UNNOBA – INTRODUCCIÓN A LA BIOLOGÍA
Organización celular - Métodos de estudio de las células.
UNIDAD 4: ORGANIZACIÓN CELULAR
TRABAJO EXPERIMENTAL 3
METODOLOGÍA PARA EL ESTUDIO DE LA CÉLULA
MICROSCOPÍA
FUNDAMENTOS
MANEJO DEL MICROSCOPIO
1. Colocar el microscopio frente a la fuente luminosa, a una distancia de 20-30 cm (siempre que la lámpara
no esté incluida en el estativo). Levantar el condensador hasta su tope. Abrir completamente el diafragma iris.
Mover el espejo (usar la cara plana) para dirigir la luz hacia el condensador, hasta que su lente frontal quede
totalmente iluminada.
2. Colocar la preparación en la platina, asegurándose que el objeto quede hacia arriba.
3. Intercalar el objetivo de menor aumento, ya que con un objetivo de poco aumento (ej.: de 4 ó 10 X) se
domina un campo visual mayor y, por lo tanto, es el más adecuado como "objetivo buscador". Por otra parte, la
profundidad de imagen es mayor que con objetivos potentes y, por consiguiente, costará menos encontrar el plano
de nitidez.
4. Bajar el tubo del microscopio mediante el tornillo macrométrico, acercando cuidadosamente la lente
frontal del objetivo a la preparación. Mirar lateralmente, con la vista a la altura de la platina, para evitar la rotura
del preparado o, lo que puede ser más grave, la rotura o deterioro de la lente objetivo.
5. Si el microscopio es binocular, ajustar la distancia entre los dos oculares a la distancia interpupilar del
observador.
6. Mirando a través del ocular, levantar el tubo mediante el tornillo macrométrico de enfoque aproximado
hasta encontrar la imagen del objeto.
7. El enfoque exacto se logra con el tornillo micrométrico hasta obtener la imagen perfectamente nítida.
8. Modificar la altura del condensador y la abertura del diafragma hasta lograr obtener el mejor contraste. El
condensador estará debidamente regulado cuando se encuentra en la posición más alta o un poco por debajo de la
misma. El diafragma no debe estar completamente abierto ni demasiado cerrado. No utilizar el diafragma para
reducir la claridad; para ello disminuir la intensidad de la lámpara o interponer filtros.
9. Desplazar la zona de la preparación que se desea examinar al centro del campo visual. Mover
constantemente el tornillo micrométrico de enfoque fino, a fin de examinar toda la profundidad de la preparación.
10. Si se desea mayor aumento se gira el revólver y se intercala otro objetivo, teniendo en cuenta que al
utilizar aumentos mayores el campo visual se reduce, será necesario regular nuevamente la iluminación.
11. Enfoque con objetivo de inmersión. Los objetivos de inmersión se identifican por un anillo color
negro pintado en la montura cerca de la lente. Los objetivos de 100 X son siempre de inmersión en aceite. Por su
gran aumento y apertura numérica elevada, son siempre de distancia focal muy corta, de allí que la distancia frontal
sea también muy corta (prácticamente apoyan sobre el cubreobjetos). Por lo tanto, para su enfoque debe
procederse con especial cuidado para no dañar la lente.
Sin desenfocar, se retira el objetivo a seco que esté colocado, girando el revólver. Se coloca sobre el
cubreobjetos una gota de aceite de inmersión sintético de índice de refracción semejante al vidrio
(aproximadamente 1,51). Mirando lateralmente se gira el revólver para ubicar el objetivo de inmersión de modo que
su lente frontal tome contacto con la gota de aceite. Cuidar que la lente no roce con la platina o con el cubreobjetos.
Observando por el ocular realizar el enfoque fino con el tornillo micrométrico. Regular la iluminación: condensador
alto, diafragma más abierto.
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Importante: en el caso de microscopios con objetivos no "igualados" (la distancia entre preparación e
imagen del objetivo no es constante), se debe elevar el tubo antes de colocar el objetivo de inmersión. Luego bajar
el tubo mirando lateralmente la platina hasta que la lente frontal se sumerja en el aceite (cuidar de no presionarla
contra el preparado). Realizar el enfoque aproximado levantando ligeramente con el tornillo macrométrico (sin que
se corte la gota de aceite) y luego el enfoque fino con el micrométrico. Regular la iluminación.
CUIDADOS Y LIMPIEZA DEL MICROSCOPIO
• Siendo el microscopio un instrumento del que se exige extraordinaria precisión óptica y mecánica, debe ser
cuidado con esmero.
