Revista de Biología Tropical, ISSN: 2215-2075, Vol. 72: e55748, enero-diciembre 2024 (Publicado May.

14, 2024) 1

BOTÁNICA Y MICOLOGÍA

https://doi.org/10.15517/rev.biol.trop..v72i1.55748

Microsporogénesis y ultraestructura de los granos

de polen de la mora andina Rubus glaucus (Rosaceae)

Edgar Javier Rincón-Barón1*; https://orcid.org/0000-0003-1347-171X

Gerardo Andrés Torres-Rodríguez2; https://orcid.org/0000-0003-2381-2936
Diego A. Zarate3; https:// orcid.org/0000-0001-96303927
Viviana Lucia Cuarán3; https://orcid.org/0000-0001-7295-0046
Carolina Santos-Heredia1; https://orcid.org/0000-0001-7617-0581
Lilian M. Passarelli4; https://orcid.org/0000-0002-8870-8622

1. Grupo de Investigación en Ciencias Básicas y Aplicadas para la Sostenibilidad-CIBAS, Facultad de Ciencias Naturales;
Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud, Universidad de Santander, calle 70 No 55-210, Campus Universitario Lagos
del Cacique, Bucaramanga, Colombia; [email protected] (*Correspondencia), [email protected]
2. Unidad de Microscopía Electrónica, Museo de Historia Natural, Universidad del Cauca, Popayán, Cauca, Colombia,
carrera 2 # 1A-25; [email protected]
3. Centro de Investigación La Suiza, Corporación Colombiana de Investigación Agropecuaria (AGROSAVIA). Km. 32,
vía al mar, Vereda Galápagos, Rionegro, Santander, Colombia; [email protected], [email protected]
4. Laboratorio de Estudios de Anatomía Vegetal Evolutiva y Sistemática (LEAVES), Facultad de Ciencias Naturales;
Museo de La Plata, Universidad Nacional de la Plata, La Plata, Argentina, 64 entre 120 y diagonal 113, B1904 E;
[email protected]

Recibido 06-VII-2023. Corregido 04-III-2024. Aceptado 11-IV-2024.

ABSTRACT
Microsporogenesis and ultrastructure of pollen grains in Rubus glaucus (Rosaceae)

Introduction: Studies on the microsporogenesis of Rubus glaucus are non-existent and little is known about the
ultrastructure of the pollen grains.
Objectives: To describe the microsporogenesis process, and ultrastructural aspects of the pollen grains in Rubus
glaucus.
Methods: Flowers at different developmental stages were embedded in paraffin. Sections were stained
with Safranin-Alcian Blue, PAS-Amidoblack and Lacmoid or included in resin and stained with toluidine
blue. Ultrathin sections were examined by transmission electron microscopy (TEM). For scanning electron
microscopy (SEM) observation, the material was fixed and dehydrated in 2.2 dimethoxypropane, then with
Hexamethyldisilazane (HMDS), and the samples were coated with gold.
Results: Anthers are differentiated by a cellular mass at the ends distal to the staminal filaments. During devel-
opment, the anther wall presents several cellular layers and at maturity, they are reduced to the epidermis and
the endothecium. Microsporocytes undergo simultaneous meiosis and form tetrahedral tetrads. The tapetum
develops secretory activity until pollen grains are released, then the cellular content undergoes autolysis. During
sporodermis formation, the exine is first deposited and then the intine in a centripetal form. The pollen grains are
tricolporate, isopolar, oblate to peroblate, with radial simetry, circular in outline with blunt apices in polar view,
ellipsoidal in equatorial view. The exine is thick, tectated, striate perforate. The sporodermis presents an ectexine
formed by a tectum interrupted by perforations and thick columellae. Colpus membrane presents small exine
granules and orbicules on the surface. The intine develops known structural patterns. Pollenkitt is inconspicuous.
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Conclusion: Anthers structure and development follows the known patterns of angiosperms. Simultaneous
microsporogenesis and centripetal deposition of the sporodermis, as well as ornamentation patterns, have been
previously described for the Rosaceae Family.

Key words: blackberry; microspore; palynology; pollen ontogeny; Rosaceae; sporodermis; tapetum.

RESUMEN
Introducción: Los estudios sobre la microsporogénesis de Rubus glaucus son inexistentes y poco es conocido
sobre la ultraestructura del polen.
Objetivos: Describir la microsporogénesis, y la ultraestructura de los granos de polen en Rubus glaucus.
Métodos: Flores en diferentes etapas de desarrollo fueron incluidas en parafina o en resina. Las secciones se tiñe-
ron con Safranin-Alcian Blue, PAS-Amidoblack y Lacmoid o incluidas en resina y teñidas con Azul de Toluidina.
Secciones ultrafinas fueron observadas mediante microscopía electrónica de transmisión (MET). Para la obser-
vación con microscopía electrónica de barrido (MEB), el material se fijó y se deshidrató en 2.2 dimetoxipropano,
luego se usó hexametildisilazano (HMDS) y las muestras se recubrieron con oro.
Resultados: Las anteras se diferencian a partir de una masa celular en los extremos distales de los filamentos
estaminales. Inicialmente, la pared de las anteras presenta varias capas celulares y al madurar se reducen a la
epidermis y al endotecio. Los microsporocitos experimentan meiosis simultánea y forman tétradas tetraédricas.
El tapete desarrolla actividad secretora hasta que se liberan los granos de polen, luego el contenido celular se
desorganiza y experimenta autólisis. Al formarse la esporodermis, primero se deposita la exina y luego la intina
en forma centrípeta. Los granos de polen son tricolporados, isopolares, oblados a peroblados, con simetría radial,
de contorno circular con ápices romos en vista polar, elipsoidales en vista ecuatorial. La exina es gruesa, tectada,
perforada estriada. La ectexina está formada por un tectum interrumpido por perforaciones y gruesas columelas.
La membrana del colpo posee pequeños gránulos como restos de exina y orbículas en la superficie. La intina
desarrolla patrones estructurales conocidos. El polenkit es inconspicuo.
Conclusión: El desarrollo de las anteras sigue los patrones de las angiospermas. La microsporogénesis simultá-
nea, el depósito centrípeto de la esporodermis, y los patrones de ornamentación observados han sido descritos
previamente para la Familia Rosaceae.

