a agentes químicos, físicos y/o
mecánicos a los que está expuesto el personal en los laboratorios.

El presente documento técnico ha sido actualizado con el objeto de establecer Normas

de Bioseguridad a nivel Institucional, aplicables a las diferentes actividades analíticas,
de investigación y producción que se realizan en los diferentes laboratorios, así como
a los diversos niveles que conforman la Red Nacional de Laboratorios.

De este modo se presentan definiciones, requisitos generales y requisitos específicos

que deben ser considerados al momento de implementar y mantener la bioseguridad
en los laboratorios, entre las cuales se incluyen tipo de microorganismos y niveles de
bioseguridad que se requiere para su manipulación, normas para la protección del
personal, condiciones para el manejo, transporte, conservación y desecho de
sustancias potencialmente dañinas al personal y a la comunidad.

Así mismo, se incluyen condiciones para el manejo de sustancias químicas, físicas y

ergonómicas como partes importantes de la bioseguridad dentro de los laboratorios.

En los anexos se encuentra información relacionada con la clasificación de

microorganismos por grupo de riesgo, señalización internacional, clasificación de
sustancias químicas de alto riesgo y almacenamiento así como un formulario para el
reporte de accidentes de laboratorio, etc.

Sólo si las personas que trabajan en los laboratorios conocen las normas de
bioseguridad y las aplican, pueden determinar su propia seguridad, la de sus
compañeros y de la colectividad. El personal de laboratorio debe cumplir con las
normas de bioseguridad y los directivos de la institución deben cumplir con brindar las
facilidades para que estas normas sean aplicadas.

1.- OBJETIVO

El objetivo dela presente guía es contribuir a la instrumentación de medidas de

seguridad básicas que prevengan y/o eliminen los accidentes en laboratorio.

2. - CAMPO DE APLICACION
 El presente documento es aplicable a los laboratorios de ensayos, biomédicos,
dermatológicos, fitoquimicos y clínicos a nivel nacional.

3. - RESPONSABILIDADES:
Los Profesores responsables de impartir el curso de laboratorio de
Fitoquimicaserán los responsables de conocer y hacer cumplir las normas
establecidas en el presentereglamento. Así como de su comunicación a los alumnos
de sus grupos respectivos.

NORMAS GENERALES DEL LABORATORIO

Las normas incluyen reglas, recomendaciones o prohibiciones relacionadas con el

conocimiento, el sentido común y la seguridad en el trabajo de laboratorio.

1. Estará PROHIBIDO comer, beber, almacenar alimentos, correr, fumar, maquillarse

o manipular lentes de contacto en el laboratorio.
2. El área de trabajo deberá estar limpia y ordenada. No debe colocarse libros,
abrigos o bolsas sobre las mesadas de trabajo. Se deberá verificar que la mesa
de trabajo esté limpia al comenzar y al terminar el trabajo realizadoEl área de
trabajo deberá estar limpia y ordenada. No debe colocarse libros, abrigos o bolsas
sobre las mesadas de trabajo. Se deberá verificar que la mesa de trabajo esté
limpia al comenzar y al terminar el trabajo realizadoEl área de trabajo deberá estar
limpia y ordenada. No debe colocarse libros, abrigos o bolsas sobre las mesadas
de trabajo. Se deberá verificar que la mesa de trabajo esté limpia al comenzar y al
terminar el trabajo realizado.
3. En el laboratorio de enseñanza se deberán almacenar la menor cantidad posible
de drogas y reactivos. Los mismos deberán estar debidamente etiquetados y
almacenados en forma segura y en el lugar adecuado.
4. Se deberá usar vestimenta adecuada: guardapolvo con MANGA LARGA que
cubra la ropa de calle, zapatos cerrados no sandalias, asimismo, se deberá tener
el pelo recogido.
5. Es obligatorio el uso de ANTEOJOS DE SEGURIDAD, según sea lo que
corresponda, durante la realización de los Trabajos Prácticos. Los ojos son
órganos muy vascularizados que pueden absorber rápidamente algunos
compuestos químicos. Las gafas deberán ser de uso personal y no pueden ser
intercambiadas entre los alumnos.
6. Los alumnos o docentes que realicen tareas experimentales en el laboratorio es
de CARÁCTER OBLIGATORIO usar guantes apropiados acorde a los riesgos y
los reactivos que se manipulen. Los guantes previenen el contacto con agentes
tóxicos o biológicos, quemaduras por superficies calientes, frías o corrosivas y
cortes por objetos punzantes. Cuando corresponda utilizar cubre bocas y gorro
para el pelo.
7. PROHIBIDO pipetear con la boca. Se podrán utilizar pipetas de vidrio o plástico
con propipetas o pipetas automáticas.
8. Los alumnos y docentes deberán estar familiarizados con los elementos de
seguridad disponibles, salidas, extintores, duchas, lavaojos, etc.
9. Toda herida, aún los pequeños cortes, que se produzca durante un trabajo
práctico deben ser informados obligatoriamente al docente.
10. Cuando el trabajo práctico involucre gases, vapores, humos o partículas,
solventes, etc. deberá realizarse en la campana de extracción.
11. No debe recibirse material de vidrio visiblemente defectuoso. Debe informarse al
profesor responsable del grupo de las roturas de material o desperfectos
detectados durante la operación de materiales y equipos.
12. En el caso de que alguna sustancia química entre en contacto con la piel (manos,
cara y sobre todo con los ojos), debe lavarse la zona afectada con abundante
agua durante 15minutos por lo menos. Avise a los profesores responsables.
13. Leer con cuidado las etiquetas en los frascos de reactivos que va a utilizar, y
tomar en cuenta sus indicaciones.
14. Manipular adecuadamente los líquidos y sólidos de los frascos que los contienen,
usando pipetas, probetas o espátulas.
15. Cuando se preparen soluciones ácidas, verter siempre el ácido al agua y nunca en
forma inversa.

Añadir lentamente el ácido al agua resbalándolo por las paredes del

recipiente, al mismo tiempo que se agita suavemente. NUNCA AÑADIR AGUA
AL ÁCIDO, ya que puede formarse vapor con violencia explosiva.

Si el recipiente en el que se hace la dilución se calentara demasiado,

interrumpir de inmediato y continuar la operación en baño de agua o hielo.

16. Si un ácido, base o cualquier reactivo corrosivo salpica su cuerpo, enjuagarse con
abundante agua y llamar al profesor.
17. Antes de encender un mechero asegurarse de que no haya cerca vapores o
líquidos inflamables.
18. Antes de verter o evaporar un líquido orgánico asegurarse que no haya una flama
cerca.
19. Nunca calentar un líquido orgánico sobre la flama, utilice para ello parrilla o cocina
eléctrica.
20. Cuando se calientan sustancias contenidas en un tubo de ensaye, no se
debe apuntar la boca del tubo al compañero o a sí mismo, ya que pueden
presentarse proyecciones del líquido caliente.
21. No regresar sobrantes de reactivos a los envases originales y no pipetear en los
frascos originales de los reactivos, colocar siempre una pequeña cantidad en un
recipiente.
22. Usar siempre pipetas limpias para medir las diferentes sustancias.
23. Si no se conoce el manejo de un equipo, leer el instructivo antes de utilizarlo y si
aún así no queda claro, preguntar al instructor.
24. Antes de verter los residuos al caño, asegurase de que es posible si son diluidos
con agua, de lo contrario verterlos en recipientes adecuados para ello.
25. Antes de retirarse del laboratorio dejar limpio el material utilizado durante la
práctica y el lugar de la mesa utilizada, asegurarse de que no quede ningún
equipo encendido o conectado o una llave de agua o gas abierta.

ADVERTENCIAS SOBRE EXPERIMENTOS AL ALUMNO

1. El laboratorio de fitoquímica es un lugar donde se desarrollan prácticas elegidas,
por el docente para confirmar y reafirmar los conocimientos teóricos impartidos en
el salón de clase.

2. Al realizar cada práctica deben seguirse las instrucciones, observar y registrar lo

que sucede.

3. Se asesorará y resolverán las preguntas durante el análisis de cada grupo.

4. Es importante señalar la necesidad de seguir todos los pasos indicados en cada

práctica para obtener los resultados correctos de cada experimento. En todas las
prácticas deberán anotarse las observaciones, los resultados y las conclusiones.

5. En el caso de que el experimento no resultara como está planeado, el alumno

deberá investigar, consultar y agotar todas las posibilidades para lograr un
desarrollo correcto. Si no se lograra el objetivo de la práctica, debe preguntar al
docente, él le explicara en donde está la falla y la manera de corregirla.

6. De esta forma se logrará desarrollar una actitud crítica hacia la materia, un mejor
aprovechamiento de clase práctica y un apoyo mayor a la clase teórica.

7. Los conos de las mesas y los lavabos, no son para tirar basura, para esto existen
cestos suficientes. Evite que las tuberías se tapen y den un mal aspecto al
laboratorio.

MEDIDAS DE SEGURIDAD EN UN LABORATORIO

1. No deben efectuarse experimentos no autorizados, a menos que estén

supervisados por el docente.

2. Cualquier accidente debe ser notificado de inmediato al docente o al auxiliar

del laboratorio

3. Uso indispensable de bata como medida de protección.

4. No pipetee los ácidos, puede llegar a ingerirlos

5. Lea cuidadosamente la etiqueta del frasco hasta estar seguro de que es el

reactivo que necesita, no utilice reactivos que estén en frascos sin etiqueta.

6. Después de que utilice un reactivo tenga la precaución de cerrar bien el

frasco.
7. Los tubos y varillas de vidrio y objetos calientes deben colocarse sobre tela
de asbesto y en un lugar no muy accesible de la mesa de trabajo, para evitar
quemaduras así mismo o a un compañero.

8. Los tubos de ensaye calientes, con líquido o no, deben colocarse en una
gradilla de alambre o dentro de un vaso de precipitados.

9. Cuando se calientan sustancias contenidas en un tubo de ensaye, no se

debe apuntar la boca del tubo al compañero o a sí mismo, ya que pueden
presentarse proyecciones del líquido caliente

10. La dilución de ácidos concentrados debe hacerse de la siguiente manera:

Añadir lentamente el ácido al agua resbalándolo por las paredes del

recipiente, al mismo tiempo que se agita suavemente. NUNCA AÑADIR
AGUA AL ÁCIDO, ya que puede formarse vapor con violencia explosiva.

Si el recipiente en el que se hace la dilución se calentara demasiado,

interrumpir de inmediato y continuar la operación en baño de agua o hielo.

11. No se debe probar ninguna sustancia. Si algún reactivo se ingiere por

accidente, se notificará de inmediato al docente.

12. No manejar cristalería u otros objetos con las manos desnudas, si no se

tiene la certeza de que están fríos.

13. No se debe oler directamente una sustancia, sino que sus vapores deben
abanicarse con la mano hacia la nariz.

14. No tirar o arrojar sustancias químicas, sobre nadantes del experimento o

no, al desagüe. En cada práctica deberá preguntar al profesor sobre los
productos que pueden arrojar al desagüe para evitar la contaminación de
ríos y lagunas.

15. Cuando en una reacción se desprendan gases tóxicos o se evaporen

ácido, la operación deberá hacerse bajo una campana de extracción.

