Pesar los Disolver: Añadir
1. Caldo Soya componentes: 50 mL de agua
Tripticaseína CST en polvo: 1.5 g destilada y agitar
(CST) - 50 mL. (30 g/L según hasta disolver
fabricante). completamente.
Esterilizar: Verter
Enfriar y
en tubos o frascos Ajustar el pH (si
almacenar: Deja
adecuados y es necesario):
enfriar y almacena
esterilizar a 121°C Asegúrate de que
en condiciones
durante 15 el pH sea 7.3 ± 0.2.
asépticas.
minutos.
Disolver: Añadir
Pesar los
100 mL de agua
componentes:
2. Agar Nutritivo destilada y calentar
Agar nutritivo en
- 100 mL. hasta que el polvo
polvo: 2.3 g (23 g/L
se disuelva por
según fabricante).
completo.
Verter en placas:
Enfría a unos 45- Esterilizar:
Ajustar el pH:
50°C y vierte en Autoclave a 121°C
Confirmar que el
placas de Petri durante 15
pH sea 6.8 ± 0.2.
estériles (si se minutos.
requiere en placas).
Dejar solidificar:
Solidificar en
condiciones
asépticas.
Pesar los
3. Medio SIM componentes: Disolver: Añadir
(Sulfuro, Indol, Medio SIM en 50 mL de agua
Motilidad) - 50 polvo: 1.55 g (31 destilada y calentar
mL. g/L según hasta disolver.
fabricante).
Esterilizar:
Enfriar: Deja Distribuir en tubos
Ajustar el pH:
enfriar en posición estériles y
Verificar que el pH
vertical para esterilizar a 121°C
sea 7.3 ± 0.2.
solidificación. durante 15
minutos.
Pesar los
Disolver: Mezclar
4. Agar Triple componentes: TSI
con 50 mL de agua
Azúcar y Hierro en polvo: 2.25 g
destilada y calentar
(TSI) - 50 mL. (45 g/L según
hasta disolver.
fabricante).
Formar el
"bevel": Coloca los Esterilizar:
tubos inclinados Distribuir en tubos Ajustar el pH:
mientras solidifican y autoclave a Confirmar que el
para obtener un 121°C durante 15 pH sea 7.4 ± 0.2.
fondo y una minutos.
pendiente.
Pesar los
Disolver: Añadir
5. Agar Cetrimida componentes:
150 mL de agua
+ Glicerol - 150 Agar Cetrimida en
destilada y calentar
mL polvo: 6.9 g (46 g/L
hasta disolver.
según fabricante).
Añadir glicerol:
Esterilizar:
Ajustar el pH: Añadir 3 mL de
Esterilizar a 121°C
Asegurarse de que glicerol estéril (2%
durante 15
el pH sea 7.2 ± 0.2. final) y mezclar
minutos.
bien.
Verter en placas:
Enfría a 45-50°C y
vierte en placas de
Petri estériles.
Pesar los
Disolver: Añadir
6. Agar Baird componentes:
150 mL de agua
Parker (ABP) - ABP en polvo: 8.2 g
destilada y calentar
150 mL (54.7 g/L según
hasta disolver.
fabricante).
Añadir
Esterilizar: suplementos (si
Ajustar el pH:
Esterilizar a 121°C aplica):
Asegúrate de que
durante 15 Suplementos como
el pH sea 7.2 ± 0.2.
minutos. yema de huevo o
telurito potásico.
Verter en placas:
Enfría a 45-50°C y
vierte en placas
estériles.
Pesar los
Disolver: Añadir
7. Agar Eosina componentes:
150 mL de agua
Azul de Metileno EMB en polvo: 8.1 g
destilada y calentar
(EMB) - 150 mL (54 g/L según
hasta disolver.
fabricante).
Verter en placas: Esterilizar:
Enfría a 45-50°C y Esterilizar en Ajustar el pH:
distribuye en autoclave a 121°C Verificar que el pH
placas de Petri durante 15 sea 7.1 ± 0.2.
estériles. minutos.
- Siembra masiva:
- Estría cruzada: dispersión total de
1. Siembra en
por cuadrantes o inóculo con asa,
placa:
por agotamiento. con hisopo o con
varilla de vidrio.
- Medio semisólido:
por punción en asa - Medio líquido: por
2. Siembra en
recta (movilidad, dispersión o punto
tubo:
metabolismo de contacto.
microbiano).
- Agar inclinado: punción
y estría o estría en pico
de flauta (metabolismo
microbiano, conservación
de cepas).
Se realizó la Se seleccionó una
siembra por la colonia del medio
Siembra en técnica de estría que contiene un
placa. cruzada de las cultivo puro y se
cepas de incubó a 37 °C por
salmonella y [Link]. 24 horas.
Para las colonias
Se observaron y
bacterianas
describieron la
considerar las
morfología 2. Descripción de
características de
macroscópica de las colonias.
tamaño, color,
los cultivos
borde, forma,
realizados.
textura, etc.
Realizar la siembra por la
técnica de estría cruzada
en agar nutritivo de las
Incubar las placas a 37 °C
1. Siembra en Placa: cepas bacterianas
por 24 horas.
seleccionando una
colonia del medio que
contiene un cultivo puro.
Para la siembra de
Colocar en el centro de la
hongos filamentosos
placa o sembrar con una
Incubar a 28°C durante 3- inocular en Agar Papa
aguja aplanada en uno de
5 días. Dextrosa un disco
sus extremos en forma de
micelial de 8 mm de
espátula.
diámetro del hongo.
Preparar un frotis
2. Tinción de Fijar el frotis
bacteriano sobre un
endosporas mediante calor.
portaobjetos limpio.
Calentar
Dejar actuar el Cubrir la muestra
suavemente la
colorante durante con papel
muestra sin dejar
5-10 minutos, absorbente y
que el colorante se
manteniendo el aplicar verde de
evapore por
calor. malaquita.
completo.
Retirar el papel Contratintar con
Lavar con agua
absorbente y safranina durante
destilada y dejar
enjuagar con agua 30 segundos a 1
secar al aire.
destilada. minuto.
Observar la
preparación bajo el
microscopio con
inmersión en
aceite.
Colocar una gota de
3. Tinción de Preparar el
solución salina o agua
hongos portaobjetos limpio y
estéril en el
filamentosos seco.
portaobjetos.
Tomar una pequeña
Agregar una gota de Extender la muestra
cantidad del hongo
azul de lactofenol o sobre la gota para
filamentoso con un
tinta china para formar una
asa o aguja de
mejorar el contraste. preparación delgada.
disección.
Observar al
microscopio con
Colocar un Dejar reposar unos
aumento adecuado,
cubreobjetos con minutos para que el
iniciando con 10x y
cuidado para evitar colorante impregne la
luego aumentando
burbujas de aire. muestra.
hasta 40x o 100x
según sea necesario.
Preparar un frotis Fijar el frotis
4. Tinción de de la muestra en pasando el
Gram un portaobjetos portaobjetos por la
limpio. llama del mechero.
Aplicar lugol Aplicar cristal
Enjuagar
(solución yodada) y violeta y dejar
suavemente con
dejar actuar por actuar por 30-60
agua destilada.
30-60 segundos. segundos.
Decolorar con
Enjuagar
Enjuagar con agua alcohol-acetona
inmediatamente
destilada. durante 10-15
con agua destilada.
segundos.
Observar bajo el
Enjuagar con agua Aplicar safranina y
microscopio con
destilada y secar el dejar actuar por
inmersión en
portaobjetos. 30-60 segundos.
aceite.