Palabras clave: esporodermis; microspora; mora; ontogenia del polen; palinología; Rosaceae; tapete.

INTRODUCCIÓN morfológicas, así mismo, en este género es

común la hibridación, la poliploidía y la apo-
El género Rubus L. pertenece a la fami- mixis, lo cual ha dificultado la circunscripción
lia Rosaceae (Alice & Campbell, 1999; The específica, convirtiéndolo en un reto sistemá-
Angiosperm Phylogeny Group et al., 2016; tico y taxonómico dentro de las angiospermas
Bayer & Kubitzki, 2003) con más de 750 espe- (Alice & Campbell, 1999; Bayer & Kubitzki,
cies y es uno de los géneros más diversos dentro 2003; Clark & Jassieniuk, 2012; Foster et al.,
de la familia (Alice & Campbell, 1999; Alice et 2019; Graham & Brennan, 2018; Weber, 1996).
al., 2014; The Angiosperm Phylogeny Group Las especies del género Rubus se distribuyen
et al., 2016; Graham & Brennan, 2018; Ramí- en todos los continentes a excepción de la
rez, 2023). El género ha sido tradicionalmente Antártida, pero son especialmente abundan-
subdividido en 12 subgéneros (Focke, 1910; tes en las zonas templadas y subtropicales
Focke, 1911; Focke, 1914), sin embargo, poste- del hemisferio norte, principalmente en Norte
riormente se reconocen 13 subgéneros (Potter América, Europa y Asia (Alice & Campbell,
et al., 2007); no obstante, la mayoría de estos 1999; Focke, 1910; Focke, 1911; Focke, 1914;
grupos no son naturales, siendo parafiléticos y Graham & Brennan, 2018; Hummer, 2017; Lu
polifiléticos (Alice & Campbell, 1999; Carter et & Bouford, 2003; Ramírez, 2023; Wang et al.,
al., 2019; Wang et al., 2016). 2016), también se registran varias especies en
Rubus es un género con gran núme- Centro América y los Andes, pocas especies
ro de especies con similares características son encontradas en África, Australia y Oceanía
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(Araque-Castellanos, et al., 2021; Cancino- La presente investigación es la primera en