16. Los frascos que contengan los reactivos a emplear en la práctica deben
mantenerse tapados mientras no se usen.

17. No trasladar varios objetos de vidrio al mismo tiempo.

SUSTANCIAS QUE DEBEN USARSE CON PRECAUCIÓN

Todas las que se utilizan en las operaciones y reacciones en el laboratorio de
análisis clínico, dermatología que son potencialmente peligrosas por lo que,
para evitar accidentes, deberán trabajarse con cautela y normar el
comportamiento en el laboratorio por las exigencias de la seguridad personal y
del grupo que se encuentre realizando una práctica.

Numerosas sustancias orgánicas e inorgánicas son corrosivas o se absorben

fácilmente por la piel, produciendo intoxicaciones o dermatitis, por lo que se ha
de evitar su contacto directo; si este ocurriera, deberá lavarse inmediatamente
con abundante agua la parte afectada.
 RECOMENDACIONES PARA EL MANEJO DE ALGUNAS SUSTANCIAS
ESPECIFICAS.
Acido Fluorhídrico (HF)

Causa quemaduras de acción retardada en la piel, en contacto con las

uñas causa fuertes dolores, y sólo si se atiende a tiempo se puede
evitar la destrucción de los tejidos incluso el óseo.

Ácido Nítrico (HN03)

Este ácido daña permanentemente los ojos en unos cuantos segundos y

es sumamente corrosivo en contacto con la piel, produciendo
quemaduras, mancha las manos de amarillo por acción sobre las
proteínas.

Ácidos Sulfúricos (H2S04), Fosfórico (H3P04) y Clorhídrico (HC1)

Las soluciones concentradas de estos ácidos lesionan rápidamente la piel y los

tejidos internos. Sus quemaduras tardan en sanar y pueden dejar cicatrices.
Los accidentes más frecuentes se producen por salpicaduras y quemaduras al
pipetear los directamente con la boca.

¿QUÉ HACER EN CASO DE ACCIDENTE?

En caso de accidente en el laboratorio, hay que comunicarlo inmediatamente al
docente.

Salpicaduras por ácidos y álcalis.

Lavarse inmediatamente y con abundante agua la parte afectada. Si la

quemadura fuera en los ojos, después de lavado, acudir al servicio médico.

Si la salpicadura fuera extensa, llevar al lesionado al chorro de la regadera

inmediatamente y acudir después al servicio médico.

Quemaduras por objetos, líquidos o vapores calientes.

Aplicar pomada para quemaduras o pasta dental en la parte afectada. En caso

necesario, proteger la piel con gasa y acudir al servicio médico.

PRIMEROS AUXILIOS
En caso de incendio, aléjese rápidamente y permita que su asesor lo apague
con el extinguidor que debe haber en el laboratorio. Si esto ya no es posible,
salga rápidamente del laboratorio. Si el fuego afecta ya a algún compañero,
trate de quitarle las prendas que se estén consumiendo y retírelo de la zona del
siniestro.
• En caso de explosión, salga inmediatamente del laboratorio y, si le es posible,
ayude a sus compañeros afectados. Avise al resto del personal de laboratorio
para que presten auxilio.
 • Si se salpica la piel con ácidos, lávese inmediatamente con agua
abundante y aplíquese una disolución de bicarbonato sódico.
• Si una sustancia lo salpica sobre los ojos, enjuáguese inmediatamente con el
lavaojos o bien con agua abundante y después con una solución de bórax (que
debe existir en el botiquín del laboratorio). Si persisten las molestias, consulte al
médico.
• Cuando se ingiere un ácido fuerte, se puede neutralizar con antiácido
(Leche de magnesia) su equivalente.
• Cuando se ingiere una base se neutraliza con jugo de naranja o de uva, o
con vinagre.
• Cuando se haya ingerido una sustancia venenosa o tóxica y sea necesario
provocar vómito, utilice un emético.
Emético: es una mezcla de sustancias que sirven para producir el vómito y
liberar al estómago del veneno. Algunos eméticos son:
• Agua con mostaza: se agrega una cucharadita de té de mostaza a un vaso
de agua caliente. Se administra una cuarta parte del contenido.
. Agua salada: se disuelven dos cucharaditas de sal en agua caliente y se
toma la dilución a intervalos de un minuto hasta suministrar más o menos
cuatro vasos.
• Agua con jabón: se agita un pedazo de jabón en agua caliente.
Nota: Los eméticos no deben administrarse nunca cuando el paciente esté:
a) Inconsciente o con convulsiones
b) Incapacitado para deglutir
c) Lastimado por haber tragado un veneno corrosivo
• Para neutralizar el efecto de una sustancia venenosa o tóxica, debe
administrarse un antídoto.
Antídoto: es una sustancia que se suministra para hacer inofensivo un veneno
o para retardar su acción.
Antídoto universal: esta mezcla se prepara con dos partes de carbón
activado, una de óxido de magnesio y una de ácido tánico. Se homogeniza
totalmente y se guarda en seco. Para administrar se disuelven 15 g en medio
vaso de agua caliente.
Si es necesario, se practica un lavado estomacal.
• Cuando la piel haya estado en contacto con una sustancia venenosa o haya
sufrido alguna quemadura, después de lavar la zona afectada aplique un
emoliente.
Emoliente: sirve para quitar el dolor de los tejidos y membranas inflamadas,
por Ejemplo la clara de huevo, la leche y el agua de cebada. Se administra
después de eliminar el veneno.

CUESTIONARIO:
1. Mencione 3 medidas de seguridad que protejan su integridad física cuando trabaje
en el Laboratorio.
1-Debéis mantener las batas y los vestidos abrochados, ya que os van a ofrecer
protección frente a salpicaduras y derrames de sustancias químicas.
2-Se evitará llevar lentes de contacto, ya que el efecto de los productos químicos es
mucho mayor si se introducen entre la lentilla y la córnea.
3-No deben realizarse experiencias sin la autorización expresa del profesor.
2. Realice la búsqueda en Internet de los principales símbolos de peligrosidad
(pictogramas) que son usados para los reactivos químicos y áreas de laboratorios.
Hacer una descripción de cada un
3. Además de los pictogramas antes indicados, las etiquetas de los reactivos
cuentan con un código adicional (con letras) sobre riesgos específicos y consejos
de prudencia. Indique 5 reactivos químicos y cuáles son dichas indicaciones.
4. Reportar la bibliografía consultada.
https://www.google.com/search?
q=pictograma+nocivo&sxsrf=ALeKk000hVlcN5jom0kEE3mgYVOJHNv78A:161
7096155947&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=2ahUKEwieg8XP2NfvAhWT
GbkGHefrA6IQ_AUoAXoECAEQ

https://www.google.com/search?q=pictograma+de+cuidado+en+
+laboratorio&tbm=isch&ved=2ahUKEwjYxNa419fvAhXrhJUCHQ4fCqwQ2-
cCegQIABAA&oq=pictograma+de+cuidado+

https://www.youtube.com/watch?v=UiofZ3A9Da8&t=130s&ab_channel=karloz30-
33

https://www.google.com/search?
q=partes+de+un+informe&tbm=isch&ved=2ahUKEwi80s3I19fvAhX-
jZUCHWKpB5gQ2-
cCegQIABAA&oq=partes+de+un+informe&gs_lcp=CgNpbWcQAzIFCAAQsQM
yBAgAEEMyAggAMgIIADICCAAyAggAMgIIADICCAAyAggAMgIIADoECC
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PARTES DEL INFORME

Redacte las partes del informe

Titulo
Índice
Introducción
Cuerpo o desarrollo
Conclusión
Bibliografía
Anexo
portada

ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

CATEDRA DE FITOQUIMICA

PRACTICA N° 2

OPERACIONES BÁSICAS DE SEPARACIÓN DE SUSTANCIAS

QUÍMICAS
OBJETIVOS
1. El alumno utilizará las técnicas de filtración, decantación y cristalización para la
separación de un principio activo de una especie vegetal y aplicará las técnicas de
separación; destilación por arrastre con vapor y extracción continua con
disolventes orgánicos (en Soxhlet y a reflujo) para aislar el aceite esencial de un
producto natural.
2. Determinar por cromatografía en capa fina (TLC por sus siglas en inglés: Thin
Layer Chromatography) la composición de algunas especies vegetales y
determinar los principios activos presentes.

I. PROCEDIMIENTOS FÍSICOS.

La decantación, la filtración y la centrifugación son procedimientos físicos de

separación de sustancias químicas que permiten la separación de algún producto
sólido que se encuentra mezclado con algún líquido.

1. Decantación: Cuando en una solución, una sustancia sólida se precipita o es

depositado en el fondo del recipiente, el líquido puede retirarse cuidadosamente
inclinando ligeramente el recipiente y llevando la fase líquida a otro recipiente, de
tal forma que se logre la separación de las dos fases, a este proceso se le llama
decantación. Cuando se tienen dos líquidos inmiscibles que forman 2 fases se
utiliza un embudo de separación para realizar la separación de fases.

2. Filtración: El proceso de filtración consiste en separar una sustancia sólida que

no precipita y por tanto se encuentra suspendida en el seno del líquido, para ello
se utiliza un filtro que generalmente es de papel y con ayuda de un embudo
normal se vierte el líquido sobre el papel filtro previamente colocado sobre el
embudo y el líquido es obtenido en un recipiente limpio. También puede utilizarse
vacío para realizar la filtración, y generalmente se requiere un embudo Büchner, el
cual se coloca sobre un matraz Kitazato. Se coloca un círculo de papel filtro (de
poro adecuado a lo que se va a filtrar) en la base del embudo, el cual debe de
quedar perfectamente ajustado, de tal forma que cubra todos los orificios del
embudo. Se humedece el papel con un poco del líquido de la mezcla que va a ser
filtrada. Se enciende el sistema de succión (de agua o bomba para vacío). Se
agrega la mezcla a ser filtrada. Después que ha pasado todo el líquido a través
del embudo al matraz, se apaga el sistema de vacío y se desconecta.

3. Centrifugación: Una centrífuga es un equipo que es capaz de aplicar una fuerza

centrífuga sostenida, esto es, la fuerza generada a través de la rotación. n los
procesos de separación de productos secundarios se utiliza para la concentración
y purificación de materiales en suspensión, disueltos en fluidos.

