REPLICACION DEL ADN

Proceso por el cual, a partir de una molécula de DNA que se utiliza

como molde, se obtienen dos moléculas de DNA idénticas.
ESQUEMA GENERAL:

Plantilla
Resultado:
2 DNA
idénticos al
original

Plantilla
DNA original Las dos cadenas se separan
y sirven como plantilla
Plantilla = molde

Síntesis de Durante la división

celular cada copia va a
nueva cadena una célula diferente.
LA REPLICACIÓN SE PRODUCE DURANTE LA INTERFASE DEL CICLO
CELULAR (FASE S), PREVIA A LA MITOSIS O A LA MEIOSIS.
La replicación del DNA ocurre una sola vez durante el ciclo celular.
 C A R A C T E R Í S T I C A S

• SÍNTESIS SIMULTÁNEA,
SECUENCIAL Y BIDIRECCIONAL
• CARÁCTER SEMIDISCONTÍNUO
• CARÁCTER
SEMICONSERVADOR
3 MECANISMOS TEÓRICOS DE LA
REPLICACIÓN DEL DNA:

Replicación Replicación Replicación

conservadora dispersante semiconservadora
REPLICACIÓN
CONSERVADORA
Un complejo enzimático recorrería todo el
DNA, reconociendo la secuencia de ambas
hebras para copiarlas simultáneamente,
de forma que el DNA progenitor de doble
hebra se conservaría intacto mientrasque
el DNA hijo contendría dos hebras
totalmente nuevas.

REPLICACIÓN
DISPERSIVA

El DNA progenitor se rompería varias

veces antes de que se sintetizaranlos
nuevos fragmentos de DNA. Éstos se
unirían al DNA progenitor para dar
lugar a los DNA hijos, ambos con
fragmentos tanto nuevos como de las
dos hebras del DNA progenitor.
CARÁCTER SEMICONSERVADOR DE LA REPLICACIÓN

Replicación semiconservadora
Es el mecanismo real.

Las dos hebras del DNA

progenitor sirven de molde para
la síntesis de sus respectivas
hebras complementarias.

Cada DNA hijo está formado por

una hebra progenitora y otra hija
(recién sintetizada).

El mecanismo se repite en
sucesivas generaciones de células.

Siempre se conserva la mitad de

la molécula original.
 SÍNTESIS SIMULTÁNEA, SECUENCIAL Y
BIDIRECCIONAL
▪ La síntesis comienza en puntos concretos de la molécula de DNA
denominados orígenes de replicación. En cada uno de ellos se
produce la apertura local de la doble hélice y comienza la
síntesis simultánea de las dos hebras nuevas.

▪ Las dos hebras nuevas se van alargando progresivamente, por

adición secuencial de nucleótidos.

▪ La separación de las hebras progenitoras, que comienza en cada

origen, progresa en ambas direcciones, por lo que la replicación
es bidireccional. A los puntos de transición entre la doble hebra
y las hebras sencillas se los llama horquillas de replicación, y van
alejándose entre sí.
CADA ORIGEN DA LUGAR A LA REPLICACIÓN DE UNA REGIÓN
DEL DNA. LA UNIDAD DE REPLICACIÓN SE DENOMINA

En eucariotas la replicación es MULTIFOCAL.

 LA SEPARACIÓN DE LA DOBLE HÉLICE DE DNA
PRODUCE UNA BURBUJA DE REPLICACIÓN. EN UNA
BURBUJA DE REPLICACIÓN EXISTEN 2 HORQUILLAS.
Horquilla Horquilla

Burbuja de replicación

En cada horquilla se produce la síntesis simultánea de las

dos hebras nuevas por adición secuencial de nucleótidos.
CARÁCTER SEMIDISCONTÍNUO DE LA
REPLICACIÓN
Se debe a que las dos hebras del DNA son antiparalelas y las enzimas de la replicación son unidireccionales.
En cada horquilla la síntesis de las 2 hebras nuevas ocurre por mecanismos diferentes.
Una hebra se sintetiza hacia la horquilla de manera contínua y la otra hebra se sintetiza
alejándose de la horquilla por pequeños fragmentos (síntesis discontínua).
En la horquilla vecina ocurre lo opuesto.
Así, cada hebra tiene regiones de síntesis contínua y regiones de síntesis discontínua.
A esto se le llama SEMIDISCONTINUIDAD de la replicación.
 LA REPLICACIÓN DEL DNA CONSISTE EN LA
M ADICIÓN SECUENCIAL DE NUCLEÓTIDOS
COMPLEMENTARIOS A LOS DE LA HEBRA MOLDE.
E El nucleótido seleccionado se adiciona al extremo 3‘ – OH libre de la cadena en crecimiento
(inicialmente del cebador) formando un enlace 3‘ - 5‘ fosfodiéster. Antes del ensamblado, el
C nucleótido seleccionado pierde 2 fosfatos y se incorpora como nucleótido monofosfato.