Escalante, et al., 2011; Espinosa et al., 2016; abordar de manera pormenorizada el proceso
Graham & Brennan, 2018; Hummer, 2017; de microsporogénesis en la especie R. glaucus,
Ramírez, 2023). prestando atención especial en la arquitectura y
A pesar de la importancia económica de morfología de las células arquesporiales, células
muchas especies de plantas pertenecientes al madre de las microsporas, formación y estruc-
género Rubus no se encuentran trabajos deta- tura de la pared de las anteras, descripción del
llados relacionados con los procesos ontoge- patrón de microsporogénesis, formación de la
néticos de la formación de los granos de polen. esporodermis, estructura y función del tapete.
Sin embargo, es importante aclarar que se han En relación con los granos de polen maduros
hecho esfuerzos en la descripción micromorfo- de R. glaucus, se presenta aquí por primera vez
lógica y ultraestructural de los granos de polen un estudio completo con microscopía fotónica
maduros en varias especies del género Rubus, (MF, MEB y MET), analizando la morfolo-
lo cual ha ayudado en la comprensión y enten- gía general, estratificación y ultraestructura de
dimiento de algunos aspectos de su taxonomía, la esporodermis.
sistemática y evolución (Hebda & Chinnappa,
1994; Kostryco & Chwil, 2021; Kostryco et al., MATERIALES Y MÉTODOS
2020; Lechowicz et al., 2020; Lechowicz et al.,
2021; Lechowicz et al., 2022; Wrońska-Pilarek Se tomaron más de 30 flores por cada etapa
et al., 2012; Xiong et al., 2019). del desarrollo floral empleado. Las muestras
Rubus glaucus Benth. pertenece al subgé- fueron obtenidas en la Finca La Fortuna, vereda
nero Rubus y es conocida como la mora andina El Polo, Municipio de Piedecuesta, Santander-
o mora de Castilla, esta especie se distribuye Colombia a 1970 m de altitud (7°59’16” N &
desde Centro América hasta los Andes, donde 72°59’57.1” W) durante el mes de enero del
pasó de ser una especie silvestre a ser una 2022. Las flores se fijaron en una mezcla de
formol, etanol y ácido acético (FAA) por 24-48
ampliamente cultivada en la región Andina por
horas a 6 °C. Posteriormente, se deshidrataron
el sabor y calidad de sus frutos; siendo la mayo-
en una serie gradual de etanol y dos pasos de
ría de los trabajos sobre esta especie de tipo
aclaramiento en Xilol (Ruzin, 1999) y se inclu-
agronómico y algunos que resaltan la impor-
yeron en Paraplast plus (Mc Cormick®) durante
tancia de esta pluridrupa con potencial fuente
12 horas a 55 °C. Se obtuvieron secciones
de antioxidantes, polifenoles, antocianinas y
transversales y longitudinales con micrótomo
hasta aplicaciones nanotecnológicas (Araque- rotatorio MicroTec®, entre 5-7 μm de grosor. Se
Castellanos, et al., 2021; Arozarena et al., 2012; procedió a la tinción de las muestras con Safra-
Cancino-Escalante et al., 2011; Espinosa, 2016; nina-azul de Alcian para distinguir estructuras
Franco et al., 2020; Garzón et al., 2009; Hum- con paredes primarias y secundarias. Adicional-
mer, 2017; Kumar et al., 2017; Mertz et al., 2007; mente, muestras de las flores con anteras madu-
Osorio et al., 2012; Ramírez, 2023; Samaniego ras también fueron teñidas con la técnica de
et al., 2020). PAS (Ácido peryódico de Schiff-Amidoblack)
En relación con los granos de polen en para discriminar entre polisacáridos estructu-
R. glaucus Solo López et al. (2019), Padilla et rales y de reserva, además de la presencia de
al., (2017), y recientemente Ramírez (2023) proteínas. Se utilizó Lacmoid para teñir calosa
describen la micromorfología de los granos y determinar el patrón de microsporogénesis.
de polen maduros, aunque son descripciones Para todas las tinciones se procedió de acuerdo
generales utilizando microscopía electrónica de con literatura especializada (Demarco, 2017;
barrido (MEB) y no se hicieron descripciones Rincón-Barón et al., 2020; Rincón-Barón et al.,
ultraestructurales con microscopía electrónica 2021a; Rincón-Barón et al., 2021b; Ruzin, 1999;
de transmisión (MET). Soukup, 2014). Muestras adicionales en los
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diferentes momentos del desarrollo floral fue- con un microscopio electrónico de transmisión
ron fijadas en Glutaraldehído al 2.5 % en buffer JEOL JEM 1200 EX.
fosfato 0.2 M pH 7.2 durante 24-48 horas a 6 Para llevar a cabo las descripciones morfo-
°C. Luego de la fijación, las muestras se lavaron lógicas de los granos de polen con MEB, mues-
en el mismo buffer seguido de agua destilada tras de las anteras maduras se deshidrataron en
para posteriormente post-fijarlas con Tetróxido 2.2 Dimetoxipropano acidificado por 2 a 3 días,
de Osmio al 2 % por 2 horas a 6 °C en oscuridad realizando un cambio del solvente durante este
y agitación constante. Finalmente, las muestras tiempo (Halbritter et al., 2018). Finalmente, se
se deshidrataron durante una hora en una serie hicieron dos cambios en etanol absoluto duran-
ascendente de etanol y durante 12 horas etanol te 30 minutos cada uno y se pasó a una mezcla
al 100 %. Las muestras se embebieron en mez- 1:1 Hexametildisilazano (HMDS)- etanol al 100
