PRÁCTICA 9
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS EN PLACA DE
PETRI, TUBO RECTO Y TUBO INCLINADO.
ARANTXA RUIZ LAZARENO
1. INTRODUCCIÓN
Los medios de cultivo son soluciones o sólidos preparados en el laboratorio que permiten el
crecimiento y la proliferación de microorganismos bajo condiciones controladas. Estos
medios proporcionan los nutrientes y el ambiente adecuado para el desarrollo de diversas
especies microbianas, y su composición varía dependiendo del tipo de microorganismo que
se desea cultivar.
Existen diferentes tipos de medios de cultivo, los cuales se clasifican según su estado físico
en: líquidos, semisólidos y sólidos. Los medios sólidos son los más utilizados en la
microbiología porque permiten la observación clara de las colonias bacterianas, las cuales
pueden ser aisladas, identificadas y estudiadas. Los medios sólidos contienen un agente
solidificante, generalmente agar (al 12-15 g/l), que convierte el medio en una sustancia
gelatinosa que mantiene su forma a temperatura ambiente.
La preparación de medios sólidos en placas de Petri, tubos rectos e inclinados es una técnica
esencial en microbiología, ya que estos medios permiten estudiar las características
morfológicas de los microorganismos y realizar pruebas de identificación, aislamiento y
clasificación. Dependiendo de la composición y el uso previsto, los medios de cultivo pueden
ser selectivos, que favorecen el crecimiento de ciertos microorganismos, o diferenciales,
que permiten la distinción entre distintas especies.
2. OBJETIVO
El objetivo de esta práctica es aprender a preparar diferentes tipos de medios de cultivo
sólidos en placa de Petri, tubo recto y tubo inclinado, utilizando agar como agente
solidificante. Este procedimiento es fundamental para el cultivo y aislamiento de
microorganismos en condiciones controladas. Los medios de cultivo preparados en esta
práctica permitirán que los estudiantes desarrollen habilidades en la preparación y manejo
de medios sólidos para la observación y estudio de bacterias y otros microorganismos en el
laboratorio.
3. MATERIAL
• Matraz Erlenmeyer • Cinta adhesiva de control del autoclave
• Mosca agitadora magnética • Guantes
• Varilla recoge imanes (para sacar o • Frasco lavador
recuperar la “pulguita” del erlenmeyer) • Algodón
• Varilla agitadora • Papel albal
• Placas de Petri • Pesasustancias o vidrio de reloj
• Espátula o cuchara • Tubos de ensayo de cristal
• Tiras indicadoras de pH • Gradilla
EQUIPOS
• Balanza
• Termoagitador (en su defecto: trípode + rejilla + mechero)
• Autoclave
• Estufa
REACTIVOS
• Medio de cultivo sólido deshidratado Nutrient Agar
• Agua destilada
4. CÁLCULOS
5. PROCEDIMIENTO
1. Lectura de las Instrucciones del Medio Deshidratado
● Antes de comenzar, se debe leer atentamente la etiqueta del medio deshidratado
elegido. Cada medio puede tener indicaciones específicas sobre la preparación y
manejo.
● Se pesa la cantidad del medio deshidratado indicada por el fabricante utilizando una
balanza de precisión o un vidrio de reloj.
2. Hidratación del Medio
● En un matraz Erlenmeyer de mayor volumen al de la cantidad que se va a preparar se
agrega agua destilada.
● El matraz se coloca en una placa termoagitadora. Se añade poco a poco el medio
deshidratado, disolviéndose con una varilla de vidrio.
● Para asegurar una disolución adecuada, se utiliza una mosca magnética y se agita
hasta que el medio alcance la ebullición . En este punto, se apaga la placa
termoagitadora y se retira la “pulguita” con una varilla.
3. Ajuste del pH
● Verificar el pH del medio preparado utilizando una tira reactiva de pH. Asegurarse de
que coincida con el pH especificado en la etiqueta del medio.
● Si el pH requiere ajustes, se pueden añadir pequeñas cantidades de ácido o base hasta
conseguir el valor deseado.
4. Esterilización del Medio de Cultivo en Autoclave
● El matraz con el medio debe ser tapado con algodón y colocado en el autoclave,
siguiendo las indicaciones del fabricante del medio (por ejemplo, temperatura de
121ºC, presión de 1 atmósfera, durante 15-20 minutos).
● Colocar el control químico de esterilización (cinta de autoclave) en el matraz y
cubrirlo con papel aluminio para evitar que el medio se derrame cuando se
transforme el agua en vapor.
5. Extracción del Medio y Comprobación de la Esterilización
● Una vez finalizado el ciclo de esterilización, retirar los matraces del autoclave.
● Verificar el cambio de color en la cinta de control químico para confirmar que la
esterilización fue efectiva.