A
N
I
S
M Pirofosfato
inorgánico

O
Una pirofosfatasa desdobla el PPi en 2 Pi asegurando la irreversibilidad de la reacción.
La ruptura del enlace proporciona la energía necesaria para la reacción.
R E Q U E R I M I E N T O S

MOLDE (PLANTILLA) DE DNA

Cadena iniciadora (cebador o primer)

Sustratos

Cofactores Iones metálicos bivalentes (Mg2+)

Maquinaria de replicación
MOLDE (PLANTILLA) DE DNA
Determina el orden correcto de incorporación de los nucleótidos.
Se van adicionando de manera secuencial los nucleótidos
complementarios a los del DNA molde.
CADENA INICIADORA (CEBADOR O PRIMER)
La replicación no es autoiniciadora, sino que solo alarga cadenas preexistentes.
Por tanto necesita una cadena iniciadora que aporte un extremo 3‘ – OH libre.
El cebador generalmente consiste en un oligonucleótido de RNA apareado de
forma complementaria y antiparalela con la hebra molde.
 SUSTRATOS
Son los nucleótidos trifosfato (desoxirribonucleótidos y ribonucleótidos).
Se adicionan a la cadena en crecimiento como nucleótidos monofosfato.

Adenina
Base Timina
Citosina
nitrogenada Guanina

Azúcar
Desoxirribosa
Ribosa

Nucleótidos trifosfato: ATP – TTP – CTP – GTP

La energía es proveída por la hidrólisis de los sustratos.
MAQUINARIA DE REPLICACIÓN
Estuche de herramientas necesarias para la replicación del DNA.
PROTEÍNAS ENZIMÁTICAS PROTEÍNAS NO ENZIMÁTICAS

▪ Helicasas ▪
▪ Topoisomerasas
▪ DNA polimerasas
▪ RNA polimerasas ▪
▪ Nucleasas ▪
▪ Ligasas
▪ Telomerasas
EN EUCARIOTAS SE CONOCEN 5 TIPOS DE DNA
POLIMERASAS
DNA polimerasas dependientes de DNA

DNA pol FUNCIÓN

Alfa Actividad primasa: inicia la síntesis mediante la formación de un RNA cebador
Actividad polimerasa: elongación inicial del cebador
Beta No interviene en la replicación. Está implicada en la reparación de errores o
daños en el DNA.
Gamma Actividad polimerasa: replica el DNA mitocondrial
Delta Actividad polimerasa: elonga la cadena discontínua
Épsilon Actividad polimerasa: elonga la cadena contínua
La síntesis de DNA es muy rápida:
▪ Procariotas: ≈ 1000 nucleótidos por minuto
▪ Eucariotas: menor velocidad (debido a los múltiples orígenes de replicación)

PROCESIVIDAD:
▪ Número de nucleótidos que son incorporados a la hebra sin que
la enzima se separe del molde
▪ Las polimerasas de mayor procesividad son las que intervienen
en la elongación de las hebras de DNA
 La alta procesividad se consigue gracias a una molécula que abraza
o rodea al molde de DNA, evitando que la enzima se separe.
Este mecanismo se denomina pinza deslizante.

En eucariotas la pinza
deslizante se debe a
las proteínas PCNA.

La proteína RFC ayuda a

ensamblar la pinza PCNA.

Requieren pinza deslizante

PCNA y cargador de pinza RFC:
delta y épsilon
LA DNA POLIMERASA RECORRE LA HEBRA MOLDE EN DIRECCIÓN
3′ → 5′ Y AÑADE NUCLEÓTIDOS GENERANDO UNA NUEVA
CADENA QUE VA CRECIENDO EN SENTIDO CONTRARIO
(CADENA ANTIPARALELA).
La nueva cadena de DNA se va sintetizando en dirección 5‘ → 3'

Hebra molde

Hebra molde
 CARACTERÍSTICAS DE LAS DNA
POLIMERASAS:

✓ Recorren la hebra molde en sentido 3‘ → 5‘ y sintetizan una

nueva hebra en sentido 5′ → 3′.

