CITOGENÉTICA

Rama de la genética que estudia la estructura, función, y composición de los cromosomas. Para estos estudios se
necesitan células en división, concretamente en la metafase, para que el ADN se encuentre en cromosomas.

Como sabemos el ADN es una doble cadena complementaria y antiparalela, unida a proteínas (histonas) y que se
enrolla sobre si misma hasta llegar a formar el cromosoma.

Estructura interna de los cromosomas:

Brazos: p corto-superior / q largo-inferior

Centrómero: constricción

Satélite: segunda constricción

Telómeros: zonas periféricas de los brazos

Cromátida: duplicación de ADN

Clasificación según el centrómero:

Células somáticas > 23 parejas de cromosomas (2n= 46)

- Una pareja de cromosomas sexuales o

heterocromosomas
- 22 parejas de autosomas.

Células germinales > aploides (n)

II- OBSERVACIÓN DE CROMOSOMAS

CARIOTIPO
Conjunto de cromosomas de una especia, un individuo o una célula ordenados de acuerdo a su tamaño y morfología.
Sirve para el diagnóstico de enfermedades de base genética.

Para obtener cromosomas metafásicos es necesario tener un cultivo celular, con esto podremos detener el
crecimiento de la célula en el punto que queramos. Posteriormente, realizar el sacrificio celular y prepararemos las
extensiones cromosómicas. Después se podrán visualizar con tinciones o bandeado para si análisis.

‫ﻬ‬ CARIOTIPO EN ESPECIE: Conjunto normal de cromosomas que caracteriza a una especie. Nos da el patrón con
el que compararemos los cariotipos individuales y celulares.
‫ﻬ‬ CARIOTIPO CONSTITUCIONAL: Conjunto de cromosomas representativos de un individuo, nacemos con él. Si
no presentamos ninguna anomalía debe ser el mismo que el cariotipo en especie.
‫ﻬ‬ CARIOTIPO CELULAR: Conjunto de cromosomas de una célula que puede diferir del cariotipo del individuo
del que procede. ( Células tumorales  mosaicismo)

Podemos observar los cromosomas desde la profase tardía hasta el final de la metafase. Se observan mediante:
TÉCNICAS DE TINCIÓN
Giemsa y Orceína: Tiñen los cromosomas de rosa o morado de forma homogénea, se diferencian por tamaño y
posición del centrómero. Se suele usar para visualizar las partes de la mitosis

TÉCNICAS DE BANDEO

Se usa para diferenciar los cromosomas analizando sus bandas. Existen varios tipos:

Bandas G  Tripsina + Giemsa. La bandas oscuras son G+ y las bandas claras son G- . Como hemos dicho, todos los
cariotipos de una especie son iguales, por lo que todos los cromosomas 1 tendrán el mismo patrón de bandas
independientemente de la persona (=código de barras).

Bandas R  Forman el patrón negativo de la banda G, es decir, lo que aparece como oscuro en la G aparece como
claro en la R.

Bandas Q  Bandas G+ fluorescente. Igual que en las bandas G pero en vez de verse oscuro se ven fluorescentes

Bandas C  La banda oscura G positiva muestra las regiones ricas en heterocromatina (centrómeros). Los
centrómeros se ven más oscuros porque es donde se concentra más ADN.

Bandas NOR  En el ADN hay información para formar ARN nucleolar, estas regiones se llaman “regiones
organizadoras del nucleolar”, y son las que se marcan en oscuro. En humanos, los acrocéntricos (13, 14, 15, 21, 22).

Las únicas técnicas de bandas útiles para el cariotipo serían las G, R y Q. Se deben contar los cromosomas para ver si
hay alguna alteración numérica y luego comparar el grosor de las bandas para identificarlos. Las representación de
todos los cromosomas organizados se llama ideograma.

Bandas G Bandas R Bandas C Bandas NOR

TÉCNICAS DE BANDAS G

Se tratan con tripsina (enzima que digiere proteínas – proteasa) y posteriormente con Giemsa.

La tripsina digiere parcialmente las proteínas a las que está asociado el ADN en el cromosoma. Digiere más algunas
proteínas que otras, haciendo que el ADN asociado se desenrolla formando un banda clara, G negativas.

