BILI-D Liquiform Ref.

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Instrucciones de Uso

Bilirrubina Directa Los reactivos no abiertos, almacenados en las condiciones indicadas,

son estables hasta la fecha de expiración impresa en el rótulo. Durante su
manipulación, los reactivos están sujetos a contaminaciones de
Finalidad . Sistema bi-reactivo para la determinación de bilirrubina
naturaleza química y microbiana que pueden provocar reducción en su
directa, por reacción de punto final, en muestras de suero y plasma.
estabilidad.
Uso professional.
Precauciones y cuidados especiales
[Solamente para uso diagnóstico in vitro.]
Los cuidados habituales de seguridad deben ser aplicados en la
Principio . La muestra es solubilizada en medio ácido y la bilirrubina manipulación de los reactivos, los que no deben ser pipeteados con la
directa es medida por formación de azobilirrubina con dicloroanilina boca. Se debe tener cuidado para evitar su ingestión, y en caso de
diazotada. El color formado es proporcional a la concentración de contacto con los ojos, se deben lavar inmediatamente con abundante
bilirrubina directa en la muestra. cantidad de agua y procurar auxilio médico.

Características del sistema . Bili-D Liquiform es un conjunto de Material necesario y no provisto

reactivos que permite un procedimiento sencillo y rápido para la
determinación de la bilirrubina directa en muestras de suero o plasma. 1. Baño-maría mantenido a temperatura constante (37ºC).
El Reactivo 1 contiene ácido sulfámico a una concentración optimizada
2. Fotómetro capaz de medir con exactitud absorbancias entre 530 y
que mantiene el pH en valores adecuados para minimizar la interferencia
550 nm.
de la bilirrubina indirecta, garantizando la especificidad de la medición.
El Reactivo 2 contiene dicloroanilina diazotada (DCA), que es un diazo- 3. Pipetas para medir muestras y reactivos.
reactivo estable en forma líquida, listo para el uso. 4. Cronómetro.
5. Calibradores de la línea Calibra - Labtest.
Como las metodologías que utilizan mono-reactivos sufren interferencias
de la muestra e incrementan la inexactitud de los resultados, Labtest
Diagnóstica desarrolló una aplicación bi-reactivo con utilización de un Muestra
blanco de muestra, que aumenta la especificidad metodológica y
minimiza la interferencia de la muestra, transfiriendo excelente exactitud a Se debe crear un Procedimiento Operacional Estándar (POE) que
los resultados. establezca procedimientos adecuados para la toma, preparación y
almacenamiento de la muestra. Destacamos que los errores debidos a la
El sistema Labtest permite que sean ensayadas muestras con muestra pueden ser mucho mayores que los errores ocurridos durante el
concentraciones de bilirrubina directa de hasta 12 mg/dL, minimizando la procedimiento analítico.
necesidad de dilución de muestras con concentración elevada.
Las bilirrubinas conjugada (directa) y no conjugada (indirecta) son
El desarrollo del método fue orientado hacia la automación, tornándolo oxidadas por acción de la luz blanca o ultravioleta. Por lo tanto, las
fácilmente aplicable en analizadores automáticos capaces de medir con muestras de sangre deben ser protegidas de la exposición directa a la luz
exactitud una reacción de punto final a 546 nm. Además, el sistema Bili-D artificial o solar inmediatamente después de su obtención.
Liquiform puede ser utilizado con éxito en aplicaciones manuales
utilizando fotómetros o instrumentos semi-automáticos. Usar suero o plasma (Heparina, EDTA). Cuando la muestra es protegida
de la luz, el analito es estable 4 días entre 2-8ºC y 3 meses a 20ºC
Metodología . Labtest DCA

(
negativos.

Reactivos Las muestras hemolisadas dan valores falsamente disminuidos en la

determinación de la bilirrubina directa.

)
1. - Reactivo 1 - Almacenar entre 2-8ºC.
Contiene ácido sulfámico ³92 mmol/L y estabilizadores. Como ningún test conocido puede asegurar que las muestras de sangre
no transmiten infecciones, todas deben ser consideradas como
potencialmente infecciosas. Por lo tanto, al manipularlas, se deben seguir
2. - Reactivo 2 - Almacenar entre 2-8ºC. las normas establecidas para bioseguridad.
Contiene ácido clorhídrico 680 mmol/L; dicloroanilina diazotada
³47 mmol/L y estabilizadores.

