Lipasa. Cinético colorimétrico.

Líquido
Determinación cuantitativa de lipasa
Ref.: LIP-027
LIPASA
Solo para uso in vitro en el laboratorio clínico R1 2 x 50 mL
Conservar a 2-8ºC R2 1 x 20 mL

PRINCIPIO DEL MÉTODO - R 2 micro-emulsión de color naranja, descartar si se vuelve roja. Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
La lipasa pancreática en presencia de colipasa, iones calcio y desoxicolato, establezca sus propios valores de referencia.
hidroliza el sustrato 1-2-O-dilauril-rac-glicerol-3-glutárico-(6' -metilresorufina)- MATERIAL ADICIONAL
ester. Las secuencias de las reacciones para la determinación directa de la - Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 580 nm. CARACTERISTICAS DEL METODO
lipasa son las siguientes: - Baño termostatable a 37ºC ( 0,1ºC) Rango de medida: Desde el limite de detección 5 U/L hasta el limite de
1-2-O-dilauril-rac-glicerol-3-glutárico -(6' -metilresorufina)-ester - Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. linealidad 250 U/L.
Lipasa - Equipamiento habitual de laboratorio. Si la concentración de la muestra es superior al limite de linealidad, diluir 1/10
 1-2-O-dilauril-rac-glicerol + Ácido glutárico-6'-etilresorufina-ester con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 10.
OH  MUESTRAS Precisión:
(no estable)   Ácido glutárico + Metilresorufina
 Suero o plasma con citrato sodico, EDTA o heparina1. Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)
La velocidad de formación de metilresorufina determinado fotometricamente, No congelar y descongelarlas las muestras repetidas veces. Media (U/L) 40,2 59,35 38,5 58,9
es proporcional a la concentración catalítica de lipasa en la muestra Estabilidad: 2 días a 2-8ºC. SD 0,410 0,875 1,10 1,25
ensayada. CV (%) 1,02 1,47 2,86 2,13
PROCEDIMIENTO Sensibilidad: 1 U/L= 0,00059792 (A)
SIGNIFICADO CLÍNICO 1. Condiciones del ensayo: Exactitud: Los reactivos BSM (y) no muestran diferencias sistemáticas
La lipasa (LPS) es una enzima pancreática necesaria para la absorción y Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .580 nm significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).
digestión de los nutrientes, cataliza la hidrólisis de los esteres de glicerol de los Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz Los resultados obtenidos con 101 muestras fueron los siguientes:
ácidos grasos. La determinación de la LPS es útil para el diagnóstico de Temperatura constante . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . 37ºC Coeficiente de regresión (r) 2: 0,99732.
enfermedades del páncreas como pancreatitis aguda y obstrucción 2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada. Ecuación de la recta de regresión: y= 0,50054x + 3,9443.
pancreática1,7,8. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta 3. Pipetear en una cubeta(Nota 2): Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
todos los datos clínicos y de laboratorio. Blanco Patrón/ Muestra
R1 (mL) 1,0 1,0 INTERFERENCIAS
REACTIVOS
TRIS pH 8,3 40 mmol/L R2 (L) 200 200 Triglicéridos a 300 mg/dL interfieren en la determinación de la lipasa
R1 Colipasa > 1 mg/L Agua destilada (L) 10 -- reduciendo su actividad un 6%. Hemoglobina hasta 150 mg/dL y bilirrubina
Tampón Desoxicolato 1,8 mmol/L hasta 20 mg/dL no interfieren2,3,4. Se han descrito varias drogas y otras
Patrón / Muestra (L) -- 10
Taurodesoxicolato 7,2 mmol/L
4. Mezclar, incubar a 37ºC 1 minuto. substancias que interfieren en la determinación de la Lipasa5,6.
R2
Tartrato pH 4,0 15 mmol/L 5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el
Substrato NOTAS
Substrato de Lipasa > 0,7 mmol/L cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 2 minutos.
(micro- Cloruro calcico (CaCl 2) 0,1 mmol/L 6. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (A/min). 1. En algunas condiciones de almacenamiento (p.e. almacenaje a
emulsión) temperatura inferior a la recomendada) puede aparecer precipitación,
Patrón. Suero humano liofilizado. CALCULOS que no influye en su funcionalidad; es recomendable resuspender
LIPASE CAL La actividad de la LPS (U/L de metilresorufin a 37ºC) está (A/min) Muestra - (A/min) Blanco= (A/min) Muestra mediante rotación suave del vial.
indicada en la etiqueta del vial 2. A fin de evitar contaminaciones se recomienda utilizar material de
(A/min) Patrón - (A/min) Blanco= (A/min) Patrón plástico de un solo uso.
PRECAUCIONES 3. BSM dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de este
LIPASE CAL Todos los componentes de origen humano han resultado ser reactivo en distintos analizadores.
negativos para el antígeno HBs, HCV y para el anti-HIV (1/2). Sin embargo, ΔA/min Muestra
deben tratarse con precaución como potencialmente infecciosos. x Actividad Calibrador = U/L de lipasa en la muestra BIBLIOGRAFIA
ΔA/min Patrón 1. McNeely M. Lipase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
PREPARACION Toronto. Princeton 1984; 1130-1134, 892.
- R1 – R 2 Listos para su uso. Estabilidad una vez abierto 90 días a Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte 2. Neumann U et al. Comptes Rend. 4 colloque de Pont-a-Musson, Masson 627-
2-8ºC. R2 Mezclar suavemente antes de usar (Nota 1). 1 mol de substrato por minuto, en condiciones estándar. La concentración se 634 (1979)
- LIPASE CAL: Reconstituir (  ) con 1 mL de agua destilada. Tapar y mezclar expresa en unidades por litro (U/L). 3. Junge W et al. [Link]., 21 445-451 (1983).
Factor conversión: LPS [U/L] x 0,01667= LPS [µkal /L] 4. Neumann U et al. Methods of Enzymatics Analysis, 3rd ed. Vol.4, 26-34 (1984)
suavemente hasta disolver su contenido. Estabilidad: 7 días a 2-8ºC o 3 5. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
meses a –20ºC. 6. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
CONTROL DE CALIDAD
7. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
CONSERVACION Y ESTABILIDAD Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados.
8. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados revisar el instrumento, los reactivos y la técnica.
a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
VALORES DE REFERENCIA1
- Presencia de partículas y turbidez.
< 38 U/L (U/L de metilresorufina a 37ºC).
- Absorbancias del Blanco a 580 > 1,4.