✓ No tienen capacidad para iniciar la síntesis de ADN. Sólo

pueden agregar nucleótidos al extremo 3′ de una cadena ya
iniciada.

✓ Algunas tienen actividad exonucleasa 3′ → 5′. Eliminan

nucleótidos que se encuentran en el extremo 3′ de la cadena.
ACTIVIDAD EXONUCLEASA
3′ → 5′
Función correctora de errores

Garantiza que la tasa de

errores durante la
replicación sea muy baja
De cada 10.000.000 de
nucleótidos añadidos, sólo uno
lleva una base erróneamente
apareada.

Tienen actividad exonucleasa 3‘ → 5‘:

gamma – delta – épsilon
 Son proteínas multiméricas
(generalmente hexámeros)

▪ Enzimas encargadas de separar las

dos cadenas de DNA.
▪ Rompen los puentes de hidrógeno entre
ambas cadenas de DNA utilizando la
energía derivada de la hidrólisis del ATP.
▪ Las dos horquillas creadas avanzan en
sentidos opuestos, cada una liderada por
una helicasa, que avanza en sentido 5‘ →
3‘ a lo largo de una de las cadenas de
DNA.
▪ Helicasa procariota: DnaB
▪ Helicasa eucariota: Mcm

Proteínas de unión a
DNA monocatenario:
▪ SSB en procariotas y RPA en eucariotas
▪ Evitan el reapareamiento de las dos cadenas separadas por la helicasa.
 Las topoisomerasas son enzimas encargadas
de relajar los superenrollamientos del DNA sin
modificar otros aspectos de su estructura.

La separación de las hebras ocasionada por la progresión de la helicasa a lo largo de la cadena de DNA
conlleva a la aparición de superhélices positivas (superenrollamientos) por delante de la horquilla. Para
aliviar la tensión se requiere algún tipo de mecanismo giratorio; de lo contrario el superenrollamiento
acumulado impediría el avance de la replicación. Esta función recae en las topoisomerasas.
 TIPOS DE REACCIONES QUE PUEDEN CATALIZAR LAS
TOPOISOMERASAS:

Superenrollamiento y relajación

Anudación y desanudación

Concatenación y desconcatenación
TOPOISOMERASA TIPO I:

▪ Corta transitoriamente una hebra de DNA (un enlace fosfodiéster)

▪ Deja pasar la otra hebra por la brecha abierta
▪ Vuelven a ligar (unir) la primera hebra

Las topoisomerasas tipo I participan en la transcripción y en la replicación del DNA.

Las topoisomerasas no eliminan ni agregan nucleótidos,

solo los separan momentáneamente y los vuelve a unir.
TOPOISOMERASA TIPO II: Es un homodímero (2 subunidades idénticas)
Las
topoisomerasas
tipo II
▪ Corta transitoriamente las dos hebras de DNA (dos enlaces fosfodiéster) participan en la
▪ Deja pasar otra doble hebra contínua por la brecha abierta replicación del
DNA.
▪ Vuelve a ligar (unir) la brecha formada
La topoisomerasa
tipo II procariota se
denomina GIRASA.

Unión a
ATP

Conformación abierta

Se liberan Una cadena se corta y la otra

los pasa por la brecha formada
segmentos
de DNA
Los extremos cortados
se vuelven a unir
 Es una RNA polimerasa dependiente de DNA que
sintetiza la cadena iniciadora (cebador o primer).
El cebador es una corta cadena de RNA complementaria a la hebra molde deDNA

▪ En eucariotas la actividad primasa recae en una de las subunidades de la DNA polimerasa alfa.
La acción polimerasa de esta enzima se encuentra en otra subunidad.
▪ En procariotas la primasa es una enzima independiente que forma parte de un complejo
proteico denominado primosoma (primasa + helicasa).
 ETAPAS DEL PROCESO

▪ Apertura de la doble hélice en los orígenes

▪ Creación de las horquillas de replicación
▪ Síntesis de cebadores

ELONGACIÓN
▪ Síntesis contínua
▪ Síntesis discontínua

TERMINACIÓN
▪ Apertura de la doble hélice en los
orígenes
▪ Creación de las horquillas de
replicación
▪ Síntesis de cebadores
 Un complejo de reconocimiento del
origen (ORC) reconoce el origen de
replicación que en levaduras contiene una
secuencia conservada denominada ARS.