4. Cristalización. Es la técnica más simple y eficaz para purificar compuestos

orgánicos sólidos. Consiste en la disolución de un sólido impuro en la menor
cantidad posible del disolvente adecuado en caliente. En estas condiciones se
genera una disolución saturada que al enfriar se sobresatura produciéndose la
cristalización. El proceso de cristalización es un proceso dinámico, de manera que
las moléculas que están en la disolución están en equilibrio con las que forman
parte de la red cristalina. El elevado grado de ordenación de una red cristalina
excluye la participación de impurezas en la misma. Para ello, es conveniente que
el proceso de enfriamiento se produzca lentamente de modo que los cristales se
formen poco a poco y el lento crecimiento de la red cristalina excluya las
impurezas. Si el enfriamiento de la disolución es muy rápido las impurezas pueden
quedar atrapadas en la red cristalina. Para la cristalización de debe de considerar
lo siguiente:
 a) Deberá disolver al compuesto en caliente y no en frío;
b) Las impurezas deben ser completamente solubles o insolubles en el disolvente;
c) No deberá reaccionar con el material por purificar

5. Destilación:
a) Destilación simple
La destilación es un método comúnmente usado en la separación y purificación de
líquidos. Esencialmente consiste en la vaporización de la sustancia seguida por la
condensación de vapores y recolecta de ellos en otro recipiente. Diferentes tipos
de destilación se usan dependiendo de los compuestos a separar. Un aparato de
destilación simple se usa para destilar una sola sustancia o para separar líquidos
con un intervalo amplio en el punto de ebullición. La mezcla por separar se coloca
en el matraz de destilación al que previamente se le han colocado perlas de
ebullición o pequeños trozos de tezontle lavados y secados en la estufa a 100 oC,
se ensambla el aparato (como indica la figura) y se procede a calentar el matraz;
el componente más volátil hierve primero y más rápidamente; consecuentemente
los vapores de la mezcla son más ricos en este componente, que al pasar por el
refrigerante, se condensan y recolectan. Cuando disminuye la proporción de este
componente en la mezcla, el vapor se enriquece con el componente menos volátil;
la temperatura del termómetro se incrementa y se utiliza otro matraz para
recolectar este componente.

Equipo de destilación simple

b) Destilación fraccionada
En cuando los componentes de la mezcla líquida tienen puntos de ebullición cercanos,
se utiliza una la destilación fraccionada, un columna de fraccionamiento se empaca
con un material inerte (perlas de vidrio, fibra de vidrio o acero etc.) y se coloca en
forma vertical al refrigerante, (ver figura 2). El calentamiento de la mezcla en e matraz
causa que los vapores ricos en el componente más volátil pasen a través de la
columna de fraccionamiento, el vapor al tocar el material de relleno frío, se condensa y
regresa hasta que toca una parte de la columna que ha elevado su temperatura,
entonces vuelve a re-evaporizarse. El nuevo vapor es más rico en el componente
menos volátil. Este proceso de condensación-revaporización se efectuará varias veces
a lo largo de la columna y se condensa en el refrigerante. Se observa que una
destilación fraccionada es equivalente a varias destilaciones simples.
 Aparato de destilación fraccionada

c) Destilación a presión reducida

Muchos de los productos naturales no pueden ser destilados a presión atmosférica
debido a que se descomponen al acercarse a su punto de ebullición. Este problema
puede ser resuelto a través de una destilación a baja presión ya que con ello se evita
la descomposición de la muestra. La presión de vapor de cualquier sustancia es una
función directa de la temperatura, así, al disminuir la presión dentro del aparato de
destilación se abatirá el punto de ebullición. La destilación a presión reducida puede
realizarse con el rotaevaporador o bien con un equipo para destilación adaptado a una
bomba de vacío.

d) Destilación por arrastre de vapor

La destilación por arrastre con vapor es una técnica que se emplea para separar
sustancias que son insolubles en agua y volátiles, de otras sustancias no volátiles. Es
una técnica aplicada en la separación de sustancias poco solubles en agua. La
destilación por arrastre de vapor se emplea para separar una sustancia de una mezcla
que posee un punto de ebullición muy alto y que se descomponen al destilar. También
se emplea para purificar sustancias contaminadas por grandes cantidades de
impurezas resinosas y para separar disolventes de alto punto de ebullición de sólidos
que no se arrastran. Este tipo de destilación se emplea principalmente para la
separación de aceites esenciales

e) Extracción continúa en Soxhlet

Esta forma de separación de metabolitos secundarios no es propiamente una
destilación pero implica el calentamiento de un solvente de tal forma que entre en
contacto con el material biológico repetidas veces y permite la extracción de
sustancias de interés una vez que el solvente que está en contacto con el material
biológico ya no presenta coloración, se considera que se ha llevado a cabo la
extracción total y se termina el proceso.
 Aparato Soxhlet para extracción de componentes orgánicos

Extracción por reflujo directo:

También puede emplearse un método directo, calentando el sólido junto con el
disolvente en un matraz y colocando un refrigerante en posición vertical para que se
condense el disolvente que está hirviendo y no se pierda. (A esta operación se le llama
calentamiento a reflujo), hasta que el producto deseado se encuentre disuelto en
dicho disolvente.

II. SEPARACIONES CROMATOGRÁFICAS

La cromatografía en varias de sus modalidades (papel, capa fina, columna, etc.) es un

método de separación y purificación de compuestos orgánicos que depende de la
distribución de ellos en la fase estacionaria. Para efectuar una separación
cromatográfica se requiere de una fase estacionaria sólida (material adsorbente como
alúmina, gel de sílice, carbón o celulosa) y de una fase móvil (eluyente).
Se elige el adecuado para efectuar la separación considerando las solubilidades
relativas de los componentes de la mezcla. La muestra se aplica en el adsorbente (en
la columna, placa o tira de papel) y luego se deja que pasen a través del adsorbente
los componentes de la mezcla, que se desplazarán dependiendo de su solubilidad
relativa en el eluyente y en el adsorbente. Aquellos que son más solubles y que son
menos atraídos por la fase estacionaria se desplazarán más rápido, mientras que
componentes insolubles quedan en el punto de aplicación. Para el caso del papel y
placa fina, después del proceso se tiene como resultado un cromatograma en el cual
los componentes separados se revelan, ya sea por su color inherente o por medio de
un método físico o químico.
La cromatografía generalmente se usa como un método cualitativo, pero también se
puede usar para efectuar análisis cuantitativo.

1.- CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

2.- CROMATOGRAFÍA EN PAPEL

3.- CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
La cromatografía en columna (CC) es el método más utilizado para la separación y
purificación de compuestos orgánicos, sólidos o líquidos, a escala preparativa. La fase
estacionaria (adsorbente) se coloca en una columna de vidrio que termina en un
estrechamiento con una llave y se impregna con el eluyente (fase móvil). La mezcla a
separar se deposita en la parte superior de la columna y la fase móvil atraviesa el
sistema Los compuestos se van eluyendo disueltos en el eluyente, se van recogiendo
ordenadamente en fracciones de pequeño volumen (1,2,.....) y se analizan por
cromatografía en capa fina (CCF). Los productos van saliendo de la columna según su
polaridad, primero salen los menos polares que son los menos retenidos por el
adsorbente y los últimos los más
polares por su mayor retención en la fase estacionaria. El adsorbente más utilizado
para este tipo de cromatografía es gel de sílice y en segundo lugar la alúmina.
El tamaño de partícula del adsorbente es importante para la separación y su elección
depende en gran medida de que la elución de la cromatografía se realice por gravedad
o a media presión (flash chromatography). En una elución a media presión se pueden
emplear tamaños de partícula más pequeños, que permiten una separación más
eficaz. Sin embargo, en una elución por gravedad el uso de tamaños de partícula
pequeños impediría el flujo del disolvente.
Antes de realizar una separación en cromatografía de columna hay que elegir
adecuadamente el disolvente haciendo ensayos en CCF.

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CATEDRA DE FITOQUIMICA

PRACTICA N° 3

IDENTIFICACIÓN DE GLUCIDOS
Siendo aldehídos o cetonas, los glúcidos se clasifican también atendiendo a la
cantidad de unidades que los constituyen en: monosacáridos, oligosacáridos o
polisacáridos. El monosacárido más abundante y de especial relevancia para el ser
humano es la glucosa, debido a su participación en diferentes trastornos metabólicos y
endocrinos, siendo la diabetes sacarina la causa más común de las afecciones del
metabolismo de los hidratos de carbono. Esta práctica analiza los glúcidos, sus
reacciones coloreadas, importancia, metabolismo y fisiopatología, así como al
conocimiento de las principales medidas para su identificación y seguimiento.
Los glúcidos, también conocidos como azúcares, sacáridos, carbohidratos o hidratos
de carbono, constituyen el grupo de biomoléculas más abundantes sobre la superficie
terrestre y representan los principales componentes de tipo energético-nutricional.
Estas moléculas responden a la composición genérica Cn (H2O)n, con una relación
entre H y O que le ha valido el término de carbohidrato.

OBJETIVOS

1.- Realizar el análisis cualitativo de las sustancias químicas que se obtienen a partir
de vegetales.

2.- Identificar los principales metabolitos presentes en plantas.

INTRODUCCIÓN

Este análisis se efectúa para determinar los principales grupos de metabolitos

presentes en plantas, los extractos obtenidos se ponen en contacto con diferentes
reactivos químicos y se observan las reacciones de coloración y/o precipitación que se
obtengan y a partir de ellas se determina la presencia o ausencia de los diferentes
metabolitos.
Como ciencia, la fitoquímica estudia multitud de compuestos químicos que se
encuentran en la complejidad de las células vegetales, pero no sólo como entidades
químicas, sino también como productos de una serie de mecanismos que intervienen
en su biogénesis, es decir que aporta elementos importantes para el estudio de la
relación entre estructura química y la acción fisiológica de los metabolitos secundarios.

IDENTIFICACION DE AZUCARES REDUCTORES

REACTIVOS Y DISOLVENTES:

Metanol, cloroformo, éter etílico, éter de petróleo, tolueno, placas de sílica gel para
cromatografía,

Materiales y equipo

Matraz fondo plano de 250 mL

Refrigerante
1 mortero con pilon
10 tubos de ensaye de 10-15 mL
1 Gradilla para tubo de ensayo
1 Pipeta de 5 mL
1 Pipeta 10 mL
1 Pipeta 1 mL
1 Baño María
1 cocina eléctrica
1 Varillas de vidrio
2 Viales con tapa
4 Tubos capilares
2 Pinzas de tres dedos
2 Embudo de tallo corto
1 Espátula
1 Soporte universal
1 Lámpara de UV

PROCEDIMIENTO:

25 g de muestra o material biológico seco y molido (pueden ser hojas, corteza, semilla,
etc de una planta o un cuerpo fructífero de champiñón, portobello u otro hongo) se
colocan en un matraz de fondo plano de 250 a 500 mL, se le agrega etanol procurando
que cubra máximo 2/3 partes de su volumen (no olvidar agregar perlas de ebullición).
Se extrae por reflujo durante media hora. El extracto etanólico obtenido después de
filtrar, se concentra en baño María. El residuo semisólido se usa para los siguientes
ensayos:

Se tomaron 2 mL del extracto, midiendo el pH y adicionando hidróxido de sodio al 10%

(si es
necesario) hasta tener un pH de 11. Dividir el extracto en dos tubos de ensaye para las
siguientes pruebas.

1) Reacción de Fehling. Se adicionan 0.5 mL de soluciónFehling A y 0.5 mL de

solución Fehling B y 1 mL de agua destilada.
2) Reacción de Benedict. Se adicionan 0.5 mL de reactivo Benedict y 1 mL de agua
destilada. Se prepara un blanco para cada tubo, sin extracto. Se colocar los cuatro
tubos en baño maría por 15 minutos. Cuando hay azúcares en los tubos que contienen
el extracto se forma un precipitado de color naranja a rojo.
PREPARACION DE REACTIVOS:

1. REACTIVO DE BENEDICT: 8.65 g de Citrato de Sodio + 5 g de Na2CO3 anh.

en 30mL de agua destilada se añadió lentamente y agitando + 0.865 CuSO4
en 7.5mL de agua y se afora a 50mL.
2. REACTIVO DE FEHLING:
Sol. A: 3.5 g de CuSO4 5H2O aforado a 50mL de agua destilada.
Sol. B: 17.5 g de tartrato de sodio y potasio + 5 g de NaOH aforado a 50mL de
agua.