clas progresivas de óxido de propileno-resina % durante toda la noche y luego en HMDS puro
Spurr, por una semana a temperatura ambien- durante dos horas, posteriormente se permitió
te. Se hicieron varios cambios de resina pura que el HMDS se evaporara en desecador de
durante seis días en agitación constante. La vidrio (Chissoe et al., 1994). Las muestras se
resina fue polimerizada a 60 °C por 48 horas. Se montaron sobre cinta conductiva de carbono de
doble cara y se recubrieron con oro utilizando
obtuvieron secciones de 0.5-0.7 μm de grosor
un cobertor iónico Quorum SC7620 durante
con cuchillas de vidrio en un Ultramicrótomo
10 minutos. El porcentaje relativo de granos
Leica Ultracut UCT®; las cuales se tiñeron con
abortivos se determinó por observación directa
azul de Toluidina (TBO) en bórax al 1 %, pH
y recuento. Las observaciones y registro foto-
3.6 por 30-60 segundos que además de permitir
gráfico se realizaron en un microscopio elec-
la descripción entre tejidos de pared primaria
trónico de barrido Carl Zeiss Evo 15 HD. Para
y secundaria, permite diferenciar esporopo- las descripciones en general se utilizaron los
lenina (Rincón-Barón et al., 2021a). Para más términos sensu Crang et al. (2018), Halbritter
datos morfológicos y estructurales, muestras et al. (2018) y Punt et al. (2007). Las medidas
de las anteras maduras procesadas en parafina de los granos de polen maduros están represen-
y teñidas con Safranina Azul de Alcian se exa- tadas por la medida mínima, media y medida
minaron empleando el filtro de triple banda de máxima utilizando un N = 30.
excitación DAPI-FITC-Texas; el cual incorpora
un filtro de excitación con ventanas de paso de
banda angostas en las regiones espectrales vio- RESULTADOS
leta (395-410 nm), azul (490-505 nm) y verde En R. glaucus se pudieron diferenciar cinco
(560-580 nm). Todas las secciones obtenidas estadios del desarrollo floral claramente dife-
se examinaron con un microscopio fotónico rentes a nivel morfoanatómico, estas etapas
Nikon eclipse Ni equipado con el sistema de están relacionadas con los principales eventos
contraste diferencial de interferencia (CDI). ontogenéticos de la formación de las anteras y
Las fotografías se obtuvieron con cámara digi- granos de polen (Fig. 1A). En sección transver-
tal Nikon DS-Fi1® utilizando el programa NIS sal, las flores maduras de R. glaucus presentan
Elements versión 4.30.02 de Nikon. ovario con múltiples carpelos y gran cantidad
Así mismo y aplicando el procesamiento de de estambres (Fig. 1B). A partir del estado
las muestras en resina descrito anteriormente se más inmaduro se logró apreciar la presencia
hicieron secciones ultrafinas de 70 a 90 nm de de filamentos estaminales en cuyo extremo se
grosor con cuchilla de diamante para MET con desarrolla una masa celular diferenciada, for-
el fin de detallar la pared de los granos de polen mada por tejido arquespórico a partir del cual
maduros. Estas secciones se contrastaron con se forma el tapete celular y pared de las anteras
acetato de uranilo y citrato de plomo durante (Fig. 1C); para este momento del desarrollo
10 y 5 minutos respectivamente y se observaron el tapete está constituido por una sola capa
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Fig. 1. Microsporogénesis de Rubus glaucus. A. Estadios del desarrollo floral. B. Sección trasversal de una flor. Se aprecian
los estambres y el ovario con múltiples carpelos. C. Región apical del filamento estaminal. Se observa el tejido arquespórico
y el tapete. D. Anteras diferenciadas. Se detallan las células madre de las microsporas y la pared de las anteras. E. Tétrades
tetraédricas de microsporas. Se aprecia el tapete celular y calosa alrededor de las microsporas y de las tétrades polínicas
(Lacmoid) formando una tinción azul. F.-H. Microsporas en maduración (Azul de toluidina). En F. se aprecia la exina y el
tapete secretor. En G. la exina se ha engrosado y el tapete secretor persiste. En H .se aprecia la exina y la intina, el tapete
secretor sufre autolisis. Se aprecian microsporas abortadas. I.-J. Antera y granos de polen maduros. En I. se aprecian los
restos o remanentes del tapete. Para este momento del desarrollo en la pared de la antera se observa la epidermis, se ha
diferenciado el endotecio y el estomio se percibe claramente. En J. se detallan los granos de polen maduros. CA: capa de
calosa; CM: células madre de las microsporas; CO: colpo; DU: drusas de oxalato de Calcio; EF: engrosamientos fibrilares;
EN: endotecio; EP: epidermis; ES: estambres; EST: zona del estomio; Ex: exina; GI: gineceo; IN: intina; MA: microsporas
abortadas; MI: microsporas; NU: núcleo de las microsporas; NUG: núcleo del grano de polen; NUL: nucleolo; OV: Ovario;
PA: pared de la antera; PL: polen; RF: receptáculo floral; RT: restos del tapete celular; TA: tejido arquespórico; TC: tapete
celular; TR; tétrades polínicas tetraédricas; VF: verticilos vegetativos. / Fig. 1. Rubus glaucus microsporogenesis. A. Stages
of floral development. B. Cross section of a flower. The stamens and the ovary with multiple carpels can be seen. C. Apical