Los factores permisivos (Mcm2 a Mcm7 =

helicasa eucariota) se unen al origen y forman
el complejo de prerreplicación capaz de iniciar
la replicación ante los estímulos adecuados. La
unión entre la helicasa y el DNA es mediada
por las proteínas Cdc6 y Cdt1.

Proteínas cinasas específicas

(Cdk y DDK) fosforilan y activan
al complejo de prerreplicación
al inicio de la fase S.

Las helicasas desenrollan el DNA

y su avance permite la creación
de las horquillas de replicación.
▪ Helicasa
▪ Proteínas de unión a DNA monocatenario (proteínas de unión a cadena sencilla)
▪ Topoisomerasas (tipo I y II)
▪ Primasa

Topoisomerasa

Proteínas de unión
a hebra sencilla

Helicasa
 Dirección: 3‘ → 5‘
DNA polimerasa:
Actividad: 5′ → 3′

Al separarse el dúplex de DNA, una cadena queda bien orientada para el avance de
la DNA polimerasa hacia la horquilla, en tanto la otra cadena queda mal orientada.

En cada horquilla la
síntesis de las 2 hebras
nuevas ocurre por
mecanismos diferentes.
 SÍNTESIS
Hebra molde bien orientada
CONTÍNUA
La nueva hebra crece hacia la horquilla

Hebra molde mal orientada Síntesis discontínua

La nueva hebra crece alejándose de la horquilla
SÍNTESIS CONTÍNUA A PARTIR DE LA CADENA BIEN ORIENTADA:
▪ La primasa sintetiza un cebador que proporciona un extremo 3’ – OH libre
▪ La DNA polimerasa épsilon agrega nucleótidos al extremo 3’ del cebador
▪ Se sintetiza una nueva cadena de DNA en dirección 5′ → 3′
▪ Esta cadena crece rápidamente, se la llama CADENA ADELANTADA o cadena contínua

La síntesis contínua
requiere UN SOLO
CEBADOR
SÍNTESIS DISCONTÍNUA A PARTIR DE LA CADENA MAL ORIENTADA:
▪ Una vez que la primasa sintetiza el cebador, la ADN polimerasa delta se mueve sobre
el molde y sintetiza una nueva hebra alejándose de la horquilla.
▪ A medida que la horquilla se separa, la ADN polimerasa se ve obligada a retroceder,
a fin de sintetizar otro fragmento a partir de un nuevo cebador.

De esta forma, la cadena va

creciendo por pequeños
fragmentos denominados
fragmentos de Okazaki.

La síntesis discontínua
requiere VARIOS
CEBADORES
 La DNA polimerasa épsilon
alarga la cadena contínua

La DNA polimerasa
delta alarga la
cadena discontínua
 LA CADENA RETRASADA FORMA UN ASA INVERTIDA PARA QUE SU
POLIMERASA AVANCE
HACIA LA HORQUILLA Y TENGA LA MISMA ORIENTACIÓN QUE LA DE
LA CADENA ADELANTADA.
Esto hace que ambas polimerasas se desplacen como parte de un solo complejo de replicación o
replisoma sin violar la regla de unidireccionalidad (5’ → 3’) para la síntesis de la cadena de DNA.
MADURACIÓN DE LOS FRAGMENTOS DE OKAZAKI:
▪ Eliminación de cebadores por nucleasas (FEN1)
▪ Relleno del hueco por adición de nucleótidos (DNA polimerasa delta)
▪ Unión de los extremos para formar una hebra contínua (DNA ligasa)
 LA REPLICACIÓN POR PASOS:
1. Se fijan las proteínas que reconocen los orígenes de replicación y luego la
helicasa para formar el complejo de prerreplicación.
2. Las proteínas Cdc6 y Cdt1 median la unión de la helicasa al DNA.
3. La helicasa rompe los puentes de hidrógeno de la doble hélice permitiendo el
avance de la horquilla de replicación.
4. Las proteínas RPA se unen a ambas hebras del ADN impidiendo que se vuelvan
a unir.
5. Las topoisomerasas relajan los superenrollamientos producidos en el frente de
avance de la horquilla
6. La primasa (subunidad de la DNA polimerasa alfa) sintetiza los cebadores
7. La DNA polimerasa épsilon sintetiza la cadena contínua y la DNA polimerasa
delta sintetiza la cadena discontínua
8. La nucleasa FEN1 elimina los cebadores
9. La DNA polimerasa delta rellena los espacios antes ocupados por los cebadores
10. La DNA ligasa sella las mellas para formar una cadena contínua
 En cada ronda sucesiva de
replicación, las hebras nuevas son
más cortas en 5‘ que su molde.
Como consecuencia, la longitud
del cromosoma se va acortando
progresivamente en sus dos
extremos (telómeros) con las
sucesivas divisiones celulares.