CUESTIONARIO:
1. Que son los azucares reductores.
2. Mencione a los azucares reductores.
3. Que función cumplen los glúcidos
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CATEDRA DE FITOQUIMICA

PRACTICA N° 4
IDENTIFICACIÓN DE ALMIDON

I. Generalidades:
El almidón es el material de reserva de los vegetales. En la medida que las
moléculas de glucosa son producidas durante la fotosíntesis, pueden
ser consumidas con el objetivo de liberar energía, o pueden juntarse una a las
otras, formando el almidón, que es mantenido como reserva. Químicamente, el
almidón o amilo es un glúcido del tipo polisacárido, formado por más de 1400
moléculas de glucosa. Es una sustancia altamente energética, que hace parte de
la dieta de la mayoría de los seres vivos. En las plantas y en las algas, es un
material típico de reserva.
Este polisacárido está formado por moléculas de glucosa y es exclusivo de las
células vegetales y se presenta de dos formas: la amilosa que es la que
realmente se tiñe con el yodo del lugol y la amilopectina.

II. Objetivo:
Extraer e identificar la presencia de almidón en un tejido vegetal (tubérculos o
cereales).

III. Materiales y Reactivos

1. Tubos de ensayo (4)

2. Gradilla
3. Fiola de 10 mL ó 25 mL
4. Cuchillo
5. Rayador
6. Balanza
5. Vaso de precipitación de 500 mL, 150 mL, 50 mL
7. Luna de reloj mediano
8. Estufa
8. Gotero
10. Pipetas de 1mL, 5mL
10. Agua destilada
11. Rvo. de lugol
12. Solución de yodo al 0.1N

IV. Procedimiento:

1. Con un cuchillo, eliminar la cubierta o la capa externa del vegetal asignado,

 rayar con el rayador para obtener una pulpa fina (hacer lo más rápido
posible para evitar las reacciones de oscurecimiento).
2. Pesar 100 gramos del tejido vegetal libre de cascara. Agregar 100 mL de
agua destilada y agitar fuertemente por unos minutos.
3. Filtrar con una gasa doble en un vaso de precipitación y dejar que el filtrado
se asiente.
4. Una vez asentado descartar el agua sobrenadante y lave el almidón
agregando nuevamente la cantidad suficiente de agua destilada y agitando
por unos minutos. Se deja asentar. La operación se puede repetir una vez
más para obtener un almidón limpio.
5. Decante finalmente, lo más posible de agua y extienda el almidon en una
luna de reloj mediano y llévelo a la estufa a 60 ºC, para que el almidón se
seca.
6. Con el almidón seco preparar una solución de almidón al 1%, tomar 5 mL y
colocar en un tubo de ensayo.
7. Agregar 3 gotas de solución de yodo al 0.1N, o solución de lugol.
8. La reacción POSITIVA para almidón da un color morado oscuro a azul.

V. CUESTIONARIO

1. Qué cantidad de almidón se obtuvo en la práctica y comparar con los otros

grupos.
2. ¿Qué tipo de molécula es el almidón? ¿De qué está compuesta?.
3. ¿Cuál es la función que cumple el almidón en el organismo?.
4. Cita otros alimentos que sean ricos en almidón.
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CATEDRA DE FITOQUIMICA

PRACTICA N° 5
MÉTODOS DE EXTRACCIÓN DE LÍPIDOS

I. Generalidades:
El presente texto pretende informar a la comunidad científica, las diferentes
metodologías que pueden ser implementadas en la extracción de lípidos, cuál es
su principio, ventajas y desventajas. Además de incentivar a la comunidad a
realizar más investigaciones encaminadas a la identificación del perfil lipídico de
las plantas.

1. LÍPIDOS:

a. ¿Qué son? Los lípidos son moléculas hidrófobas o anfipáticas, pueden

originarse completamente o en parte a través de condensaciones de
tioésteres o unidades de isopreno, se caracterizan por ser sustancias
solubles en solventes orgánicos y ser no poliméricos. Los lípidos biológicos
se pueden clasificar en ocho categorías diferentes (FAO, 2012), como se
muestra en la Tabla No. 1.

Tabla No.1. Categoría de lípidos biológicos y ejemplos típicos

CATEGORIA EJEMPLO
ÁCIDO GRASO ÁCIDO OLEICO
GLICERILÍPIDOS TRIGLICÉRIDOS
GLICEROFOSFOLÍPIDOS FOTIDILCOLINA
ESFINGOLÍPIDOS ESFINGOSINA
ESTEROLES COLESTEROL
ESOPRENOIDES FARNESOL
GLUCOLÍPIDOS ACETILGLUCOSAMINA
POLICÉTIDOS AFLATOXINA

Monografias.com

b. Lípidos animales: Los lípidos animales se comportan como reservas

energéticas concentradas, cada gramo puede originar el doble que un
gramo de Carbohidratos o proteína, además no necesita estar disuelto en
agua. Muchos animales, almacenan grasa para los momentos de déficit
calórico, las grasas y otros lípidos son importantes en ciertos componentes
de los tejidos, como las membranas celulares, la vaina de la mielina de los
axones, etc. (Alfaro et. Al., 2005).

c. Lípidos vegetales: En los vegetales los lípidos se encuentran en las

membranas celulares como glicolípidos y fosfolípidos, y como
triacilglicéridos, los últimos como sustancias de reserva, en cuerpos oleosos
 (esferosomas) en las semillas. Aproximadamente cerca de 300 ácidos
grasos diferentes se han identificado en plantas. En las membranas de los
cloroplastos y en los plastidios de los tejidos no fotosintéticos, los
glicolípidos son los componentes que se encuentran en mayor abundancia.
En las membranas, la parte polar (hidrofílica) se orienta hacia la parte
externa de éstas y la parte hidrófoba se encuentra inmersa en el interior de
la membrana de diferentes organelos y estructuras (García-Mateos, 2008).

d. Importancia: Las grasas y los aceites están presentes en todo momento en

nuestra vida. Las utilizamos en nuestra alimentación, en nuestro aseo e
higiene, en la conservación de nuestra salud, y en innumerables productos y
objetos que utilizamos y/o consumimos diariamente (Valenzuela et. Al,
2005). En el área industrial, se han realizado estudios en diversas partes del
planeta, desde el siglo pasado, relacionados con la obtención de aceites
para la producción de biocombustible, a partir de macro-algas y plantas
acuáticas, han demostrado un alto rendimiento. (UNESCO, 2010).

Otros estudios demuestran el interés en los aceites esenciales para usos

médicos, por ejemplo, se ha identificado que el componente principal del aceite
de hígado de tiburón, los alquilgliceroles, ayudan en la protección contra 3 tipos
de agresores comunes: infecciones virales, bacterianas y fúngicas. Brindan
beneficios que se insertan en la estimulación del sistema inmunológico,
incremento de anticuerpos, trombocitos y leucocitos, disminuyen la mortalidad
por cáncer de mama y detiene la progresión de enfermedades degenerativas
(García- Peña, 2010).

En la nutrición, desde el año de 1929, se identificó la esencialidad de los ácidos

grasos, por los investigadores George y Mildred Burr, por medio de
experimentos con ratas identificaron como alimentación carente totalmente de
grasas, disminuía el crecimiento corporal, causa dermatitis, perdida de la cola o
pelaje y hasta la muerte, estos hallazgos no fueron detectados en estudios
anteriores a los de Burr, porque muy probablemente no contaba con los
procedimientos químicos necesarios para aislar los ácidos grasos.

Más tarde con la llegada de nuevas técnicas más finas para la separación y
análisis en los ácidos grasos, como la cromatografía, se ha logrado la
identificación, separación y determinación de los ácidos grasos, demostrando
por ejemplo que el ácido linoleico, es el causaba las alteraciones en las ratas
(Valenzuela & Morgado, 2005).
II. Objetivo:
Describir los diferentes métodos de extracción de lípidos
III. Materiales (información)
Métodos de extracción
El contenido total de lípidos se determina comúnmente por métodos de extracción con
disolventes orgánicos (por ejemplo Soxhlet, Goldfish,Mojonnier), sin embargo también
puede cuantificarse por métodos deextracción que no incluyen disolventes (por
ejemplo, Gerber, Babcock) y por métodos instrumentales que se basan en
propiedades físicas o químicas de los lípidos (por ejemplo, infrarrojo, densidad y
absorción de rayos x) (Aguilar, 2011)

a. Métodos con solventes:

Soxhlet: Es el más ampliamente utilizado, usa una extracción Solida- Liquida en un

aparato llamado de la misma manera, se tiene un flujo constante de un solvente
orgánico, por lo general Éter de petróleo, éter etílico o Hexano- Diclorometano. Este
solvente es calentado hasta ebullir, luego condensado y dispuesto en el tubo Soxhlet,
en el cual extrae el aceite contenido en la biomasa hasta que el tubo se llena, cuando
el tubo está lleno de solvente, este es sifonado hasta el balón que contiene el resto de
solvente y se repite el proceso (González et Al., 2009).

Es sencillo, no es de un trabajo intensivo y los lípidos pueden ser usados para

posteriores determinaciones. Sin embargo, los resultados son menos eficientes
comparados con los del método Bligh & Dyer, no se pueden determinar los lípidos
totales, se necesitan grandes cantidades de solvente, se requiere de un equipo
especial, puede tener efectos adversos en lípidos lábiles y es difícil controlar muchas
de las condiciones (Carvalho et. Al., 2009).

Folch: también es ampliamente utilizado, se considera el método más fiable para la

recuperación de los lípidos totales, en la extracción el perfil de los ácidos grasos
permanecen estables, el método subestima sistemáticamente concentraciones en las
muestras que contienen más de 2% de lípidos (Axelsson & Gentili, 2014; Segura, J.
2015). En algunos estudios se reporta mas bajo rendimiento en extracción comparado
con Soxhlet (Caprioli et Al. 2015).

Bligh and Dyer: es un método estándar bien establecido, determina lípidos totales, se
basa en un sistema bifásico de equilibrio Liquido- Liquido. Las muestras pueden ser
analizadas directamente sin necesidad de pre-secarlas y los lípidos obtenidos pueden
ser usados para futura determinación, sin embargo la utilización de cloroformo es una
desventaja, pues te compuesto es toxico con el ambiente ( Santana et Al, 2009).