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…viene de la página anterior.

region of the staminal filament. The archesporic tissue and the tapetum are observed. D. Differentiated anthers. Microspore
mother cells and the anther wall are detailed. E. Tetrahedral tetrads of microspores. The secretory tapetum and callose
around the microspores in the tetrads (Lacmoid) are appreciated as a blue stain. F.-H. Maturing microspores (Toluidine blue).
In F. The exine and secretory tapetum can be seen. In G. the exine has thickened and the secretory tapetum persists. In H. the
exine and intine can be observed, the secretory tapetum undergoes autolysis. Aborted microspores can be seen. I.-J. Anther
and mature pollen grains. In I. remnants of the cellular tapetum can be observed. By this time of development, the epidermis
is notorious in the wall of the anther, the endothecium has differentiated and the stomium can be clearly seen. In J. the
mature pollen grains are detailed. CA: callose layer; CM: Microspore mother cells; CO: colpus; DU: Calcium oxalate druses;
EF: fibrillar thickenings; EN: endothecium; EP: epidermis; ES: stamens; EST stomium area; Ex: exine; GI: gynoecium; IN:
intine; MA: aborted microspores; MI: microspores; NU: microspore nucleus; NUG: pollen grain nucleus; NUL: nucleolus;
OV: Ovary; PA: anther wall; PL: pollen; RF: flower receptacle; RT: remnants of the cellular tapetum; TA: archesporic tissue;
TC: cellular tapetum; TR; tetrahedral pollen tetrads; VF: vegetative whorls.

uniestratificada de células de contorno entre y estas forman primero la exina que se aprecia
rectangular a cuadrado con núcleo en posición de un color azul turquesa al teñirlas con Azul de
central y que ocupa la mayor parte del citoplas- Toluidina, mientras tanto el tapete mantiene su
ma con un prominente nucleolo y citoplasma integridad (Fig. 1F). A medida que las micros-
de apariencia granular. Citológicamente, las poras maduran la exina se va engrosando y en
células del tejido arquespórico son similares a la pared de la antera se aprecia que las células
las del tapete celular, solo que estas presentan epidérmicas adquieren un contorno rectangu-
un contorno más redondeado y los granos de lar y las tres capas de células parietales se ven
polen se aprecian tricolporados (Fig. 1J). más grandes y de contorno rectangular, así
Así mismo, en este punto del desarrollo, mismo el tapete celular persiste (Fig. 1G). Con
se aprecia que la pared de las anteras está el progreso de la ontogenia, las microsporas
constituida por una epidermis claramente dife- forman la intina que se tiñe de azul oscuro con
renciada y tres capas de células parietales de Azul de Toluidina, las microsporas presentan
apariencia parenquimatosa localizadas entre
un citoplasma de apariencia vacuolada y un
el tapete y la epidermis (Fig. 1C). Con el creci-
núcleo con un prominente nucleolo, en el
miento y maduración, el tejido arquespórico se
microsporangio es posible observar abundantes
diferencia para formar las células madre de las
microsporas abortadas (alrededor del 33 %) y
microsporas, estas células presentan contorno
el tapete ha experimentado autolisis (Fig. 1H).
globoso con paredes primarias engrosadas, un
Finalmente, las microsporas se diferencian
núcleo prominente y se encuentran densamente
empaquetadas en el lóculo del microsporangio, para formar los granos de polen maduros,
rodeadas por una capa uniestratificada de tape- cuyo citoplasma se tiñe intensamente de azul
te celular; para este momento del desarrollo, oscuro con Azul de Toluidina (Fig. 1I, Fig.
la pared de la antera mantiene su estructura 1J); para este momento de la microsporogé-
morfoanatómica y se empieza a diferenciar nesis, se evidencia que en pared de la antera
el estomio (Fig. 1D). Después de experimen- se ha diferenciado el endotecio a partir de las
tar citocinesis meiótica simultánea, las células células parietales parenquimatosas, y este está
madre de las microsporas forman tétrades de formado por dos estratos de células de contor-
microsporas en disposición tetraédrica rodea- no rectangular con engrosamientos fibrilares
das con una gruesa capa de calosa que se obser- lignificados; así mismo, el estomio se ha estruc-
va de color azul claro al teñir con Lacmoid (Fig. turado por completo (Fig. 1I). Para el momento
1E). Posteriormente, las microsporas se separan de la liberación de los granos de polen, la exina
de las tétrades en el lóculo del microsporangio e intina se han desarrollado
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Justo para el momento de la antesis, los DISCUSIÓN