El acortamiento de los telómeros

está relacionado con la senescencia
o envejecimiento celular.

El consenso actual indica que el acortamiento

de los telómeros protege al ser humano contra
el cáncer al limitar el número de divisiones de
una célula potencialmente tumoral.
 La DNA polimerasa
requiere de un extremo
3‘ libre para poder
agregar nucleótidos.
▪ La cadena que va de 3′ → 5′ es más larga y tiene una secuencia TTAGGG
repetida miles de veces (cadena rica en G).
▪ La cadena que va de 5′ → 3′ es más corta y tiene la secuencia AATCCC
repetida miles de veces (cadena rica en C).

3′ Cadena rica en G 5′

5′ Cadena rica en C 3′
LA TELOMERASA ES UNA ENZIMA QUE ALARGA LOS TELÓMEROS, COMPENSANDO LA PÉRDIDA
PRODUCIDA EN CADA CICLO CELULAR.

La telomerasa es una ribonucleoproteína.

▪ Componente RNA: tiene secuencia complementaria y antiparalela a la cadena rica en G.
Esta secuencia sirve de molde para sintetizar DNA.
▪ Componente proteico: funciona como enzima (transcriptasa inversa) que sintetiza DNA
sin necesidad de cebador.

La telomerasa es una
TRANSCRIPTASA INVERSA
debido a que sintetiza DNA
usando RNA como molde.
Cadena rica en C

Cadena rica en G
 La telomerasa alarga la cadena rica en G
usando como molde la secuencia de RNA
presente en la propia telomerasa

“La telomerasa alarga la cadena más larga”

La telomerasa se desliza sobre la

cadena previamente alargada

La telomerasa alarga nuevamente

la cadena rica en G

El proceso se repite unas 5 o 6 veces

La telomerasa alarga
la cadena rica en G

La DNA polimerasa alfa

(primasa) sintetiza un
cebador y rellena la
otra hebra
Aunque la telomerasa está ausente de casi todas
las células del organismo, existen algunas
excepciones notables.
Las células germinales de las gónadas conservan
actividad telomerasa y los telómeros de sus
cromosomas no se encogen como resultado de la
división celular. Por consiguiente, cada
descendiente comienza la vida como un cigoto
que contiene telómeros de longitud máxima.
La replicación:
- Es semiconservativa
- Es bidireccional
- Es semidiscontínua

Participan:
Proteínas no enzimáticas:
- RPA
- PCNA y RFC
Proteínas enzimáticas:
- DNA polimerasas
- RNA polimerasas
- Helicasas
- Nucleasas (endo y exo)
- Ligasas
- Telomerasas
- Topoisomerasas
Los sustratos son nucleótidos trifosfato
- De ribosa para el cebador
- De desoxirribosa para la hebra nueva

Se ensamblan como nucleótidos

monofosfato
La energía proviene de los mismos
sustratos

Proteínas no enzimáticas:

RPA: evita que las cadenas de DNA separadas se

vuelvan a juntar.
PCNA: evita que la DNA polimerasa se
desprenda de su molde.

RFC: monta la pinza deslizante sobre el DNA

Helicasa:
Rompe puentes de H para separar
ambas cadenas de DNA

Nucleasa: elimina nucleótidos

rompiendo enlaces fosfodiéster
▪ Exonucleasa: a partir del extremo
▪ Endonucleasa: no en el extremo

Ligasa: forma enlaces fosfodiéster

Topoisomerasas: relajan
superenrollamientos
▪ Tipo I: cortan una cadena
▪ Tipo II (girasa): cortan dos cadenas

Actúan como nucleasa (corta) y

como ligasa (une)

Telomerasa: replica la cadena rica en G

a nivel del telómero

DNA polimerasa alfa: sintetiza la cadena

rica en C a nivel del telómero