El procedimiento consiste en realizar una cuantificación gravimétrica, en la cual se

tienen en cuenta tres pasos para la extracción: 1) Methanol+ cloroformo, 2) Cloroformo
y 3) Agua. Después de la separación de fases lípidos totales se determinan en la fase
de cloroformo por análisis gravimétrico seguido de la evaporación del solvente
(Schlechtriem et al, 2009)

Schmid-Bondzynski-Ratzlaff: Es un método muy empleado para determinar los lípidos

en queso y en leche en polvo. Económico, extrae lípidos totales y las muestras pueden
ser abalizadas sin secado previo, sin embargo los lípidos no pueden ser usados para
determinaciones posteriores. El Procedimiento consiste en ubicar en un vaso de
precipitado de 100 ml la cantidad adecuada de muestra, agregar HCl y calentar. Dejar
enfriar, transferir el contenido a una probeta graduada con tapa esmerilada, lavando el
vaso de precipitado con unos 10 ml de alcohol etílico en dos porciones y luego agregar
50-60 ml de éter. Dejar en reposo 24 horas y leer el volumen de la fase etérea. Tomar
una alícuota exactamente medida y evaporar el éter en un vaso de precipitado
pequeño previamente tarado. Una vez evaporado el éter pesar nuevamente y
determinar el contenido de lípidos por diferencia, teniendo en cuenta la alícuota
tomada para realizar los cálculos (UNLP, 2012).

Fluidos supercríticos: Los fluidos supercríticos (FSC) tienen la capacidad de extraer

ciertos compuestos químicos con el uso de determinados solventes específicos bajo la
combinación de temperatura y presión. El CO2 es el fluido supercrítico más utilizado
debido a que no es ni tóxico, ni inflamable, ni corrosivo, es incoloro, económico, se
elimina fácilmente, no deja residuos, sus condiciones críticas son relativamente fáciles
de alcanzar y se consigue con diferentes grados de pureza, se puede trabajar a baja
temperatura y por tanto, se pueden separar compuestos termolábiles (Velazco et Al.,
2007). Después del paso del CO2, este es evaporado y los lípidos son medidos. Las
ventajas que presenta este método es que es rápido, utiliza solventes orgánicos y los
lípidos pueden ser usados para futuros análisis, sin embargo el alto costo de los
equipos y su complejidad, limita el uso de esta técnica (Vásquez, 2008).

b. Extracción por instrumentos:

Extracción asistida por Microondas: consiste en el calentamiento de un solvente en

contacto con la muestra. El proceso implica la perturbación de los enlaces por puente
de hidrógeno, como resultado de la rotación de dipolos por la radiación en las
moléculas y la migración de iones; con la consiguiente penetración del solvente en la
matriz, y transporte al seno del líquido de los componentes.

La rapidez en el calentamiento es la principal ventaja de las microondas frente a los

métodos tradicionalmente empleados en la extracción con disolventes, que causan el
calentamiento a partir de la transmisión de la energía al material de forma indirecta. El
empleo de las microondas permite, por tanto, significativos ahorros de tiempo;
disminución de los volúmenes de disolventes necesarios en los tratamientos y, en
consecuencia, de energía en el proceso; no contamina el medio ambiente, lo cual se
manifiesta en la reducción de los costos en general, que constituyen aspectos
deseables de alcanzar en todo proceso de extracción, además de que permite obtener
altos recobrados de los compuestos de interés ( Salomón et. Al., 2013).

Espectroscopia de infrarrojo cercano (NIR) Algunas clases de lípidos muestran bandas

fuertes de absorción de grupos carbonilo en la región infrarroja, lo que quiere decir que
cada uno de ellos, tiene su espectroscopia. Por consiguiente para establecer un
complemento a las técnicas tradicionales surge el uso de la refractancia en el infrarrojo
cercano, que consiste en irradiar con un haz de luz monocromática los materiales
orgánicos, que en función de la naturaleza de los enlaces y cargas electrostáticas
existentes entre sus átomos y moléculas, absorben una determinada cantidad de
energía (reflectancia). Con esta técnica se generan modelos matemáticos que
relacionen la composición química con cambios de energía en la región
correspondiente al rango infrarrojo cercano. Este método no es destructivo, requiere
un mínimo o nulo tratamiento de la muestra, minimiza el daño ambiental y es una
técnica multianalítica de alta precisión que permite predecir varios factores
simultáneamente. Una vez calibrado el espectrofotómetro, el uso del NIR es de bajos
costos. El NIR está establecido para medir la composición lipídica en cereales como
granos de maíz (Bravo et al.,2009)

Autoclavado: El principio de extracción mediante Autoclavado es similar a la extracción

mediante agua subcrítica. La metodología de utilización de esta técnica es variable, se
puede utilizar una solución salina acuosa como fluido de trabajo y se autoclavan a
300°C y 100 MPa con tiempos que oscilan entre 5 y 60 minutos, adicionalmente se
purga con nitrógeno el aire residual. una ventaja de esta técnica para ser utilizada en
la extracción de lípidos, es que se puede trabajar con la biomasa húmeda, lo cual
evade la etapa de secado de la biomasa, durante la cual se pueden degradar los
lípidos presentes y aumenta los costos globales de proceso. No obstante, todos los
experimentos que utilizan Autoclavado para la extracción de aceite, incorporan una
etapa adicional de extracción con solvente químico, por lo cual podemos decir que el
autoclavado es una técnica de pre-tratamiento para una posterior extracción química,
que una técnica de extracción en sí misma (Mendes, et. Al, 2001).

https://grasas-y-aceites-vegetales.webnode.com.co/procesos/extraccion-de-
aceites/ PRENSADO EN FRIO: EXTRACCION DE ACEITE VEGETAL (5 MIN)

IV. Procedimiento:
Leer cada uno de los métodos y elaborar un esquema de llaves
V. CUESTIONARIO

Elaborar cuadros de doble entrada donde indicaran las ventajas y desventajas de

cada uno de los métodos de extracción de lípidos
 PRACTICA N° 05 - B
OBTENCIÓN DE ACEITE ESENCIAL DEL LIMÓN

I.OBJETIVO:
Obtener Aceite Esencial a partir de la corteza del limón (citrus limonium), como
aditivo en la Industria Cosmética y Alimenticia.
II. MATERIALES Y EQUIPO:
Materiales:
▫ Limones: 2 Kilos de limones cuyo fruto es de unos 130 gr aproximadamente.
Corteza gruesa, lo que facilita su manipulación
▫ Solución de Etanol Esponjas
Instrumentos: Cuchillo,alfileres, recipiente
Equipos: Equipo de destilación.

III.MARCO TEÓRICO
3.1. El aceite esencial es una mezcla de componentes volátiles, producto del
metabolismo secundario de las plantas. Se forman en las partes verdes (con
clorofila) del vegetal y al crecer la planta son transportadas a otros tejidos, en
concreto a los brotes en flor. Es uno de los ingredientes básicos en la industria
de los perfumes, alimenticia y en medicina. El objetivo general es obtener el
aceite esencial a partir del la corteza del limón (citrus limonium) como aditivo en
la industria cosmética y alimenticia, a través los procesos de expresión a mano
utilizando una esponja, desterpenación y destilación al vacío, de los cuales se
obtiene un aceite alta calidad, siendo estos procesos una vía más accesible para
las personas interesadas en producir este tipo de aceites, debido a su
practicidad y a la carencia de equipos complicados y relativamente costosos.

IV.PROCEDIMIENTO
1.Selección del fruto, el cual debía pesar aproximadamente 130gr y tener la corteza
gruesa para que se hiciera más fácil su manipulación. Esta preferiblemente debía
ser de color amarillo verdoso para asegurase que la solución que se va a obtener
no es de color tan oscuro ni tan amargo.
2. Su corteza previamente lavada para evitar que el aceite tuviera partículas
sucias.
3.Para obtener el aceite se procede a presionar una esponja previamente
humedecida en etanol (etanol – agua al 25% v/v) contra el limón y, por encima de
la esponja se pinchaba con un alfiler de manera que la atravesara y punzara la
corteza del limón, agilizando el desprendimiento del aceite.
4.La esponja exprimir periódicamente hasta obtener aproximadamente una ½ taza
de esta solución
5.Posteriormente esta sustancia se introduce en un alambique y se somete previo
calentamiento para que la sustancia volátil se evaporara (destilación al alto vacío)
con el fin de separar la mezcla de los componentes volátiles, quedándonos en el
recipiente la solución deseada la cual es aproximadamente 15 cc.
 Flujograma de secuencia para la obtención del Aceite Esencial del Limón.

Selección de los limones

Se humedece la esponja
en etanol

La esponja se prensa contra la

corteza de limón y se pincha
constantemente con el alfiler

Mientras la esponja absorbe el

aceite, esta debe ir exprimiendose
periodicamente en un recipiente

La solución obtenida se coloca

en un alambique (aparato de
destilación)

Se somete a un previo
calentamiento para que la
solución volátil se evapore

Obtención de la fase deseada

Envasado del aceite esecial del

limón.

https://www.youtube.com/watch?v=HHN894AqEWU
EXTRACCIÓN DE ACEITE Y JUGO DE LIMON (2 :26)

https://www.youtube.com/watch?v=Rr6VmP2dm2M
COMO HACER ACEITE D LIMÓN EN CASA (7:52)

V. CUESTIONARIO/ EVALUACIÓN
Describa los usos del aceite de limón
¿Qué técnica se aplico para extraer el aceite esencial?
ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y BIOQUIMICA
CATEDRA DE FITOQUIMICA

PRACTICA N° 6

IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS Y PROTEINAS

I. Generalidades:
En esta práctica aplicamos los fundamentos del análisis químico (reactividad y
comportamiento) de aminoácidos, polipéptidos y proteínas.
II. Objetivo:
Identificar proteínas a través de pruebas de análisis cualitativo, identificando así
mismo características químicas particulares

III. Materiales y Reactivos

1.Tubos de ensayo
2 Pipeta aforada
3 Matraz de Erlwnmeyer de 250 mL
4 Agua destilada 100 mL
5 5ml ò 0,25g de la sustancia a analizar (espinacas, leche, huevo)
6 SULFATO DE COBRE AL 0,5% (reactivo biuret)
7 Hidróxido de sodio al 10%
8 0,5 mL de HNO3
9 0,5 mL reactivo del millón
10 1ml de ácido sulfúrico concentrado
11 2ml de ácido glioxílico
12 0,5ml de solución de hidróxido de sodio al 5%
13 gotas de alfa naftol en etanol
14 dos gotas de solución de hipoclorito de sodio al 10 %
15 5 ml de formol previamente neutralizado.
16 hidróxido de sodio 0,1N
17 Gotas de fenolftaleína

IV. Procedimiento:

Ensayo de Biuret
En un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia a analizar, adicione 0,5mL o
0,25g de la sustancia (en caso de ser sólida agregue 1mL de agua. Luego adicionar
gota a gota solución de sulfato de cobre al 0,5%, agite y espere la formación de un
color violeta es el resultado final de la prueba
Reacción Xantoprotéica
Agregar cuidadosamente solución de hidróxido de sodio al 10% en exceso. Adicionar
0,5ml de ácido nítrico concentrado. Caliente los tubos en baño de maría. Adicione
0,5ml ò 0,25g de la sustancia a analizar. En caso de ser sólida, agregue 1ml de agua).
Un precipitado blanco recién formado, se vuelve luego amarillo y posteriormente se
disuelve dando a la solución de color amarillo intenso casi anaranjado si en la proteína
se encuentran los aminoácidos: fenilalanina, tirosina, tiroxina y triptófano
Ensayo de Millón
Ensayo de Millón Tomar un tubo limpio y seco por cada sustancia a analizar Adicionar
0,5ml ò 0,25g de la sustancia a analizar. En caso de ser sólida, se agrego 1ml de
agua). Si no aparecía color, se adicione tres gotas más y caliente. Luego adicione
gotas de reactivo Millón; después calentarhasta ebullición Si se presenta un
precipitado rojo, la solución contiene los aminoácidos: tiroxina ò tirosina. Luego se
registraron los resultados

Ensayo de Hopkins Cole

En el tubo de ensayo se adiciona 0,5ml ò 0,25g de la sustancia a analizar. En caso de

ser sólida, agregue 1ml de agua). Se Inclina el tubo y sin agitar adicionar por las
paredes 1ml de ácido sulfúrico concentrado de modo que se formen dos fases. Luego
agregar 2ml de ácido glioxílico, hasta que se forma un anillo violeta en la interface si la
proteína contiene el aminoácido triptófano.