granos de polen maduros presentan abundantes
gránulos de almidón, los cuales se evidencian En la familia Rosaceae son escasos los tra-
por la coloración purpura al usar la tinción de bajos que describan los procesos de formación
PAS-Amidoblack (Fig. 2A). Al observar las sec- de las anteras (Çetinbaş & Ünal, 2015; Sumner
ciones de las anteras maduras con fluorescencia & Remphrey, 2005) y microsporogénesis; la
teñidas con Safranina-Azul de alcian y empe- mayoría se enfoca en otras plantas de interés
lando el filtro de triple banda de excitación económico, como duraznos, ciruelas y cerezas
DAPI-FITC-Texas, las microsporas abortadas (Akšić et al., 2016; Çetinbaş & Ünal, 2015;
son evidentes y se aprecia que el endotecio ha Fadón et al., 2019; Feng et al., 2016; Hajnal
alcanzado su mayor grado de desarrollo, con et al., 2013; Julian et al., 2011; Ontivero et al.,
engrosamientos fibrilares fuertemente lignifi- 2005; Radice & Galati, 2006; Rahmani et al.,
cados (Fig. 2B). 2012; Sumner & Remphrey, 2005; Szalay &
Los granos de polen son liberados en Remphrey, 2002; Ye et al., 2010). En una prime-
mónades, tricolporados, isopolares, con sime- ra etapa se forma una masa celular diferenciada
tría radial, pequeños P: (10) 12.3 (14) µm x E: en el extremo distal de los filamentos estami-
(22) 24.5 (27) µm (Fig. 1J), P/E: 0.5 (Fig. 2C), nales; esta masa llamada tejido arquespórico
oblados a peroblados (Fig. 2C). Presentan AMB formará las células madre de las microsporas y
de contorno triangular, con vértices romos los tejidos vegetativos que constituirán la pared
en vista polar, elipsoidales en vista ecuatorial de las anteras. Esta pared está formada por
(Fig. 2D). Colporo formado por un colpo de 20 varios estratos celulares, en las etapas tempra-
(21.6) 26.2 µm, por entre 10 (12) 14 y un poro nas del desarrollo, pero una vez que la antera
notablemente expuesto (Fig. 2D, Fig. 2E), el alcanza la madurez, justo para el momento de la
colpo se extiende hasta los polos (Fig. 2D, Fig. liberación de los granos de polen, termina for-
2E, Fig. 2F). La membrana del colpo presen- mada por el endotecio y el tejido epidérmico en
ta repliegues, con abundantes microgránulos, tanto que los demás estratos celulares parietales
constituidos por ectexina (es la capa que se degeneran (Çetinbaş & Ünal, 2015). Este patrón
encuentra en la zona más externa de la exina), histológico es similar en estructura y función al
y por orbículas depositadas sobre la superficie observado aquí por primera vez en R. glaucus
(Fig. 2E, Fig. 2F). Exina bien desarrollada de y coincide con el patrón general que presenta
1.2-1.4 µm, tectada, estriado-perforada, con la mayoría de las eudicotiledóneas (Åstrand et
estrías paralelas al eje polar distribuidas en al., 2021; Davis, 1966; Fernández et al., 2015;
forma homogénea y perforaciones de diámetro Kostryco & Chwil, 2021; Rincón-Barón et al.,
variable menores a un micrómetro (Fig. 2F). La 2021b; Rincón-Barón et al., 2023).
ultraestructura de la esporodermis observada En similitud a lo descrito en otras Rosa-
con MET, muestra que la exina está formada ceae, la formación del endotecio en R. glaucus
por dos capas, la ectexina, constituida por un comienza después de la meiosis y termina por
tectum contínuo en zonas con columelas uni- diferenciarse por completo para el momento de
das y por zonas interrumpidas, en las que que- la liberación del polen. Una vez que alcanza su
dan báculas libres formando las perforaciones maduración, estructuralmente presenta engro-
en el tectum (Fig. 2G), y la endexina compacta samientos fibrilares lignificados (Çetinbaş &
de menor grosor (capa más interna de la exina) Ünal, 2015; Fadón et al., 2019; Kostryco &
(Fig. 2H). La intina es delgada en la zona inte- Chwil, 2021; Radice & Galati, 2006; Rahmani
rabertural (0.3 µm), notoriamente extendida en et al., 2012). Sin embargo y en contraste a lo
las aberturas con el doble de espesor (0.6 µm) anteriormente descrito por estos autores para la
(Fig. 2I). En las secciones y montajes hechos familia, el endotecio en R. glaucus está formado
para MET y MEB no se aprecia polenkit. por dos estrados celulares en lugar de solo uno.
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Fig. 2. Anteras y detalles morfológicos y ultraestructura de los granos de polen de Rubus glaucus. A-B. Sección trasversal
de las anteras. En A. se observan microsporas abortadas y en el citoplasma de los granos de polen se aprecian abundantes
gránulos de almidón (PAS-Amidoblack). En B. se aprecian microsporas abortadas; además que el endotecio está formado
por dos estratos celulares (Filtro DAPI-FITC-Texas, PAS-Amidoblack). C.-F. Granos de polen observados con MEB. En C.
detalles de los granos de polen tricolporados en vista ecuatorial y polar. Se reconoce la forma oblada. D. detalle de los granos
de polen en vista polar, se aprecian los colporos con orbículas en la superficie. En E. se detalla el colporo y los pliegues de
la membrana del colpo con orbículas sobre la superficie. En F. detalle de la micrornamentación de la esporodermis con
estrías paralelas al eje polar y perforaciones. G.-I. Granos de polen observados con MET. En G. detalle de la esporodermis,
se observa la exina y la intina más engrosada en la zona abertural. En H. detalle de la ultraestructura de la espordermis,
se aprecia la exina formada por tectum y endexina. En el tectum se observan las perforaciones y debajo las columelas. La
membrana basal se aprecia como una capa homogénea electrolúcida y la endexina como una capa electropaca y la intina
más gruesa. En I. detalle ultraestructural de la esporodermis en la región abertural. La intina se aprecia más engrosada
en esta zona y se observa restos de exina que forman el pliegue de la membrana del colpo. CO: colpo; COL: colporo; EF:
engrosamientos fibrilares del endotecio; EN: endotecio; ENX: endexina; ES: estrías; EX: exina; EXR: restos de exina que
forman el pliegue sobre el colpo; GA: gránulos de almidón; IN: intina; INE: intina engrosada en la abertura; MA: microsporas
abortadas; MB: membrana basal; MEC: membrana citoplasmática; OR: orbículas; PER: perforaciones del tectum; PL: polen;
PLI: pliegues sobre la membrana del colpo; TEC: tectum; VE: polen vista ecuatorial; VP: Polen vista polar; ZA: zona de la
abertura. / Fig. 2. Anthers and morphological details and ultrastructure of Rubus glaucus pollen grains. A.-B. Cross section
of the anthers. In A., aborted microspores are observed, and abundant starch granules (PAS-Amidoblack) are observed in
the cytoplasm of the pollen grains. In B., aborted microspores can be seen; In addition, the endothecium is made up of two
cell layers (DAPI-FITC-Texas Filter, Safranin-alcian blue). C.-F. Pollen grains observed with SEM. In C. details of tricolporate
pollen grains in equatorial and polar view. Oblate shape is recognized D. Detail of the pollen grains in polar view, showing the
colpori and the micro-ornamentation of the sporodermis with orbicules on the surface. In E., the colpus and the folds of the
colpus membrane with orbicules on the surface are detailed. In F., detail of the micro-ornamentation of the sporodermis with
striations parallel to the polar axis and perforations. G.-I. Pollen grains observed with MEB. In G. detail of the sporodermis,
the exine and the thickened intine are observed in the aperture area. In H. detail of the ultrastructure of the spordermis, the
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exine formed by tectum and endexine can be observed. Perforations can be seen in the tectum and under it the columellae
are distinguished. The foot layer is seen as a homogeneous electropaque layer and the intine is thicker and more electrolucent.
In I. ultrastructural detail of the sporodermis in the aperture zone. The intine is thickened in this area and exine and the
remnants of the exine forming folds on the colpus are observed. CO: colpus; COL: colporus; EF: fibrillar thickenings of the
endothecium; EN: endothecium; ENX: endexine; ES: striae; EX: exine; EXR: exine remnants that form the fold over the
colpus; GA: starch granules; IN: intine; INE: thickened intina at the aperture; MA: aborted microspores; MB: foot layer;
MEC: membrana citoplasmática; OR: orbicules; PER: tectum perforations; PL: pollen; PLI: folds on the colpus membrane;
TEC: tectum; VE: pollen equatorial view; VP: pollen polar view; ZA: aperture zone.

