PRACTICA 1.
MEDICIÓN DEL POTENCIAL HÍDRICO
INTRODUCCIÓN
En las plantas, el agua cumple múltiples funciones. El agua como el componente del citoplasma
vivo participa en el metabolismo y en todos los procesos bioquímicos. Una disminución del
contenido hídrico va acompañada de una pérdida de turgencia, marchitamiento aparente,
disminución del alargamiento celular, cierre de estomas, reducción en la fotosíntesis y respiración
y se afectan varios procesos metabólicos más.
La determinación del contenido hídrico de los suelos y los cultivos permite ajustar tanto las dosis de
riego como los momentos de aplicación, logrando de esa manera hacer un uso mas eficiente del
agua de riego, mejorando la respuesta de los cultivos, ahorrando agua y energía y como
consecuencia de lo anterior mejorando la rentabilidad para los agricultores a la vez que se aumenta
la sustentabilidad ambiental de las prácticas de riego.
Recordemos que el movimiento del agua dentro de una planta (movimiento intercelular) dependen
de las diferencias de valor del potencial hídrico entre los distintos compartimentos (células). El
potencial hídrico de una célula (Ψw) depende fundamentalmente del potencial osmótico o
potencial de solutos (Ψs) y del potencial de presión o presión de turgencia (Ψp) de acuerdo con
la fórmula:
Ψw = Ψs + Ψp
El valor de Ψs depende del contenido de solutos; los solutos disminuyen el potencial hídrico y por lo
tanto Ψs siempre es negativo en una célula. El valor de Ψp se corresponde con el de la presión a la
que está sometida el agua. En una célula, Ψp surge de la relación de presión que se origina entre la
vacuola y la pared celular, donde para toda presión que ejerza la vacuola sobre la pared se genera en
correspondencia una presión de la pared hacia la vacuola, la diferencia (recuerden su clase de vectores)
resulta en el Ψp y en células con la vacuola llena (turgentes) siempre resultará en valores positivos.
Se puede determinar el valor del potencial hídrico y de sus componentes en los tejidos vegetales
mediante técnicas relativamente sencillas:
1. Método volumétrico: se basa en la medida de los cambios de las dimensiones lineales de las células
( o sus vacuoplas) cuando estas se colocan en soluciones de diferente potencial osmótico.
2. Método gravimétrico: se miden los cambios de peso que experimentan los tejidos al ser colocados
en soluciones de diferente potencial osmótico.
También existen el método densimétrico (de Chardokov), el método refractométrico, el método de
presión de vapor y el método Scholander (ver el video de medición de potencial hídrico de vid con una
Cámara Scholander en nuestra plataforma Moodle), entre otros.
OBJETIVOS
Determinar el valor del potencial hídrico de tejido de tubérculo de papa por medio del método
gravimétrico.
Determinar el potencial osmótico de células de epidermis de cebolla por medio de observación de
plasmólisis (reducción del volumen de la vacuola).
MATERIALESY MÉTODOS
Materiales
1. Sacarosa 10. Gotero
2. Agua destilada 11. Balanza analítica con precisión de 0.1g
3. Vasos de precipitados de 500 mL 12. Sacabocados
4. Agitador 13. Navaja
5. probeta graduada de 50 0 100 mL 14. Portaobjetos y cubreobjetos (uno por
6. Pipeta de 10 mL cada solución)
7. Cajas de petri 15. Tubérculo de papa
8. Pinzas y agujas de disección 16. Cebolla
9. Marcador de agua 17. Azul de metileno
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Método
a) Determinación del potencial hídrico en células de tubérculo de papa
Para determinar el valor del potencial hídrico en células de tubérculo de papa utilizaremos un
método gravimétrico. Para ello, sumergiremos discos de papa en una serie de soluciones de
sacarosa de concentración creciente, de modo que, en función de las diferencias de Ψw entre la
solución externa y el interior de las células del disco de papa, tenderá a entrar o a salir agua del
disco. Esto se traducirá en un incremento o una disminución del peso del disco. La concentración
de sacarosa CON LA QUE NO SE PRODUZCA UNA VARIACIÓN en el peso tendrá un valor de
Ψw igual al de las células de la papa.
1. Preparar en placas Petri o tubos de ensayo soluciones de sacarosa (15 a 20 mL de cada una) con
concentraciones 0.05M, 0.25M, 0.35M, 0.45M, 0.55M, y 0.85M. Para ello, se utilizará una
cantidad (g) específica de sacarosa y agua destilada según el Cuadro 1.