BEIS19-E 25/07/17
Bio-Science Medical S.L. C/ Velázquez,126 7º 28006 MADRID (SPAIN)
 Lipase. Kinetic colorimetric. Liquid
Quantitative Determination of lipase
Ref.:LIP-027
LIPASE
Only for in vitro use in clinical laboratory R1 2 x 50 mL
Store at 2-8ºC R2 1 x 20 mL

PRINCIPLE OF THE METHOD - Thermostatic bath at 37º C ( 0,1ºC) If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/10
The pancreatic lipase in presence of colipase, desoxycholate and calcium - Matched cuvettes 1,0 cm light path. with NaCl 9 g/L and multiply the result by 10.
ions, hydrolyses the substrate 1-2-O-dilauryl-rac-glycero-3-glutaric acid-(6' - - General laboratory equipment. Precision:
methylresorufin)-ester. The sequence of reactions involved in the enzymatic Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)
direct lipase determination is the following: SAMPLES Mean (U/L) 40,2 59,35 38,5 58,9
1-2-O-dilauryl-rac-glycero-3-glutaric-(6' -methylresorufin)-ester Serum or plasma with sodium citrate, EDTA or heparin1. SD 0,410 0,875 1,10 1,25
Lipase Avoid repeated frozen and unfrozen. Stability: 2 days at 2-8ºC. CV (%) 1,02 1,47 2,86 2,13
 1-2-O-dilauryl-rac-glycerol + Glutaric-6'-methylresorufin-ester (no Sensitivity: 1U/L = 0,00059792 (A)
PROCEDURE
OH  Accuracy: Results obtained using BSM reagents (y) did not show systematic
stable) 
 Glutaric acid + Methylresorufin 1. Assay conditions: differences when compared with other commercial reagents (x).
The rate of methylresorufin formation, measured photometrically, is proportional Wavelength: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 580 nm The results obtained using 101 samples were the following:
to the catalytic concentration of lipase present in the sample. Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . 1 cm light path Correlation coefficient (r) 2:0.99732.
Constant temperature . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC Regression equation: y= 0.50054x + 3.9443.
CLINICAL SIGNIFICANCE 2. Adjust the instrument to zero with distilled water. The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.
Lipase (LPS) is a pancreatic enzyme necessary for the absorption and digestion 3. Pipette into a cuvette(Note 2):
of nutrients that catalyzes the hydrolysis of glycerol esters of fatty acids. Blank Standard / Sample INTERFERENCES
Determination of LPS is used for diagnosis of diseases of pancreas such as R 1 (mL) 1,0 1,0 Triglycerides at 300 mg/dL interfere on determination reducing the activity of
acute and chronic pancreatitis and obstruction of the pancreatic duct1,7,8. R 2 (L) 200 200
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it should integrate enzyme of 6%. Hemoglobin concentration lower than 150 mg/dL and Bilirubin
clinical and other laboratory data. Distilled water (L) 10 -- lower than 20 mg/dL do not interfere2,3,4. A list of drugs and other interfering
Standard / Sample (L) -- 10 substances with lipase determination has been reported by Young et. al 5,6.
REAGENTS
4. Mix, incubate at 37ºC for 1 minute.
TRIS pH 8.3 40 mmol/L 5. Read initial absorbance (A) of the sample, start the stopwatch and read NOTES
R1 Colipase > 1 mg/L 1. In some storage conditions (i.e. storage at a temperature lower that the
absorbances at 1 minute intervals thereafter for 2 minutes.