En la mayoría de las especies de Rosaceae En cuanto al depósito de la esporodermis

se ha indicado la presencia del tapete secretor en R. glaucus se forma primero la exina que
(Çetinbaş & Ünal, 2015; Fadón et al., 2019; está compuesta principalmente de esporopo-
Feng et al., 2016; Julian et al., 2011; Kostryco lenina y luego se deposita la intina formada de
& Chwil, 2021; Ontivero et al., 2005; Radice componentes de pared primaria, este patrón
& Galati, 2006; Sumner & Remphrey, 2005; de depósito centrípeto de la esporodermis es
Watson & Dallwitz, 1991) presente hasta el coincidente con el descrito habitualmente en
momento de la liberación de los granos de plantas (Blackmore et al., 2007; Pacini & Hesse,
polen, entonces sufre autólisis y degenera hasta 2012; Rincón-Barón et al., 2021a; Rincón-Barón
desaparecer, situación que se pudo apreciar en et al., 2021 b; Rincón-Barón et al., 2023).
esta investigación para el tapete secretor de R. En los lóculos de los microsporangios
glaucus. Otros autores indicaron la presencia en las anteras de R. glaucus es posible obser-
de tapete plasmodial en algunas especies de var abundantes microsporas abortadas (33%),
Rosaceae (Bhojvani & Soh, 2010; Rahmani et esta situación podría explicarse en parte por
al., 2012). Dado el estrecho contacto que se los niveles de ploidía presentes en R. glaucus
observó entre las células madre de las micros- tal y como lo señalan López et al. (2019).
poras y el tapete secretor de R. glaucus, este No obstante, existen abundantes referencias
facilitaría la maduración de estas células repro- donde indican la susceptibilidad de la micros-
ductivas, así como, proporciona materia prima porogénesis a factores abióticos principalmente
para la formación de la exina (Fernández et al., relacionados con la temperatura y humedad,
2015; Furness & Rudall, 2004; Furness et al., que pueden afectar estos procesos de manera
2002; Pacini, 2010; Rincón-Barón et al., 2021b; negativa llevando a la menor producción de
Rincón-Barón et al., 2023). granos de polen maduros y viables (Åstrand
En R. glaucus la microsporogénesis es et al., 2021; Aronne et al., 2021; De Storme &
simultánea y se forman tétrades de microspo- Geelen, 2014; Dolferus et al., 2011; Hedhly,
ras en disposición tetraédrica con una gruesa 2011; Iovane & Aronne, 2022; Pacini & Dolfe-
capa de calosa, este proceso culmina con la rus, 2019; Rosbakh et al., 2018; Thakur et al.,
formación de granos de polen tricolporados, 2010). Estos trabajos señalan que los factores
lo cual es ampliamente conocido en eudicotile- ambientales relacionados con el estrés por calor,
dóneas incluidas las Rosaceae y se explica por bajas temperaturas y sequía afectan en especial
depósitos de calosa y los puntos de contacto al tapete, que siendo un tejido tan importante
de las microsporas en la tétrade (Çetinbaş & en varios pasos claves de las actividades meta-
Ünal, 2015; Fadón et al., 2019; Feng et al., 2016; bólicas de la microsporogénesis, puede pertur-
Furness & Rudall, 2004; Furness et al., 2002; bar la formación de los granos de polen desde
Julian et al., 2011; Ontivero et al., 2005; Radice la meiosis, interfiriendo con la posición natural
& Galati, 2006; Rahmani et al., 2012; Sumner & de los microtúbulos y por consiguiente afectan-
Remphrey, 2005). do la correcta separación de las microsporas
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e incluso llevando a la segregación anormal The Angiosperm Phylogeny Group et al., 2016;
de los cromosomas. Así mismo, estos autores Graham & Brennan, 2018; Ramírez, 2023), y
indican que daños en el tapete causados por teniendo en cuenta su diversidad palinológi-
los factores de estrés señalados, pueden afectar ca, muy bien documentada por Hebda et al.
desde el metabolismo de los carbohidratos en (1994) en referencia a la Subfamilia Rosoideae
especial de almidones y otros azúcares, hasta como la más heterogénea, se puede caracterizar
interferir con los depósitos de precursores de como euripalínico (Erdtman, 1969; Halbrit-
la esporopolenina a nivel de la exina, compro- ter et al., 2018), a diferencia de lo expresado
metiendo así el desarrollo de la esporodermis y por Monasterio-Huelin & Pardo (1995). Eide
por consiguiente interfiriendo dramáticamente (1981) realiza una amplia descripción de las
en la formación de los granos de polen, todo aberturas y de la compleja ornamentación de
lo anterior podría estar relacionado con el alto las especies europeas de las Familia Rosaceae,
porcentaje de microsporas abortadas observa- entre ellas, seis especies de Rubus. Describe
das en R. glaucus. una ornamentación positiva microreticulada
Aunque el estrés por temperatura y hume- perforada, rugulado perforada, estriado micro-
dad también pueden afectar a otras capas de la reticulada, estriado perforada, característica de
pared de las anteras (Pacini & Dolferus, 2019; Rubus, aunque no exclusiva de este taxon, ya
Rosbakh et al., 2018) interfiriendo incluso en que en otros géneros como Physocarpus (Cam-
la dehiscencia de estas y por ende la liberación bess.) Raf. y Spiraea L. por ejemplo, se repite
de los granos de polen maduros; en este trabajo el mismo patrón de escultura. Dentro de Rubus
con R. glaucus no fue evidente ningún tipo subgen. Chamamemorus, un taxón monotípico
de alteración morfoanatómica que afectara a considerado linaje basal en el género (Alice &
estos tejidos y por consiguiente a la abertura Campbell, 1999) se observa otro tipo de orna-
del estomio. Adicionalmente, Aronne et al. mentación, equinada o verrucosa. Estos autores
(2021), Iovane & Aronne (2022) y Pacini & concluyen en que los principales tipos polínicos
Dolferus (2019), han indicado que incluso el de las Rosaceae son variaciones del mismo
efecto adverso de los factores abióticos sobre la carácter tricolporado estriado.
microsporogénesis no necesariamente estaría Así mismo, Hebda & Chinnappa (1990)
relacionado con largas exposiciones a estos detallan la morfología de especies canadienses
tipos de estrés, e indican que períodos cortos de Rosaceae, incluyendo a Rubus y las ilustra
de exposición al calor, frio o sequía durante los con una ornamentación positiva suave y pre-
momentos más susceptibles de la microsporo- sencia de perforaciones, lo cual es coincidente
génesis, pueden afectar drásticamente la forma- con los trabajos previos ya mencionados y es
ción y desarrollo de los gametofitos masculinos. similar a lo observado en R. glaucus. Un trabajo
Por lo anterior, estos mismos autores resaltan la más reciente (Xiong et al., 2019) basado en un
relación existente entre el cambio climático y amplio estudio de 155 especies y 13 variedades
el efecto adverso sobre la formación del polen de Rubus representando a los doce subgéneros,
que puede intervenir de manera negativa en caracteriza a los diferentes taxones dando todas
la agricultura y producción de alimentos, por las descripciones conocidas hasta el momento,
consiguiente, la necesidad de prestar atención incluyendo a las medidas de los ejes polar y
a estos aspectos de la biología reproductiva diámetro ecuatorial de las especies estudiadas
de plantas que impacta directamente sobre la siendo los valores generales aportados, mayo-
seguridad alimentaria. res que los observados aquí, este estudio no
En cuanto a la morfología, varios traba- encuentra valor taxonómico en los granos de
jos describen al polen de la familia Rosaceae, polen. Kostryco et al. (2020) intentan com-
incluyendo a especies de Rubus, este género es pletar la micromorfología y ultraestructura de
uno de los más numerosos en la Familia apro- diferentes cultivares de R. idaeus observando
ximadamente 750 especies (Alice et al., 2014; estrías paralelas que pueden ramificarse en
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forma dicotómica o anastomosarse irregular- ausencia de su distribución como una sinapo-

