Nocardia: N.
Asteroides
La familia Nocardiaceae está compuesta por más de 50 especies, de las cuales la mitad son
patógenos.
Están ampliamente diseminadas en la naturaleza (saprófitas).
Son transportadas por el viento, tienen un mecanismo de transmisión frecuente por medio de la
inhalación, inoculación traumática en la piel o mucosa ocular.
Las infecciones ocasionadas por bacterias del género Nocardia generalmente son oportunistas.
Esto quiere decir que afectan a los individuos cuyo sistema inmunológico se encuentra
debilitado.
Las infecciones causadas por alguna especie de este género se conocen con el nombre de
nocardiosis.
La nocardiosis produce principalmente infección pulmonar invasiva o diseminada.
Este género de bacterias tardan más de siete días en generar las colonias cuando son
cultivadas en el laboratorio de forma artificial. Se han observado cultivos en los que incluso han
pasado 14 días hasta que se hacen evidentes las colonias.
La tinción de Kinyoun es una técnica de coloración utilizada para teñir
bacterias y parásitos ácido alcohol resistentes. Nació de la
modificación de la coloración de Ziehl-Neelsen. Ambas técnicas se
interpretan de la misma manera, pero se diferencian en dos
elementos: en la preparación del reactivo principal y en que la técnica
de Kinyoun no emplea calor.
Coloración de bacilos ácido -alcohol resistentes (BAAR):
Ziehl-Neelsen
El objetivo de la tinción de Ziehl-Neelsen es diferenciar entre bacilos acidorresistentes y no
acidorresistentes.
La resistencia de las bacterias a la decoloración con ácidos fuertes, después de la coloración
con solución de fucsina caliente, se denominan como “acidorresistentes” o “ácido-alcoholes
resistentes”.
La resistencia ácido-alcohol es la capacidad de incorporar ciertos colorantes y retenerlos
después de someterlos a la acción de ácidos y alcohol, y está determinada por la presencia de
ácidos grasos (ácido micólico) en la pared celular .
Los bacilos ácido-alcohol resistentes (BAAR) se observan de color rojo al ser coloreados con
los colorantes para Ziehl Neelsen, mientras que otras células se colorean de toos de azul.
La coloración de Ziehl Neelsen utiliza compuestos básicos de fucsina y fenol, calor y
un agente decolorante (ácido-alcohol) y una contratinción con azul de metileno.
Esta técnica se utiliza en microorganismos que no se tiñen con facilidad, como con la
tinción de Gram.
Los pasos son los siguientes:
● Preparación del extendido: Es conveniente efectuar un examen directo y
del homogeneizado. Para la homogeneización se añade un volumen
equivalente de NaOH 4% al material en estudio. Se coloca en la estufa a 37 C
durante 15 a 30 minutos y se centrifuga a 3000 r.p.m. durante 20 minutos.
Se vuelca el sobrenadante y se realiza el extendido del centrifugado con
ansa.
● Secado del extendido: Colocar el portaobjetos en posición horizontal
dentro de la estufa de cultivos o sobre la corriente de aire caliente de un
mechero.
● fijado del extendido: mediante el calentamiento suave, flameando sobre la
llama. Esto se efectúa pasando 3 veces el lado del portaobjeto que no tiene
la preparación sobre la llama del mechero para que la misma adquiera una
temperatura aproximada de 80 C.
● coloración:
1. colocar un pequeño trozo de papel filtro un poco más largo que el
tamaño del preparado sobre el portaobjetos (importante: el papel del
filtro tiene que estar por encima del extendido).
2. cubrir el extendido con Fucsina para Ziehl Neelsen.
3. flamear por debajo del portaobjetos hasta el desprendimiento de
vapores blancos (evitar que se produzca la ebullición por exceso de
calor).
4. dejar enfriar por 5 minutos y repetir el flameado hasta nuevo
desprendimiento de vapores blancos.
5. Dejar enfriar por 5 minutos. cuando esté frío, mediante el uso de
pinzas, quitar el papel de filtro.
6. lavar con agua corriente.
7. cubrir con el decolorante para Ziehl Neelsen. dejar 2 minutos. realizar
sucesivos lavados hasta que no se desprenda más colorante
(aproximadamente 2 minutos; en el caso de preparados gruesos,
puede requerirse mayor tiempo).
8. lavar con agua corriente.
9. cubrir con azul de metileno para Ziehl Neelsen. dejar 30 seg.
10.lavar con agua corriente durante 30 seg.
11.secar el extendido.
● limitaciones
• La coloración de Ziehl Neelsen no reemplaza el cultivo de
micobacterias.
• Algunos microorganismos además de las micobacterias pueden
presentar distintos grados de ácido resistencia. Tal es el caso de
Rhodococcus spp., Nocardia spp.
• Las micobacterias de rápido crecimiento pueden diferir en su
capacidad de retener los colorantes.
• La decoloración de los extendidos tiene que ser apropiada. Los
microorganismos que son realmente ácido alcohol resistentes,
retienen la carbolfucsina.
• No preparar extendidos demasiado gruesos ya que puede afectar la
decoloración. También el contracolorante puede dificultar la visualización de
los BAAR.
• Algunos fármacos utilizados en el tratamiento de la tuberculosis, hacen
perder la ácido-resistencia de los bacilos, observándose esta característica de
las cepas sensibles a la isoniazida y a la alfa etiltioisonicotinamida
(ethionamida).
BIBLIOGRAFÍA
- Lifeder. (30 de marzo de 2022). Nocardia. Recuperado de:
https://www.lifeder.com/nocardia/.
- Lifeder. (19 de febrero de 2021). Tinción de Ziehl-Neelsen. Recuperado de:
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%20visualizaci%C3%B3n. Dr. Martin Passen