La Giemsa tiñe al ADN y tiene más afinidad por zonas ricas en adenina y guanina. La tripsina deja expuestas zonas con
A y G, se generan bandas G + que son las oscuras.
Como todos los cromosomas son comunes dentro de una especia, todos los cromosomas formarán las mismas
bandas G en la misma posición. Gracias a las bandas podemos hacer una representación con ideogramas.

Cada cromosoma está dividido en dos brazos, el superior (p) e inferior (q), esto lo determina su posición de bandas y
su tamaño (el superior es el pequeño). Cada brazo se divide en regiones enumeradas (1,2,3…) de manera que la
región 1 siempre es la más cercana al centrómero del brazo. Ya está establecido el número de regiones, de cada
brazo, de cada cromosoma del cariotipo humano.

Dentro de las regiones están las bandas también enumeradas, la banda 1 es la más cercana del centrómero de esta
región. Según el método de muestreo que usemos podemos encontrar dentro de las bandas las subbandas, se
enumeran siguiendo el método anterior. Cada subbanda se puede dividir en subsubbandas, se enumeras según su
localización dentro de la subbanda.

Las Bandas G claras (G-) y oscuras (G+) no coinciden con las bandas señaladas, estas coinciden con las subbandas.

CROMOSOMA - BRAZO – REGIONES – BANDAS . SUBBANDA – SUBSUBBANDA

El brazo p tiene 1 región, dentro de esta región hay 3 bandas, dentro de la región uno, banda
1uno hay 2 subbandas.

El brazo q tiene 2 regiones, dentro de la región 1 tenemos 5 bandas y dentro de la región 2

tenemos 4 bandas, dentro de la banda 4 de la región 2 tenemos 3 subbandas.

El problema de esto es que no se corresponden los locus con las bandas coloreadas.

Hay más alternancias de bandas claras(-) y oscuras(+) dentro de una subbanda, y para
diferenciarlas necesitamos más resolución.

En los diagramas ya está especificado:

- Posición del centrómero

- Relación entre el brazo corto y largo
- Existencia de satélites
- Patrón de bandas según la técnica

III- OBSERVACIÓN Y ANÁLISIS DE CARIOTIPOS

Necesitamos una muestra de sangre periférica conservada en heparina. Aislamos los linfocitos de la sangre para
obtener el ADN iniciando un cultivo celular. El cultivo servirá para que las células se multipliquen y podamos parar el
proceso en la metafase.

Para el cultivo necesitamos que los linfocitos puedan dividirse. Las células de nuestra sangre se reponen desde la
médula ósea, por lo que si obtenemos el tubo de sangre estas células ya que son maduras y no tienen capacidad de
división, tenemos que hacer que los linfocitos (célula madura) se vuelvas linfoblastos (célula joven), este proceso se
llama desdiferenciación. Este tratamiento se hace con fitohemaglutinina. El cultivo realmente será de linfoblastos.
Tras unos días procedemos a añadir al cultivo un compuesto llamado colchicina, este interfiere en la formación de los
microtúbulos del uso acromático, al no haber uso acromático la metafase no puede continuar, los cromosomas se
pueden formar pero las cromátidas no se separan, dejando las células en metafase. Conseguimos gran cantidad de
células en estado de metafase.

Para obtener una extensión de metafase o extensión de cromosomas tenemos que recoger las células del medio del
cultivo y las introducimos en un tubo para centrifugar. Las células habrán precipitado (sedimento), descartamos el
sobrenadante. Resuspendemos las célula en una solución hipotónica para someter a las células un choque
hipotónico, esto provoca que las células se hinchen de agua y los cromosomas se extenderán dentro de la
células(células con cromosomas separados). Se fijan con el líquido de Carnoy. Tenemos que conseguir extender las
células en un portaobjetos, se hace una extensión por goteo. Se coje con una pipeta un poco del suspensión y
dejamos caer a una cierta distancia una gota en el porta, un poco inclinado, al caer se expande sola. Para poder
verlos nos conviene hacerlo con el tinte que nos muestre lo que queremos ver.