01 Español - Ref.: 93
Para descartar los reactivos y el material biológico, sugerimos aplicar las Test A1cor = Test A1 x 0,81
normas locales, estatales o federales de protección ambiental. Calibrador A1cor = Calibrador A1 x 0,81

Para obtener la absorbancia final restar el valor de A1cor de la absorbancia

Interferencias A2 del Test y del Calibrador:

Concentraciones de triglicéridos de hasta 1000 mg/dL no producen

Absorbancia del Test = A2 - A1cor
interferencias significativas.
Absorbancia del Calibrador = A2 - A1cor
La presencia de hemoglobina (muestra hemolisada), en cualquier
Absorbancia del Test
concentración, interfiere en el resultado del ensayo.
Bilirrubina directa (mg/dL) = x CCal
Absorbancia del Calibrador
Procedimiento
CCal: concentración del calibrador
Este procedimiento no se aplica a analizadores semi-automáticos que
utilizan únicamente cubeta de flujo. Están disponibles aplicaciones para
Ejemplo
sistemas automáticos y semi-automáticos.
Test
Vea Observaciones 1, 2 y 3.
A1 = 0,064 A1cor = 0,064 x 0,81 = 0,052
Tomar 3 cubetas del fotómetro y proceder como sigue:
A2 = 0,094

Blanco Test Calibrador Absorbancia del Test: 0,094 - 0,052 = 0,042

Reactivo 1 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
Muestra 0,1 mL Calibrador
Calibrador 0,1 mL
Agua desionizada 0,1 mL Ccal: 1,93 mg/dL
A1 = 0,105 A1cor = 0,105 x 0,81 = 0,085
A2 = 0,170
Homogeneizar e incubar a baño-maría a 37ºC durante 5 minutos. El nivel
del agua en el baño debe ser superior al nivel de los reactivos en los tubos
Absorbancia del Calibrador: 0,170 - 0,085 = 0,085
de ensayo. Determinar solamente la absorbancia del test y del calibrador
a 546 nm (530 a 550 nm), ajustando el cero con agua desionizada. Se
0,042
obtiene la absorbancia A1.
Bilirrubina directa = x 1,93 = 0,95 mg/dL
0,085
Blanco Test Calibrador
Reactivo 2 0,25 mL 0,25 mL 0,25 mL
Debido a la gran reproducibilidad que puede obtenerse con esta
metodología, se puede utilizar el método del factor.
Homogeneizar e incubar en baño-maría a 37ºC durante 5 minutos.
Determinar las absorbancias del test y del calibrador a 546 nm (530 a
Ccal mg/dL
550 nm), ajustando el cero con el blanco. Se obtiene la absorbancia A2.
FACTOR =
El color es estable por 30 minutos.
Absorbancia del Calibrador
El procedimiento sugerido para la medición es adecuado para fotómetros
cuyo volumen mínimo de solución de lectura es igual o menor a 1,1 mL. Bilirrubina directa (mg/dL) = Absorbancia del Test x Factor
Se debe verificar la necesidad de ajuste del volumen en el fotómetro
utilizado. Los volúmenes de muestra y reactivos pueden ser modificados Ejemplo
proporcionalmente sin perjuicio en el desempeño del ensayo, 1,93
manteniéndose inalterado el procedimiento de cálculos. En caso de Factor = = 22,7 mg/dL
reducción de los volúmenes, es fundamental que se observe el volumen 0,085
mínimo necesario para la lectura fotométrica. Volúmenes de muestra
menores a 0,01 mL son críticos en aplicaciones manuales y deben ser Bilirrubina directa (mg/dL) = 0,042 x 22,7= 0,95 mg/dL
usados con cautela porque aumentan la imprecisión de la medición.
Calibración . Utilizar los calibradores proteicos de la línea Calibra -
Cálculos . Vea Linealidad. Labtest.

La lectura A1 del Test y del Calibrador debe ser corregida al volumen final Calibraciones manuales
de la reacción, obteniéndose A1cor. Obtener el factor de calibración al usar un nuevo lote de reactivo o cuando
el control interno de calidad lo indique.

