Enzimas II

Temario:

1) Mecanismos de inhibición de la actividad enzimática

2) Enzimas reguladas
3) Aplicaciones clínicas de las enzimas

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Mecanismos de inhibición de la actividad enzimática
Existen distintos tipos de inhibidores:
-reversibles: que permiten la disminución de la actividad de la enzima pero no
es un cambio permanente.

-competitiva

-acompetitiva
-no competitiva

-irreversible: que modifican de forma permanente a la enzima por:

- unión de moléculas a residuos ser, thr o cys del sitio activo, esenciales para la
actividad de la enzima.
Inhibición Reversible
-Inhibición competitiva:
El inhibidor (I) es una molécula que compite con el S por el sitio activo de la enzima. I y S
son químicamente similares.
Altas [S] pueden desplazar al inhibidor del sitio activo y revertir la inhibición

Un Inhibidor competitivo aumenta el Km pero no modifica la Vmáx.

= Vmax

Km 
Inhibición competitiva ↑ Km = Vm

-Ej: etanol y metanol compiten por el sitio activo de la alcohol

deshidrogenasa,

Etanol
ADH
+ NAD+ CH2O
Metanol formaldehido
Inhibición Reversible
-Inhibición acompetitiva:
El I se fija al complejo ES, dando lugar a un complejo ESI inactivo.
El sitio de unión del Inhibidor es diferente al del S.
Disminuye Km y Vmáx

 Vmax

Km  5
Inhibición Reversible
- Inhibición no-competitiva: ↓ Vmax

= Km

El Inhibidor se fija tanto a la enzima como al complejo enzima sustrato (ES), dando lugar a
un complejo enzima-inhibidor (EI) o enzima-sustrato-inhibidor (ESI) inactivo. El I se une a un
sitio diferente al sitio activo
El efecto se traduce en disminución de Vmáx y no se modifica el Km
Inhibición Irreversible
- Está dada por compuestos que se unen a aa esenciales del enzima
bloqueando su actividad.
- El inhibidor se fija de forma covalente estable a la enzima o sea que la
enzima no puede recuperar la actividad biológica.

Ej: Penicilina: Reacciona con una Ser de una glicopéptido transpeptidasa

que sintetiza la pared bacteriana

Inhibidores de B-lactamasas
Enzimas Reguladas

Enzima 1 Enzima 2 Enzima 3

A B C D
Reacción 1 Reacción 2 Reacción 3
Molécula Producto
inicial
REGULADA

- En una vía metabólica de múltiples pasos la velocidad global del proceso

esta limitada por el paso más lento. Por lo tanto para regular una vía
metabólica la mejor estrategia es regular las enzimas que catalizan estos
pasos limitantes de velocidad.

-Ahorro de enegía.

-Evitar producir intermediarios metabólicos no necesarios.

Enzimas Reguladas: Enzimas Alostéricas

Son enzimas multiméticas, de estructura cuaternaria.

Contienen 2 tipos de sitios:

Sitio activo (catalítico): unión del S

Sitio alostérico (regulador): unión del modulador

El modulador es una molécula que se une a la enzima y le modifica su

conformación.

Hay dos grupos de Enzimas alostéricas:

Homotrópicas

Heterotrópicas
Enzimas alostéricas: Cinética
Las enzimas alostéricas poseen cinética sigmoidea → Cooperatividad

Vo

K0,5 S
n
Vm [S]
v= n n
K0,5 + [S] 10
Enzimas alostéricas homotrópicas:

El propio sustrato ejerce de modulador.

La reacción de una molécula de sustrato con un enzima multimérico afecta a

la fijación de las siguientes moléculas de sustrato en los demás sitios activos.

La afinidad de E por S varía con [S], y

esto hace que aparezcan efectos
cooperativos.
Enzimas alostéricas homotrópicas: cooperatividad
Modelo concertado (Monod) → “Todo o nada”

Cooperatividad positiva: ocurre cuando la unión de una molécula de sustrato con un SA

facilita la unión de otra molécula de sustrato en otro SA de la enzima.
Cooperatividad negativa: ocurre cuando la unión de una molécula de sustrato con un
SA dificulta la unión de otra molécula de sustrato en otro SA de la enzima. 12
Enzimas alostéricas heterotrópicas:
- El modulador es distinto al sustrato.