mente. En este caso, R. glaucus presenta un morfía de los clados derivados, algo ya propues-
tamaño pequeño a mediano coincidiendo con to por Verstraete et al. (2014). Todos los géneros
la mayoría de las especies de Rubus descriptas de la tribu Sorbarieae presentan orbículas (Song
por diferentes autores (Eide, 1981; Hebda & et al., 2016), la mayoría de estas estructuras se
Chinnappa, 1990; Lechowicz et al., 2022; López encuentran agregadas o embebidas en el tejido
et al., 2019; Padilla et al., 2017; Ramírez, 2023), tapetal. Ocasionalmente, en R. glaucus según lo
por otra parte, la forma oblada es algo menos observado en este trabajo, las orbículas pueden
frecuente en este taxón (Hanchana et al., 2023; fusionarse y formar pequeños agregados. Este
Lechowicz et al., 2022). carácter ha sido comúnmente observado, ade-
Adicionalmente, en R. glaucus la orna- más, en otras especies de Angiospermas (Gala-
mentación presenta estrías, éstas son rectas, ti, 2003; Galati & Strittmatter, 1999).
pudiendo contactarse brevemente en algunos En cuanto a la ultraestructura de la pared,
sitios de la zona ecuatorial, se observan, ade- en R. glaucus se distingue fácilmente la presen-
más perforaciones de diámetro variable sobre cia de un tectum, columelas y capa basal. Esta
toda la superficie de la esporodermis. Xiong et estructura de la esporodermis está presente
al. (2019) describen seis grupos diferentes en en todas las angiospermas eudicotiledóneas
base a las perforaciones, aquellos con agujeros incluidas las especies de la familia Rosaceaeae
menores a un micrómetro, mayores a un micró- con muy pocas excepciones generalmente rela-
metro, con diámetros mixtos y con diferentes cionadas con adaptaciones al ambiente como,
patrones de distribución. El grupo tres con por ejemplo, el infratectum granular que ocurre
estrías y perforaciones, aunque heterométricas en Nymphaeae gardneriana (Zini et al., 2017) y
y menores a un micrómetro, coincide con la es, además, característico de las angiospermas
mayoría de las especies incluso R. glaucus. basales (Doyle, 2005). Las diferentes capas de
La presencia de orbículas en especies del la pared presentan grosores y características
género Rubus puede observarse en los dis- variadas (Blackmore, 2007; Halbritter et al.,
tintos trabajos citados, aunque en la mayoría 2018; Hickey & Wolfe, 1975; Kostrico et al.
no se hace mención a este carácter (Hebda & 2020; Song et al., 2017). Kostryco et al. (2020)
Chinnappa, 1994; Tomlik-Wyremblewska et incorporan a su estudio en R. idaeus L. los deta-
al., 2004). Cada vez más atención se pone sobre lles con MET, encontrando diferencias a nivel
estas estructuras producidas por el tapete, cons- de cultivares en el grosor de las capas, mencio-
tituidas por esporopolenina que se distribuyen nan a la ectexina como una zona muy gruesa y
sobre la superficie interna de las anteras y de los que forma el 80 % del grosor total de la pared,
granos de polen, y que por conservar su morfo- este carácter coincide con lo observado aquí
logía pueden aportar a la caracterización inclu- para R. glaucus ya que en los cortes ultrafinos
so a nivel de especie (Ruggiero & Bedini, 2020; la capa externa de la exina, la ectexina, forma
Verstraete et al., 2014); sin embargo, aún se casi la totalidad de esta estructura. En las figu-
desconoce su función, aunque está demostrado ras se demuestra claramente la ornamentación
que la presencia de orbículas en las plantas con negativa mediante interrupciones del tectum.
flores marca una tendencia evolutiva hacia la Las columelas son gruesas y pueden observarse
ausencia ya que en los clados considerados más unidas debajo de esta estructura.
evolucionados estas estructuras no se observan, La presencia de polenkit no ha sido notoria
por ejemplo faltan en Asteraceae y Lamiaceae en R. glaucus, sin embargo, es visible en otras
(Verstraete et al., 2014). especies del género (Kostryco et al., 2020).
Song et al. (2017) realizan un amplio estu- Llama la atención la ausencia de este material
dio por primera vez, sobre la presencia de orbí- en R. glaucus atendiendo a la relación estrecha
culas en la Tribu Spireae, señalando que están entre el polenkit y el síndrome de polinización
presentes sólo en tres géneros y reconocen a la (Konzmann et al., 2019; Pacini & Hesse, 2005;
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Rincón et al., 2021a), ya que en R. glaucus se ha modelos productivos sostenibles para el cultivo
indicado polinizadores como abejas, avispas, de la Mora en Colombia”
abejorros, moscas y hormigas (Bolaños et al.,
2020; Franco et al., 2020; López et al., 2019;
REFERENCIAS
Ramírez, 2023); y también fenómenos de poli-
nización por viento (Ramírez, 2023), o podría Akšić, M. F., Cerović, R., Ercişli, S., & Jensen, M. (2016).
tratarse de un depósito fino sobre los granos Microsporogenesis and meiotic abnormalities in
different ‘Oblačinska’sour cherry (Prunus cerasus L.)
de polen que luego desaparece de la superficie, clones. Flora, 219, 25–34.
quedando a veces entre las cavidades inter-
nas delimitadas por las columelas infratectales. Alice, L. A., & Campbell, C. S. (1999). Phylogeny of Rubus
(Rosaceae) based on nuclear ribosomal DNA internal
Un pormenorizado estudio sobre este tema es transcribed spacer region sequences. American Jour-
aportado por Pacini & Hese (2005), teniendo en nal of Botany, 86(1), 81–97.
cuenta las diferentes formas de distribución y
Alice, L. A., Goldman, D. H., Macklin, J. A., Moore, G.
funciones de este material, sería necesario con- (2014). Rubus. En: Flora of North America Editorial
tinuar con estos estudios tendientes a dar luz a Committee (Ed.), Flora of North America north of
aspectos fisiológicos de la microsporogénesis Mexico (Vol. 9, pp 28–56). Oxford University Press.
por un lado y aportando a la controvertida sis- The Angiosperm Phylogeny Group, Chase, M. W., Christ-
temática mediante la morfología del polen y la enhusz, M. J., Fay, M. F., Byng, J. W., Judd, W. S., Soltis,
distribución de las orbículas. Así mismo, enten- D. E., Mabberley, D. J., Sennikov, A. N., Soltis, P. S.,
& Stevens, P.F. (2016). An update of the Angiosperm
der a detalle el proceso de microsporogénesis Phylogeny Group classification for the orders and
en plantas aportan información relevante sobre families of flowering plants: APG IV. Botanical Jour-
su evolución, biología reproductiva y aplicacio- nal of the Linnean Society, 181(1), 1–20.
nes en el mejoramiento agronómico de plantas. Araque-Castellanos, D., Cancino-Escalante, G., Hernan-
dez-Contreras, D. A., & Chinchilla-Cárdenas, D.
Declaración de ética: los autores declaran (2021). Diversidad genética de Rubus glaucus Benth
en el municipio de Pamplona (nororiente de Colom-
que todos están de acuerdo con esta publica- bia). BISTUA Revista de la Facultad de Ciencias Bási-
ción y que han hecho aportes que justifican cas, 19(2), 8–14.
su autoría; que no hay conflicto de interés de
Aronne, G., Iovane, M., & Strumia, S. (2021). Temperature
ningún tipo; y que han cumplido con todos and humidity affect pollen viability and may trigger
los requisitos y procedimientos éticos y legales distyly disruption in threatened species. Annali Di
pertinentes. Todas las fuentes de financiamien- Botanica, 11, 77–82.
to se detallan plena y claramente en la sección Arozarena, I., Ortiz, J., Hermosín-Gutiérrez, I., Urretaviz-
de agradecimientos. El respectivo documento caya, I., Salvatierra, S., Córdova, I., & Navarro, M.
legal firmado se encuentra en los archivos de (2012). Color, ellagitannins, anthocyanins, and anti-
la revista. oxidant activity of Andean blackberry (Rubus glaucus
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mistry, 60, 7463−7473.
AGRADECIMIENTOS Åstrand, J., Knight, C., Robson, J., Talle, B., & Wilson, Z.
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Los autores agradecen a las siguientes ins- anther: trends in function and development. Plant
tituciones y personas: a la Universidad de San- reproduction, 34(4), 307–319.
tander (UDES) por el apoyo financiero y a la Bayer, C., & Kubitzki, K. (2003). Malvaceae. En K. Kubitzki
Universidad del Cauca (UNICAUCA) por su (Ed.), The families and genera of vascular plants (pp.
apoyo técnico e infraestructura. A Luis Abelar- 225–31). Springer-Verlag.
do Rey Velandia propietario de la finca la For- Bhojvani, S. S., & Soh W. Y. (2010). Current trends in the
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