02 Español - Ref.: 93
Sistemas automáticos Estudios de comparación de métodos . El método propuesto
Blanco de reactivos: agua desionizada o NaCl 150 mmol/L (0,85%). fue comparado con método de tecnología similar, obteniéndose los
siguientes resultados:
Intervalo de calibraciones
Calibración en 2 o 3 puntos al cambiar de lote; Método Método
Calibración en 2 o 3 puntos cuando el control interno de calidad lo indique. Comparativo Labtest
Número de muestras 20 20
Linealidad Intervalo de
0,14 - 18,7 0,15 - 17,2
concentraciones (mg/dL)
El resultado de la medición es lineal hasta 12 mg/dL. Para valores Media des las estimaciones
3,36 3,28
mayores a 12 mg/dL, diluir la muestra con NaCl 150 mmol/L (0,85%), (mg/dL)
realizar una nueva medición y multiplicar el resultado obtenido por el Método Labtest = 0,927
Ecuación de regresión
factor de dilución. Sugerimos la verificación de la linealidad metodológica Comparativo + 0,168 mg/dL
y fotométrica al menos semestralmente, utilizando muestras con valores Coeficiente de correlación 0,999
de hasta 12 mg/dL. Error sistemático medio
0,08
(mg/dL)
Control interno de la calidad . El laboratorio debe mantener un
programa de control interno de calidad que defina con claridad los
reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para Fueron confirmados errores sistemáticos iguales a 4,7% y 5,5% en los
especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones niveles de decisión de 1,4 mg/dL y 9,0 mg/dL, respectivamente.
correctivas y registro de las actividades. Controles deben ser utilizados Confirmase la hipótesis nula de que las diferencias entre el método Bili-D
para evaluar la imprecisión e desviaciones de calibración. Se sugiere que Liquiform y el método comparativo no se desvían en más que el desvío
las especificaciones para el coeficiente de variación máximo y el error provocado por las imprecisiones inherentes, caracterizando la identidad o
total sean basados en los componentes de la variación biológica (VB)5,7. relación funcional entre los métodos.

Los errores totales (error aleatorio + error sistemático) estimados en los

Se sugiere utilizar las preparaciones estabilizadas de los productos de la
niveles de decisión 1,4 e 9,0 mg/dL son 6,4% y 7,2%. Así siendo, Bili-D
línea Qualitrol - Labtest, para control interno de la calidad en ensayos de
Liquiform es substancialmente equivalente al método comparativo. El
química clínica.
coeficiente de correlación (0,999) confirma la fuerza de la relación entre
los métodos.
Intervalo de referencia . Los intervalos deben ser usados sólo
como orientación. Se recomienda que cada laboratorio establezca su
propio rango de valores de referencia en la población atendida. Repetitividad - Imprecisión intra-ensayo
N Media DE CV (%)
Neonatos8 Muestra 1 20 0,32 0,009 2,76
Bilirrubina Directa hasta 0,4 mg/dL Muestra 2 20 1,96 0,009 0,47
1 día: hasta 5,1 mg/dL Muestra 3 20 8,91 0,027 0,30
Bilirrubina Total 1 a 2 días: hasta 7,2 mg/dL
3 a 5 días: hasta 10,3 mg/dL
Reproducibilidad - Imprecisión total
N Media DE CV (%)
Niños, Adolescentes y Adultos
Muestra 1 20 0,32 0,009 2,86
Bilirrubina Directa hasta 0,4 mg/dL
hasta 1,2 mg/dL Muestra 2 20 1,96 0,020 1,02
Bilirrubina Total
Muestra 3 20 8,91 0,094 1,05

Conversión: Unidades Convencionales (mg/dL) x 17,1 = Unidades SI

(mmol/L) Sensibilidad metodológica . El límite de detección fotométrica
es de 0,02 mg/dL, correspondiendo a una absorbancia igual a 0,001.
Características de desempeño9
Efectos de la dilución de la matriz . Muestras con valores
Exactitud . En muestras con concentraciones conocidas de bilirrubina iguales a 5,8 y 9,6 mg/dL fueron utilizadas para evaluar la respuesta del
directa fueron añadidas diferentes cantidades del analito, obteniéndose sistema a las diluciones de la matriz con NaCl 150 mmol/L (0,85%).
recuperaciones de entre 99 y 102%. El error sistemático proporcional Usando diversos factores de dilución correspondientes a 1:2, 1:4 se
medio obtenido a un valor de 1,4 mg/dL fue igual a 0,01 mg/dL o 0,7%. determinó una recuperación media del 105%.

