OBSERVACIÓN DE CÉLULAS Y TINCIÓN
DE GRAM
Jesús Manuel Sarmiento Vega
Facultad Ciencias Básicas y Aplicadas
Agroecología
Universidad de La Guajira
Fecha de práctica: 11 de abril de 2025
Fecha de entrega: 5 de mayo de 2025
Docente: Marisol Santos Acevedo
Riohacha-La Guajira
INTRODUCCIÓN
El estudio de microorganismos mediante el microscopio óptico ha sido fundamental para la
comprensión de los seres vivos unicelulares y su clasificación. En esta práctica, se realizaron
observaciones microscópicas de microorganismos presentes en agua estancada y cultivos
bacterianos, aplicando exitosamente la técnica de tinción de Gram para diferenciar
bacterias Gram positivas y Gram negativas. Esta metodología es clave en microbiología, ya
que permite la caracterización estructural de la pared celular bacteriana (Madigan et al.,
2019).
OBJETIVOS
- Reconocer las características diferenciales de las bacterias Gram positivas y Gram
negativas mediante tinción de Gram.
- Identificar orgánulos y estructuras en células eucariotas observables al microscopio
óptico.
- Aplicar correctamente la metodología de tinción de Gram y el manejo adecuado del
microscopio.
MATERIALES Y MÉTODOS
Materiales proporcionados por el laboratorio:
- Microscopio óptico
- Láminas porta y cubre objetos
- Pipetas Pasteur
- Vidrio de reloj
- Papel de arroz
- Colorantes: violeta de genciana, lugol, alcohol-acetona, safranina, azul de metileno
- Aceite de inmersión
- Agua estancada y cultivo de bacterias
- Mechero y alcohol para encendido
Materiales del estudiante:
- Papel secante
- Cinta de enmascarar
- Tijeras
- Guantes de nitrilo
- Tapabocas
- Cuaderno de laboratorio
Procedimiento:
Se tomó una gota de agua estancada con una pipeta Pasteur y se colocó en el centro de un
portaobjetos limpio. Se cubrió con un cubreobjetos y se observó con el microscopio óptico
en aumentos de 4x y 40x. Para la tinción de Gram, se prepararon frotis con cultivos
bacterianos. Se aplicó la secuencia clásica de tinción: violeta de genciana, lugol, alcohol-
acetona (decolorante) y safranina. Se observó la coloración resultante en el microscopio. El
procedimiento funcionó correctamente, permitiendo identificar los tipos de bacterias
presentes y la mitosis
RESULTADOS
Tabla 1. Identificación de bacterias según tinción de Gram
Morfología Tipo de tinción Color observado Clasificación
Bacilos Gram positivo Violeta Gram +
Filamentos curvos Sin tinción Gram Verde-azulado Cianobacterias
(espirilos) natural (Espirulina)
Bacilos filamentosos Gram negativo Rosado Gram -
DISCUSIÓN
La tinción de Gram permitió diferenciar exitosamente los tipos de bacterias presentes en la
muestra. Los bacilos que se tiñeron de violeta fueron identificados como Gram positivos, lo
que indica una pared celular gruesa rica en peptidoglicano. Los bacilos rosados fueron
clasificados como Gram negativos, con una pared celular más delgada y una membrana
externa adicional (Tortora et al., 2021). La observación de Spirulina, una cianobacteria
fotosintética, fue posible sin tinción, debido a sus pigmentos naturales. La correcta
aplicación del protocolo permitió superar los errores previos y obtener resultados
funcionales.
CUESTIONARIO
1. a. Lente objetivo de menor aumento (4X)
2. a. Lente objetivo de menor aumento (4X)
3. a. Lente objetivo de menor aumento (4X) (5X ocular x 4X objetivo = 20X)
4. b. Lente objetivo de mayor aumento (40X) (10X ocular x 40X objetivo = 400X)
5. a. Lente objetivo de menor aumento (4X)
La tinción de Gram permite clasificar a los microorganismos en dos grupos:
- Gram positivos: se tiñen de violeta.
- Gram negativos: se tiñen de rosado.
Cuidados al usar el aceite de inmersión:
- Aplicar solo con el objetivo de 100X.
- Evitar el contacto del aceite con otros lentes.
- Limpiar cuidadosamente después del uso.
CONCLUSIONES
- La tinción de Gram permitió identificar y diferenciar bacterias Gram positivas y negativas
con base en su coloración.
- Las bacterias Gram positivas se tiñen de violeta y las Gram negativas de rosado.
- La observación de Spirulina evidenció su morfología filamentosa y pigmentación
característica.
- La aplicación correcta del protocolo permitió superar errores previos y obtener resultados
funcionales.
- Se fortalecieron habilidades prácticas en el uso del microscopio y técnicas de tinción.
REFERENCIAS
Madigan, M. T., Bender, K. S., Buckley, D. H., Sattley, W. M., & Stahl, D. A. (2019). Brock
Biology of Microorganisms (15ª ed.). Pearson.
Tortora, G. J., Funke, B. R., & Case, C. L. (2021). Microbiología (12ª ed.). Panamericana.
Prescott, L. M., Harley, J. P., & Klein, D. A. (2002). Microbiología (5ª ed.). McGraw-Hill.
Imagen de la mitosis