Ensayo de Sakaguchi
Después se procede a adicionar 0,5ml de solución de hidróxido de sodio al 5%, dos
gotas de alfa naftol en etanol y dos gotas de solución de hipoclorito de sodio al 10 %
Tomar un tubo por cada sustancia a analizar adicionamos ,5ml ò 0,25g de la sustancia
a analizar. En caso de ser sólida, agregue 1ml de agua). La aparición de un color rojo
intenso indica que la proteína posee el aminoácido: arginina. Ensayo para detectar
azufre.

Determinación cuantitativa de grupos carboxilos en una proteína (Titulación de

Sorensen)
Con una pipeta aforada, mida 10ml de la solución anterior. Luego se disolver en agua
hasta formar una solución de 100ml en un balón aforado. Se Añade con una pipeta
graduada 5 ml de formol previamente neutralizado. transfiérela a un Erlenmeyer de
250ml. Se rotula como con hidróxido de sodio 0,1N hasta la aparición de un color
rosado tenue permanente. Se Calcula el número de mili equivalentes de hidróxido de
sodio usados en la titulación. Se deja en reposos un momento. Luego se aplica dos
gotas de fenolftaleína. Y se determina el número de equivalentes del grupo COOH
presentes en la proteína.

CONCLUSIONES
Realizaron cada uno de los proceso de la práctica donde aprende a diferenciar que los
aminoácidos son una molécula orgánica con un grupo de amino (NH2) y un grupo
carboxilo (-COOH). En cuanto a las proteínas son uno de los principales componentes
de todas las cuales se sintetizan la unión entre si de las cadenas lineales de
aminoácidos.

Bibliografía: Guías de laboratorio Carlos Enrique Meñaque (tutor presencial) Modulo

de química orgánica

Recomendado
Practica 1,2 y 7 Química Orgánica Universidad Nacional Abierta y a Distancia
https://www.youtube.com/watch?v=1PFTJemVtnI (EXTRACCIÓN DE AMINOÁCIDOS)
1 HORA CON 26 MINUTOS
https://www.youtube.com/watch?v=V6TV6aeJQQA (IDENTIFICACIÓN CUALITATIVA
DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS) 6 MINUTOS
CUESTIONARIO
1. ¿Qué son los aminoácidos?
2. ¿Qué son las proteínas?
3. ¿Cómo se identifica los aminoácidos? 4.¿Cómo se identifica las proteínas?
ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y BIOQUIMICA
CATEDRA DE FITOQUIMICA

PRACTICA N° 7

IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS
I. Generalidades:
Las proteínas son macromoléculas formada por monómeros conocidos como
aminoácidos, son las biomoléculas más abundantes en los seres vivos y las
que presentan gran diversidad de funciones.
La identificación de proteínas se puede dar mediante el aislamiento de
cualquier material biológico. Muchas células requieren algún tipo de ruptura
mecánica para liberar su contenido. La mayoría de los procedimientos para
lograr la lisis de las células se basa en alguna forma de aplastar o moler,
seguida de una filtración o una centrifugación para retirar las partículas
insolubles más grandes. Si la proteína está estrechamente asociada con una
membrana lipídica puede usarse un solvente orgánico para solubilizar los
lípidos y recuperar la proteína
La yema que contiene el huevo tiene un peso aproximadamente de 10g,
contiene un 50% de agua, 17% de proteínas y 33% de lípidos; entre
los cuales los fosfolípidos (lípidos que contienen fosforo) representan un
tercio de la masa lipídica y se componen esencialmente de lecitinas (70%) y
cefalinas (25%).

II. Objetivo:
Identificación de proteínas y obtención de biomoléculas por medio de su
solubilidad en disolventes

III. Materiales y Reactivos

2 VASOS DE PRECIPITADOS DE 100ml

3 pipetas de 10 ml
1 pipeta de 5ml
1 probeta de 100ml
1 varilla de vidrio
1 embudo de vidrio
2 tubos de ensayo
1 matraz Erlenmeyer de 100ml
Papel filtro
Guantes
Frascos de 20 ml. Con tapa
MATERIAL BIOLOGICO
Huevo

REACTIVOS
Etanol
 Sulfato de Amonio anhídro (NH4)2 SO4
Éter
Acetona

SOLUCIONES
Sulfato de amonio al 60% a pH11

EQUIPO
Parrilla de calentamiento
Centrífuga

IV. Procedimiento:

AISLAMIENTO DE PROTEÍNAS DE LA CLARA DE HUEVO (ALBÚMINAS)

1. Extraer la clara del huevo en una probeta, luego trasvasar a un matraz de
250ml.
2.- Se adiciona un volumen igual al de la clara de agua destilada, y agitar con
una varilla de vidrio
3.- Adicionar 30ml de sulfato de amonio al 60% y se mezclar con una varilla de
vidrio
4.- Se deja reposar por 10 minutos
5.- La mezcla de clara y sulfato vaciar en tubos para centrifugar a 3500 rpm
durante 10 minutos.
6.-Separar el sobrenadante en un tubo y recuperar el precipitado

CUESTIONARIO
1. ¿Cómo sabemos si es proteína o no?
2. ¿De que están compuestas las proteínas?
3. ¿Cuáles son las funciones de las proteínas?
4. ¿Cuáles son las propiedades fundamentales de las proteínas?

https://es.slideshare.net/skrjz/practica-9-qumica

https://food.r-biopharm.com/es/analitos/alergenos-alimentarios/soja/
(3 minutos PROTEÍNAS DE SOYA)
CARRERA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
CATEDRA DE FITOQUIMICA
PRACTICA N° 08

IDENTIFICACIÓN DE TRITERPENOIDES y/o ESTEROIDES

I. Generalidades:

Los esteroides son compuestos cuya estructura presenta el sistema anular

del ciclopentano perhidrofenantreno, metilos en los carbonos 10 y 13 y un
radical lineal en el carbono 17.
II. Objetivo:
Extraer e identificar la presencia de triterpenoides y/o esteroides en diferentes
muestras vegetales por el método de la prueba de precipitación y ensayos de
coloración.

III. Materiales y Reactivos

1. Mortero con pilón

2. Matraz de 50 mL y 100 mL
3. Embudo (02)
4. Trípode y malla de asbesto
5. Balanza
6. Vaso de precipitación de 500 mL, 150 mL, 50 mL
7. Pipetas de 1mL, 5mL
8. Tubos de ensayo (6 tubos)
9. Algodón
10. Papel filtro
11. Agua destilada
12. 10 g de muestra vegetal molido (Ñame, Zarzaparrilla, Aguaje, Soya, aceite
de oliva etc.)
13. Reactivos:
Cloroformo o diclorometano 15 mL
Sulfato de sodio anhidro 1 gramo
Anhídrido acético 1 mL
Ácido sulfúrico
Agua destilada
IV. Procedimiento:
1. Moler 10 gramos de la muestra vegetal seca. Agregar un volumen
suficiente de cloroformo o diclorometano y extraer por agitación. Filtrar.
2. Si el filtrado es turbio contiene humedad, secarlo agregando sulfato de
sodio anhidro y filtrar.
 3. En un tubo de ensayo limpio y completamente seco, colocar 1 mL de
filtrado orgánico. Añadir 1 mL de anhídrido acético. Por la pared del tubo
y con mucha precaución, dejar resbalar 1-2 gotas de ácido sulfúrico
concentrado. La formación de colores azules, violetas, rojos o verdes es
prueba positiva de que la muestra contiene Esteroides y/o
Triterpenoides.

CUESTIONARIO
1. Describir el nombre vulgar y científico de la muestra analizada, parte de la
planta analizada, familia vegetal.
2. Mencionar y describir las más importantes triterpenoides y/o esteroides que
se encuentran en los vegetales, cuáles son sus usos.
PRACTICA N° 10
IDENTIFICACIÓN DE QUINONAS (antraquinonas)

I. Generalidades:

Las quinonas son dicetonas cíclicas insaturadas que por reducción se

convierten en polifenoles, siendo reversible esta reacción. Las quinonas
derivan su nombre del miembro más simple de la serie: la p -benzoquinona
obtenida en 1838 por Woskresensky, como producto de oxidación del ácido
quínico.
Las quinonas, por el sistema aromático que dan al reducirse se pueden
clasificar en Benzoquinonas, Naftoquinonas, Antraquinonas (las más
numerosas) y Fenantroquinonas (las menos numerosas).
II. Objetivo:
Extraer e identificar la presencia de quinonas en diferentes muestras vegetales
por el método de la prueba de precipitación y ensayos de coloración.

III. Materiales y Reactivos

1. Equipo de reflujo (Balón con tapa y refrigerante)

2. Mortero con pilón
3. Matraz de 50 mL y 100 mL
4. Embudo (02)
5. Trípode y malla de asbesto
6. Balanza
7. Vaso de precipitación de 500 mL, 150 mL, 50 mL
8. Pipetas de 1mL, 5mL
9. Tubos de ensayo (6 tubos)
10. Algodón
11. Papel filtro
12. Agua destilada
13. 10 g de muestra vegetal molido (sen, el ruibarbo, cáscara sagrada, penca
zábila, la quinina, el café e ipecacuana etc.)
13. Reactivos:
Ácido sulfúrico al 50%
Ácido clorhídrico al 5 %
Peróxido de hidrogeno al 20 %
Tolueno 5 mL
Hidróxido de sodio
Amoniaco
Agua destilada
IV. Procedimiento:

1. Colocar 5 g de muestra fresca (ó 1 g de muestra seca y molida), en un

sistema de reflujo, agregar 25 mL de HCl 5%. Reflujar 5 minutos. Dejar
enfriar y filtrar.
2. Con el filtrado acuoso proceder como se describe para el ensayo con
una fracción acuosa.
3. Colocar en un tubo de ensayo unos 5 mL de filtrado acuoso. Añadir 1 mL de
peróxido de hidrógeno al 20% y 1 mL de ácido sulfúrico al 50%.
4. Calentar la mezcla en un baño de agua hirviendo durante 15 minutos.
Enfriar. Añadir 5 mL de tolueno.
5. Agitar sin emulsionar. Recuperar la fase toluénica. Trasvasar 2 mL fase
toluénica a un tubo de ensayo. Añadirle 1 mL de una solución de NaOH al
5% con amoniaco al 2%. Agitar sin emulsionar. Si la capa acuosa toma una
coloración rosada a roja intensa es prueba positiva de la presencia de
quinonas en la muestra.