03 Español - Ref.: 93
Significancia clínica . Algunas enfermedades adquiridas y 6. [Link] (acesso em 23/10/07).
hereditarias y diversos medicamentos son capaces de afectar una o más
7. Basques JC. Especificações da Qualidade Analítica. Labtest
etapas involucradas en la producción, captación, almacenamiento,
Diagnóstica. 2005.
metabolismo y excreción de la bilirrubina. Dependiendo del disturbio, la
bilirrubina no conjugada (indirecta), la conjugada (directa) o ambas
8. Soldin SJ, Brugnara C, Wong EC: Pediatric Reference Ranges, 5a.
(total), son las principales contribuyentes de la hiperbilirrubinemia.
edição, Washington: AACC Press, 2005: 42-43.

Las causas más comunes de aumento de bilirrubina directa son las 9. Labtest: Dados de Arquivo.
enfermedades hepatobiliares y la obstrucción del árbol biliar (colestasis).
En realidad, ambas bilirrubinas están aumentadas y se puede observar
una variación amplia de las concentraciones séricas de cada forma de Presentación
bilirrubina. La hepatitis y la cirrosis son ejemplos de dolencias que
Producto Referencia Contenido
pueden causar colestasis intra-hepática. La colestasis puede también ser
inducida por medicamentos y hormonas esteroides. La obstrucción
1 1 X 80 mL
Bili-D Liquiform 93-1/104
extra-hepática del árbol biliar debida a carcinoma o fibrosis de cabeza del 2 2 X 12 mL
páncreas, carcinoma o constricciones del canal biliar común y Bili-D Liquiform 1 4 X 35 mL
93-4/44
coledocolitiasis, producen concentraciones séricas aumentadas de Labmax 560/400 2 4 X 9 mL
bilirrubina directa.

Observaciones Están disponibles aplicaciones para sistemas automáticos e semi-

automáticos.
1. La limpieza y secado adecuados del material utilizado son factores
fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de El número de ensayos en aplicaciones automáticas depende de los
resultados correctos. parámetros de la programación.

2. El laboratorio clínico tiene como objetivo fornecer resultados exactos Informaciones al consumidor
y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa
potencial de errores analíticos. El agua utilizada en el laboratorio debe [Términos y Condiciones de Garantía]
tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así, para preparar
reactivos y usar en las mediciones y para su uso en enjuague final de la Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto, dentro de
vidrería, debe tener resistividad ³1 [Link] o conductividad las especificaciones, hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos,
£1 microsiemens/cm y concentración de silicatos <0,1 mg/L. Cuando la siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en
columna desionizadora está con su capacidad saturada, se produce agua los rótulos y en estas instrucciones, sean seguidos correctamente.
alcalina con liberación de varios iones, silicatos y sustancias con gran
poder de oxidación o reducción que deterioran los reactivos en pocos días
o incluso horas, alterando los resultados de modo imprevisible. Por lo
cual es fundamental establecer un programa de control de la calidad del Labtest Diagnóstica S.A.
agua.
CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
3. Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas y medicamentosas Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - [Link]
de interferencia en los resultados y en la metodología, se sugiere Customer Service e-mail: customerservice@[Link]
consultar: [Link]/

Referencias Revisión: Maio, 2014 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.

Ref.: 260117 Reproducción bajo previa autorización
1. Rand RN, di Pasqua A. Clin. Chem. 1962; 06:570-8.

2. Perlman FC, Lee RTY. Clin. Chem. 1974, 20:447-453.

3. Poon R; Hinberg IH. Clin. Chem. 1985, 31:92-94.

4. Tietz. Textbook of Clinical Chemistry, Burtis CA.; Ashwood ER. eds, 2ª

edição, Philadelphia: WB. Saunders Co, 1994.

5. Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular,

B a s e d e D a t o s d e Va r i a c i ó n B i o l ó g i c a . D i s p o n í v e l
em:<[Link] ticle/ar ticleview/330/1/170>
(acesso em 04/2006).

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