• Deberá protegerse del polvo y de la humedad, como así también de todo agente corrosivo (álcalis, ácidos, etc.)
que pueda atacar sus partes mecánicas y ópticas; no sólo debe evitarse el contacto directo sino también que
sea alcanzado por emanaciones.
• La lente frontal de los objetivos está sumamente expuesta a ensuciarse por su proximidad a la preparación, al
líquido de inmersión del cubre, a las manos del operador cuando éste acciona el revólver o manipula la
preparación.
La mejor forma de limpiar la lente frontal de los objetivos es utilizar un paño de algodón perfectamente
lavado y libre de polvo (o un trozo de algodón), seco o ligeramente humedecido con agua destilada, la cual puede
suplirse echando el aliento sobre la superficie del cristal.
NO DEBE UTILIZARSE XILOL NI NINGÚN OTRO SOLVENTE PARA LA LIMPIEZA DEL
MICROSCOPIO.
• Una vez finalizado el uso del microscopio se debe: apagar la lámpara, retirar y guardar los preparados, limpiar la
platina y las lentes, comenzando por los oculares, los objetivos a seco y, por último, los objetivos de inmersión.
PROTOCOLO DE LAS EXPERIENCIAS
MÉTODOS PARA EL EXAMEN CITOLÓGICO
I. EXAMEN INMEDIATO
1.- Observación de tejido vegetal: Catáfila de cebolla (Allium cepa)
Con un bisturí se efectúa una incisión en la catáfila de una cebolla, con una pinza se extrae una delgada
película de epidermis y se deposita sobre un cubreobjetos. Observar al microscopio con objetivos a seco
comenzando por el de menor aumento. Esquematizar la observación.
2.- Observación de una gota de agua estancada
Colocar entre porta y cubre una gota de agua estancada. Observar al microscopio con objetivos a seco
comenzando por el de menor aumento. Explicar lo observado.
3. Observación de levaduras de una muestra de levadura comercial
Preparar una suspensión de levadura en solución salina. Observar. Esquematizar.
4. Observación de ciclosis en Elodea (monocotiledónea acuática). Colocar entre porta y cubre un trocito de
Elodea. Observar.
5. Observación de bacterias. Colocar una gota de yogurt entre porta y cubreobjetos. Observar
II. EXAMEN MEDIATO
6. Observación de bacterias de placa dental
Con espátula tomar material de la parte basal de los dientes, depositarlo sobre un portaobjetos, extenderlo
y fijar por calor suave sobre la llama de mechero. Colorear con azul de metileno de Loefler durante 3 minutos y
lavar con agua. Esquematizar cocos y bacilos.
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7. Observación de bacterias teñidas con la tinción de Gram
En preparaciones de frotis de bacterias previamente fijados y coloreados observar cocos y bacilos Gram
positivos y Gram negativos.
La técnica es capaz de diferenciar dos grandes grupos de eubacterias: Gram positivas y Gram
negativas.
La tinción de Gram requiere cuatro soluciones:
1. Primer colorante: Es un colorante básico. El más utilizado es el cristal violeta
2. Solución mordiente: Fija las tinciones y aumenta la afinidad entre el colorante y las células. Uno de los
mordientes empleados suele ser solución de Lugol (I2-IK).
3. Agente decolorante: es un disolvente orgánico, [Link]. alcohol-acetona (1:1).
4. Colorante de contraste: Es un colorante básico de distinto color que el primer colorante, como, [Link]., la
safranina o la fucsina.
Los dos grupos bacterianos que distingue esta técnica difieren en el color con el que finalmente
aparecen. Las bacterias Gram (+) se teñirán de azul por el cristal violeta y no perderán esta coloración durante
los pasos sucesivos. Las bacterias Gram (–) perderán la coloración inicial del cristal violeta en los siguientes
pasos y se teñirán de rosa debido a la safranina o la fucsina.
8. Observación de corte histológico de testículo de ratón
A partir de tejido fijado e incluido en parafina, se obtuvieron cortes con micrótomo que colocados sobre un
portaobjetos fueron desparafinizados e hidratados. El preparado fue teñido con fucsina básica decolorada y
hematoxilina. Observar al microscopio la estructura del tejido.
9. Observación de células descamativas de epitelio bucal
Con un portaobjetos, efectuar un raspado de la mucosa bucal; depositar el material sobre otro portaobjetos,
añadirle una gota de solución acuosa de Eosina al 1%, extender y colocar un cubreobjetos. Observar al
microscopio. Esquematizar la observación.
LUPA ESTEREOSCÓPICA
Observación de flores, insectos, hongos en alimentos enmohecidos. Comparar aumentos y formación de
imágenes con el microscopio compuesto.