- La unión de un modulador positivo

aumenta la afinidad de la E por el S y
desplaza el eq hacia la forma R, en
cambio un modulador negativo
disminuye la afinidad y favorece el eq
hacia la forma T.
Enzimas reguladas – Modificación covalente

✓ activar o
inactivar

✓ Reversibles

✓ Dadas por
otras E

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Enzimas reguladas – Modificación covalente

Fosforilación – defosforilación: La fosforilación puede activar o inactivar a la E.

Existen diferentes proteín-quinasas y fosfatasas a su vez reguladas por diferentes
mecanismos.
Enzimas reguladas – Activación proteolítica

Proteólisis (Zimógenos)

Algunas enzimas son sintetizadas y

almacenadas como un precursor
inactivo (denominado proenzima o
zimógeno) en un compartimiento
celular, y se activan al ser clivadas
por otra enzima en el lugar o
momento en que deben actuar.

Proceso irreversible.

Ej:
Enzimas digestivas
Formación de cascadas de coagulación y fibrinolisis sanguíneas
Activación de hormonas proteicas (ej: insulina)
Enzimas reguladas – unión a proteínas reguladoras

- Proteínas inhibidoras (inhibidor de tripsina pancreática //

antitrombina 3)

- Ciclinas

Enzimas reguladas – compartimentalización

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Enzimas reguladas – Otros mecanismos de regulación
Regulación de la expresión génica

La expresión de la enzima en respuesta a variaciones del medio o de la

situación metabólica.

Retroinhibición

•inhibición por retroalimentación es un mecanismo frecuente de

regulación metabólica

* Una E puede
tener varios
mecanismos de
regulación.
Degradación
Las enzimas que deben dejar de actuar se degradan.
 Enzimología clínica

La determinación de la actividad de ciertas E en líquidos biológicos puede

servir como diagnóstico y seguimiento de una enfermedad.

- Enzimas funcionales: tienen una función definida y específica en este

medio (enzimas que actúan en la coagulación sanguínea).

- Enzimas no funcionales: no tienen una función conocida en este medio y su

concentración plasmática es menor que en los tejidos donde es expresada.

- Enzimas de secreción: se sintetizan en las gandulas exocrinas,

páncreas, próstata, etc.

- Enzimas del metabolismo intermediario: su aumento en el plasma

puede ser un indicio de un daño tisular.
 Isoenzimas estudiadas para aplicaciones clínicas

Lactato deshidrogenasa
Localización
Lactato deshidrogenesa (LDH), las isoformas Monómeros
H H Miocardio
difieren en su carga y localización tisular. Son LDH-1 y eritrocito H
H H
ampliamente utilizadas para diagnosticar
Corazón
infarto de miocardio. 5 combinaciones
H H
tetraméricas (H4, H3M, H2M2, HM3 y M4de LDH-2 Miocardio M
H M y eritrocito
dos tipos de subunidades monoméricas Músculo
diferentes).
H H
LDH-3 Cerebro y riñón
M M
-La subunidad H se adapta mejor a la
H M
producción de piruvato (músculo cardíaco), LDH-4
mientras que la M se adapta mejor a la M M
producción de lactato (músculo esquelético).
M MHígado y músculo
LDH-5
esquelético
M M
 Isoenzimas estudiadas para aplicaciones clínicas

Creatina quinasa (CPK)

Monómeros

M
músculo

B
Creatina Fosfoquinasa (CPK), 3
cerebro
combinaciones diméricas de 2 tipos
diferentes de subunidades (BB, BM y
MM) Dímero Localización

CPK-1 B B Cerebro

CPK-2 M B Miocardio

Músculo
CPK-3 M M
esquelético
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Infarto de miocardio

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