CUESTIONARIO
1. Describir el nombre vulgar y científico de la muestra analizada, parte de la
planta analizada, familia vegetal.
2. Mencionar y describir las más importantes quinonas que se encuentran en
los vegetales, cuáles son sus usos.
ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y BIOQUIMICA
CATEDRA DE FITOQUIMICA

PRACTICA N° 11-A

IDENTIFICACIÓN DE FLAVONOIDES
I. Generalidades:
Los flavonoides son los pigmentos amarillos derivados de la fenil-benzo γ
pirona o fenil cromona. Se dan mucho en el reino vegetal, normalmente en
forma de heterósidos. Son una estructura molecular del tipo C6 – C3 – C6. Son
una familia muy diversa de compuestos, aunque todos los productos finales se
caracterizan por ser polifenólicos y solubles en agua. Existen 6 clases
principales, las chalconas, las flavonas, los flavonoles, los flavanoles, las
antocianidinas, y los taninos condensados, y otras dos más, las xantonas y las
auronas.
Para los vegetales, estos compuestos son importantes pues, además de ser
responsables de las coloraciones de muchas flores, frutos y hojas y por ello
intervenir en la polinización atrayendo a los insectos, participan en la vida del
vegetal ejerciendo importantes funciones como por ejemplo protegerle de los
efectos nocivos de la radiación UV y ejercer una eficaz actividad antioxidante.
En general, los flavonoides se encuentran de forma natural en frutas, verduras,
hortalizas, semillas y flores, así como en la cerveza, el vino, el chocolate, el té
verde, el té negro y la soja.
Los citroflavonoides son los flavonoides que más destacan, entre ellos se
encuentra la quercetina, hesperidina, naranjina y limoneno. Estos son
responsables del sabor y color particular en algunos alimentos como la cebolla,
brócoli, cerezas, uvas, naranja, lima y limón.
II. Objetivo:
Extraer e identificar la presencia de flavonoides en diferentes muestras vegetales
por el método de ensayos de coloración y precipitación.

III. Materiales y Reactivos

1. Mortero con pilón

2. Matraz de 50 mL
3. Embudo (02)
4. Trípode y malla de asbesto
5. Balanza

6. Vaso de precipitación de 500 mL, 150 mL, 50 mL

7. Algodón

8. Papel filtro
 9. Pipetas de 1mL, 5mL

10. Agua destilada

11. Tubos de ensayo (5 tubos)

12. 10 g de muestra vegetal seca y molido (Harina de soja, etc.)

13. Reactivos:
Tricloruro férrico 5 mL
Hidróxido de potasio 5 mL
Agua destilada
IV. Procedimiento:

Extracción acida:

1. En un matraz erlenmeyer seco se colocan 1 gramo de la muestra vegetal

seco y triturado finamente en un mortero.
2. Se añade 30 mL de agua destilada y llevar a baño maría por 10 minutos,
agitando de vez en cuando, filtrar con papel filtro.
3. Colocar 2 mL de la solución filtrada en tres tubos de ensayo y agregar a
un tubo 2 – 3 gotas del tricloruro férrico (Fe Cl 3), dando un color o
precipitado de color verde.
4. A otro tubo agregar 2- 3 gotas de KOH o NaOH al 10%, dando un color o
precipitado de color amarillo intenso, una coloración de amarillo a rojo,
indica la presencia de xantonas y flavonas; de café a naranja de flavonoles;
de púrpura a rojizo de chalconas y azul de antocianinas.
5. A otro tubo agregar 2 gotas de HCl cocentrado, si se obtiene una
coloración roja indica la presencia de auronas o chalconas. En caso de
haber cambio, se colocar un trozo de magnesio metálico, si se forma una
coloración naranja a rojo, indica la presencia de flavonas; si es rojo
flavonoles y si es magenta flavononas.

V. CUESTIONARIO
1. Debe incluir nombre vulgar y científico de la muestra analizada, parte de
la planta analizada, familia vegetal.
2. Mencionar y describir los más importantes flavonoides que se encuentran
en los vegetales, cuáles son sus usos.
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BIOQUIMICA
CATEDRA DE FITOQUIMICA

PRACTICA N° 11-B

IDENTIFICACIÓN DE CUMARINAS (FENÓLICOS)

I. Generalidades:

Las cumarinas son un grupo muy amplio de principios activos fenólicos y

tienen en común la estructura química de 1 -benzopiran-2-ona. Se
caracterizan porque presentan fluorescencia bajo la luz ultravioleta a 365
nm.
La cumarina es un aromatizante. Tienen propiedades vitamínicas,
disminuyen la permeabilidad capilar y aumentan la resistencia de las
paredes de capilares (protegen la fragilidad capilar y actúan como tónico
venoso). Algunos tienen propiedades sedantes, como la angelicina.
Pueden tener propiedades hipnóticas

II. Objetivo:
Extraer e identificar la presencia de cumarinas en diferentes muestras
vegetales por el método de la prueba de precipitación y ensayos de
coloración.

III. Materiales y Reactivos

1. Mortero con pilón

2. Tubos de ensayo grande (2)
3. Trípode y malla de asbesto
4. Balanza
5. Vaso de precipitación de 500 mL, 150 mL, 50 mL
6. Pipetas de 1mL, 5mL
7. Propipetas
8. Pinza para tubo
9. Ligas
10. Gradilla
11. Papel filtro
 12. Agua destilada
13. 1 g de muestra vegetal molido (avena, genciana, corteza del
castaño de indias etc.)

Reactivos:
Etanol 10 mL
Hidróxido de sodio 2 mL
Agua destilada

IV. Procedimiento:

1. En un tubo de ensayo grande colocar 1 g de material vegetal fresco.

2. Agregar cantidad suficiente de etanol comercial que cubra el material
vegetal.
3. Cubrir la boca del tubo de ensayo con un papel filtro blanco y sujetarlo
con unas pinzas el tubo de ensayo o con una banda elástica.
4. Agregarle unas gotas de NaOH diluido en el papel filtro que cubre la
boca del tubo de ensayo.
5. Calentar hasta ebullición el tubo de ensayo por 5 minutos, enfriar y
retirar el papel filtro.
6. Observar bajo luz ultravioleta a 365 nm la aparición de una coloración
fluorescente que puede ser: verde, amarilla, roja en el papel filtro.
7. Nota: El papel filtro normalmente se observa azul fluorescente bajo la
luz ultravioleta de 365 nm.

CUESTIONARIO
1. Describir nombre vulgar y científico de la muestra analizada, parte de la
planta analizada, familia vegetal.
2. Mencionar y describir las más importantes cumarinas que se encuentran
en los vegetales y cuáles son sus usos.
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BIOQUIMICA
CATEDRA DE FITOQUIMICA

PRACTICA N° 12

IDENTIFICACIÓN DE TANINOS

I. Generalidades:
Los taninos son sustancias complejas que no es posible clasificar dentro de
una estructura química única. Son sustancias polifenólicas hidrosolubles no
nitrogenadas, de origen vegetal, de peso molecular entre 500 y 3000, que
además de dar las reacciones clásicas de los fenoles, precipitan gelatina,
sales de alcaloides y metales pesados. Pueden clasificarse en gálico o
hidrolizables y catéquicos, no hidrolizables o condensados.
Los taninos gálicos están constituidas por unidades de ácido gálico o
hexahidroxidifénico y se hidrolizan con facilidad con ácidos y calor. Con
sales de hierro dan precipitados color azul oscuro.
Los taninos catéquicos poseen como unidad química a la catequina. Con
ácidos en presencia de un donador de grupos metilénicos y en caliente se
polimerizan y oxidan formando precipitados algodonosos de color rosáceo
denominados flobafenos. Con sales de hierro dan precipitados color
verdoso.
El tanino se encuentra principalmente en las raíces, la corteza, y de vez en
cuando en las hojas de la planta. Estos compuestos tienen propiedades
antibacterianas, astringentes y antisépticas. Se encuentran
especialmente en las familias de las Ericáceas, Leguminosas, Rosáceas y
Salicáceas.
Históricamente, son las sustancias empleadas para curtir pieles, ya que
forman puentes de hidrógeno con las fibras de colágeno de la piel. Sus
propiedades farmacológicas externas son astringentes, vasoconstrictoras
(para hemorragias) y cicatrizantes (quemaduras). Internamente,
antidiarreicas.
II. Objetivo:
Extraer e identificar la presencia de taninos en diferentes muestras vegetales por
el método de ensayos de coloración.

III. Materiales y Reactivos

1. Mortero con pilón

2. Matraz de 50 mL con tapa y varilla refrigerante y un matraz simple de 100
mL
3. Embudo (02)
4. Trípode y malla de asbesto
5. Balanza
 6. Vaso de precipitación de 500 mL, 150 mL, 50 mL

7. Algodón

8. Papel filtro

9. Pipetas de 1mL, 5mL

10. Agua destilada

11. Tubos de ensayo (6 tubos)

12. 10 g de muestra vegetal molido (aloe vera, salvia, hamamelis, granada,

membrillo, manzana, orégano, corteza del roble, uva, hojas de llantén,
plátanos, guayaba, hojas de té, hojas de la frambuesa y fresa, ruda,
ajenjo, sauce, tomillo, verbena, toronjil, etc.)
13. Reactivos:
Tricloruro férrico 2 gramos
Reactivo de Stiasny (Ácido clorhídrico, Formol 1:1)
Ácido clorhídrico 8 mL
Formol 8 mL
Hidróxido de amonio 2 mL
Acetato de sodio 2 mL
Agua destilada
IV. Procedimiento:
1. Moler con ayuda de un mortero unos 1 g de muestra vegetal, colocar en
un matraz erlenmeyer agregar 50 mL de agua. Calentar por 5 minutos y
filtrar.
2. Separar en dos tubos de ensayo la muestra 4 mL
3. Un tubo es el testigo y el otro tubo, adicionar II a III gotas de FeCl 3
comprobar la presencia de taninos, con precipitados de color verde
taninos catéquicos. Comprobar la astringencia.
4. Colocar 15 mL del extracto filtrado en un matraz Erlenmeyer con tapa y
tubo refrigerante, agregar 15 mL del Reactivo de Stiasny (Ácido clorhídrico,
Formol 1:1), llevar a baño maría por 30 minutos. Observar la formación de
precipitados, filtrar con papel de filtro.
5. En el papel de filtro verificar la presencia de taninos catéquicos, añadiendo
una gota de FeCl3 y una gota de Hidróxido de amonio, si es positivo
aparecerá color azul verdoso.
6. En el filtrado detectar la presencia de taninos gálicos, colocar 4 mL del
filtrado en un tubo de ensayo y agregar una gota de FeCl3 y Acetato de
sodio, si es positivo aparecerá un precipitado de color azul.