Al microscopio óptico tenemos que observar los tamaños, identificar los cromosomas… Tenemos que observar un
mínimo de 20 células metafásicas, para compararlas entre ellas y estar seguros del resultado que vamos a dar. Si nos
encontramos con cariotipos diferentes tenemos que hacer un registro fotográfico y posteriormente hacer un
informe. Con estos datos haremos los cariotipos y escribiremos la fórmula cromosómica (escribir de manera
abreviada un cariotipo, con o sin alteraciones).

NORMAS BÁSICAS DE LAS FÓRMULAS CROMOSÓMICAS

Cariotipo sin alteraciones:

Ej: 46,XX (número de cromosomas y cromosomas sexuales)

Esta es la base, a partir de aquí destacamos las anomalías:

- Euploidia: cambio en el conjunto de cromosomas, los humanos somos diploides (2n>46), las alteraciones
serian triploide (3n>69), tetraploide(4n>92), monoploide (n>23).
- Aneuploidía: alteración en un solo juego de cromosomas, en vez de ir por parejas puede haber un conjunto
de tres cromosomas o de uno: 2n>46  45 = monosomía ; 47 = trisomía

Ej:

45, Xo  monosomía del cromosoma sexual

47, XX,+21  mujer con trisomía del 21 (síndrome de Down)

45, XY, -13  hombre con monosomía del 13

47, XYY  hombre con disomía del Y (duplo Y)

47, XXY  hombre con disomía del X (síndrome de Clinexfelter)

47, XXX  mujer con trisomía del X (triple X)

- Deleción: del
- Duplicación: dup
- Inversión: inv
- Traslocación: recíprocas t y no recíprocas ins (inserción)
- Mosaicismo: mos

Ej:

46, XY, del (2) (q21q23)  hombre que ha perdido desde la banda 1 de la región dos del brazo largo hasta la 3 banda
de la región 2 del brazo largo del cromosoma 2. (los locus están incluidas en la deleción)
46, XY, inv (4) (p22p28)  hombre con una inversión de la banda 2 de la región 2 del brazo corto hasta la banda 8 de
la región 2 del brazo corto del cromosoma 4. (todo este fragmento se ha invertido)

46, XX, ins (10,3) (q22; p13p23)  mujer con una inserción. El fragmento que se ha roto de cromosoma 3 va a ir a la
banda 2, de la región 2 del brazo largo del cromosoma 10. Este fragmento va entre la banda 3, de la región 1 del
brazo corto hasta la banda 3 de la región 3 del brazo corto del cromosoma 3.

mos 45, X [50] / 46, XX [50] > mujer con mosaicismo, tiene dos cariotipos diferentes. ( cada cariotipo separados
por / , 1º se pone el anómalo y 2º el normal, también se colocan por cantidad.

1º Monosomía del cromosoma x, 50 son las metafases que se han contado con ese cariotipo.

2º Se han contado otras 50 metafases que se han encontrado son anomalías.

CARIOTIPO HUMANO
Criterios de ordenamiento:

1. Tamaño
2. Posición del centrómero (metacéntricos, submetacéntricos…)
3. Constricciones secundarias (satélites)

GRUPOS A B C D E F G SEXUALES
CROMOSOMAS 1-2-3 4-5 6 - 12 13-14-15 16-17-18 19-20 21-22 XY/XX
CONSTRICCIÓN No siguen
SECUNDARIA X X las normas
CENTRÓMERO met,sub,me sub sub acro sub meta acro
t
TAMAÑO +++++++ +++++ - ++++ - - +++ - - - ++ - - - - +----- ------
EJEMPLO CARIOTIPOS: IMÁGENES

2- deleción

3- 45, X0

4- 47, XY, + 18

5- traslocación recíproca

DIAGNÓSTICO PRENATAL – PREIMPLANTACIONAL

Se necesitan dos muestras:

Vellosidades croriónicas > punción de la placenta para obtener las vellosidades (tejido embrionario), en la placenta se
juntan tanto las células de la madre como las del embrión. Tenemos que descartar cualquier parte que creamos que
es de la madre, si hay mezcla de ambas células los resultados suelen ser difusos.

Líquido amniótica > por punción y aspiración, encontraremos células de la epidermis del feto. Separamos las células,
centrifugo y hacemos el cariotipo.