Buffer Desoxycholate 1,8 mmol/L 6. Calculate the difference between absorbances and the average one indicate) a precipitate may appear in the vial that will not influence
Taurodesoxycholate 7,2 mmol/L absorbance differences per minute (A/min). that the reagent performance; however, it is recommended to
R2 resuspend the product with a slight rotation.
Tartrate pH 4,0 15 mmol/L 2. In order to avoid contamination it is recommended to use disposable
Substrate CALCULATIONS
Lipase substrate > 0,7 mmol/L material.
(micro- (A/min) Sample - (A /min) Blank = (A /min) of sample
Calcium chloride (CaCl 2) 0,1 mmol/L 3. BSM has instruction sheets for several automatic analyzers.
emulsion)
Standard. Lyophilised human serum (A/min) Standard - (A/min) Blank= (A/min) of Standard
BIBLIOGRAPHY
LIPASE CAL The LPS activity (U/L methylresorufin at 37ºC) is indicate on 1. McNeely M. Lipase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
the label of the vial. A/min Sample Toronto. Princeton 1984; 1130-1134, 892.
x Calibrador activity = U/L of lipase in the sample 2. Neumann U et al. Comptes Rend. 4 colloque de Pont-a-Musson, Masson 627-
PRECAUTIONS
A/min Standard 634 (1979)
LIPASE CAL Components from human origin have been tested and found to be 3. Junge W et al. [Link]., 21 445-451 (1983).
negative for the presence of HBsAg, HCV, and antibody to HIV (1/2). However 4. Neumann U et al. Methods of Enzymatics Analysis, 3rd ed. Vol.4, 26-34 (1984)
Units: One international unit (IU) is the amount of enzyme that transforms 1 mol 5. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
handle cautiously as potentially infectious.
of substrate per minute, in standard conditions. The concentration is expressed 6. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
in units per litre of sample (U/L). 7. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
PREPARATION 8. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Conversion factor: LPS [U/L] x 0,01667= LPS [µkal/L]
- R1 – R2 Ready to use. Stability after opening 90 days at 2-8ºC.
- R2 Mix gently before use (Nota 1).
QUALITY CONTROL
- LIPASE CAL: Dissolve with 1 mL of distilled water. Cap and mix gently to
Control sera are recommended to monitor the performance of assay
dissolve contents. Stability: 7 days at 2-8ºC or 3 months at –20ºC.
procedures.
If control values are found outside the defined range, check the instrument,
STORAGE AND STABILITY
reagents and technique for problems.
All the components of the kit are stable until the expiration date on the label
Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective
when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light and contaminations
actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
prevented during their use. Do not use reagents over the expiration date.
REFERENCE VALUES1
Signs of reagent deterioration:
< 38 U/L (U/L methylresorufin at 37ºC).
- Presence of particles and turbidity.
- Blank absorbance (A) at 580 nm  1.4. These values are for orientation purpose; each laboratory should establish its
own reference range.
- R 2 is a turbid orange-colored micro-emulsion, discard if turning to red.

ADDITIONAL EQUIPMENT PERFORMANCE CHARACTERISTICS

BEIS19-I 25/07/17
Bio-Science Medical S.L. C/ Velázquez,126 7º 28006 MADRID (SPAIN)