2. Utilizando un sacabocados, obtener cilindros de patata libres de capas suberizadas. A partir de
los cilindros, cortar discos delgados de aproximadamente el mismo grosor (aprox. 0.25 a 0.50
mm de grosor). Hay que cortar 8-20 discos por cada disolución de sacarosa.
3. Pesar cada grupo de discos y anotar el valor como peso inicial.
4. Introducir cada grupo de discos en una de las disoluciones de sacarosa. Incubarlos a
temperatura ambiente durante 1 hora.
5. Sacar los discos de cada disolución, secar su superficie ligeramente y pesarlos inmediatamente.
Anotar el valor como peso final.
6. Representar gráficamente el incremento relativo de peso frente a la concentración de
sacarosa. Definir el eje X para el Ψw y el eje Y para la diferencia en peso del tejido de papa.
7. Obtén el valor del Ψw para las células del tubérculo de papa considerando el Ψw de la solución
donde no hubo cambio de peso.
b) Determinación del potencial osmótico en células de cebolla
Para determinar el valor del potencial osmótico vamos a utilizar la epidermis interna de una hoja de
bulbo de cebolla, que incubaremos en una serie de soluciones de sacarosa de concentración
creciente. Como ocurre en el caso de la papa, en función de las diferencias de Ψw entre la solución
externa y el interior de las células epidérmicas, tenderá a entrar o a salir agua. Cuando entra agua,
aumenta la turgencia de las células; cuando sale, se contrae la vacuola y las células se plasmolizan.
A concentraciones relativamente bajas de sacarosa, pero cuando el valor del Ψw de la solución
ya es inferior al del Ψw de la célula, se produce una pérdida leve de agua en la célula que no resulta
en un cambio de volumen, sino en una reducción del valor de la presión del agua en su interior.
Cuando el valor de Ψp llega a cero, se considera que las células se encuentran en un estado
denominado plasmólisis incipiente. En esa situación, el valor de Ψw se iguala al de Ψs.
Consideramos que las células de epidermis de cebolla están en plasmólisis incipiente cuando el
50% de las mismas se encuentran plasmolizadas. La concentración de sacarosa con la que se
produzca plasmólisis incipiente tendrá un valor de Ψw igual al del Ψo las células de cebolla.
1. Extraer la epidermis interna de la tercera hoja del bulbo de cebolla y cortar siete cuadraditos de
4-5 mm de lado.
2. Introducir los fragmentos de epidermis en las soluciones de sacarosa, cuidando que queden
bien cubiertos. Incubarlos 1 hora.
3. Extraer los fragmentos de epidermis y colocarlos en portaobjetos con un poco del líquido en el
que estaban sumergidos. Colocar una gota de azul de metileno, esperar un minuto y enjuagar.
4. En el campo de seco débil (objetivo de 10x), observar 25 células y anotar cuántas aparecen
turgentes y cuántas plasmolizadas. (recomendación: comenzar por observar las muestras de
0.0M y 0.85M).
5. Representar gráficamente el porcentaje de plasmólisis frente a la concentración de sacarosa.
6. Calcular Ψw para la concentración de sacarosa con la que se produce plasmólisis incipiente.
7. Calcular el valor de Ψo para las células de epidermis de cebolla.
2
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Discute los resultados reportados en los cuadros 1 y 2.
Cuadro 1. Variación en el peso de tejido de tubérculo de papa incubadas en diferentes
concentraciones de sacarosa.
Solución de sacarosa Paso del tejido (g)
Tubo (mg/mL) Molaridad Ψw (atm) Inicial Final Diferencia Ψw
1 17.1 0.05M -1.3
3 85.5 0.25M -6.7
5 119.7 0.35M -9.6
7 153.9 0.45M -12.7
9 188.1 0.55M -16.0
12 270.7 0.85M -27.6
Cuadro 2. Plasmolización en células de epidermis de cebolla incubadas en diferentes
concentraciones de sacarosa.
Tubo Celulas plasmolizadas (de 25)
(mg/mL) Molaridad Ψw (atm) Número total Porcentaje
1 17.1 0.05M -1.3
3 85.5 0.25M -6.7
5 119.7 0.35M -9.6
7 153.9 0.45M -12.7
9 188.1 0.55M -16.0
12 290.7 0.85M -27.6
CONCLUSIONES.
El alumno concluirá con base en los resultados y cumpliendo los objetivos.
BIBLIOGRAFÍA
Azcón-Bieto, J. y M. Talón. 2008. Fundamentos de Fisiología Vegetal. 2ª Edición. McGraw Hill.
México. 651pp.
Sutcliffe, J. 1984. Las plantas y el Agua. Omega. Barcelona. Cuadernos de Biología. 41 pp.