CUESTIONARIO
1. Debe incluir nombre vulgar y científico de la muestra analizada, parte de la
planta analizada, familia vegetal.
2. Mencionar y describir los más importantes taninos que se encuentran en los
vegetales, cuáles son sus usos.
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CATEDRA DE FITOQUIMICA

PRACTICA N° 13
IDENTIFICACIÓN DE ALCALOIDES
I. Generalidades:
Los alcaloides son sustancias básicas que contienen nitrógeno en un anillo
heterocíclico, son derivados de aminoácidos, presentan distribución taxonómica
limitada y se encuentran en plantas superiores como sales de un ácido orgánico.
En la naturaleza pueden estar libres o combinados, con ácidos orgánicos u otros
compuestos (taninos). Cuando están libres son solubles en solventes orgánicos
y alcohol e insolubles en agua. Cuando están en forma de sales son solubles en
agua y alcohol e insolubles en disolventes orgánicos.
Con los reactivos yodados forman precipitados coloreados, Dragendorff
(anaranjado), Mayer (blanco) y Bouchardat (pardo)

II. Objetivo:
Extraer e identificar la presencia de alcaloides en diferentes muestras vegetales
por el método de cromatografía en capa fina, ensayos de coloración y
precipitación.

III. Materiales y Reactivos

1. Mortero con pilón

2. Matraz de 50 mL
3. Embudo (02)
4. Pera de decantación 60 ó 125 mL
5. Frasco de vidrio color ámbar de 60 mL con tapa
6. Trípode y malla de asbesto
7. Balanza

8. Vaso de precipitación de 500 mL, 150 mL, 50 mL

9. Frasco vial estéril con tapa

10. Algodón

11. Papel filtro

12. Pipetas de 1mL, 5mL

10. Agua destilada

13. Placas cromatograficas

14. Capilares sin heparina.

 15. Tubos de ensayo (5 tubos)

16. 5 g de muestra vegetal seca y triturada (Hojas de coca, hojas de te,

granos de café, etc, etc.)
17. Reactivos:
Cloroformo 15 mL
Ácido clorhídrico al 10% (10 mL)
Hidróxido a amonio al 10% 5 mL
Éter etílico 10 mL
Metanol 5 mL
Rvo de Mayer
Rvo de Dragendorff

IV. Procedimiento:

Extracción acida:

1. En un matraz erlenmeyer seco se colocan 1 gramo de tejido vegetal seco

y triturado finamente en un mortero.
2. Se añade 20 mL de agua destilada y 2-3 mL de HCl al 10%, calentar por
5 minutos, enfriar y filtrar.
3. Colocar 2 mL de la solución filtrada en dos tubos de ensayo y agregar a
un tubo 3 – 5 gotas de los reactivo Dragendorff y en el otro tubo agregar el
3-5 gotas del reactivo de Mayer.

Extracción alcalina:

4. En una botella de vidrio pequeña con tapa seco y limpio se colocan 1

gramo de tejido vegetal seco y triturado finamente en un mortero.
5. Se añade 1 mL de Hidróxido de amonio al 10%, luego agregar 10 mL de
éter etílico, agitar fuertemente el frasco abriendo cada cierto tiempo el
tapón, decantar dejando reposar por 20 minutos.
6. Filtrar en una pera de decantación, agregar 5 mL HCl al 10%, agitar dando
ligeros movimientos.
7. Filtrar y separar la fase acuosa y colocar 2 mL de la solución filtrada en
dos tubos de ensayo y agregar a un tubo 3 – 5 gotas de los reactivo
Dragendorff y en el otro tubo agregar el 3-5 gotas del reactivo de Mayer.

Extracción para cromatografía en capa fina:

8. En una pera de decantación colocar 2 g de tejido vegetal seco y triturado

finamente en un mortero, agregar 1 mL de Hidróxido de amonio al 10%.
9. Se añade 10 mL de cloroformo, se deja reposar por 20 minutos, filtrar.
10. El filtrado con los alcaloides se concentra hasta un volumen aproximado
de 1 mL, mediante aplicación de calor suave (40 -50 C) y vacío. El
extracto concentrado de alcaloides se tapa y se guarda para protegerlo
de la luz, la humedad, el calor y el aire.
11. Sembrar la muestra o extracto clorofórmico en las placas
cromatograficas con silica gel, llevar a la fase movil.
12. Selección de la fase móvil
 Cloroformo/metanol 4:1
Metanol 5

8. Utilizar como reveladores en su orden los siguientes, dibujando lo más

precisamente posible, y anotando en cada caso las observaciones como
colores, fluorescencia, manchas:
A simple vista
Luz UV 254 nm
Luz UV 366 nm
 Rvo. de dragendorff

CUESTIONARIO
Debe incluir nombre vulgar y científico de la muestra analizada, parte de la planta
analizada, familia vegetal, análisis de los valores Rf y los espectros visible
comparándolos con los reportados en la literatura.
Mencionar y describir los más importantes alcaloides vegetales que existen, sus
usos.
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CATEDRA DE FITOQUIMICA

PRACTICA N° 14

IDENTIFICACIÓN DE SAPONINAS (GLICÓSIDOS)

I. Generalidades:
Las saponinas son un grupo de glicósidos solubles en agua, que tienen la
propiedad de hemolizar la sangre y disminuir la tensión superficial del agua,
formando espuma abundante. Las saponinas por hidrólisis se desdoblan en
carbohidratos y una aglicona llamada sapogenina.
Las saponinas (del latín sapo, "jabón") son glucósidos de esteroides o de
triterpenoides, llamadas así por sus propiedades semejantes a las del jabón:
cada molécula está constituida por un elemento soluble en lípidos (el esteroide
o el triterpenoide) y un elemento soluble en agua y forman una espuma cuando
se las agita en agua.
Las drogas con saponinas producen una acción expectorante, diurética,
depurativa, tónico-venosa y de disminución del colesterol. Las esteróidicas
sirven como materia prima en la hemisíntesis de hormonas sexuales y
corticales. Aunque se absorben mal en el tracto digestivo, favorecen la
absorción de otros compuestos: los cardiotónicos.
Existe una gran variedad de plantas que contienen Saponinas en distintas
concentraciones, como por ejemplo la yuca, el ginseng, la quinua o el quillay,
entre otros

II. Objetivo:
Extraer e identificar la presencia de saponinas en diferentes muestras vegetales
por el método de la prueba de espuma y ensayos de coloración.

III. Materiales y Reactivos

1. Mortero con pilón

2. Matraz de 50 mL (02)
3. Embudo (02)
4. Trípode y malla de asbesto
5. Balanza

6. Vaso de precipitación de 500 mL, 150 mL, 50 mL

7. Algodón

8. Papel filtro

9. Pipetas de 1mL, 5mL

10. Agua destilada

 11. Tubos de ensayo (6 tubos)

12. 10 g de muestra vegetal molido (quinua, yuca, ginseng, garbanzo, etc.)

13. Reactivos:
diclorometano 10 mL
Ácido sulfúrico 5 mL
Dicromato de potasio
Agua destilada
IV. Procedimiento:

1. Moler con ayuda de un mortero unos 1 g de muestra vegetal, colocar en

un matraz erlenmeyer agregar 30 mL de agua. Filtrar.
2. Separar en dos tubos de ensayo la muestra 4 mL
3. Un tubo es el testigo y el otro tubo agitar vigorosamente durante un
minuto. La formación de una espuma abundante y estable es prueba
presuntiva de la presencia de saponinas en la muestra.
4. Para verificar su acción emulsificante, separar en un tubo de ensayo la
muestra 4 mL colocar diclorometano y a otro tubo agua más
diclorometano, agitar vigorosamente durante un minuto.
5. En otro tubo agregar la muestra 4mL y adicionar por las paredes mezcla
sulfocromica, verificar la formación de un anillo color verde, indicando
que se encontró saponina esteriode.

CUESTIONARIO
Debe incluir nombre vulgar y científico de la muestra analizada, parte de la
planta analizada, familia vegetal.
Mencionar y describir las más importantes saponinas que se encuentran en los
vegetales, cuáles son sus usos.
 ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y
BIOQUIMICA
CATEDRA DE FITOQUIMICA

PRACTICA N° 15

IDENTIFICACIÓN DE CAROTENOIDES

I. Generalidades:
Los carotenoides o tetraterpenoides son una clase de pigmentos terpenoides
con 40 átomos de carbono derivados biosintéticamente a partir de dos unidades
de geranil-geranil - pirofosfato, en su mayoría son solubles en solventes apolares
y de coloraciones que oscilan entre el amarillo (por ejemplo el ß-caroteno) y el
rojo (por ejemplo el licopeno).
Los tetraterpenoides más conocidos son los pigmentos liposolubles amarillos
–rojos denominados carotenoides, los cuales se encuentran ampliamente
distribuidos en el reino vegetal y en diversos tipos de tejidos. Se conocen
algo más de 400 carotenoides. A los pigmentos hidrocarbonados se les
denomina CAROTENOS, y los oxigenados XANTOFILAS.

II. Objetivo:
Extraer e identificar la presencia de carotenoides presentes en diferentes
muestras vegetales por el método de cromatografía en capa fina.

III. Materiales y Reactivos

1. Mortero con pilón

2. Matraz de 250 mL
3. Embudo
4. Trípode y malla de asbesto
5. Cuchillo
6. Balanza
5. Vaso de precipitación de 500 mL, 150 mL, 50 mL
7. Frasco vial estéril con tapa
8. Algodón
8. Papel filtro
10. Pipetas de 1mL, 5mL
10. Agua destilada
11. Placas cromatograficas
12. Capilares sin heparina.
13. 30g de muestra vegetal fresca triturada o rallada (Tomate rojo, Pimentón
verde-rojo, zanahoria, Pimentón rojo, pasta de tomate, salsa de tomate,
espinacas, etc.)
14. Reactivos:
Cloroformo
IV. Procedimiento:

1. En un matraz erlenmeyer seco se colocan unos 30 g. de tejido vegetal

fresco triturado finamente en un mortero.
2. Se añade un volumen suficiente de etanol al 95% para que recubra la
muestra.
3. Se calienta a ebullición sobre un baño maría durante 5 minutos.
4. Se filtra en caliente con un algodón, procurando que la masa semisólida
quede libre del solvente.
5. A la masa semisólida se adiciona un volumen suficiente de
diclorometano (también puede usarse cloroformo) en una campana de
extracción y se remueve con una varilla de vidrio para que el solvente
extraiga los carotenoides.
6. El extracto se filtra. El residuo sólido se puede reextraer varias veces con
el fin de obtener el mayor rendimiento posible. Los extractos filtrados se
juntan
7. El filtrado con los carotenoides se concentra hasta un volumen
aproximado de 5 ml, mediante aplicación de calor suave (40 -50 C) y
vacío. El extracto concentrado de carotenoides se tapa y se guarda para
protegerlo de la luz, la humedad, el calor y el aire.
8. Selección de otra fase móvil
9. El extracto de carotenoides se analizara por CCF con la serie eluotrópica
siguiente:
n-Hexano
n-Hexano/Acetato de Etilo 4:1
n-Hexano/Acetato de Etilo 2:1
n-Hexano/Acetato de Etilo 1:2
n-Hexano/Acetato de Etilo 1:4
Acetato de etilo
10. Utilizar como reveladores en su orden los siguientes, dibujando lo más
precisamente posible, y anotando en cada caso las observaciones como
colores, fluorescencia, manchas:
A simple vista
Luz UV 254 nm
Luz UV 366 nm
Vapores de yodo

CUESTIONARIO
Debe incluir nombre vulgar y científico de la muestra analizada, parte de la planta
analizada, familia vegetal, análisis de los valores Rf y los espectros visible
comparándolos con los reportados en la literatura. Informar cuáles carotenoides se
logró identificar.