● Asegúrese de que el medio esté a una temperatura de aproximadamente 45-50ºC
antes de proceder a distribuirlo.
6. Distribución del Medio en las Placas de Petri
● Coloque las placas de Petri previamente rotuladas con el nombre del medio y la fecha
en la base, alrededor de un mechero Bunsen para mantener un área estéril.
● Destape el matraz con cuidado y flamee la boca del matraz con el mechero Bunsen.
● Vierta el medio en las placas, asegurándose de llenar aproximadamente la mitad de
cada placa (alrededor de 15-20 ml) para obtener un grosor de 3 mm.
● Una vez que las placas estén llenas, tápelas e inviértelas, dejando que el vapor de
condensación se evapore alrededor del mechero.
7. Incubación de las Placas y Tubos
● Coloque las placas de Petri y los tubos (rectos e inclinados) en la estufa a 37ºC
durante un periodo de 24 horas.
● Asegúrese de que las placas no toquen las paredes de la estufa para evitar que se
sequen.
8. Inspección del Crecimiento Microbiano
● Después de las 24 horas, inspeccione las placas y tubos para verificar si ha habido
crecimiento microbiano. Si no hay crecimiento, significa que el medio fue preparado
correctamente y está estéril.
● Si se observa crecimiento, las placas y tubos pueden haber sido contaminados o la
esterilización no fue adecuada.
9. Conservación de las Placas de Petri
● Para almacenar las placas de Petri, apílelas de 5 a 6 unidades y envuélvalas en papel
aluminio.
● Guarde las placas en el frigorífico (a 4ºC), colocándolas de manera invertida para
evitar que el agua de condensación caiga sobre el medio.
● Las placas de cultivo pueden conservarse en el frigorífico durante un máximo de 3-4
semanas.
10. Uso de los Medios Preparados
● Los medios de cultivo preparados pueden utilizarse en prácticas posteriores para
siembra o resiembra de microorganismos. Antes de su uso, asegúrese de que los
medios estén a temperatura ambiente.
Procedimiento para la Esterilización del Medio de Cultivo en el Autoclave
El autoclave es un equipo comúnmente utilizado en los
laboratorios para esterilizar cultivos y soluciones que no se
descomponen a temperaturas superiores a 100°C. Funciona a
una temperatura de 120°C, con 1 atmósfera de presión, durante
un ciclo de 20 minutos. Este proceso es eficaz para eliminar
microorganismos, incluyendo esporas, lo que lo convierte en un
método confiable y rápido de esterilización.
Preparación del Autoclave:
1. Llenar la cámara del autoclave con agua destilada hasta que sobresalga ligeramente
por los agujeros de la rejilla metálica.
2. Verificar que la válvula de vapor esté abierta y la válvula de desagüe esté cerrada.
3. Carga del Material:
4. Colocar el material a esterilizar (medios de cultivo, algodón, papel aluminio, etc.) con
el indicador de esterilización (cinta de autoclave).
5. Cierre y Configuración:
6. Cerrar la tapa del autoclave ejerciendo presión y configurar la temperatura (121ºC),
tiempo (15 minutos) y presión (1 atmósfera).
7. Inicio del Ciclo:
8. Encender el autoclave. Cuando salga vapor por la goma naranja, cerrar la válvula de
vapor.
9. Monitoreo de la Esterilización:
10.Verificar que la temperatura alcance los 121ºC. Cuando se complete el ciclo de 15
minutos, apagar el autoclave.
11. Purgado y Seguridad:
12. Abrir la válvula de vapor y esperar a que el manómetro marque 0 antes de abrir la
tapa del autoclave.
13. Extracción del Material:
14. Esperar que el material se enfríe ligeramente y extraerlo con guantes antitérmicos.
15. Verificación de Esterilización:
16. Comprobar el indicador químico (cinta de autoclave) para confirmar que la
esterilización fue exitosa.
6. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
7. OBSERVACIONES/ CURIOSIDADES
Se ha realizado la preparación de un medio de cultivo del tipo Agar nutritivo para la
posterior siembra y cultivo de microorganismos. Se ha trabajado en condiciones de limpieza
y asepsia, se han utilizado equipos de esterilización como el autoclave. Se ha de trabajar en
dichas condiciones de asepsia para lograr obtener en el cultivo únicamente el
microorganismo que se ha sembrado y no contaminar la placa con cualquier otro tipo de
microorganismo. Se han obtenido unos resultados satisfactorios con un medio de cultivo de
Agar nutritivo sin contaminar y gelificado.
NOTA:
Los medios de cultivos que queremos desechar NUNCA deben de tirarse por el desagüe ya
que ocasiona un taponamiento y posteriormente una avería, se deberan echar en lejia y tirar
los medios por el WC
8. BIBLIOGRAFÍA
Libro ALTAMAR microbiología
Informe de práctica classroom
